Summary
تضخم Neointimal هو السبب الرئيسي للتضيق في شرايين arterialized. نقترح بروتوكول جديد يتم بمقتضاه المطعمة الحق حبل الوريد الخارجية باستخدام تقنية صفعة في الشريان السباتي المشترك من الفئران سبراغ داولي. كان معدل البقاء على قيد الحياة بنسبة 100٪ عند النقطة وقت التضحية.
Abstract
تضخم Neointimal هي واحدة من الأسباب الرئيسية للتضيق في شرايين arterialized التي هي ذات أهمية كبيرة في الشرايين جراحة لتغيير شرايين التاجية، سيخضع لعملية جراحية في الشرايين الطرفية وكذلك في الشرايين والأوردة نواسير. 1-5 الإجراء التجريبي للمداخلة الكسب غير المشروع في الوريد الشريان السباتي المشترك باستخدام تقنية الكفة-تم تطبيق العديد من المشاريع البحثية في دراسة المسببات المرضية من فرط تنسج neointimal والخيارات العلاجية للتصدي لها. 6-8 الكفة يمنع السفينة تفاغري إعادة عرض ويؤدي الاضطراب في الكسب غير المشروع، وبالتالي تطوير تضخم neointimal.
باستخدام متفوقة الوريد الأجوف الكسب غير المشروع هو ثابت الحيوانات الصغيرة نموذجا لتجربة arterialization الوريدي 9-11 هذا البروتوكول الحالي يشير إلى تأسيس تقنية حبل الوريد مداخلة الكسب غير المشروع لأول مرة من قبل وآخرون زو.، 9 فضلا عن غيرهم. 12-14
لتبسيط الإجراءات والتقليل من عدد من حيوانات التجارب اللازمة، ويرد على بروتوكول العملية التفصيلية من خلال التدريب الفيديو. يجب أن هذا الفيديو مساعدة الجراح المبتدئ على حد سواء لمعرفة الكفة-تقنية والكسب غير المشروع مداخلة الوريد. بموجب هذه الوثيقة، والمطعمة الحق حبل الوريد الخارجية في تقنية مرتجلا في الشريان السباتي المشترك من 21 أنثى الفئران سبراغ داولي تصنيفها في ثلاث مجموعات متساوية أن تم التضحية في يوم 21 و 42 و 84، على التوالي. والجدير بالذكر أن هناك حاجة إلى أي الحيوانات المانحة، لصناعة السيارات في وأجريت عملية زرع. كان معدل البقاء على قيد الحياة بنسبة 100٪ عند النقطة وقت التضحية. وبالإضافة إلى ذلك، كان معدل الكسب غير المشروع سالكية 60٪ لأول 10 الحيوانات تعمل و 82٪ للحيوانات ال 11 المتبقية. وكان تدفق الدم في وقت التضحية 8 ± 3 مل / دقيقة. في الختام، هذا البروتوكول الجراحي يبسط إلى حد كبير، يحسن وتوحد هذه شركاتlicated الداخلي. أنه يعطي الجراحين المبتدئين سهلة، خطوة بخطوة تعليمات، موضحا المزالق المحتملة، الامر الذي يساعدهم على اكتساب الخبرة بسرعة وتجنب التضحية عديمة الفائدة من حيوانات التجارب.
Protocol
1. الحيوانات التجريبية
- الحصول على موافقة لجنة الأخلاقيات المحلية لجميع التجارب التي سوف يتم تنفيذها، وفقا للمبادئ التوجيهية حماية FELASA الحيوان.
- استخدام الإناث سبراغ داولي الفئران المتاحة للشراء من أي مربي التجارية (مثل نهر تشارلز Wiga محدودة، Sulzfeld، ألمانيا). كنا 21 الحيوانات مقسمة في ثلاث مجموعات من 7 الحيوانات التي تم التضحية كل في 3 و 6 و 12 أسبوعا بعد العمل الجراحي. في وقت الشراء، ينبغي أن تكون الحيوانات 12 أسبوعا من العمر وتزن 250-300 غرام.
- الحفاظ على الحيوانات في المناخ التي تسيطر عليها الغرف وجود درجة الحرارة المحيطة من 21 درجة مئوية، الرطوبة النسبية 60٪ و12-HR دورة ضوء الظلام مع حرية الوصول إلى الغذاء والماء.
2. التخدير وإعداد المنطوق
- حمل التخدير العام باستخدام مربع زجاجي متصلا آلة التخدير، مجموعة في معدل تدفق الأوكسجين من 1 لتر / دقيقة، والمرذاذ ث isofluoraneإيث الغاز مخدر 5٪.
- الحفاظ على التخدير مع المرذاذ isofluorane بنسبة 1.5٪ في أقرب وقت ردود الفعل الحسية العميقة من الحيوانات وقمعها.
- إصلاح الفئران في موقف ضعيف على لوحة ظاهرة الاحتباس الجسم.
- إعداد المنطقة تشغيل كل حيوان عن طريق إزالة الفراء مع كريم إزالة الشعر، من زاوية الفك الأسفل إلى 2 سم تحت قبضة القص.
- إعداد حقل معقمة جراحية إيلاء اهتمام خاص لمنطقة العمليات الجراحية، ومنطقة أعد على الحيوان وأمام الجراح:
- تنظيف الفوق مع مطهر.
- إعداد موقع شق طريق استخدام تطبيقات متعددة من حل فرك الجراحية (مثل كلورهكسيدين و 70٪ ايزوبروبيل). تطبيق كلورهكسيدين الأولى والثانية الكحول، وأخيرا، فإن الحل فرك.
- ارتداء ثوب الجراحية والمتاح القفازات الجراحية، أو بدلا من ذلك، والقفازات الامتحان التي تم غسلها مسبقا ثإيث مطهر الجراحية.
- استخدام أدوات معقمة المجهرية في إجراء العملية.
- استخدام المجهر العملية (M650 Heerbrugg البرية، Gais، سويسرا) في 10-20-أضعاف التكبير.
3. علم التشريح
الشكل 1 يصور تشريح الرقبة في الجرذ:
1A) سيتوس قبل transection من العضلات القصية الترقوية الخشائية الحق.
1B) سيتوس بعد transection من العضلات القصية الترقوية الخشائية الحق.
4. صفعة إعداد
قطع الأصفاد في طول 3 مم باليد من أنبوب بلاستيكي (Portex، قطرها الداخلي 0.75 مم، 0.94 مم القطر الخارجي، الحدادون الطبية، UK). هذه الأصفاد تتكون من الجسم بما في ذلك صفعة أنبوبي حجم كامل للأنبوب من البلاستيك، ومؤشر الكفة يتكون من نصف حجم الكفة. يتعين على كل من الجسم وصفعة صفعة يكون مقبض خط الطول بالتساويز. مقبض صفعة أمر ضروري لمعالجة الكفة خلال إجراء العمليات الجراحية. بعد تراجع الكفة على السفينة، يتم وضع المشبك في وقت واحد بلدغ صغيرة على مقبض الكفة والسفينة، وذلك لمنع النزيف من، والحفاظ على الكفة في موقف وضمان الاستقرار.
5. صفعة تقنيات
- تنزلق الكفة على السفينة.
- بعد ذلك مباشرة، يقلب للخارج السفينة، وسحب ما يزيد على السطح الخارجي للجسم الكفة واصلاحها مع ربطة الحرير 7-0. بهذه الطريقة، يتم تغطية تجويف الكفة مع البطانة. بعد ذلك، تنزلق الكسب غير المشروع وريدي أنحاء الجسم الكفة واصلاحها مع ربطة جديدة الحرير 7-0. لمنع تشكيل خثرة، لا بد من ربط الوريد التعادل الكسب غير المشروع قريبا جدا من الهامش صفعة من أجل تجنب الدم من الاتصال التعادل عقد الشريان في مكان. هذا أمر بالغ الأهمية لمفاغرة البعيدة نظرا لاتجاه تدفق الدم. ومع ذلك، وفقا للكتاب، فإنه لا يعتبر منضروري لمفاغرة القريبة لنفس السبب.
6. الإجراءات الجراحية
6.1 إعداد الوريد الوداجي الخارجي الحق
- جعل تقريبي 2.5 سم طويلة شق عنق الرحم مباشرة فوق متوسط القص قبضة.
- فصل تماما 1 سم لمدة جزء من الوريد الوداجي الخارجي حق من الأنسجة المحيطة بها
- Ligate روافد الوريدي مع خيوط الحرير 7-0.
6.2 إعداد الشريان السباتي المشترك الحق
- إعداد العضلات القصية الترقوية الخشائية والقطع في وسطها.
- إعداد الحق الشريان السباتي المشترك بعناية، والتأكد من عدم ضغط الشريان أو العصب المبهم. حشد من ذلك التشعب السباتي وصولا الى الجذع العضدي الرأسي.
- في وقت لاحق، ligate مرتين في الوسط مع خيوط الحرير 7-0 قبل transection.
- زلة لصفعة النايلون consistiنانوغرام من الجسم ومؤشر (الشكل 2A) على الطرف البعيد من الشريان السباتي المشترك، حيث أنه من المهم للتأكد من أن مقبض صفعة وراء السفينة (الشكل 2B).
- المشبك نهاية مكبلة من الشريان السباتي المشترك القاصي مع المشبك بلدغ مصغرة بالضبط على مقبض الكفة لضمان الاستقرار (الشكل 2C).
- في وقت لاحق، وقطع الشريان مباشرة وراء ربطة، حيث الجذع الشرياني الناتج يجب أن يكون طالما أن الجسم الكفة.
- شطف التجويف الشرياني مع الهيبارين الملوحة الحل (20 IU الهيبارين / مل كلوريد الصوديوم 0.9٪). تعيين حلقة ربط جانبا في الموقف الصحيح لاستخدامها لاحقا.
- سحب الجذع الشرياني، وتنزلق فوق وكأنه كم أنحاء الجسم الكفة.
- في وقت لاحق، وسحب حلقة ربط عقدة وذلك بإحكام.
- لمنع الشريان من الانزلاق من جعبتها، قد تطبيق خدعة: فهم كل من جدران الشرايين وخياطة ومع ليالي اليد اليمنىimultaneously ومع ملقط اليسرى (الشكل 2D) جعل عقدة (2E الشكل).
- كرر نفس الإجراء في الجذع الشرياني القريبة (الشكل 2F).
6.3 تحديد المواقع وريدي الكسب غير المشروع
- فرضت المكوس على 1 سم لمدة جزء من حبل الوريد الخارجية
- منذ 2 الشرايين مكبلة متباعدة جدا عن بعضها البعض لمداخلة الوريدي، تقريب المسافة الصحيحة لهذا الإجراء باستخدام 3-0 Vicryl-خياطة التي يجب أن حلقة حول كل صغيرة بلدغ المشبك.
- متقاطع كل من الغرز.
- في وقت لاحق، وسحب الخيوط الجراحية في اتجاهين متعاكسين، وتمكن من تحديد المواقع المناسبة من جذوعها والشرايين مكبلة (الشكل 2G)
- شطف الجزء الوريد مع الحل الهيبارين الملوحة.
- زلة واحدة من نهاية الجزء الوريد عكس سابقا خلال الشريان السباتي مكبلة القاصي وضمان الحصول عليها في POSI الصحيحنشوئها مع ربطة 7-0 الحرير.
- من المهم أن نلاحظ هنا أن محيط الوريد يجب أن تكون تماما وبشكل متساو اغتنامها.
- شطف الجزء الوريد بمحلول ملحي، الهيبارين، وتنزلق على الطرف الآخر من الجزء الوريد السباتي أكثر من الجدعة القريبة.
- استكمال ربط (الشكل 2H)؛
- إزالة المشابك بلدغ صغيرة واحدة بعد أول، وغيرها من الجذع على الشريان السباتي والبعيدة ثم على واحد القريبة، مما يتيح تدفق الدم دون عائق وarterialization من الكسب غير المشروع وريدي (الشكل 2I). تعتبر عملية جراحية ناجحة إذا لوحظ تدفق الدم ونبض داخل الكسب غير المشروع والشريان السباتي المشترك (تقييم بصريا).
6.4. إغلاق الجرح
لتشغيل خياطة تحت الجلد، استخدم Vicryl 4-0. لخياطة الجلدية تشغيل، استخدم 3-0 Vicryl.
7. وبعد العملية الجراحية الانتعاش <إدارة/ P>
- السماح للتعافي من التخدير الحيوانات على الفراش ورقة مسطحة تحت مصباح الأشعة تحت الحمراء الاحترار. لا يعودون الحيوانات تعمل للحيوان مناطق الاحتجاز حتى تظهر جميع الحيوانات العادية.
- إدارة البوبرينورفين بعد العمل الجراحي (Temgesic) في تركيز 0،03-0،05 SC مغ / كغ كل ساعة لمدة 2 8-12 أيام. يمكن أن تدار البوبرينورفين قبل تحريض isofluorane.
- رصد الحيوانات بعد العمل الجراحي لحالتهم العامة وعلامات المرض أو العدوى.
8. قياس تدفق الدم
ثبتت سالكية بعد العملية الجراحية من الكسب غير المشروع عن طريق قياس تدفق الدم، باستخدام البحوث تدفق الدم أسرع من الصوت نظام القياس (نموذج: TS420، أسرع من الصوت نظم أوروبا BV، ماستريخت، هولندا) مع flowprobe حول الأوعية (3 مم، MA3PSB). ويستند هذا النظام على مبدأ دوبلر.
9. ممثل النتائج
بواسطة F حفظ aithfully الإرشادات المذكورة أعلاه، كان متوسط مدة العمليات الجراحية حوالي 65 دقيقة. قدم الحيوانات حالة ممتازة البدنية واكتسبت وزنا كما هو متوقع في كافة مراحل التجربة برمتها: في نقطة الانطلاق للعملية وزنه 312 ± الحيوانات ز 20.39. في وقت التضحية نقطة 3 أسابيع بعد العملية وزنه 325.2 ± الحيوانات 28،7 غرام، في 6 أسابيع 333 ± 39.9 جم و362،22 في 12 أسبوعا ± 29 ز.
لم يلاحظ أي إصابات في موقع العملية وليس القروح المتقدمة. تلتئم الجروح تماما عملية في الوقت المتوقع. وأظهرت لسيطرة عصبية لا توجد مؤشرات على احتشاء الدماغ أو نقص الحركية. وكان في وقت لاحق نقطة مهمة منذ تشغيلها الحيوانات في الشريان السباتي وتمت إزالة واحدة من الأوردة 2 الوداجي الخارجي وتستخدم لصناعة السيارات في زرع. لم يلاحظ أي حساسية لتخفيف الألم والعلاج ما بعد الجراحة.
> ويقظة جميع الحيوانات والاجتماعية في كافة مراحل التجربة برمتها. ظلت عاداتهم المتعلقة تلقي الغذاء والماء دون تغيير في جميع أنحاء طوال الوقت.
كان معدل البقاء على قيد الحياة من جميع التجارب 100٪ عند النقطة وقت التضحية. كان معدل الكسب غير المشروع سالكية 60٪ لأول 10 الحيوانات تعمل وفقا لذلك و82٪ للحيوانات ال 11 المتبقية. كان الكسب غير المشروع سالكية مجموع 71٪. وقد تم قياس تدفق الدم في وريدي ترقيع arterialized في نقطة زمنية من التضحية وكان 8 ± 3 مل / دقيقة دون أي فروق ذات دلالة إحصائية بين وجهات التضحية الوقت الثلاث.
الشكل 1. تشريح الرقبة فأر. 1A) سيتوس قبل transection من العضلات القصية الترقوية الخشائية الحق. 1B) سيتوس بعد transection من العضلات القصية الترقوية الخشائية الحق.
الشكل 2 صورة مجهرية جراحة داخلية: صفعة)، ويتألف من الجسم صفعة صفعة ومقبض؛ ب) صفعة تراجع عن نهاية البعيدة من الشريان السباتي المشترك، ج) من تحامل البعيدة المشتركة مكبلة جدعة الشريان السباتي؛ د) من انقلاب للخارج جدعة المشتركة الشريان السباتي على الكفة؛ ه) تأمين مقلوبة المشتركة جدعة الشريان السباتي مع ربطة؛ و) بعد انقلاب للخارج موقع الموجودات من القاصي والداني على حد سواء المشتركة مكبلة جذوعها الشريان السباتي؛ ز) متقاطع تقنية لتقريب مكبلة 2 الشريان السباتي المشترك جذوعها، ح) بعد مداخلة موقع الموجودات وريدي، وأنا) موقع الموجودات بعد ضخه من الكسب غير المشروع وريدي مداخلة.
الشكل 3. تصوير تخطيطي للموقع الموجوداتبعد ضخه من الكسب غير المشروع وريدي مداخلة. اضغط هنا لمشاهدتها بشكل اكبر شخصية .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
فاصلة خارجي الكسب غير المشروع حبل الوريد في الشريان السباتي المشترك هو أسلوب المجهرية المتطورة. هذا الفيديو يساعد الجراح المبتدئ اتقان هذه التقنية في الحد الأدنى من الوقت مع انخفاض مضيعة للحيوانات التجارب.
التخدير Inhalative هو الخيار الأفضل لهذه العملية، لأنه يتجنب مرحلة التخدير العميق بشكل مفرط، يمكن السيطرة عليها تماما، وتتيح للجراح الوقت ما يكفي للعمل. وعلاوة على ذلك الفأر هو حيوان التجريبية التي توفر حجم مناسب لممارسة مثل هذه التقنيات الجراحية المعقدة أسهل بكثير، بالمقارنة مع الماوس.
ميزة استخدام الكفة-التقنية التي يمكن anastomosed السفن بأقطار مختلفة اللمعية. من المهم أن ligate محيط كامل من السفن مكبلة ومقلوبة لتجنب النزيف بعد ضخه. هذا النموذج هو مناسبة جدا لمحاكاة ديناميكا الدم من سرعة الدم المرتفع والمنخفض إجهاد القص ودراسة لالآليات التي تؤثر على تطور تضخم neointimal. الكفة يمنع السفينة تفاغري إعادة عرض ويؤدي الاضطراب في الكسب غير المشروع، وبالتالي تطوير تضخم neointimal.
لمنع تشكيل خثرات، لا بد من وضع التعادل الكسب غير المشروع الوريد 2 في وضع مناسب لمنع رابطة الدم مع ال 1 التعادل عقد الشريان في مكان (الشكل 3) .. 9 ربط الوريد الكسب غير المشروع في طريق أوصت يحد الخثاري الأحداث إلى 12-13٪ وانسداد الأوعية إلى نسب أقل من ذلك. 15 كما يمكن أن ينظر إليه في شريط الفيديو العملية، فإنه ليس من السهل وضع ربطة عنق تماما في هذا الموقف المقترح. الكتاب يعتبرون أن يكون حاسما لمفاغرة البعيدة، على وجه الخصوص، نظرا لاتجاه تدفق الدم. على النقيض من ذلك، لا يعتبر هذا الأمر مهما للغاية لمفاغرة القريبة لنفس السبب.
على عكس الإجراء باستخدام الخامس الأجوفعين والكسب غير المشروع، وهذا اغتراس ذاتي باستخدام الوريد الوداجي الخارجي والكسب غير المشروع يقلل من العدد اللازم من حيوانات التجارب إلى النصف. في نهاية المطاف، فاصلة خارجي الكسب غير المشروع حبل الوريد في الشريان السباتي المشترك هو أسلوب المجهرية المتطورة. هذا الفيديو يساعد الجراح المبتدئ اتقان هذه التقنية في الحد الأدنى من الوقت مع انخفاض مضيعة للحيوانات التجارب. هذا النموذج هو وسيلة ممتازة للجراحين المبتدئين لممارسة صفعة التقنيه التي تستخدم حاليا في عمليات زرع الأعضاء الصلبة في الحيوانات الصغيرة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
Acknowledgments
وقد تم تمويل هذه الدراسة من قبل "START" تعزيز برنامج البحوث في كلية الطب في جامعة آخن، ألمانيا (العنوان: "يموت Arterialisation venöser Gefäße" START 690753). نود أن نشكر السيدة ماري جوان Blümich لمساعدتها التحرير ممتازة.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Braided Silk black 7-0 | Ethicon Products | 892100 | |
| Vicryl 3-0 | Ethicon Products | J285G | |
| Vicryl 4-0 | Ethicon Products | J284G | |
| Portex non sterile nylon tubing 0.75 mm, 0.94 mm Fine-Bore Polyethylene (Polythene) Tubing | Portex UK | 800/200/175/100 | |
| Isofluorane 5 % | Any genericon | ||
| Heparin | Any genericon | ||
| 0.9% saline | Any genericon | ||
| Buprenorphine | Any genericon |
References
- Motwani, J. G., Topol, E. J. Aortocoronary saphenous vein graft disease: Pathogenesis, Predisposition, and Prevention. Circulation. 97, 916-931 (1998).
- Bonatti, J., Oberhuber, A., Schachner, T., Zou, Y., Hammerer-Lercher, A., Mittermair, R., Laufer, G. Neointimal hyperplasia in coronary vein grafts: Pathophysiology and prevention of a significant clinical problem. The Heart Surg. , E72-E87 (2004).
- Roy-Chaudhury, P., Kelly, B. S., Zhang, J., Narayana, A., Desai, P., Melhem, M., Duncan, H., Heffelfinger, S. C. Hemodialysis Vascular Access Dysfunction: From Pathophysiology to Novel Therapies. Blood Purif. 21, 99-110 (2003).
- Dixon, B. S.
- Newby, A. C., Zaltsman, A. B.
- Schachner, T., Heiss, S., Zipponi, D., Tzankov, A. Perivascular treatment with azathioprine reduces neointimal hyperplasia in experimental vein grafts. Heart Surg. 9, E515-E517 (2006).
- Zhang, L., Sivashanmugam, P., Wu, J. H., Brian, L., Exum, S. T., Freedman, N. J., Peppel, K. Tumor necrosis factor receptor-2 signaling attenuates vein graft neointima formation by promoting endothelial recovery. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 28, 284-289 (2008).
- Tzankov, A., Mairinger, T., Laufer, G., Bonatti, J. O. Local application of rapamycin inhibits neointimal hyperplasia in experimental vein grafts. Ann. Thorac. Surg. 77, 1580-1585 (2004).
- Zou, Y., Dietrich, H., Hu, Y., Metzler, B., Wick, G., Xu, Q. Mouse Model of Venous bypass graft arteriosclerosis. A.J.P. 153, 1301-1310 (1998).
- Schachner, T., Oberhuber, A., Zou, Y., Tzankov, A., Ott, H., Laufer, G., Bonatti, J. Rapamycin treatment is associated with an increased apoptosis rate in experimental vein grafts. Eur. J. Cardiothorac. Surg. 27, 302-306 (2005).
- Ali, Z., Bursill, C., Hu, Y., Choudhury, R. P., Xu, Q., Greaves, D. R., Channon, K. M. Gene transfer of a broad spectrum CC-chemokine inhibitor reduces vein graft atherosclerosis in apolipoprotein E-knockout mice. Circulation. 30, 1235-1241 (2005).
- Zou, J., Zhang, X., Yang, H., Zhu, Y., Ma, H., Wang, S. Rapamycin-loaded nanoparticles for inhibition of neointimal hyperplasia in experimental vein grafts. Ann. Vasc. Surg. 25, 538-546 (2011).
- Wang, J., Liu, K., Shen, L., Wu, H., Jing, H. Small interfering RNA to c-myc inhibits vein graft restenosis in a rat vein graft model. J. Surg. Res. 169, e85-e91 (2011).
- Schachner, T., Zou, Y., Oberhuber, A., Mairinger, T., Tzankov, A., Laufer, G., Ott, H., Bonatti, J. Perivascular application of C-type natriuretic peptide attenuates neointimal hyperplasia in experimental vein grafts. Eur. J. Cardiothorac. Surg. 25, 585-590 (2004).
- Thomas, A. C., Newby, A. C. Effect of matrix metalloproteinase-9 knockout on vein graft remodelling in mice. J. Vasc. Res. 47, 299-308 (2010).
