압축시키는 것 / 확장시키는 반응 (압력 myography를 사용하여)의 측정 병렬 절연 동맥 근세포 (패치가 electrophysiological 기술 클램프 사용)에서 Kv7 (KCNQ) 칼륨 채널 활동의 측정은 혈관 평활근의 생리학에 Kv7 채널의 역할에 대한 중요한 정보를 공개 할 수 있습니다 약리학.
저항 동맥의 벽 내의 평활근 세포의 수축이나 이완이 동맥 직경을 결정함으로써 혈관을 혈액의 흐름을 제어하고 조직 혈압에 기여한다. 수축 과정은 주로 이온 수송 및 채널의 다양한 의해 제어 차례에 cytosolic 칼슘 농도 ([칼슘 2 +] cyt)에 의해 조절된다. 이온 채널은 혈관 수축 또는 vasodilation에 영향을 미치도록 vasoactive 호르몬에 의해 활성화 신호 전달 경로의 일반적인 중간체 있습니다. 그리고 이온 채널은 종종 두 의도적으로 치료 대리인 또는 실수 (원치 않는 심장 혈관 부작용을 유발하는 등) (예 : 칼슘 채널 차단제가 vasodilation과 낮은 혈압을 유도하기 위해 사용)에 의해 타겟팅 할 수 있습니다.
Kv7 (KCNQ) 전압 활성화 칼륨 채널은 최근에 중요한 생리 및 치료 targ으로 연루되어있다부드러운 근육 수축의 조절을위한 ETS. 생리적 신호 전달 모두와 치료 대리인의 행동에 Kv7 채널의 특정 역할을 명료하게하다하기 위해, 우리는뿐만 아니라 그대로 동맥의 맥락에서의 공헌을 평가로서 활동이 세포 수준에서 조절이 얼마나 공부를해야합니다.
쥐 창 자간 막 동맥 유용한 모델 시스템을 제공합니다. 동맥은 쉽게 해부하는 결합 조직의 청소 및 패치 클램프 전기 생리학에 대한 격리 된 동맥 근세포를 준비하는 데 사용하거나, cannulated 상대적으로 생리적 조건 하에서 혈관 수축 제라 / vasodilator 응답 측정을 위해 가압 될 수 있습니다. 여기 측정의 두 가지 유형에 사용되는 방법을 설명하고 실험 디자인 혈관 톤의 규정에 이러한 이온 채널의 역할을 명확하게 이해를 제공하기 위해 통합 될 수있는 방법의 예를 제공합니다.
여기에서 설명한 방법과 실험 방법은 아주 강력하고 세부 사항에 세심한주의를 적용 할 경우 명확하고 재현 결과를 생성 할 수 있습니다. 좋은 electrophysiological 레코딩 및 수축 / 동맥 세그먼트의 팽창은 각각 셀 및 동맥 세그먼트의 건강에 따라 달라집니다. 셀 준비는 동일한 프로토콜을 사용하여, 날마다 다를 수 있습니다. 절연 솔루션은 최대 2 주까지 사용할 수 있지만 셀 준비의 품질은 두 결과…
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 KLB와 미국 심장 협회 (09PRE2260209)와 BKM에 아서 J. 슈미트 재단의 사전 박사 장학금으로 국립 심장, 폐, 및 혈액 연구소 (NIH R01-HL089564)의 교부금으로 운용되었다.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Sodium Chloride | Sigma | S5886 | Dissecting Solution: 145 Bath solution for Electrophysiology*: 140 Internal solution for electrophysiology: 10 Isolation solution for myocytes*: 140 Bath solution for pressure myography: 145 Lumen solution for pressure myography: 145 |
Potassium chloride | Sigma | P5405 | Dissecting Solution: 4.7 Bath solution for Electrophysiology*: 5.36 Internal solution for electrophysiology: 135 Isolation solution for myocytes*: 5.36 Bath solution for pressure myography: 4.7 Lumen solution for pressure myography: 4.7 |
Potassium EGTA | Sigma | E4378 | Internal solution for electrophysiology: 0.05 |
HEPES | Sigma | H9136 | Bath solution for Electrophysiology*: 10 Internal solution for electrophysiology: 10 Isolation solution for myocytes*: 10 |
Disodium hydrogen phosphate | Sigma | S5136 | Isolation solution for myocytes*: 0.34 |
Potassium hydrogen phosphate | Sigma | P5655 | Isolation solution for myocytes*: 0.44 |
Magnesium Chloride | Sigma | M2393 | Bath solution for Electrophysiology*: 1.2 Internal solution for electrophysiology: 1 Isolation solution for myocytes*: 1.2 |
Calcium Chloride | Sigma | C7902 | Bath solution for Electrophysiology*: 2 Isolation solution for myocytes*: 0.05 |
Sodium phosphate | Fisher Scientific | BP331-1 | Dissecting Solution: 1.2 Bath solution for pressure myography: 1.2 Lumen solution for pressure myography: 1.2 |
Magnesium Sulfate | Sigma | M2643 | Dissecting Solution: 1.17 Bath solution for pressure myography: 1.17 Lumen solution for pressure myography: 1.17 |
MOPS | Fisher Scientific | BP308 | Dissecting Solution: 3 Bath solution for pressure myography: 3 Lumen solution for pressure myography: 3 |
Pyruvic acid | Sigma | P4562 | Dissecting Solution: 2 Bath solution for pressure myography: 2 Lumen solution for pressure myography: 2 |
EDTA dihydrate | Research Organics | 9572E | Dissecting Solution: 0.02 Bath solution for pressure myography: 0.02 Lumen solution for pressure myography: 0.02 |
D-Glucose | Sigma | G7021 | Dissecting Solution: 5 Bath solution for Electrophysiology*: 10 Internal solution for electrophysiology: 20 Isolation solution for myocytes*: 10 Bath solution for pressure myography: 5 Lumen solution for pressure myography: 5 |
Bovine serum albumin | Sigma | A3912 | Dissecting Solution: 1% Lumen solution for pressure myography: 1% |
pH | Dissecting Solution: 7.4 Bath solution for Electrophysiology*: 7.3 Internal solution for electrophysiology: 7.2 Isolation solution for myocytes*: 7.2 Bath solution for pressure myography: 7.4 Lumen solution for pressure myography: 7.4 |
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Osmolarity | Dissecting Solution: 300 Bath solution for Electrophysiology*: 298 Internal solution for electrophysiology: 298 Isolation solution for myocytes*: 298 Bath solution for pressure myography: 300 Lumen solution for pressure myography: 300 |
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*11 |
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Table 1. Components of solutions used in the experiment. |