Summary
En metod för att ladda subventrikulära zonen (SVZ) celler med färgämnen kalcium Indikator för inspelning kalcium aktivitet beskrivs. Den postnatala SVZ innehåller tätt packade celler, inklusive neurala stamceller och neuroblaster. Istället för att använda bad belastning vi injicerade färgen genom trycket i vävnaden möjliggör bättre färg diffusion.
Abstract
Den subventrikulära zonen (SVZ) är en av de två neurogena zonerna i postnatala hjärnan. I SVZ innehåller tätt packade celler, inklusive neurala stamceller med astrocytiska funktioner (kallas SVZ astrocyter), neuroblaster, och mellanliggande progenitorceller. Neuroblaster födda i SVZ migrera tangentiellt ett stort avstånd till luktloben, där de differentierar till interneuronen. Intercellulära signalering via adhesionsmolekyler och diffunderbara signaler spelar en viktig roll i kontrollen neurogenes. Många av dessa signaler utlösa intercellulära kalcium aktivitet som sänder information inom och mellan celler. Kalcium aktivitet är således återspeglar aktiviteten hos extracellulära signaler och är ett optimalt sätt att förstå funktionella intercellulär signalering mellan SVZ celler.
Kalcium aktivitet har studerats i många andra regioner och celltyper, inklusive mogna astrocyter och nervceller. Men den traditionella metoden till load celler med kalcium-indikatorfärgämne (dvs. bad belastning) var inte effektiva vid lastning alla SVZ celltyper. Faktiskt hindrar cellulär densitet i SVZ färgdiffusion inuti vävnaden. Dessutom kommer förbereda sagittala skivor bättre bevara den tredimensionella arrangemanget av SVZ celler, särskilt strömmen av neuroblast migration på rostral-caudal axeln.
Här beskriver vi metoder för att förbereda sagittala sektioner innehållande SVZ, lastning av SVZ celler med kalcium indikatorfärgämne, och förvärvet av kalcium aktivitet med time-lapse-filmer. Vi använde Fluo-4:00 färg för lastning SVZ astrocyter med tryck ansökan inne i vävnaden. Kalcium aktiviteten registrerades med hjälp av en scanning konfokalmikroskop tillåter en exakt upplösning för särskiljande enskilda celler. Vår strategi är tillämplig på andra neurogena zoner, inklusive den vuxna hippocampus subgranular zon och embryonala neurogena zoner. Dessutom kan andra typer av färgämnen kanappliceras med användning av den beskrivna metoden.
Protocol
1. Beredning av lösningar, dissekering, och vibratome
- Lösningar måste vara beredda på rätt osmolaritet och pH (tabell 1). Jämfört med artificiell cerebrospinalvätska (ACSF), är dissektion framställd med lägre halter av natrium och kalcium, och högre koncentrationer av magnesium. Detta för att minimera excitotoxicitet effekter under skivning.
- Både dissekering och ACSF lösningar måste mättas med 95% O 2/5% CO 2 genom bubbling under åtminstone 10 minuter för att nå det önskade pH-värdet av 7,3.
- Förbered ett isbad i ett fack. Placera en dissektion plattan i isbadet och fyll med dissektion lösning. Bubbla dissektion plattan.
- Förbered vibratome genom att skapa ett isbad. Placera sektionering skålen i isbadet, fyll skålen med dissektion lösning och bubbla.
- Fyll skiva håller kammaren med ACSF och bubbla för att säkerställa att lösningen är tillräckligt luftas oavsettvar skivor är placerade.
2. Avlägsnande av hjärnvävnad
Akut hjärnan skivor tenderar att vara friskare med yngre möss. Den postnatala SVZ cellulära arkitektur hos gnagare är mogen runt postnatal dag (P) 20 1. Därför försöker vi begränsa våra experiment för att musen åldrarna P20-P30, men vi har utfört lyckade experiment i möss som gammal som 3 månader. Under hela hanteringen av vävnaden, måste man vara uppmärksam för att minimera mekaniska rörelser och tryck till hjärnan, underhålla kylda förhållanden och utsätter SVZ till lösning så snabbt som möjligt efter offer.
- Efter injektion av pentobarbital, är musen snabbt halshöggs. Pälsen avlägsnas och snitt görs genom skallbasen. Huvudet placeras sedan i en bricka fylld med dissektion lösning.
- Samtidigt stabilisera huvudet med tång, är kontinuerliga nedskärningar görs runt skallen och ibland upp mittlinjen med Microscissors. Var noga med att minimera kontakt med vävnaden. Eftersom luktloben är den slutliga destinationen för nyfödda nervceller från SVZ, måste man vara uppmärksam på att bevara den regionen, särskilt under benborttagning runt området. Microscissor nedskärningar runt skallen vara på ryggsidan, för att möjliggöra enkel borttagning av skallen.
- Borttagning av skallen som ligger över hjärnan nu separeras från benen nedanför hjärnan. Om nedskärningar i föregående steg görs korrekt, kan detta överliggande ben tas bort enkelt med pincett eller tång.
- Fortfarande håller huvudet med pincett, kan man använda ett kirurgiskt blad till rent avlägsna flera stycken av hjärnvävnad före skivning, såsom följande. En koronala snitt kan göras vid nivån av lambda. Sagittala snitt kan göras på båda sidor av hjärnan lateralt till SVZ. En konservativ uppskattning skulle vara ~ 2,5 mm från mittlinjen. Om så önskas, kan hjärnan också hemisected här. Dessa nedskärningar kommer både Facilitate montering av vävnaden och låta SVZ kan uppnås snabbare när hjärnan skivning. Det är viktigt att komma ihåg att utöva den minimalt med mekaniska krafter på hjärnan (t.ex. inte skjuta eller dra).
3. Akut Brain skiva Förberedelser
- En förberedelse inför kommande steg, se till att superlim som används för att montera vävnaden är fri från träskor och redo att ansöka till vibratome plattan. Det är viktigt att gå så snabbt som möjligt utan att skada hjärnan.
- Hjärnvävnaden kan sedan skopas underifrån, vilket separerar vävnaden från underliggande ben samtidigt separera nerver.
- Vävnaden är monterad och limmad på en plåt och placeras på vibratome. På grund av den rostral-kaudala anatomi SVZ har vi fokuserat på att göra sagittala skivor som bevarar vandrande vägen för neuroblaster, den gliaceller manteln och kärlsystemet som i stor utsträckning är inriktade i denna riktning. Man kan antingen mount vävnaden vid mittlinjen eller på den plana ytan som skapas genom sagittala snitt laterala till SVZ. Ett valfritt steg är att placera en 3% agaros block bakom vävnaden att fungera som ett anslag för bladet som skivorna lossnar. Vi använde företrädesvis cyanoakrylat-baserade superlim.
- Skölj bladet med etanol för att avlägsna oljor och skölj med destillerat vatten. Placera bladet på bladhållaren. Montera bladhållaren till vibratome.
- Justera inställningar vibratome att skära vävnad vid en tjocklek av 250-350 | im per skiva. Det är viktigt att skära med högfrekventa vibrationer och låg hastighet.
- Avsnitt progressivt genom vävnaden. Utseendet av luktloben är en bra indikator på att man är nära SVZ i sagittala skivor som de mest laterala skivor kommer att innehålla varken regionen. Andra landmärken att titta efter är ventrikeln och förtjockning av corpus callosum, under vilken SVZ finns. Den SVZ visas först i mer lateral sagittal skivor. RMS kommer att visas i mediala sagittala skivor.
- Avlägsna skivor innehållande SVZ med en plast pasteurpipett med spetsen avskuren. Överföring till skiva innehav kammaren. Vi får ofta fler skivor än vi kan använda i en arbetsdag. Kommer dock att variera segment på mängden celler innehållande SVZ. Det är ibland nödvändigt att titta igenom flera skivor för att hitta en önskad för avbildning.
4. Framställning av mikroskop och färgämnen
Skivorna kräver en timmes inkubationstid i ACSF att återhämta sig från dissekering och skivning. Flera steg kan utföras under denna skiva återhämtningsperiod.
- Beredning av pipetter för kalcium färg och / eller narkotika ansökan
- Glaspipetter behöver ha en spets av 2-3 pm i diameter och en spets längd (~ 2 mm) och vinkel (~ 16 ° för pipetthållaren) som förhindrar kontakt med perfusionskammaren och ger utrymme för placering avmålet.
- Man kan oftast förbereda 6-8 tryck pipetter för varje dag av experiment.
- Kalcium färg förberedelse
- Vid utarbetandet av arbetslösningen (4-5 M av Bath, 250 pM av tryck ansökan), är det bäst att exponera den minsta mängd DMSO till cellerna. Detta kan uppnås genom att göra högkoncentrerade bestånd. Till exempel, för Fluo-4, är ett rör innehållande 50 | ig användes per dag. Man kan göra en 10 mM stamlösning av denna alikvot genom tillsats 4,6 il av Pluronic F-127 20% lösning i DMSO.
- Förbereda mikroskop setup (figur 2).
- Användning av en peristaltisk pump för vätskeflödet har hjälpt minimera bild drift. Kör den peristaltiska pumpen innan att ACSF att gå igenom perfusion linjer och se till att den är bubbelfri.
- Ställ röret inlopp på perfusionskammaren och se till att det inte finns några läckor.
- Placera vakuum tips till ENSure att lösningen håller aspireras från perfusionskammaren. Se till att det är på en lämplig nivå, så att målet är nedsänkt i rätt arbetsavstånd, men inte så hög så att lösningen kan spilla över kammaren. En låg nivå av lösning kommer också att minimera flödet snedvridningar. En konstant strävan kan också verifieras genom att lyssna efter stadighet.
5. Dye Loading
Denna metod har beskrivits i detalj i en annan manuskript 2. Se figurer däri.
- Bad laddningsfärg
- Gör en 1-2 ml arbetslösning av färgämnet. För Fluo-4 AM, är en koncentration av 4-5 M tillräcklig för märkning SVZ neuroblaster.
- Skivorna överförs först till en 35 mm odlingsskål med en nätbotten som redan är fylld med ACSF. Byt ut lösningen med en 3 ml pipett av plast överföring till försiktigt bort ACSF, samtidigt tillsätta calcium färgämne arbetslösning.
- Inkubera vid 37 ° C under 30-60 min i en 5% CO 2 gas-kontrollerad miljö.
- Placera skiva tillbaka till ACSF fyllda hållarkammaren att tvätta bort färg som inte har ingått celler. Alternativt kan man placera den direkt på mikroskopet perfusionskammaren som kör ACSF. Denna tvättning period är 30-45 min.
- Överför segmentet till perfusionskammaren.
- Tryck tillämpning av färgämne
- Överför segment från mottagningskammaren till perfusionskammaren på mikroskopet installationen.
- Fyll ett glas pipett med en fungerande lösning som är 250 M och plats på mikromanipulator.
- Sänk pipetten till regionen av intresse. Pipetten kan placeras så att spetsen är antingen flera mikrometer ovanför skivan ytan eller begravd flera mikrometer under segment yta, men bort från den inspelade regionen. Vinkeln av pipetten inte AffeCT laddningseffektivitet. När avbildning under segmentet ytan finner vi att placera pipettspetsen under bildplanet kommer märka vår önskade avbildning område bättre.
- När tryckanbringande färgämnet anger Picospritzer så att det är <3 psi. Vi har inte beräknat mängden färgdiffusion, eftersom detta är föremål för variation av pipettspetsen diametern, pålagt tryck och densitet av vävnad där färgämnet injiceras. Vi tillämpar helt enkelt tills vi uppnår vår önskade lastning som bedöms av ögat. Minimera skador på skivan under applicering, speciellt när spetsen placeras under skivan yta. Ansök om 1-2 minuter. Ibland upprepade ansökningar behövs beroende på märkning enligt bedömning av ögat. För denna koncentration och tillämpning varaktighet, finner vi att ytan tillämpning av färg företrädesvis märker neuroblaster medan under ytan programmet företrädesvis märker astrocyter. Dock kommer> 3 min ansökan på 500 M märka även neuroblasteroavsett om spetsen är ovanför eller nedanför skivan ytan (JC Platel, opublicerad observation). Tillåta tvätt och skiva återhämtning för 30-45 minuter.
6. Konfokal avbildning av kalcium aktivitet
- Hitta det intressanta området först med en lägre effekt mål som 4x eller 10x. Placera i mitten av fältet innan att byta till en högre makt mål. Vid denna punkt, kan man bedöma allmän segment hälsa genom att notera uppkomsten av SVZ celler under differentiell interferens kontrast (DIC). Friska celler verkar runt och fylligt. Dessutom kommer friska celler uppvisar svag Fluo-4 lastning som ska ingen belastning alls eller ljusa fluorescens (en döende cell).
- Sänk vatten nedsänkning mål på det intressanta området är som nu dye-laddad. Antingen en 40x eller 60x mål har varit tillräcklig för våra behov, även 40x ger en bredare synfält och ger större pipett tillträde. När avbildning underyta, vi går ofta minst 15 um under segmentet yta där den 3-dimensionell arkitektur och cell hälsa är bättre bevarade.
- Kontrollera att perfusion och vakuum arbetar tillfredsställande.
- Setup mikroskopet så att time-lapse upplösning och spatial upplösning är inställda på önskad priser. För konfokal mikroskopi, måste dessa faktorer balanseras som en ökning av temporal upplösning vanligen resulterar i en förlust av rumslig upplösning på grund av avsökning systemets natur. För kalcium aktivitet har vi avbildat en ram ungefär varannan med en 512x512 pixlars upplösning. Om flera kanaler som köps separat krävs kommer detta också att påverka förvärv priser. Ange längd film (2-10 min).
- Initiera köra. Om du utför farmakologiska studier, tvätta på antagonister eller icke-desensibiliserande agonister för åtminstone 5-10 minuter, och sedan göra en annan film av 5-10 min. Agonister som kan desensibilisera receptorer kan akut appliceras, såsom genom användning av en prEssure pipetten styrs av en mikromanipulator.
7. Kalcium Analys
Analys följer standardförfaranden som vi beskrev i genomträngliga publikationer 2-4. F 0 (dvs. baslinjen) och F är de genomsnittliga fluorescensintensiteterna mätt över alla områden av intresse (ROI) och i varje ROI, respektive. En förändring i fluorescens ansågs vara en Ca 2 + ökning om det var> 15% F / F 0 ökning. Intracellulära Ca 2 + förändringar beräknades med användning Calsignal 5.
8. Representativa resultat
Vi har kunnat få selektiv laddning av SVZ celler beroende på färgämnet lastning protokollen som beskrivs ovan och på andra ställen 2-4,6. Badkar lastning eller tryck ansökan på skiva yta Fluo-4:00 (4-5 eller 250 M respektive) etiketter mestadels neuroblaster. Medan tryck ansökan kan läsa neurobvarar snabbare än bad belastning i en enda skiva, gör bad belastning samtidig laddning av flera skivor. Vi bekräftar identiteten hos märkta celler som neuroblaster av (1) om de uppvisar flyttningsbeteendet 4,7, (2) deras morfologi, (3) negativ färgning av sulforodamin 101, en astrocyt-specifik färg 3 eller (4) positiv färgning med DCX-DsRed uttryck (JC Platel, opublicerad observation). Neuroblaster migrerar snabbt (i genomsnitt 60 pm / h) vid fysiologisk temperatur 4,7-9, men deras rörelse kan lätt observeras även vid rumstemperatur. Förflyttning av neuroblaster utgör inte ett problem när det gäller att placera regioner av intresse (ROI) för att spåra kalcium aktivitet eftersom våra filmer är oftast kortvarig. Under långa väntetider, till exempel vid utbyte läkemedelslösning måste utredarna vara noga med att matcha ROI i kontroll och perioder behandling. Det är inte ovanligt att neuroblaster att migrera in i eller ut ur den i maging fält eller fokalplan.
Tryck tillämpning av Fluo-4 AM (250 M) djupt in i segmentet och för begränsad tid (<2 min) märker företrädesvis SVZ astrocyter 2. Astrocyt märkning har verifierats genom positiv märkning med sulforodamin 101 och deras morfologi, i synnerhet genom närvaron av prognoser och endfeet på blodkärl som vi nyligen beskrivits 3. Med hjälp av dessa metoder har vi observerat spontan aktivitet i både SVZ neuroblast och astrocyt befolkning (figur 1). Aktiviteten i astrocyter tar ofta formen av vågor som engagerar 3 blodkärl. Dessutom använder kalcium avbildning som en analys, har tillämpningen av farmakologiska agonister avslöjats eller bekräftad uttryck av GABA A-receptorer på neuroblaster och astrocyter 6, AMPA och NMDA-receptorer på neuroblaster 4.
Siffror
1 "src =" / files/ftp_upload/4071/4071fig1.jpg "/>
Figur 1. Förökningsmaterial kalcium aktivitet i astrocyter. (A) representant genomsnitt bild från en time-lapse inspelning av kalcium aktivitet. Astrocyter i SVZ laddades med tryck tillämpning av Fluo-4:00 djupt in i segmentet. Filmer förvärvades till 0,75 s tidssteg. Områden av intresse (ROI) placeras över cellerna uppvisar aktivitet. (B) Spår från ROI placerades över celler från filmen visas i (A). Spår filtrerades med ett glidande medelvärde och normaliserad. Den vertikala skalan representerar 2 x AF / F 0 där F är signalintensiteten och F 0 är den genomsnittliga baslinje signalen och AF = FF 0.
Figur 2. Bild perfusionssystemet. En ände av ett rör nedsänkt i 95% O 2/5% CO 2 gas-perfused lösning. Lösningen är därefter perfuseras genom röret och till badkammaren genom en peristaltisk pump (ej visad). Den andra änden är införd i lösningen inlopp badkammaren monterad på en plattform. Sugspetsen kopplas sedan till lösningen utlopp från kammaren och inställd på en nivå för att bestämma lösning höjd. Från utloppet, är sugspetsen ansluten till vakuumledningen, som suger lösningen från kammaren till en avfallsbehållare. Perfusionssystemet visas från mikroskopet scenen för visuell skärpa.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Kalcium avbildning av SVZ celler har använts för att studera mönster i spontan aktivitet i 10 neuroblaster, receptorkanalen uttryck i både neuroblaster och astrocyter 4,6,8 och astrocytiska vågor kalcium 3. Eftersom celler i SVZ är antingen omogna eller har gliaceller egenskaper, inte sparka de inte aktionspotentialer 11,12, vilket innebär att millisekund förändringar i spänningspotential indikerar aktivitet i mogna nätverk är inte tillämplig i detta område. Därför fånga långsammare kalcium händelser (i storleksordningen sekunder) är inte bara biologiskt meningsfullt, men kanske den mest relevanta formen av aktivitet i dessa celler.
Utredarna måste vara uppmärksam på många steg i detta förfarande, särskilt när det gäller skiva hälsa. Felaktig framställning av lösningar kan dålig vattenkvalitet (används för att göra lösningar), långsam och oprecis dissektioner, och användningen av smutsiga rakblad för att skära vävnad har alla skadliga efningarna på aktivitet.
När det gäller användningen av kalcium indikatorer, medan vi bara diskuterade användningen av Fluo-4:00, har vi försökt andra kommersiella färgämnen, inklusive Oregon Grön BAPTA-AM, som har en högre nivå baslinje belastning än Fluo-4. Vi valde att fokusera på Fluo-4 på grund av dess större dynamiskt område jämfört med andra färgämnen, men andra forskare kan finna olika färgämnen fördelaktigt för deras syften. Varje färgämne kan ha olika affinitet för vissa celltyper. Koncentration och metod för lastningen kan behöva justeras för varje färgämne. Vi använde företrädesvis tryckbelastning att märka SVZ astrocyter och sundare, djupare celler. En finansiell faktor att beakta är att använda tryck ansökan är dyrare än bad ansökan, även om färgämneslösningen i tryck pipetten kan frysas och återanvändas nästa dag. Alternativt har genetiskt kodade kalcium indikatorer (GECIs), såsom GCaMP3, varit allt populärare för att studera andra system och bhi regioner 13,14. Dessa GECIs har fördelen att drivas enligt cellspecifika promotorer, men deras kinetik och dynamiskt omfång i allmänhet inte bättre än de organiska färgämnena 15. Deras användning i den postnatala SVZ kräver också viral märkning eller elektroporering av konstruktionen, den senare begränsar studien av neuroblaster till den neonatala perioden på grund av förlust av plasmid under celldelningen.
Skiva drift förhindrar tillförlitlig signal förvärv under den tid filmen och är en av de mest utmanande tekniska hinder med levande imaging experiment hjärnsnitt. Den påverkas av flera faktorer inklusive perfusionshastighet, vakuum placering, objektiv vikt, och, om tillämpligt, temperaturgradienter. Om temperaturen är högre än 25 ° C är nödvändig för experiment, bör man försöka värma lösningar och kammare perfusion vid den lägsta temperaturen där de kan ta itu med sina frågor, eftersom temperaturen kan leda till betydande, undesired fokus drift. Mål värmare och uppvärmda kapslingar kan också hjälpa till att minimera denna effekt, även om vi har försökt det tidigare utan större framgång.
Spärr dessa tekniska hinder, forskare har möjlighet att analysera ett stort antal celler i en postnatal utveckling område. Detta ger en möjlighet att ta itu med aktivitet på befolkningsnivå, vilket skulle kunna ge nya insikter i de processer som reglerar neurogenes.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Inga intressekonflikter deklareras.
Acknowledgments
Detta arbete har finansierats med bidrag från NIH (DC007681, AB), CT Stem Cell bidrag (AB), Pardee stiftelse (AB), Predoctoral Ruth L. Kirschstein National Research Service Awards (NRSA) (SZY) och en NSF Graduate Research gemenskap (BL). Vi tackar Bordey labbet medlemmar för värdefulla kommentarer på manuskriptet. Den nuvarande materialet bygger på arbete delvis stöds av staten Connecticut under Connecticut stamcellsforskning Grants. Dess innehåll är helt och hållet av författarna och inte nödvändigtvis representerar officiella ståndpunkter i staten Connecticut, Institutionen för folkhälsovetenskap i delstaten Connecticut eller CT Innovations, Incorporated.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sucrose | Sigma | S0389 | Dissection: 147 mM ACSF: 0 mM |
| NaCl | Sigma | S9888 | Dissection: 42 mM ACSF: 126 mM |
| KCl | Sigma | P3911 | Dissection: 2.5 mM ACSF: 2.5 mM |
| MgCl2.6H2O | Sigma | M9272 | Dissection: 4.33 mM ACSF: 1 mM |
| NaH2PO4.H2O | Sigma | S8282 | Dissection: 1.25 mM ACSF: 1.25 mM |
| Glucose | Sigma | G8270 | Dissection: 10 mM ACSF: 10 mM |
| NaHCO3 | Sigma | S6014 | Dissection: 26 mM ACSF: 26 mM |
| CaCl2.2H2O | Sigma | C3306 | Dissection: 1.33 mM ACSF: 2 mM |
Table 1. Chemical list and recipes of dissection solution and ACSF. |
|||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Vibratome | Leica | VT 1000S | |
| Super Glue | Surehold or 3M | Surehold 3G Super Glue or 3M Vet-Bond | |
| Dissection tools | Roboz or Ted Pella | ||
| Fluo-4 AM calcium-sensitive dye | Invitrogen | F14201 | |
| Oregon Green BAPTA-1 AM calcium-sensitive dye | Invitrogen | O6807 | |
| Pluronic F-127 20% solution in DMSO | Invitrogen | P3000MP | |
| Upright confocal microscope | Olympus | FV300 or FV1000 | |
| Water-immersion objectives | Olympus | LUMPlanFl 40 x W/IR (NA 0.80); LUMPlanFl 60 x W/I (NA 0.90) | |
| Micromanipulators | Sutter | MPC-200/MPC-325/MPC-385 | |
| Pressure controller | Parker Hannifin | Picospritzer | <3 PSI during application |
| Pipette puller | Sutter or Narshige | Sutter P-97 or Narshige PP-830 | |
| Glass pipettes | Sutter | BF150-110-10 | I.D.:1.10, O.D.: 1.50 |
| Peristaltic pump | Harvard Apparatus | Model 720 | flow rate: 1 ml/min |
| Chamber bath | Warner Instruments | RC-26 GLP | Low profile allows for objective clearance |
| Tubing | Tygon | ||
| Temperature Controller | Warner Instruments | TC-324B/344B | |
Table 2. Materials/equipment list. |
|||
References
- Peretto, P., Giachino, C., Aimar, P., Fasolo, A., Bonfanti, L. Chain formation and glial tube assembly in the shift from neonatal to adult subventricular zone of the rodent forebrain. J. Comp Neurol. 487, 407-427 (2005).
- Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. Imaging and recording subventricular zone progenitor cells in live tissue of postnatal mice. Front. Neurosci. 4, 10-3389 (2010).
- Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. Gap junction-mediated calcium waves define communication networks among murine postnatal neural progenitor cells. Eur. J. Neurosci. , (2011).
- Platel, J. C., Dave, K. A., Gordon, V., Lacar, B., Rubio, M. E., Bordey, A. NMDA receptors activated by subventricular zone astrocytic glutamate are critical for neuroblast survival prior to entering a synaptic network. Neuron. 65, 859-872 (2010).
- Platel, J. C., Dupuis, A., Boisseau, S., Villaz, M., Albrieux, M., Brocard, J. Synchrony of spontaneous calcium activity in mouse neocortex before synaptogenesis. Eur. J. Neurosci. 25, 920-928 (2007).
- Young, S. Z., Platel, J. C., Nielsen, J. V., Jensen, N. A., Bordey, A. GABAA increases calcium in subventricular zone astrocyte-like cells through L- and T-type voltage-gated calcium channels. Front. Cell. Neurosci. 4, 8 (2010).
- Bolteus, A. J., Bordey, A. GABA Release and Uptake Regulate Neuronal Precursor Migration in the Postnatal Subventricular Zone. J. Neurosci. 24, 7623-7631 (2004).
- Platel, J., Heintz, T., Young, S., Gordon, V., Bordey, A. Tonic activation of GLUK5 kainate receptors decreases neuroblast migration in a whole mount preparation of the subventricular zone. J. Physiol. (Lond). 586, 3783-3793 (2008).
- Nam, S. C., Kim, Y., Dryanovski, D., Walker, A., Goings, G., Woolfrey, K., Kang, S. S., Chu, C., Chenn, A., Erdelyi, F., Szabo, G., Hockberger, P., Szele, F. G. Dynamic features of postnatal subventricular zone cell motility: a two-photon time-lapse study. J. Comp. Neurol. 505, 190-208 (2007).
- Lacar, B. L., Platel, J. C., Bordey, A. GABA controls Ca2+ activity-dependent network synchrony in the adult neurogenic forebrain. Neuroscience Meeting Planner, San Diego, CA, , Society for Neuroscience. (2007).
- Liu, X., Bolteus, A. J., Balkin, D. M., Henschel, O., Bordey, A. GFAP-expressing cells in the postnatal subventricular zone display a unique glial phenotype intermediate between radial glia and astrocytes. Glia. 54, 394-410 (2006).
- Wang, D. D., Krueger, D. D., Bordey, A. Biophysical properties and ionic signature of neuronal progenitors of the postnatal subventricular zone in situ. J. Neurophysiol. 90, 2291-2302 (2003).
- Tian, L., Hires, S. A., Mao, T., Huber, D., Chiappe, M. E., Chalasani, S. H., Petreanu, L., Akerboom, J., McKinney, S. A., Schreiter, E. R., Bargmann, C. I., Jayaraman, V., Svoboda, K., Looger, L. L. Imaging neural activity in worms, flies and mice with improved GCaMP calcium indicators. Nat. Methods. 6, 875-881 (2009).
- Zhao, Y., Araki, S., Wu, J., Teramoto, T., Chang, Y. F. An expanded palette of genetically encoded Ca(2) indicators. Science. 333, 1888-1891 (2011).
- Shigetomi, E., Kracun, S., Sofroniew, M. V., Khakh, B. S. A genetically targeted optical sensor to monitor calcium signals in astrocyte processes. Nat. Neurosci. 13, 759-766 (2010).
