Mondelinge en intra haemocolic infectie van larven van de grotere wasmot<em> Galleria mellonella</em> Beschreven. Dit insect kan worden gebruikt om virulentiefactoren entomopathogene van zoogdieren opportunistische bacteriën te bestuderen. Opfok van de insecten, de wijze van besmetting en voorbeelden van<em> In vivo</em> Analyse worden beschreven.
De studie van bacteriële virulentie vereist vaak een geschikt diermodel. Zoogdieren modellen van infectie zijn kostbaar en kunnen ethische kwesties. Het gebruik van insecten als infectie-modellen biedt een waardevol alternatief. In vergelijking met andere niet-gewervelde model gastheren zoals nematoden, insecten hebben een relatief geavanceerd systeem van antimicrobiële verdediging en zijn dus meer kans om relevante informatie over de zoogdieren infectie proces te produceren. Net als zoogdieren, insecten bezitten een complex aangeboren immuunsysteem 1. Cellen in de hemolymfe kunnen fagocyteren of inkapselende microbiële indringers en humorale reacties omvatten de induceerbare productie van lysozyme en kleine antibacteriële peptides 2,3. Daarnaast worden analogieën gevonden tussen de epitheelcellen van insect larven midguts en darmcellen van zoogdier spijsverteringsstelsel. Tenslotte bevat basiscomponenten essentieel voor het bacteriële infectie proces zoals celadhesie, weerstand tegenantimicrobiële peptiden, weefselafbraak en aanpassing aan oxidatieve stress waarschijnlijk belangrijk zijn in zowel insecten en zoogdieren 1. Dus insecten polyvalent hulpmiddelen voor de identificatie en karakterisering van microbiële virulentiefactoren betrokken bij zoogdieren infecties.
Larven van de grotere wasmot Galleria mellonella is aangetoond dat een bruikbaar inzicht in de pathogenese van een groot aantal microbiële infecties waaronder zoogdieren schimmel (Fusarium oxysporum, Aspergillus fumigatus, Candida albicans) en bacteriële pathogenen zoals Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris , Serratia marcescens Pseudomonas aeruginosa, Listeria monocytogenes of Enterococcus faecalis 4-7. Ongeacht de bacteriële soorten, verkregen met Galleria larven geïnfecteerd door directe injectie door de cuticula steeds correleren met die van similar zoogdieren studies: bacteriestammen die verzwakt in zoogdiercellen modellen tonen lager virulentie in Galleria, en stammen leidt tot een ernstige infecties bij mensen zijn ook zeer virulent in de Galleria model 8-11. Orale infectie van Galleria is veel minder gebruikte en extra verbindingen, zoals specifieke toxines, zijn nodig om de sterfte te bereiken.
G. mellonella larven onderhavige verschillende technische voordelen: zij zijn relatief groot (laatste instar larven voor de verpopping is ongeveer 2 cm lang en gewicht 250 mg), zodat de injectie van gedefinieerde doses bacteriën, ze kunnen worden gekweekt bij verschillende temperaturen (20 ° C tot 30 ° C) en infectie studies kunnen worden uitgevoerd tussen 15 ° C tot boven 37 ° C 12,13, waardoor experimenten die een zoogdier omgeving nabootsen. Bovendien insect fokken eenvoudig en relatief goedkoop. Infectie van de larven maakt het monitoren bacteriële virulentie op verschillende manieren, including berekening van LD 50 14, meting van de bacteriële overleving 15,16 en onderzoek van het infectie proces 17. Hier beschrijven we de opfok van de insecten, die alle levensfasen van G. mellonella. Wij bieden een gedetailleerd protocol van infectie door twee routes van inenting: orale en intra haemocoelic. De bacteriële model in dit protocol Bacillus cereus, een Gram-positieve pathogenen betrokken bij maag-en andere ernstige lokale of systemische opportunistische infecties 18,19.
Het gebruik van insecten en vooral de larvale stadium, infectiemodellen voor verschillende pathogenen, steeds frequent. Een model van de keuze voor sommige aspecten is Drosophila (het vlieg-model) gebruikt als zowel volwassenen als larvale stadium 1,2. De lepidoptera insecten G. mellonella is ook hoofdzakelijk gebruikt voor het bepalen van bacteriële virulentie door injectie. Het voordeel van tolereren hogere temperaturen (boven 37 ° C) dan Drosophila (maximum 25 ° C) is belangri…
The authors have nothing to disclose.
We willen graag Elisabeth Guillemet, Christophe Buisson en Ludovic Bridoux bedanken voor een uitstekende technische bijstand. Wij zijn veel dank verschuldigd aan Sylvie Salamitou en Sinda Fedhila voor de eerste systeem-setup.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Wax and pollen | La Ruche Roanaise | 303000 | Any honey producer |
Automated syringe pump | KD Scientific | KDS 100 | |
Syringe 1 ml | Terumo | BS 01T | |
Needle 0.45 x 12 mm | Terumo | NN 2613R | |
Petri dish 5 cm | VWR | 89000-300 | |
Needle 30G, 25 mm hypodermic | Burkard Mfg. Co. Ltd. | PDE0005 |