Summary

An<em> In Vitro</emFizyolojik Hareketleri Besleme Motor Programlar ortaya çıkartılması ve kayıt için> Hazırlık<em> Aplysia'nın californica</em

Published: December 05, 2012
doi:

Summary

Biz ekstraselüler kayıt ve sinirler, kaslar ve bireysel tespit nöronlardan uyarmak için bir teknik tarif<em> In vitro</em> Eliciting ve besleme aygıtı içinde davranışlar besleme farklı gözleyerek<em> Aplysia'nın</em>.

Abstract

Işlevliliği, birden çok, farklı davranışlar 1 oluşturmak için bir periferik yapının özelliği, hayvanlar hızla değişen çevresel davranışlarını uyum sağlar. Deniz yumuşakça Aplysia'nın californica multifunctionality çalışma için uysal sistemi sağlar. Besleme sırasında, Aplysia aynı besleme aygıtı, bukkal kütle kullanılarak davranış birkaç farklı türde oluşturur. Bu davranışları kontrol eden ganglionlar elektrofizyolojik çalışma için erişilebilir büyük, tespit nöronların bir dizi içerir. Bu nöronların aktivitesi sinirsel faaliyet için gıda grasper göreli kapatan sinirsel faaliyet ve zamanlama bağlı olarak iki tip ingestive ve egestive programları, ayrılabilir motorlu programları tarif edilmiştir ki uzattığını ya da geri çekilir grasper 2. Ancak izole ganglionlar, bu davranışlar üretecektir kas hareketleri yapma, bulunmadığınasert vivo, sinir ve kas kayıtlarında programları 2,3,4 beslenme karşılık elde edilmiştir. gözlenen motor programları gerçek davranışları bağıntılarını olup olmadığını emin olmak, ancak bunu doğrudan 5 bireysel nöronların kaydetmek çok zor olduğu. Buna ek olarak, in vivo olarak, ingestive programların daha fazla ısırma ve yutar 1,2, en önceden anlatılan in vitro müstahzarlar olarak yapmak zor olan bir ayrım ayrılabilir.

Askıya bukkal kütle hazırlama (Şekil 1) izole ganglia ve sağlam hayvanlar arasındaki boşluğu kapatıyor. Bu hazırlık, ingestive davranışlar – ısırma ve yutma de dahil olmak üzere – bireysel nöronların kaydedilen ve ekstrasellüler elektrotlar 6 ile stimüle edilebilir olarak ve egestive davranışlar (red), aynı zamanda da gözlemlenebilir. Bu farklı davranışlarla ilişkili beslenme hareketleri recor olabilirded, ölçülebilir, ve motor programları ile doğrudan ilişkilidir. Askıya bukkal kitle hazırlanmasında motoru programları Motor programları izole ganglionlar elicited olandan in vivo gözlenen daha benzer olduğu görülmektedir. Bu nedenle, bu hazırlama, motor programların daha direkt olarak in vivo davranış ile ilgili olabilir, aynı zamanda, bireysel nöronların bozulmamış hayvanlarda daha kayıt ve uyarma için daha erişilebilir. Bunun yanında izole ganglia ve sağlam hayvanlar arasında bir ara adım, askıya bukkal kitle bulguları daha az ve daha sağlam hem ortamlarda elde edilen verileri yorumlamada yardımcı olabilir. Askıya bukkal kütle hazırlama Aplysia'nın içinde multifunctionality nöral kontrolü tanımlamak için yararlı bir araçtır.

Protocol

1. Çözeltilerin Hazırlanması Hayvanlar tutulduğu, tuzlu su (~ 1.000 millosmolar) ile izotonik magnezyum klorür çözeltisi hazırlamak için, istenen cilt seviyesinde büyük bir sürahi işaret eder. Bu seviyenin yaklaşık% 80 saf su ile testi doldurun, ve son hacmi 333 mM çözüm oluşturmak için magnezyum klorür hekzahidrat uygun miktarda tarttın. Sürahi magnezyum klorür ilave edin, kapağını kapatın ve magnezyum klorür tamamen eriyene kadar kuvvetlice çalkalanır, sonra son hacim ulaşı…

Representative Results

When an extracellular electrode is positioned above a neuron’s soma and used to stimulate the neuron, a one-for-one correspondence between spikes on the soma channel and on the nerve(s) the neuron projects to can be observed (Figure 6, left panel, stimulation of identified neuron B9). The soma channel (top channel) is set to stimulating mode when the current is applied (time 1 in the figure), and is then quickly switched to recording mode (time 2). By maintaining the position of the electrode, the…

Discussion

Önceki iş sağlam hayvan ve tür izole ganglionlar azaltılmış hazırlıklarda, Aplysia'nın motorlu programları karakterize etmiştir. Bireysel nöronların kayıtları 5 elde edilmiş olmasına rağmen sağlam hayvan olarak, bu tür deneyler çok zordur, ve elektrotlar beslenme sırasında nörona nörondan taşınamaz. Izole ganglionlar, sinir aktivitesi tarafından indüklenen beslenme hareketleri izlenememektedir. Askıya bukkal kitle hazırlanması bu iki uç arasındaki boşluğu kapa…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu araştırma NIH hibe NS047073 ve NSF hibe DMS1010434 tarafından desteklenmiştir.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Sodium chloride Fisher Scientific S671 Biological, Certified
Potassium chloride Fisher Scientific P217 Certified ACS
Magnesium chloride hexahydrate Acros Organics 19753 99%
Magnesium sulfate heptahydrate Fisher Scientific M63 Certified ACS
Calcium chloride dihydrate Fisher Scientifc C79 Certified ACS
Glucose (dextrose) Sigma-Aldrich G7528 BioXtra
MOPS buffer Acros Organics 17263 99%
Carbachol Acros Organics 10824 99%
Sodium hydroxide Fisher Scientific SS255 Certified
Hydrochloric acid Fisher Scientific SA49 Certified
Single-barreled capillary glass A-M Systems 6150  
Flaming-Brown micropipette puller model P-80/PC Sutter Instruments   Filament used: FT345B
Enamel coated stainless steel wire California Fine Wire   0.001D, coating h
Household Silicone II Glue GE    
Duro Quick-Gel superglue Henkel corp.    
A-M Systems model 1700 amplifier A-M Systems   Filter settings: 300-500 Hz nerves,10-500 Hz I2 muscle
Pulsemaster Multi-Channel Stimulator World Precision Instruments A300  
Stimulus Isolator World Precision Instruments A360  
AxoGraph X AxoGraph Scientific    
Veeder-Root Totalizing Counter Danaher C342-0562  
Gold Connector Pins Bulgin SA3148/1  
Gold Connector Sockets Bulgin SA3149/1  
Sylgard 184 Silicone Elastomer Dow Corning    
100 x 50 mm Crystalizing Dish Pyrex    
High Vacuum Grease Dow Corning    
Pipet Tips Fisher Scientific 21-375D  
Minutien Pins Fine Science Tools 26002-10  
Modeling Clay Sargent Art 22-4400  
Silk Sutures Ethicon K89OH  
Whisper Air Pump Tetra 77849  
Aquarium Tubing Eheim 7783 12/16 mm
Elite Airstone Hagen A962  
Vannas Spring Scissors Fine Science Tools 15000-08  
Dumont #5 Fine Forceps Fine Science Tools 11254-20  
Yaki Sushi Nori Seaweed Rhee Bros    
Kimwipes Kimberly-Clark 34155  

References

  1. Neustadter, D. M., Herman, R. L., Drushel, R. F., Chestek, D. W., Chiel, H. J. The kinematics of multifunctionality: comparisons of biting and swallowing in Aplysia californica. J. Exp. Biol. 210, 238-260 (2007).
  2. Morton, D. W., Chiel, H. J. In vivo buccal nerve activity that distinguishes ingestion from rejection can be used to predict behavioral transitions in Aplysia. J. Comp. Physiol. A. 172, 17-32 (1993).
  3. Hurwitz, I., Neustadter, D., Morton, D. W., Chiel, H. J., Susswein, A. J. Activity patterns of the B31/B32 pattern initiators innervating the I2 muscle of the buccal mass during normal feeding movements in Aplysia californica. J. Neurophys. 75, 1309-1326 (1996).
  4. Cullins, M. J., Chiel, H. J. Electrode fabrication and implantation in Aplysia californica for multi-channel neural and muscular recordings in intact, freely behaving animals. J. Vis. Exp. (40), e1791 (2010).
  5. Warman, E. N., Chiel, H. J. A new technique for chronic single extracellular recording in freely behaving animals using pipette electrodes. J. Neurosci. Methods. 57, 161-169 (1995).
  6. Lu, H., Chestek, C. A., Shaw, K. M., Chiel, H. J. Selective extracellular stimulation of individual neurons in ganglia. J. Neural Eng. 5, 287-309 (2008).
  7. Church, P. J., Lloyd, P. E. Expression of diverse neuropeptide cotransmitters by identified motor neurons in Aplysia. J. Neurosci. 11, 618-625 (1991).
  8. Church, P. J., Lloyd, P. E. Activity of multiple identified motor neurons recorded intracellularly during evoked feedinglike motor programs in Aplysia. J. Neurophys. 72, 1794-1809 (1994).
  9. Nargeot, R. N., Baxter, D. A., Byrne, J. H. Contingent-dependent enhancement of rhythmic motor patterns: an in vitro analog of operant conditioning. J. Neurosci. 17, 8093-8105 (1997).
  10. Kandel, E. R. . Behavioral biology of Aplysia. , (1979).
  11. Scott, M. L., Govind, C. K., Kirk, M. D. Neuromuscular organization of the buccal system in Aplysia californica. J. Comp. Neurol. 312, 207-222 (1991).
  12. Susswein, A. J., Rosen, S. C., Gapon, S., Kupfermann, I. Characterization of buccal motor programs elicited by a cholinergic agonist applied to the cerebral ganglion of Aplysia californica. J. Comp. Physiol. A. 179, 509-524 (1996).
  13. Kupfermann, I. Feeding behavior in Aplysia: A simple system for the study of motivation. Behav. Biol. 10, 1-26 (1974).
  14. Morton, D. W., Chiel, H. J. The timing of activity in motor neurons that produce radula movements distinguishes ingestion from rejection in Aplysia. J. Comp. Physiol. A. 173, 519-536 (1993).
  15. Weiss, K. R., Chiel, H. J., Koch, U., Kupfermann, I. Activity of an identified histaminergic neuron, and its possible role in arousal of feeding behavior in semi-intact Aplysia. J. Neurosci. 6, 2403-2415 (1986).
  16. Jing, J., Weiss, K. R. Generation of variants of a motor act in a modular and hierarchical motor network. Curr. Biol. 15, 1712-1721 (2005).
  17. Jing, J., Weiss, K. R. Neural mechanisms of motor program switching in Aplysia. J. Neurosci. 21, 7349-7362 (2001).
  18. Morgan, P. T., Jing, J., Vilim, F. S., Weiss, K. R. Interneuronal and peptidergic control of motor pattern switching in Aplysia. J. Neurophysiol. 87, 49-61 (2002).
  19. Jing, J., Cropper, E. C., Hurwitz, I., Weiss, K. R. The construction of movement with behavior-specific and behavior-independent modules. J. Neurosci. 24, 6315-6325 (2004).

Play Video

Cite This Article
McManus, J. M., Lu, H., Chiel, H. J. An In Vitro Preparation for Eliciting and Recording Feeding Motor Programs with Physiological Movements in Aplysia californica. J. Vis. Exp. (70), e4320, doi:10.3791/4320 (2012).

View Video