Изучение артериальной гладких мышц KV7 калиевых каналов функцию с помощью Patch Clamp электрофизиологии и давления Миография

Summary

Измерения KV7 (KCNQ) калиевого канала активности в изолированной артериальной миоцитов (с помощью патча зажим электрофизиологические методы) параллельно с измерениями констриктор / расширитель ответы (с помощью давления миография) могут выявить важную информацию о роли KV7 каналы в гладких сосудистых мышц и физиологии фармакологии.

Abstract

Сокращение или расслабление гладких мышечных клеток в стенах сопротивление артерий определяет диаметр артерий и тем самым контролирует поток крови через сосуд и вносит свой вклад в системное артериальное давление. Сокращение процесс регулируется прежде всего цитозольной концентрации кальция ([Ca ^{2 +]} _цит), которая в свою очередь контролируется с помощью различных ионных транспортеров и каналов. Ионные каналы являются общими промежуточных сигнальных путей активируется вазоактивных гормонов для осуществления сужение сосудов или сосудов. И ионные каналы зачастую становятся мишенью терапевтических агентов, либо намеренно (например, блокаторы кальциевых каналов используется, чтобы вызвать расширение сосудов и снижение артериального давления) или непреднамеренно (например, чтобы вызвать нежелательные сердечно-сосудистых побочных эффектов).

KV7 (KCNQ) напряжение активированного калиевых каналов в последнее время были вовлечены в качестве важной физиологической и терапевтической ТаргETS для регуляции сокращения гладких мышц. Для выяснения конкретных ролей KV7 каналов, как в физиологическом передачи сигнала и в действиях терапевтических агентов, мы должны изучить, как их деятельность модулированные на клеточном уровне, а также оценить их вклад в контексте интактной артерии.

Артерий крыс брыжеечных обеспечить полезную модель системы. Артерий может быть легко рассеченные, очищают от соединительной ткани и используются для подготовки изолированной артериальной миоциты для патч зажим электрофизиологии, или канюлю и давлением для измерения сосудосуживающие / сосудорасширяющее ответов при относительно физиологических условиях. Здесь мы опишем методы, используемые для обоих типов измерений и привести несколько примеров того, как экспериментальная конструкция может быть интегрирована, чтобы обеспечить более четкое понимание роли этих ионных каналов в регуляции сосудистого тонуса.

Protocol

1. Хирургическое иссечение тонкого кишечника Аркады сосудистой Брыжеечные Anesthetize 300-400 г Sprague-Dawley крыс с изофлурана (4%) вводят путем ингаляции. Выполните средней линии лапаротомия, чтобы разоблачить брыжейки тонкого кишечника. Экстериоризироваться тонкой и толстой кишки чере…

Discussion

Методы и экспериментальных подходов, описанных здесь довольно надежная и может производить четкие и воспроизводимые результаты при применении с тщательным вниманием к деталям. Хорошо электрофизиологических записей и сужение / расширение артериальных сегментов зависит от здоровья к…

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Sodium Chloride	Sigma	S5886	Dissecting Solution: 145 Bath solution for Electrophysiology*: 140 Internal solution for electrophysiology: 10 Isolation solution for myocytes*: 140 Bath solution for pressure myography: 145 Lumen solution for pressure myography: 145
Potassium chloride	Sigma	P5405	Dissecting Solution: 4.7 Bath solution for Electrophysiology*: 5.36 Internal solution for electrophysiology: 135 Isolation solution for myocytes*: 5.36 Bath solution for pressure myography: 4.7 Lumen solution for pressure myography: 4.7
Potassium EGTA	Sigma	E4378	Internal solution for electrophysiology: 0.05
HEPES	Sigma	H9136	Bath solution for Electrophysiology*: 10 Internal solution for electrophysiology: 10 Isolation solution for myocytes*: 10
Disodium hydrogen phosphate	Sigma	S5136	Isolation solution for myocytes*: 0.34
Potassium hydrogen phosphate	Sigma	P5655	Isolation solution for myocytes*: 0.44
Magnesium Chloride	Sigma	M2393	Bath solution for Electrophysiology*: 1.2 Internal solution for electrophysiology: 1 Isolation solution for myocytes*: 1.2
Calcium Chloride	Sigma	C7902	Bath solution for Electrophysiology*: 2 Isolation solution for myocytes*: 0.05
Sodium phosphate	Fisher Scientific	BP331-1	Dissecting Solution: 1.2 Bath solution for pressure myography: 1.2 Lumen solution for pressure myography: 1.2
Magnesium Sulfate	Sigma	M2643	Dissecting Solution: 1.17 Bath solution for pressure myography: 1.17 Lumen solution for pressure myography: 1.17
MOPS	Fisher Scientific	BP308	Dissecting Solution: 3 Bath solution for pressure myography: 3 Lumen solution for pressure myography: 3
Pyruvic acid	Sigma	P4562	Dissecting Solution: 2 Bath solution for pressure myography: 2 Lumen solution for pressure myography: 2
EDTA dihydrate	Research Organics	9572E	Dissecting Solution: 0.02 Bath solution for pressure myography: 0.02 Lumen solution for pressure myography: 0.02
D-Glucose	Sigma	G7021	Dissecting Solution: 5 Bath solution for Electrophysiology*: 10 Internal solution for electrophysiology: 20 Isolation solution for myocytes*: 10 Bath solution for pressure myography: 5 Lumen solution for pressure myography: 5
Bovine serum albumin	Sigma	A3912	Dissecting Solution: 1% Lumen solution for pressure myography: 1%
pH			Dissecting Solution: 7.4 Bath solution for Electrophysiology*: 7.3 Internal solution for electrophysiology: 7.2 Isolation solution for myocytes*: 7.2 Bath solution for pressure myography: 7.4 Lumen solution for pressure myography: 7.4
Osmolarity			Dissecting Solution: 300 Bath solution for Electrophysiology*: 298 Internal solution for electrophysiology: 298 Isolation solution for myocytes*: 298 Bath solution for pressure myography: 300 Lumen solution for pressure myography: 300
			*11
			Table 1. Components of solutions used in the experiment.