Summary
Neointimal hiperplazi arterialized damarlarında darlık birincil nedenidir. Biz sağ eksternal juguler ven Sprague Dawley sıçan karotis arter manşet tekniği kullanılarak aşılı sayede yeni bir protokol öneriyorum. Hayatta kalma oranı, kurban zaman noktasında% 100 idi.
Abstract
Neointimal hiperplazi biridir periferik arter bypass cerrahisi yanı sıra arteriyovenöz fistüllerde arter koroner bypass cerrahisinde büyük önem taşımaktadır arterialized damarlarında darlık başlıca nedenleri. 1-5 karotis arter ven greft interpozisyonu deneysel prosedür kaf-tekniği kullanılarak neointimal hiperplazi ve çözmemiz için tedavi seçeneklerinin etiyolojisi incelemek için çeşitli araştırma projeleri tatbik edilmiştir. 6-8 manşet neointimal hiperplazi gelişimi böylece damar anastomoz biçimlenme önler ve greft içindeki türbülansı neden ve.
Üstün kaval ven grefti kullanma venöz arterleştirilmelerine deney için kurulmuş bir küçük hayvan modelidir. 9-11 Bu akım protokolü kurulmuş bir jugular ven greft interpozisyonu ilk Zou ve arkadaşları tarafından tanımlanmıştır tekniği., 9 yanı sıra başkalarına ifade eder. 12-14
Prosedürü kolaylaştırmak ve gerektiğinde deney hayvanlarının sayısını en aza indirmek için, video eğitim bir detaylı çalışma protokolü sunulmaktadır. Bu video manşet-teknik ve ven greft interpozisyonu hem öğrenmek acemi cerrah yardımcı olacaktır. Bu vesile ile, sağ eksternal juguler ven ise günde 21, 42 ve 84, sakrifiye edildi üç eşit gruba kategorize 21 dişi Sprague Dawley cinsi rat karotis arter kaf-tekniğinde aşılanmıştır. Oto-transplantasyon yapıldı çünkü Özellikle, bir donör hayvanlar, ihtiyaç vardı. Hayatta kalma oranı, kurban zaman noktasında% 100 idi. Buna ek olarak, greft kalma oranı, ilk 10 işletilen hayvanlar için% 60 ve geriye kalan 11 hayvan için% 82 idi. Hayvanlar öldürüldükten hemen sonra da kan akışı 8 ± 3 ml / dak idi. Sonuç olarak, bu cerrahi protokol ölçüde basitleştirir, optimize eder ve bu comp standartlaştırırprosedürü Licated. Bu böylece onları hızlı bir uzmanlık kazanmak ve deney hayvanlarının gereksiz kurban engellemek için yardım, olası tehlikelerini anlatan, acemi cerrahlar kolay, adım-adım talimat verir.
Protocol
1. Deney Hayvanları
- Hayvan koruma FELASA yönergelere uygun olarak yapılacaktır tüm deneyler için bir Yerel Etik Kurul onayı edinin.
- Herhangi bir ticari yetiştirici (örn. Charles River Wiga GmbH, Sulzfeld, Almanya) satın almak için mevcut dişi Sprague-Dawley sıçan kullanın. Biz 7 hayvanlar postoperatif 3, 6 ve 12. haftalarda sakrifiye edildi her üç grupta 21 hayvan kullanılmıştır. Satın zamanda, hayvanların yaşı 12 hafta olacak ve 250-300 g tartmak gerekir.
- 21 arasında bir ortam sıcaklığında olan iklim kontrollü odalarda hayvanların tutun ° C, yiyecek ve su ücretsiz erişim ile% 60 bağıl nem ve 12 saat ışık-karanlık döngüsü.
2. Anestezi ve Operatif Hazırlama
- 1 L / dk oksijen akış hızı ayarlanır, anestezi makineye bağlı bir Pleksiglas kutu kullanarak genel anestezi neden, ve bir isofluorane buharlaştırıcı wITH% 5 anestezik gaz.
- Kısa sürede hayvanların derin duyu refleks olarak bastırılır% 1.5 isofluorane buharlaştırıcı ile anestezi koruyun.
- Bir vücut ısınma plaka üzerine sırtüstü pozisyonda sıçan Fix.
- Ağız sapı sternumun 2 cm altına çene açısı, bir epilasyon kremi ile kürk aşağı kaldırarak her hayvan Operasyon bölgesini hazırlayın.
- Cerrahi alanda, hayvan ve cerrahın önünde hazırlanan alana dikkat ederek steril bir cerrahi alan hazırlayın:
- Bir dezenfektan ile benchtop temizleyin.
- Cerrahi fırçalayın çözüm çoklu uygulamalar (örneğin Klorheksidin ve% 70 izopropil alkol) kullanılarak kesi yeri hazırlayın. Ilk alkol ikinci ve nihayet, fırçalama çözüm Klorheksidin uygulayın.
- Önceden w yıkanmış bir tek kullanımlık cerrahi önlük ve cerrahi eldiven, veya alternatif olarak, sınav eldiven giyinITH cerrahi bir dezenfektandır.
- Ameliyatınızla steril mikrocerrahi aletleri kullanın.
- 10-20-kat büyütme bir operasyon mikroskobu (Wild Heerbrugg M650, Gais, İsviçre) kullanın.
3. Anatomi
Şekil 1 sıçan boyun anatomisi gösteriyor:
Sağ sternokleidomastoid kasının transeksiyonu önce 1a) Situs.
1b) sağ SKM kasın transeksiyonu sonrası situs.
4. Manşet Hazırlık
Bir plastik boru (portex, iç çapı 0.75 mm, dış çapı 0.94 mm, Smiths Medical, UK) adlı el ile 3 mm arasında bir uzunluk olarak manşet kesin. Kelepçeler plastik tüp tam miktarı dahil olmak üzere, bir boru şeklinde manşet gövde, ve manşon hacminin yarısına oluşan bir manşon sap oluşur. Manşet vücut ve manşet kolu iki eşit lon olmalıdırg. Manşet kolu cerrahi prosedür sırasında manşon işlemek için gereklidir. Manşet geminin üzerinde süzüldü sonra, bir mini Bulldog kelepçe, kanama önlemek pozisyonda manşet tutmak ve istikrarı sağlamak amacıyla, manşet kolu ve gemi aynı anda yerleştirilir.
5. Manşet Tekniği
- Geminin üzerinde manşet Kayma.
- Hemen ardından, geminin tersyüz manşet vücudun dışında üzerinden çekin ve 7-0 ipek ligatür ile sabitleyin. Bu şekilde, manşet lümeninde endotel ile kaplıdır. Bundan sonra, manşet vücut üzerinde venöz greft kayma ve yeni 7-0 ipek ligatür ile sabitleyin. Trombüs oluşumunu önlemek için, o yerde arter tutan kravat temas kan önlemek için manşet marjı çok yakın ven grefti kravat bağlamak için gereklidir. Bu kan akış yönünü nedeniyle distal anastomoz için çok önemlidir. Bununla birlikte yazarlara göre, kabul edilmezaynı nedenle proksimal anastomoz için gereklidir.
6. Cerrahi Prosedür
Sağ eksternal juguler venin 6.1 hazırlanması
- Doğrudan ağız sapı sternumun üzerinde yaklaşık 2,5 cm uzunluğunda median servikal kesi olun.
- Tamamen çevre dokulardan sağ eksternal juguler venin 1 cm-uzun segment ayırmak
- 7-0 ipek sütür ile venöz kolları Arter.
Sağ ana karotis arter 6.2 hazırlanması
- SKM kas hazırlayın ve ortasına transeksiyonu.
- Arter veya Vagus siniri sıkıştırmak için değil, emin, dikkatli sağ ana karotis arter hazırlayın. Brakiyosefalik gövde aşağı karotid bifurkasyon onu harekete geçmek.
- Akabinde, transeksiyonu önce 7-0 ipek dikişlerle ortasında iki kez Arter.
- Bir naylon manşet consisti Kaymabir gövde ng ve bu manşon sap kap (Şekil 2b) arkasında olduğundan emin olmak için önemli olan vasıtasıyla ortak karotid arteri distal ucu üzerinde bir tutamak (Şekil 2a).
- Tam stabilite (Şekil 2c) sağlamak için manşet tanıtıcı bir mini Bulldog kelepçe ile distal karotis arter kaflı sonunda kelepçe.
- Daha sonra ortaya çıkan arteriyel güdük manşet vücut gibi uzun olmalıdır sayede ligatür, arkasında doğrudan arter kesti.
- Heparin-tuzlu su çözeltisi (20 IU heparin / ml% 0.9 NaCl) ile arteryel lümen durulayın. Daha sonra kullanmak için uygun konumda bir kenara ligasyon döngü ayarlayın.
- Arteriyel güdük yukarı çekin ve manşet vücut üzerinde bir kol gibi kayma.
- Daha sonra, ligasyon döngü ve sıkıca düğüm çekin.
- Onun kolunun dışına kaymasını arter önlemek için, bir hile uygulamaya koyabilir: sağ s ile arteriyel duvar ve sütür hem kavramakimultaneously ve sol forseps ile (Şekil 2d) düğüm (Şekil 2e) yapmak.
- Proksimal arteryel güdük (Şekil 2f) için aynı işlemi tekrarlayın.
6.3 Venöz greft konumlandırma
- Ve Özel Tüketim 1 cm-uzun segment eksternal juguler venin kenetlenir
- İki kaflı arter ven interpozisyonu birbirinden çok uzak olduğu için, yaklaşık bu işlem için doğru mesafe 3-0 Vicryl-sütür kullanarak hangi sen-meli her mini Bulldog kelepçe etrafında döngü.
- Criss-cross hem dikişler.
- Daha sonra, kaflı arteriyel kütükleri doğru konumlandırma (Şekil 2g) etkinleştirerek, zıt yönlerde sütür çekin
- Heparin-serum fizyolojik ile ven segmenti durulayın.
- Manşonlu karotid arterin distal üzerinde önceden tersine damar kademeli bir ucunda kayma ve doğru konumda içinde sabitlemekipek 7-0 ligatür ile tion.
- Bu damarın çevresi tamamen ve eşit kavramış olması gerektiğini burada not etmek önemlidir.
- Heparin-serum fizyolojik ile damar kademeli durulayın, proksimal karotis güdük fazla damar parçasının diğer ucunda kayma.
- Ligasyon (Şekil 2h) tamamlayın;
- Böylece engelsiz kan akımı ve venöz greft (Şekil 2i) arasında arterleştirilmelerine sağlayan mini Bulldog kelepçeler proksimal biri sonra diğeri, distal karotis arter kütüğünün üzerine ilk ve sonra tek tek çıkarın. Kan akımı ve nabız greft ve karotis arter (görsel olarak değerlendirilir) içinde gözlenen eğer ameliyat başarılı kabul edilir.
6.4. Yara kapatılması
Subkutan devamlı sütür için 4-0 Vicryl kullanın. Bir deri devamlı sütür için 3-0 Vicryl kullanın.
7. Kurtarma ve Postoperatif Yönetimi </ P>
- Hayvanlar kızılötesi ısınma lamba altında düz bir kağıt yatak üzerinde anestezi kurtarmak edelim. Bütün hayvanların normal görünüyor kadar hayvan tutma alanına çalışan hayvanlar iade etmeyin.
- Ameliyat sonrası 0,03-0,05 mg / kg vücut ağırlığı sc 2 gün boyunca her 8-12 saatte bir konsantrasyon içinde Buprenorfin (Temgesic) yönetmek. Buprenorfin sadece isofluorane indüksiyonundan önce uygulanan olabilir.
- Onların genel durumu ve hastalık ya da enfeksiyon belirtileri için postoperatif hayvanları izleyin.
8. Kan Akış Ölçümü
Bir perivasküler flowprobe (3 mm, MA3PSB) ile: greftinin postoperatif açıklığının bir araştırma Transonik kan akımı ölçüm sistemi (TS420, Transonik Systems Europe BV, Maastricht, Hollanda Modeli) kullanılarak, kan akış ölçümü ile ispatlandı. Sistem Doppler prensibine dayanır.
9. Temsilcisi Sonuçlar
Faithfully talimatları yukarıda tutarak, cerrahi operasyon süresi ortalama 65 dk idi. Hayvanların mükemmel fiziksel durumu sundu ve tüm deney boyunca beklenildiği gibi ağırlık kazandı: operasyonun başlangıç noktasında hayvanlar 312 tartılır ± 20.39 gr. 3 hafta kurban zamanı noktada operasyon sonrası hayvanların 6 hafta, 325.2 ± 28.7 g tartılarak 333 ± 39.9 g ve 12 haftada 362,22 ± 29 g.
Hayır enfeksiyonları operasyon sahasının ve geliştirilen hiçbir yaralar gözlendi. Ameliyat yaraları beklenen anda tamamen iyileşti. Nörolojik kontrolü beyin enfarktüsü veya motorik eksikliği belirtisi gösterdi. Hayvanlar karotis arter ameliyat edildi ve iki harici damarlarından biri kaldırıldı ve otomatik nakli olarak kullanılan bu yana daha önemli bir nokta oldu. Postoperatif ağrı azaltılması tedaviye herhangi bir alerjik reaksiyon gözlendi.
> Bütün hayvanlar, bütün deney boyunca uyanık ve sosyal edildi. Gıda ve su alma konusundaki alışkanlıkları bütün zaman boyunca değişmemiştir.
Tüm deneyler hayatta kalma oranı, kurban zaman noktasında% 100 idi. Greft kalma oranı, ilk 10 işletilen hayvanlar için% 60 ve geriye kalan 11 hayvan için buna uygun olarak% 82 idi. Toplam greft açıklığı% 71 idi. Arterialized venöz greft içinde kan akışı kurban bir zaman noktasında ölçülmüş ve 8 oldu ± üç kurban zaman noktaları arasında önemli bir fark olmaksızın, 3 ml / dakika.
Şekil 1. Sıçan boyun anatomisi. Sağ sternokleidomastoid kasının transeksiyonu önce 1a) Situs. 1b) sağ SKM kasın transeksiyonu sonrası situs.
. Şekil 2 İntraoperatif mikroskobik fotoğrafları: kaf-beden ve kaf-kolu oluşan) manşet; kelepçeli distal karotis arter güdük sıkılmasına) c, b) Kolluk karotis arter distal ucuna kaymış d) eversiyon manşet üzerinde karotis arter güdük, e) Bir ligatür ile dışa çekik karotis arter güdük güvence; f) kaflı distal ve proksimal karotis arter kütükleri hem eversiyon sonrası situs; iki kelepçeli yaklaştırmaya yönelik g) çapraz tekniği karotis arter kütükleri; h) venöz interpozisyonu sonrası situs; ven greft interpozisyonu reperfüzyon sonrasında i) situs.
Şekil 3. Situs şematik olarak gösterilmesiven greft interpozisyonu reperfüzyon. sonra büyük bir rakam görmek için buraya tıklayın .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Karotis arter bir eksternal juguler ven grefti interposing gelişmiş mikrocerrahi tekniktir. Bu video acemi cerrah deney hayvanları daha düşük bir atık olan en kısa sürede bu tekniği ana yardımcı olur.
Bu, aşırı derin anestezi aşamasında önler iyi kontrol edilebilir ve cerrahın yeterli zaman çalışmasına izin beri Solunum anestezi, bu işlem için en iyi seçenektir. Ayrıca sıçan, fare ile karşılaştırıldığında, çok daha kolay gibi karmaşık cerrahi teknikler uygulamaya uygun bir boyut sunuyor deneysel bir hayvandır.
Kaf-tekniği kullanmanın avantajı farklı lümen çapları damarları anastomoz edilebilir olmasıdır. Bu, reperfüzyon sonrası kanama önlemek için manşonlu ve dışa dönük damar tam çevresi Arter önemlidir. Bu model, yüksek kan akım hızı ve düşük kayma gerilmesi hemodinami simüle etmek ve okumak için çok uygundurneointimal hiperplazi gelişimini etkileyen mekanizmalar. Manşet geminin anastomoz biçimlenme önler ve greft içindeki türbülansı ve böylece neointimal hiperplazi gelişimini indükler.
Trombüs oluşumunu önlemek için, bu beraberlik 1 (Şekil 3) yerinde arter tutarak kan ilişki önlemek için uygun bir konumda ven grefti kravat 2 yerleştirmek için esastır. 9 önerilen şekilde ven grefti Bağlama trombotik sınırlar % 12-13 ve hatta daha düşük oranlarda damar tıkanıklığına olaylar. 15. İşlemi video Görüldüğü gibi, bu önerilen pozisyonda tam kravat yerleştirmek kolay değil. Yazarlar, çünkü kan akış yönü, özellikle de distal anastomoz için çok önemli olduğunu düşünüyoruz. Buna karşılık, bu aynı nedenle proksimal anastomoz için kesinlikle önemli olarak kabul edilmez.
Kaval v kullanarak prosedürü aksinegreft, greft yarıya deney hayvanlarının gerekli sayısını azaltır gibi eksternal juguler venin kullanarak bu ototransplantasyon olarak ein. Sonuçta, karotis arter bir eksternal juguler ven grefti interposing gelişmiş mikrocerrahi tekniktir. Bu video acemi cerrah deney hayvanları daha düşük bir atık olan en kısa sürede bu tekniği ana yardımcı olur. Bu model şu anda küçük hayvanlar, organ naklinde kullanılan kaf-tekniği uygulamak için bir acemi cerrahlar için mükemmel bir araçtır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Çıkar çatışması ilan etti.
Acknowledgments
Bu çalışma, RWTH Aachen Üniversitesi, Almanya (: START 690753 "arteriyel venöser Gefäße Die" Başlık) tıp fakültesi araştırma tanıtım programı "START" tarafından finanse edildi. Biz onu mükemmel düzenleme yardım için Bayan Mary-Joan Blümich teşekkür etmek istiyorum.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Braided Silk black 7-0 | Ethicon Products | 892100 | |
| Vicryl 3-0 | Ethicon Products | J285G | |
| Vicryl 4-0 | Ethicon Products | J284G | |
| Portex non sterile nylon tubing 0.75 mm, 0.94 mm Fine-Bore Polyethylene (Polythene) Tubing | Portex UK | 800/200/175/100 | |
| Isofluorane 5 % | Any genericon | ||
| Heparin | Any genericon | ||
| 0.9% saline | Any genericon | ||
| Buprenorphine | Any genericon |
References
- Motwani, J. G., Topol, E. J. Aortocoronary saphenous vein graft disease: Pathogenesis, Predisposition, and Prevention. Circulation. 97, 916-931 (1998).
- Bonatti, J., Oberhuber, A., Schachner, T., Zou, Y., Hammerer-Lercher, A., Mittermair, R., Laufer, G. Neointimal hyperplasia in coronary vein grafts: Pathophysiology and prevention of a significant clinical problem. The Heart Surg. , E72-E87 (2004).
- Roy-Chaudhury, P., Kelly, B. S., Zhang, J., Narayana, A., Desai, P., Melhem, M., Duncan, H., Heffelfinger, S. C. Hemodialysis Vascular Access Dysfunction: From Pathophysiology to Novel Therapies. Blood Purif. 21, 99-110 (2003).
- Dixon, B. S.
- Newby, A. C., Zaltsman, A. B.
- Schachner, T., Heiss, S., Zipponi, D., Tzankov, A. Perivascular treatment with azathioprine reduces neointimal hyperplasia in experimental vein grafts. Heart Surg. 9, E515-E517 (2006).
- Zhang, L., Sivashanmugam, P., Wu, J. H., Brian, L., Exum, S. T., Freedman, N. J., Peppel, K. Tumor necrosis factor receptor-2 signaling attenuates vein graft neointima formation by promoting endothelial recovery. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 28, 284-289 (2008).
- Tzankov, A., Mairinger, T., Laufer, G., Bonatti, J. O. Local application of rapamycin inhibits neointimal hyperplasia in experimental vein grafts. Ann. Thorac. Surg. 77, 1580-1585 (2004).
- Zou, Y., Dietrich, H., Hu, Y., Metzler, B., Wick, G., Xu, Q. Mouse Model of Venous bypass graft arteriosclerosis. A.J.P. 153, 1301-1310 (1998).
- Schachner, T., Oberhuber, A., Zou, Y., Tzankov, A., Ott, H., Laufer, G., Bonatti, J. Rapamycin treatment is associated with an increased apoptosis rate in experimental vein grafts. Eur. J. Cardiothorac. Surg. 27, 302-306 (2005).
- Ali, Z., Bursill, C., Hu, Y., Choudhury, R. P., Xu, Q., Greaves, D. R., Channon, K. M. Gene transfer of a broad spectrum CC-chemokine inhibitor reduces vein graft atherosclerosis in apolipoprotein E-knockout mice. Circulation. 30, 1235-1241 (2005).
- Zou, J., Zhang, X., Yang, H., Zhu, Y., Ma, H., Wang, S. Rapamycin-loaded nanoparticles for inhibition of neointimal hyperplasia in experimental vein grafts. Ann. Vasc. Surg. 25, 538-546 (2011).
- Wang, J., Liu, K., Shen, L., Wu, H., Jing, H. Small interfering RNA to c-myc inhibits vein graft restenosis in a rat vein graft model. J. Surg. Res. 169, e85-e91 (2011).
- Schachner, T., Zou, Y., Oberhuber, A., Mairinger, T., Tzankov, A., Laufer, G., Ott, H., Bonatti, J. Perivascular application of C-type natriuretic peptide attenuates neointimal hyperplasia in experimental vein grafts. Eur. J. Cardiothorac. Surg. 25, 585-590 (2004).
- Thomas, A. C., Newby, A. C. Effect of matrix metalloproteinase-9 knockout on vein graft remodelling in mice. J. Vasc. Res. 47, 299-308 (2010).
