Analyse av gnager cerebrovaskulær anatomi spiller en viktig rolle i eksperimentell slag forskning. I denne sammenheng, har intravaskulær perfusjon med farget lateks vært ansett som en standard verktøy for flere år. Innebærer imidlertid denne teknikken distinkte tekniske begrensninger, som undergraver sin reproduserbarhet. Her beskriver vi en enkel metode for å visualisere cerebrale fartøy i en reproduserbar måte. Injeksjon av en blanding av to kommersielt tilgjengelige karbon svart blekk gjennom venstre myokardielle ventrikkel fører tilstrekkelig fylling av cerebrale kar med høy kontrast visualisering. Vi har med hell brukt denne teknikken for å identifisere Anastomotisk poeng mellom cerebral vaskulær territorier av mus med ulike genetiske bakgrunn. Vi endelig gi bevis for at denne romanen og enkel metode for fartøy farging kan kombineres med triphenyltetrazolium klorid (TTC) farging – et mye brukt verktøy for å observere og analysere infarkt volumer i mus.
Den anatomiske strukturen av cerebrale kar er en viktig determinant for hjernen hemodynamikk så vel som alvorlighetsgraden av skade etter ischemiske fornærmelser. Hjernens blodforsyning reagerer dynamisk til ulike patofysiologiske tilstander og det viser betydelige forskjeller mellom stammer og under forhold med genetiske manipulasjoner. I hovedsak er en pålitelig teknikk for intrakraniell fartøy farging avgjørende for å studere patogenesen av hjerneinfarkt. Inntil nylig har et sett av forskjellige teknikker blitt anvendt for å visualisere den cerebrale vaskulatur herunder injeksjon av lettflytende harpiks, Araldite F, gelatin blandet med forskjellige fargestoffer en (dvs. karminrød, tusj) eller lateks med to eller uten 3 kjønrøk. Perfusjon av hvit latex forbindelsen via oppstigende aorta er først rapportert av Coyle og Jokelainen 3. Maeda et al. 2 har endret protokollen ved å legge carbon svart blekk til latex sammensatt for forbedret kontrast visualisering av skip etter saltløsning perfusjon av hjernen. Imidlertid ineffektiv perfusjon og utilstrekkelig fylling av fartøyene ofte oppleves grunnet høy viskositet av lateksen forbindelse 4. Derfor har vi beskrevet en enkel og kostnadseffektiv teknikk ved hjelp av en blanding av to kommersielt tilgjengelige karbon svart blekk (CB1 og CB2) for å visualisere den cerebrale vaskulatur i en reproduserbar måte 5. Vi har vist at perfusjon med CB1 + CB2 i mus resulterer i misfarging av betydelig mindre cerebrale kar på en høyere tetthet i forhold til lateks perfusjon 5. Her beskriver vi vår protokoll for å identifisere Anastomotisk poeng mellom fremre (ACA) og middels cerebrale arterier (MCA) for å studere fartøy variasjoner i mus med ulike genetiske bakgrunn. Til slutt viser vi mulighetene for teknikken vår i en forbigående fokal cerebral iskemi modell i mus ved å kombinere CB1 +CB2-mediert fartøy farging med TTC flekker i ulike grader av iskemiske skader.
Perfusjon av CB1 + CB2 ved manuell injeksjon kan utføres med hell av uten intensiv trening som det ikke innebærer noen spesiell enhet for å antyde bestemt trykk 2,3. Heterogene perfusjon utfall i protokollen vår er også ubetydelig. Bare 1 dyr ut av 16 ikke-iskemisk dyr og 3 av 20 iskemiske dyr har vist ufullstendig perfusjon. I disse tilfellene var inkorporering av bobler under saltvann perfusjon fører til okklusjon av fartøy sannsynligvis grunnen av mislykkede utfallet.
Se…
The authors have nothing to disclose.
Vi vil gjerne takke Britta Kaltwasser for hennes utmerket teknisk assistanse og Mahesh Kumar Teli å organisere videofilming forberedelse.
Name of reagent | Company Name | Catalog No. |
Scribtol Schwarz (CB2) | Pelican, Germany | 221 135 |
Stempelfarbe (CB1) | Herlitz PBS AG, Germany | 10417202 |
Gedeo Latex | Pebeo, France | 13042B |