Summary
Neointimal 증식이 arterialized 정맥의 협착의 주요 원인입니다. 우리는 오른쪽 바깥목 정맥은 Sprague Dawley 쥐 온목 동맥에 커프 기술을 사용하여 이식되어 상기 새로운 프로토콜을 제안합니다. 생존 속도는 희생의 시점에서 100 %이다.
Abstract
Neointimal 증식은 하나입니다 주변 동맥 우회 수술뿐만 아니라 동정맥 fistulas의 동맥 관상 동맥 바이 패스 수술에 큰 중요성의 역할 arterialized 정맥의 협착의 주요 원인. 1-5 온목 동맥에서 정맥 그래프트 개재의 실험 절차 소매 - 기술을 사용하여 neointimal 증식하고 문제를 해결할 수 치료 옵션의 aetiology을 검토하기 위해 여러 연구 프로젝트에 적용되었습니다. 6-8는 커프가 neointimal 증식의 개발함으로써 선박 anastomotic 리모델링을 방지하고 이식에서 난류를 유도합니다.
우수한 caval 정맥 이식편을 사용하면 정맥 arterialization 실험에 대한 기존 소형 동물 모델입니다. 9-11이 현재의 프로토콜 설립 경정맥 정맥 그래프트 개재의 첫번째 조우 외 의해 설명 기술., 9뿐만 아니라 다른 사람들에게 말합니다. 12-14
절차를 간소화하고 필요한 실험 동물의 수를 최소화하기 위해, 비디오 교육을 통해 자세한 동작 프로토콜이 제공됩니다. 이 동영상은 즉석 - 기술과 정맥 그래프트 개재 모두 내용을 보려면 초보자 외과 의사를하는 데 도움이됩니다. 이에, 오른쪽 바깥목 정맥는 각각 일 21 42 84,에 희생 된 그려 그룹으로 분류 21 여성 Sprague Dawley 쥐 온목 동맥에 수갑 - 기술에 이식되었다. 자동 transplantations을 수행했기 때문에 특히 더 기증자 동물은 필요 없습니다. 생존 속도는 희생의 시점에서 100 %이다. 또한, 그라프 트 명백 속도는 처음 10 운영 동물 60 %와 나머지 11 동물 82%했다. 희생의 시간에 혈액의 흐름은 8 ± 3 ML / 분이었다. 결론적으로,이 수술 프로토콜 상당히 간소화, 최적화하고 받아도 표준화절차를 licated. 그것은 따라서 그들에게 빠른 전문 지식을 얻을 수 있으며 실험 동물의 쓸모없는 희생을 방지하는 데 도움이, 가능한 함정을 설명, 초보자 외과 의사에게 쉬운 단계별 지침을 제공합니다.
Protocol
1. 실험 동물
- 동물 보호 FELASA 가이드 라인에 따라 수행 될 모든 실험에 대한 로컬 윤리위원회의 승인을 얻습니다.
- 상업적인 증식 (예 : 찰스 강 (Charles River) Wiga GmbH의, Sulzfeld, 독일)에서 구입 할 수있는 여성 Sprague-Dawley 쥐를 사용하십시오. 우리는 7 동물 postoperatively 3, 6, 12 주가 희생 된 그 각각의 세 그룹으로 나누어 21 동물을 사용했습니다. 구입 당시 동물 연령 12 주이어야하며 250~300그램 무게해야합니다.
- 21 주위 온도를 갖는 기후 제어 방에 동물을 유지 ° C, 먹이와 물을 무료로 이용할 수있는 60% 상대 습도와 12 시간 빛을 어두운주기.
2. 마취 및 수술 준비
- 1 L / 분의 산소 유량에서 설정, 마취 기계에 연결된 Plexiglas 상자를 사용하여 전신 마취를 유도하고, isofluorane vaporizer wi 번째 5퍼센트 마취 가스.
- 즉시 동물의 깊은 감각 반사 신경 등의 억압 아르 1.5 %에서 isofluorane vaporizer로 마취를 유지합니다.
- 몸 온난화 판에 위로 향한 위치에 쥐 문제를 해결했습니다.
- 흉골 병 sterni 아래 2cm에 턱 각도에서 depilation 크림과의 털을 제거하여 각 동물의 작업 영역을 준비합니다.
- 수술 지역, 동물과 외과 의사의 전면에 준비 영역에 관심을 지불하여 무균 수술 필드를 준비 :
- 살균제로 benchtop를 청소합니다.
- 수술 스크럽 솔루션의 여러 응용 프로그램 (예 : Chlorhexidine 및 70% 이소 프로필 알코올)를 사용하여 절개 사이트를 준비합니다. 먼저 알코올 둘째, 결국은 스크럽 솔루션을 Chlorhexidine을 적용합니다.
- 이전 w를 씻어 된 일회용 수술 가운 및 수술 장갑, 또는 대안 적으로, 시험 장갑을 착용i 번째 수술 살균제.
- 운영 절차에 무균 미세 악기를 사용하십시오.
- 10-20 배 확대에서 작업 현미경 (야생 Heerbrugg M650, 가이 스, 스위스)를 사용하십시오.
3. 해부
그림 1은 쥐의 목의 해부학 적 구조를 도시 :
오른쪽 목 빗근의 절개 전에 1a)를 원위치.
1B) 오른쪽 목 빗근의 절개 후 원위치.
4. 커프 준비
플라스틱 튜브 (Portex, 내경 0.75 mm, 외경 0.94 mm), 스미스 (Smiths 의료, 영국)에서 손으로 3mm의 길이에 수갑을 잘라 버릴거야. 수갑은 플라스틱 튜브의 전체 볼륨을 포함하는 관 모양의 커프 몸과 커프 볼륨의 절반 구성된 커프 핸들로 구성되어 있습니다. 커프 몸과 커프 핸들 모두 동일 경도해야g. 커프 핸들은 수술하는 동안 수갑 조작을 위해 필수적입니다. 소매는 혈관을 통해 미끄러 진 후, 소형 불독 클램프는 출혈 방지 위치에 수갑 유지하고 안정성을 보장하기 위해 커프 핸들과 혈관에 동시에 배치됩니다.
5. 커프 기술
- 혈관을 통해 수갑 나오십시오.
- 즉시 나중에, 혈관을 뒤집다 커프 몸의 바깥쪽으로 당겨와 7-0 실크 봉합사로 해결할 수 있습니다. 이러한 방법으로, 즉석의 내강은 내피로 덮여 있습니다. 이후 커프 몸 위에 정맥 이식편을 풀하고 새 7-0 실크 봉합사로 해결할 수 있습니다. 혈전 형성을 방지하기 위해, 그것은 곳에서 동맥을 가지고있는 넥타이를 접촉에서 혈액을 방지하기 위해 즉석 여백에 매우 가까운 정맥 그래프트 넥타이를 고정하는 것이 필수적입니다. 이것은 혈액의 흐름 방향에 의한 말초 문합을위한 중요합니다. 그러나 저자에 의하면,이 간주되지 않습니다같은 이유로 근위 문합을 위해 필수적.
6. 수술
오른쪽 바깥목 정맥의 6.1 준비
- 직접 흉골 병 sterni 위의 대략 2.5 cm 길이의 평균 자궁 절개를합니다.
- 완전히 주변 조직에서 오른쪽 바깥목 정맥의 1cm 길이 세그먼트를 분리
- 7-0 실크 봉합과 정맥 지류를 Ligate.
오른쪽 온목 동맥 6.2 준비
- 목 빗근을 준비하고 중간에 가로로 쪼개다.
- 동맥 또는 미주 신경을 압축하지 않도록하기 조심스럽게 오른쪽 온목 동맥을 준비합니다. 팔 머리 트렁크 아래로 경동맥 분기에서 시켜라.
- 그 후, 절개 전에 7-0 실크 봉합과 함께 중간에 두 번 ligate.
- 나일론 커프스 consisti 슬립몸의 NG하고 커프 핸들이 혈관 (그림 2B) 뒤에 확인하는 것이 중요하다 상기 온목 동맥의 말단부를 통해 핸들 (그림 2A).
- 정확히 안정성 (그림 2C)를 보장 할 수있는 커프 손잡이에 작은 불독 클램프와 말초 온목 동맥의 수갑에 채워진 끝을 고정.
- 그 후, 그 결과 동맥 그루터기는 커프 몸만큼이어야된다 봉합사, 뒤에 직접 동맥을 잘라.
- 헤파린 - 생리 식염수 (20 IU 헤파린 / ML 0.9 % NaCl)의 동맥 내강을 씻어. 나중에 사용하기 위해 적절한 위치에 따로 결합 루프를 설정합니다.
- 동맥 몸통 올려와 커프 몸에 비해 슬리브처럼 나오십시오.
- 그 후, 결합 루프와 단단히 매듭을 당겨.
- 의 소매 밖으로 미끄러지는 동맥을 방지하기 위해, 당신은 트릭을 수행 할 수 있습니다 : 오른쪽 s의 동맥 벽 봉합을 모두 파악imultaneously과 왼쪽 집게로 (그림 2D) 매듭 (그림 2e)를합니다.
- 근위 동맥 그루터기 (그림 2F)에 대해 동일한 절차를 반복합니다.
6.3 정맥 그라프 트 위치
- 의 소비세 1cm 길이 세그먼트가 바깥목 정맥을 고정
- 두 수갑에 채워진 동맥은 정맥 개재에 대해 서로 너무 멀리 떨어져 있기 때문에, 대략이 절차에 대한 올바른 거리가 3-0 Vicryl - 봉합을 사용하는 당신이 할 각 미니 겸자 주변 루프.
- 십자로 모두 봉합.
- 그 후, 수갑에 채워진 동맥 stumps의 적절한 위치 (그림 2g)을 가능하게 반대 방향으로 봉합을 뽑아
- 헤파린 - 생리 식염수로 정맥 세그먼트를 씻어.
- 수갑에 채워진 말초 경동맥을 통해 이전에 반대 정맥 세그먼트의 한쪽 끝을 살짝하고 올바른 posi에 확보실크 7-0 봉합사로 기.
- 이 정맥의 원주가 완전히 균등하게 파악해야한다는 여기서주의하는 것이 중요합니다.
- 헤파린 - 생리 - 솔루션 정맥 세그먼트를 헹구고, 근위 경동맥 잘린 통해 정맥 세그먼트의 다른 쪽 끝을 나오십시오.
- 결합 (그림 2 시간)를 작성,
- 이를 통해 탁 트인 혈액 흐름과 정맥 이식편 (그림 2i)의 arterialization을 허용, 미니 불독 클램프에게 근위 하나에 다음 다른 말초 경동맥 등 걸에서 첫 번째 및 이후 하나를 제거합니다. 혈액 흐름과 맥동이 이식과 온목 동맥 (시각적 평가)에서 관찰하는 경우 수술이 성공적으로 간주됩니다.
6.4. 상처 폐쇄
피하 실행을 봉합를 들어, 4-0 Vicryl을 사용합니다. 피부 실행 봉합를 들어, 3-0 Vicryl을 사용합니다.
7. 복구 및 수술 관리 </ P>
- 동물 적외선 온난화 램프 아래에 평면 종이 침대에 마취에서 회복 보자. 모든 동물이 정상적인 나타날 때까지 동물 지주 영역으로 인식 동물을 반환하지 않습니다.
- Postoperatively 0.03-0.05 MG / kg BW SC 2 일간 모든 8-12 시간의 농도에 Buprenorphine을 (Temgesic) 관리 할 수 있습니다. Buprenorphine 단 isofluorane 유도하기 전에 관리 할 수 있습니다.
- 자신의 일반 상태와 질병이나 감염의 징후에 대한 postoperatively 동물을 모니터링 할 수 있습니다.
8. 혈액 흐름 측정
perivascular flowprobe (3mm, MA3PSB)로 : 이식의 수술 명백는 연구 음속에 가까운 혈액의 흐름 측정 시스템 (TS420, 음속에 가까운 시스템 유럽 BV, 마스 트리 히트, 네덜란드 모델)를 사용하여, 혈액의 흐름 측정에 의해 입증되었다. 시스템은 도플러 원리에 기반을두고 있습니다.
9. 대표 결과
F 별aithfully 지침을 상기 유지, 외과 수술의 평균 기간은 65 분 정도 였고. 동물은 훌륭한 신체 조건을 제시하고 전체 실험을하는 동안 예상대로 몸무게가 늘 었는데 : 작업의 시작 시점에서 동물 312 무게 ± 20.39 g. 3 주 희생 시점에서 사후 operatively 동물 육주에서 325.2 ± 28.7 g 무게 333 ± 39.9 g, 12 주짜리 362.22 ± 29g.
어떤 감염은 수술 사이트와 개발없이 염증에 관찰되지 않았습니다. 작업 상처가 예정 시간에 완전히 고쳐 주셨다. 신경 제어 뇌 경색이나 motoric 결핍의 흔적을 보여 주었다 없습니다. 동물 경동맥에서 운영되었으며 두 바깥목 정맥의 하나가 제거 및 자동 이식으로 사용 된 이후는 나중에 중요한 포인트이었습니다. 수술 후 통증 완화 치료는 전혀 알레르기 반응은 관찰되지 않았습니다.
> 모든 동물은 전체 실험을하는 동안 경계 및 사회했다. 음식과 물을받을 관한 그들의 습관는 전체 기간 동안 변경되지 남아 있었다.
모든 실험의 생존 속도는 희생의 시점에서 100 %이다. 그라프 트 명백 속도는 처음 10 운영 동물 60 %와 나머지 11 동물 따라 82%했다. 총 그래프트 명백 71 %이다. arterialized 정맥 이식의 혈액 흐름 희생의 시점에서 측정과 8였습니다 ± 세 희생 시간 포인트 사이에 통계적으로 의미있는 차이가없는 3 ML / 분.
그림 1. 쥐의 목의 해부학. 오른쪽 목 빗근의 절개 전에 1a)를 원위치. 1B) 오른쪽 목 빗근의 절개 후 원위치.
. 그림 2 Intraoperative 현미경 사진 : 커프 - 몸과 즉석-핸들로 구성된) 커프스, 수갑에 채워진 말초 온목 동맥 그루터기의 클램핑) C; b)는 커프가 온목 동맥의 말단부 위에 미끄러의 D) eversion 소매를 통해 온목 동맥 그루터기, 전자)는 끈으로 everted 온목 동맥 몸통 확보, F) 수갑에 채워진 말초 및 근위 온목 동맥 stumps 모두의 eversion 후 원위치, 두 수갑에 채워진 상태의 근사치에 대한 g)는 십자의 기술 온목 동맥 stumps, H) 정맥 개재 후 원위치, 정맥 개재 이식의 reperfusion 후에) 원위치.
그림 3. 원위치의 도식 묘사정맥 개재 이식의 reperfusion. 이후 더 큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오 .
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Discussion
온목 동맥 바깥목 정맥 이식편을 Interposing 것은 정교한 미세 기술이다. 이 동영상은 초보자 외과 의사가 실험 동물의 낮은 폐기물을 최소한의 시간에이 기술을 습득하는 데 도움이됩니다.
는, 지나치게 깊은 마취 무대를 방지 잘 제어 할 수 있으며, 외과 의사 충분한 시간을 조작 할 수 있기 때문에 Inhalative 마취는이 작업에 대한 최선의 방법입니다. 또한 쥐가 마우스에 비해, 훨씬 더 쉽게 그런 복잡한 수술 기술을 연습 할 수있는 적당한 크기를 제공하는 실험 동물이다.
소매 - 기법을 사용의 장점은 다른 luminal 직경과 혈관이 anastomosed 할 수 있다는 것입니다. 그것은 reperfusion 후 출혈을 방지하기 위해 수갑에 채워진 상태와 everted 선박의 전체 둘레를 ligate하는 것이 중요합니다. 이 모델은 높은 혈액 속도와 낮은 전단 응력의 혈류 역학을 시뮬레이션하고 공부하는 것은 매우 적합합니다neointimal 증식의 개발에 영향을 미칠 메커니즘. 수갑은 혈관 anastomotic 리모델링을 방지하고 이식 내의 난류함으로써 neointimal 증식의 개발을 유도한다.
thrombi 형성을 방지하기 위해,이 동점 1 (그림 3) 장소에 동맥을 개최과 피 연결을 방지 할 수있는 적절한 위치에 정맥 이식 넥타이 2 배치하는 것이 필수적입니다. 9 권장 방법으로 정맥 이식편을 매는 것은 thrombotic 제한 12~13% 및 더 낮은 비율로 용기의 가림에 이벤트. 15가 작동 동영상에서 볼 수 있듯이, 그렇게 제안 된 위치에 정확히 넥타이를 배치 쉽지 않습니다. 저자는 때문에 혈액의 흐름 방향으로, 특히 말초 문합에 중요한 것으로 생각합니다. 대조적으로, 이것은 같은 이유로 근위 문합을 위해 절대적으로 중요하게 고려되지 않습니다.
caval v를 사용하여 프로 시저와는 달리그라프 트, 그라프 트가 반으로 실험 동물의 필요한 수를 줄이고로 바깥목 정맥를 사용하여이 autotransplantation로 EIN. 궁극적으로, 온목 동맥 바깥목 정맥 이식편을 interposing 것은 정교한 미세 기술이다. 이 동영상은 초보자 외과 의사가 실험 동물의 낮은 폐기물을 최소한의 시간에이 기술을 습득하는 데 도움이됩니다. 이 모델은 현재 작은 동물의 고체 장기 이식에 사용되는 즉석-기법을 연습 할 초보 의사 수있는 훌륭한 수단입니다.
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Disclosures
관심 없음 충돌이 선언 없습니다.
Acknowledgments
이 연구는 RWTH 아헨 대학, 독일 (: START 690753 "Arterialisation venöser Gefäße 다이 '제목)의 의료 교수진의 연구 진흥 프로그램"START "의 지원을받는되었다. 우리는 그녀의 뛰어난 편집에 도움 부인 메리 - 조안 Blümich 감사드립니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Braided Silk black 7-0 | Ethicon Products | 892100 | |
| Vicryl 3-0 | Ethicon Products | J285G | |
| Vicryl 4-0 | Ethicon Products | J284G | |
| Portex non sterile nylon tubing 0.75 mm, 0.94 mm Fine-Bore Polyethylene (Polythene) Tubing | Portex UK | 800/200/175/100 | |
| Isofluorane 5 % | Any genericon | ||
| Heparin | Any genericon | ||
| 0.9% saline | Any genericon | ||
| Buprenorphine | Any genericon |
References
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