Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

Insektet Published: December 11, 2012 doi: 10.3791/4392
Automatic Translation
1, 1, 1
1INRA, Micalis UMR1319, France

Summary

Muntlig og intra haemocolic infeksjon av larver av større voks møll

Abstract

Studiet av bakteriell virulens krever ofte en egnet dyremodell. Pattedyr modeller av infeksjon er kostbare og kan reise etiske problemstillinger. Bruken av insekter som infeksjon modeller gir et verdifullt alternativ. Sammenlignet med andre ikke-virveldyr modell verter som nematoder, insekter har et relativt avansert system av antimikrobielle forsvar og er dermed mer sannsynlig å produsere informasjon som er relevant for pattedyr infeksjonen prosessen. Som pattedyr, insekter har et komplekst medfødte immunforsvaret en. Celler i hemolymph er i stand phagocytosing eller innkapsle mikrobielle inntrengere, og humorale responser inkluderer induserbare produksjon av lysozym og små antibakterielle peptider 2,3. I tillegg er analogier funnet mellom epitelceller av insekt larve midguts og tarmcellene pattedyr fordøyelsessystem. Endelig flere grunnleggende komponenter som er essensielle for bakteriell infeksjon prosessen som celleadhesjon, motstand motantimikrobielle peptider, vevsnedbrytning og tilpasning til oksidativt stress er sannsynlig å være viktig i både insekter og pattedyr en. Således er insekter polyvalente verktøy for identifikasjon og karakterisering av mikrobielle virulensfaktorer involvert i mammalske infeksjoner.

Larver av større voks møll Galleria mellonella har vist seg å gi et nyttig innsikt i patogenesen av et bredt spekter av mikrobielle infeksjoner inkludert pattedyr fungal (Fusarium oxysporum, Aspergillus fumigatus, Candida albicans) og bakterielle patogener, så som Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris , Serratia marcescens Pseudomonas aeruginosa, Listeria monocytogenes eller Enterococcus faecalis 4-7. Uavhengig av bakteriearter, resultater oppnådd med Galleria larver smittet av direkte innsprøytning gjennom cuticle konsekvent korrelerer med de av simiLar pattedyr studier: bakteriestammer som er svekket i pattedyr modeller viser lavere virulens i Galleria, og stammer som forårsaker alvorlige infeksjoner hos mennesker er også svært virulente i Galleria-modellen 8-11. Oral infeksjon av Galleria er mye mindre brukt og ytterligere forbindelser som spesifikke giftstoffer, er nødvendig for å nå dødelighet.

G. mellonella larver presentere flere tekniske fordeler: de er relativt store (siste instar larver før forpupping er ca 2 cm lang og vekt 250 mg), dermed gjør injeksjon av definerte doser av bakterier, de kan bli oppdratt ved ulike temperaturer (20 ° C til 30 ° C) og infeksjon studier kan gjennomføres mellom 15 ° C til over 37 ° C 12,13, slik eksperimenter som etterligner et pattedyr miljø. I tillegg er insekt oppdrett enkelt og relativt billig. Infeksjon av larvene tillater overvåking bakteriell virulens på flere måter, including beregning av LD 50 14, måling av bakteriell overlevelse 15,16 og undersøkelse av infeksjonsprosessen 17. Her beskriver vi oppdra insekter, som dekker alle livsstadier av G. mellonella. Vi tilbyr en detaljert protokoll for smitte av to ruter av inokulering: muntlig og intra haemocoelic. Den bakterielle modellen som brukes i denne protokollen er Bacillus cereus, en Gram positiv patogen innblandet i gastrointestinal så vel som i andre alvorlige lokale eller systemiske opportunistiske infeksjoner 18,19.

Protocol

1. Insekt Rearing

Hele syklusen fra egg til siste instar larver varer ca 5 uker ved 25 ° C. Ett eller to ekstra uker for å få voksne sommerfuglene.

  1. Plasser minst 100 puppe eller nyfusjonerte voksen G. mellonella sommerfugler i en 5-liters wire-mesh buret. Mann sommerfugler høyden på 10 til 15 mm. Den voksne mannlige møll er beige med svakt lys og mørke markeringer. Kvinne sommerfugler måler rundt 20 mm. Kvinner er mørkere enn menn med en brun / grå farge.
  2. Suspendere to pakker av fire lag papir i buret for egg-legging. Etter 2 dager, vil den voksne kvinnelige legge egg på kanten mellom avisene.
  3. To ganger i uken, plasserer egg-papir pakker i nye plast stell bokser med tavler for å la luften sirkulere, inneholder pollen og bivoks. Eggene klekkes i ca 3 dager og lite larver begynner å utvikle av fôring på voks og pollen. Alternativt, kan larver plasseres på en kunstig diett consisting av en blanding av 500 g flytende honning, 400 g glyserin, 100 g tørket ølgjær, 250 g hvetemel, 200 g skummet melkepulver, og 400 g polenta. Å gi riktig forhold mellom mat per larve, regelmessig skille larvene inn i nye bokser og etterfylle maten annenhver dag.
  4. Larver blir oppdratt løpet av de seks stadier av larve stadium. Hver stadion kjennetegnes ved glidning av hodet kapsel av larver. Når larvene kommer til siste etappe før forpupping, de slutter fôring og begynne å bygge en lett silke kokong.
  5. I sine beskyttende kokonger, vil larvene hvile og forvandle seg til puppe. Voks ormer forbli i puppe scenen for en til to uker å dukke opp i voksen møll. De voksne sommerfuglene ikke drikke eller spise. Paring skjer og voks ormer livssyklus begynner på nytt.
  6. Å standardisere patologi analysen, ta larvene under siste larvestadiet. I denne fasen slutter de fôring, flytte til dekning av oppdrett boksen og begynne å produsere silke. Dette sTage varer rundt 5 dager.

2. Insekt Utvalg for infeksjon

  1. Velg siste instar larver, som er 2-3 cm lang og 180-250 mg i vekt, 24 timer før infeksjoner og sette dem inn i en tom boks å sulte dem.
  2. Fjern den gryende silke kokong rundt larvene.

3. Bakteriell Forberedelse

  1. Forbered Bacillus bakterielle suspensjoner for å oppnå endelige konsentrasjoner fra 10 4 koloni dannende enheter (cfu) / ml til 10 8 cfu / ml for intra haemocoelic injeksjon og fra 3x10 6 cfu / ml til 1x10 8 cfu / ml ved inntak (CFU å innhente en LD 50 avhenger bakteriearter). I vårt tilfelle, B. cereus dyrkes i Luria-Bertani buljong medium (LB, 10 g / l trypton, 5 g / l gjærekstrakt, 10 g / l NaCl) ved 37 ° C under omrøring, inntil inntreden i stasjonær fase, tilsvarende incurvation av veksten kurve. Mål OD 600 nm (mellom 1 og 2 for B. cereus) og bruke den til å evaluere bakteriell konsentrasjon, ved hjelp av en tidligere laget titrering kurve. Høste bakterier ved sentrifugering ved 5000 xg i 10 min ved romtemperatur og resuspender i fosfatbufret saltvann (PBS: 1M KH 2 4 PO, 1M K 2 HPO 4, 5M NaCl, pH 7,2). Enkelte larve mottar 10 pl bakteriesuspensjon ved den ønskede konsentrasjon.
  2. Alternativt kan sporesuspensjon fremstilles for infeksjon. Innhent sporer ved dyrking av bakterier i sporulation mediet HCT (5 g / L trypton, 2 g / L kasein hydrolysat, 12,5 mM K 2 HPO 4, 12,5 mM MgSo4, 0,05 mM MnSO 4, 1,2 mM ZnSO 4, 1,2 mM Fe 2 (SO 4) 3, 0,5% H 2 SO 4, 25 mM CaCl 2) 20 ved 30 ° C i 3 dager. Høste sporer ved sentrifugering (10 000 xg, 15 min), og vask to ganger i sterilt destillert vann. Resuspender spore Pella i sterilt destillert vann og varme i 15 minutter ved 78 ° C for å fjerne gjenværende vegetative bakterier. Numerate suspensjonen ved plating seriefortynninger på LB agarplater. Enkelte larve mottar 10 pl sporesuspensjon ved den ønskede konsentrasjon.

4. Cry Toksin Forberedelse

  1. Klargjør Cry1C toksinet fra B. thuringiensis stamme 407 transformert med plasmidet pHTF31C 21 bærer genet som koder Cry1C. Kultur belastningen i 100 ml HCT medium ved 30 ° C i 72 timer med antibiotika (erytromycin 10mg/ml) for å tillate full sporulation, toksin krystall produksjon og frigjøring i kultursupernatanten.
  2. Rens krystaller fra supernatanten på en 72% -79% sukrosegradient. Først legge 17 ml 79% sukrose i en 40 ml rør. Nøye lag 17 ml av 72% sukrose på toppen av 79% sukrose. Endelig, lag 5-6 ml av den 10X konsentrert sporulated kultur og lukke røret. Sentrifuger røret for 14 timer ved 20,000 xg, 4 ° C, for å skille krystallene fra sporene. Oppsamling av krystallene ved gradient-grensesnittet. Resuspender krystall pelleten i 25 ml kaldt sterilt vann for å vaske det. Sentrifuger ved 8000 xg i 20 min. Dette trinnet gjentas tre ganger for å fjerne all sukrose stikker til krystallene. Resuspender krystallene i 5 ml sterilt vann og observere under mikroskop for å evaluere renhet.
  3. Vurdere toksin protein konsentrasjon av klassiske Bradford flekker på krystall løsning presolubilized i 50 mM NaOH. Toksin krystaller kan lagres ved -20 ° C inntil bruk.

5. Injector Forberedelse

  1. For å kontrollere den nøyaktige injeksjonsvolum, bruker automatiserte sprøytepumpe (f.eks KD Scientific KDS 100) med oppsett hastighet til 1 pl / sek (figur 1A).
  2. Fyll en 1 ml hypodermisk sprøyte med 300 pl vann eller bakteriell løsning (en sprøyte pr tilstand) for infeksjon av 20-25 larver. Fjern boblene ved forsiktig taPPING sprøyten, deretter legge en 0,45 x 12 mm kanyle til sprøyten.
  3. Plasser sprøyten i injektoren.
  4. Utføre en blank injeksjon av 10 ul i et tomt rør for å kontrollere det injiserte volum.

6. Insekt Intrahaemocoelic Injection

  1. Plasser insekt manuelt mellom tommel og pekefinger. Deretter setter nålen fast i injektoren i larven huden (cuticle) (figur 1C).
  2. Hold insekt på plass mens injisere 10 ul bakteriell løsning (spore eller vegetative bakterier).
  3. Fjern forsiktig insekt fra nålen.
  4. Plasser infiserte insekt i en liten petriskål (5 cm i diameter), 5 larver per parabolen.
  5. Infisere minst 20 larver for hver eksperimentell tilstand.
  6. Plasser rettene ved 37 ° C i en inkubator i 48 timer.

7. Insect Force Feeding (Svelging)

  1. I 2 ml Eppendorf-rør, bland 0,2 ug / & mu; l av Cry1C toksin med enten sporer eller vegetativ cellesuspensjon for å oppnå endelige konsentrasjoner fra 3x10 4 til 1x10 7 per 10 pl.
  2. Fyll en 1 ml sprøyte med en 30G, 25 mm kanyle med 300 pl av den bakteriell-Cry1C toksinet løsning for infisering av 20-25 larver. Fjern boblene fra sprøyten.
  3. Plasser insekt manuelt, slik at munnen kommer nålen fast i injektoren (fig. 1D), og kraft-mate den med 10 pl av den bakteriell løsning ved hjelp av automatiserte sprøytepumpe.
  4. Infisere minst 20 larver for hver eksperimentell tilstand.
  5. Plasser den infiserte insekt i en liten 5 cm petriskål (5 larver per parabol). Plasser rettene ved 37 ° C i en inkubator i 48 timer.

8. Innspilling Insect Dødelighet

  1. Etter tvangsforing eller injeksjon eksperimenter, holde larvene i petriskål uten mat ved 25 ° C eller 37 ° C. Sjekk larve mortality regelmessig over en 48 timers periode. Døde larver er inert og vanligvis bli svart (figur 1B).
  2. Dødelighet data kan analyseres ved hjelp av loggen-Probit programmet 14. Dette programmet tester linearitet av dose dødelighet kurver og gir dødelige doser (LD 50). Alternativt, kan andre programmer, for eksempel Prism (Graph Pad), analysere overlevelse eller dødelighet dataene brukes.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Intra haemocoelic injeksjon av bakterier i G. mellonella påvist meget nyttige for identifisering av mange virulensfaktorer håndtere vevsskade og motstand mot medfødte immun faktorer av flere humane patogener. Som et eksempel, representerer figur 2A insektvoks dødelighet etter injeksjon av forskjellige doser av B. cereus bakterier (villtype og mutante stammer) 22. Fig. 2B representerer bakteriell overlevelse etter infisering av G. mellonella av Pseudomonas aeruginosa 4.

Bruken av Galleria som en oral infeksjon modell for B. cereus og B. thuringiensis avhengig evalueringen av synergistisk effekt av de vegetative bakterier eller sporer på insekticidaktivitet av Cry1C toksin 10. Larvene er mottakelig for inntak av sporen / toksin blandingen, men er bare svakt følsom for inntak av Cry1C toksin alene. Larve death resultater fra sepsis etter bakterier har nådd haemocoel etter havari av intestinal barrierer. Figur 3 representerer larve-dødelighet etter inntak av krystaller og enten villtype eller mutante stammer av Bacillus bakterier 10.

Noen bakterier har blitt testet for oral infeksjon i Galleria. Blant de menneskelige patogener testet, B. cereus stammer med Cry1C toksin var den mest virulente for G. mellonella etter oral smitte 24. Denne metoden kan brukes til å overvåke infeksjon / kolonisering av mage tarmkanalen. Faktisk, som vist i figur 4, kan larven fordøyelseskanalen ekstraheres etter smitte, og vertcellens modifikasjoner samt bakteriell kolonisering kan visualiseres på histologisk parafinsnitt. I tillegg, kan inntak av fluorescerende bakterier brukes til å følge banen og koloniseringen prosessen sammen de ulike avdelinger av larvene. Endelig, kan den spesifikke ekspresjon av et gen i de forskjellige insekt kamrene bli overvåket av fluorescerende mikroskopi 25.

Figur 1
Figur 1. (A) Automatisert sprøytepumpe injektor. (B) Død (topp, svart) og live (nederst, hvit) G. mellonella larver. (C) Bakterier er injisert i haemocoel av G. mellonella larver. (D) G. mellonella larvene er tvangsforet med bakteriell preparat: nålen kommer inn i munnen av den insektlarver.

Figur 2
Figur 2. Resultat etter intra haemocoelic injeksjon. (A) CwpFM virulens mot G. mellonella larver 22. Forskjellige konsentrasjoner av B. cereus Wild-attraksjon (Bt 407) og ΔcwpFM mutantstammer ble inokulert i haemocoel av 20 G. mellonella larver. Mortalitet ble registrert etter 24 timer ved 37 ° C. (B) Tid løpet av Pseudomonas aeruginosa PA14 infeksjon i G. mellonella 4. Tjuefem bakterier per larve ble injisert på tidspunktet null. Larvene ble knust i den angitte tiden poeng etter infeksjon og bakterieveksten ble bestemt ved plating. Hvert datapunkt representerer gjennomsnittet og standardavvik for bakterieveksten fra 10 grupper på 10 larver. Larver døde ca 48 timer etter injeksjon, når bakterielle konsentrasjoner nådde 10 9 / g.

Figur 3
Figur 3. Synergism av sporer og Cry1C toxin krystaller som en evaluering av sykdomsfremkallende i G. mellonella larver etter oralt inntak 10. G. mellonella larvee ble oralt infisert med enten Cry1C toxin krystaller (1 pg pr larve), eller med 10 6 B. thuringiensis sporer, eller med en blanding av Cry1C toksin og B. thuringiensis sporer. Larver dødelighet ble evaluert etter 48 timer ved 25 ° C.

Figur 4
Figur 4 Oral infisering av larver:. Kolonisering og vev lokalisering av bakterier. (A) 10 pl av blått fargestoff oppløsningen ble introdusert av tvangsforing i munnen på en G. mellonella larve. Larven ble dissekert for å avsløre tarmen fylt med blått fargestoff. (B) En blanding av Bt 407 belastning og Cry1C toksin ble introdusert i G. mellonella larver ved tvangsforing. Etter 24 timer var hele larver parafin innebygd, kuttet og festet. Histologiske langsgående snitt ble farget (hematoxylin & Eosine og Gram straining). Lyset mikroskopiske bilde (400X) viser gut (mørk lilla) og Gram farget Bacillus (mørk fiolett) lokalisert på intestinal overflaten. (C) En blanding av 407-Bt GFP fluorescerende belastning og Cry1C toksin ble introdusert i G. mellonella larver ved tvangsforing. Etter 24 timer, er de bakteriene nådd haemocoel og insekt kadaver er fylt med B. cereus uttrykker grønt fluorescerende protein. (D) Analyse av Ilsa uttrykk in vivo 25. Mikroskopiske observasjoner av epifluorescence ble utført på B. cereus bærer pHT315-pilsA'gfp. Bakterier ble isolert fra hemocoel av døde larver 24 hr etter oral infeksjon. Grønne bakterier indikerer ekspresjon av GFP grunnet aktivering av Ilsa promotoren. Dette viser den spesifikke ekspresjon av dette genet (Ilsa) når bakteriene har nådd haemocoel.

Film 1. Spredning av oppløsningen i insekt gut etter oral ingestion. 10 pl blått fargestoff løsning ble introdusert av tvangsforing i munnen på den europeiske mais borer Ostrinia nubilalis larve. Fargestoffet fyller raskt i intestinal lumen av insektlarver. Klikk her for å se filmen .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Bruken av insekter og spesielt larvestadiet, som infeksjon modeller for flere patogener, blir hyppig. En modell av valget for noen aspekter er Drosophila (fly-modellen) brukes som både voksne og larvestadiet 1,2. Den lepidopteran insekt G. mellonella har også vært i hovedsak brukt til å analysere bakteriell virulens ved injeksjon. Fordelen med å tolerere høyere temperaturer (over 37 ° C) enn Drosophila (maks. 25 ° C) er viktig når pattedyr patogener er å bli undersøkt. Også størrelsen på Galleria er mer praktisk for å studere infeksjon kinetikk og vevsskade. Til slutt beskriver vår protokoll muligheten til å bruke Galleria for oral infeksjon, som er en fordel for studier knyttet til fordøyelseskanalen. Tilsvarende er larvestadiet av annen stor caterpillar, Manduca sexta, brukt til å studere infeksjoner ved injeksjon i haemocoel og mer nylig for oral infeksjon 26.B. mori og Spodoptera arter, som genomer er sekvensert 27 også tilby interessante alternativer, og vert gener kan være stengt av RNAi metoder eller andre genet manipulasjoner 28. Her beskriver vi på en enkel måte, hvordan å oppdra Galleria larver, hvordan å infisere dem og noen eksempler på hvordan å følge infeksjonen prosessen og scorer dødelighet for å vise potensialet i slike modeller.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Ingen interessekonflikter erklært.

Acknowledgments

Vi vil gjerne takke Elisabeth Guillemet, Christophe Buisson og Ludovic Bridoux for utmerket teknisk assistanse. Vi er sterkt i gjeld til Sylvie Salamitou og Sinda Fedhila for den første systemoppsettet.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Wax and pollen La Ruche Roanaise 303000 Any honey producer
Automated syringe pump KD Scientific KDS 100
Syringe 1 ml Terumo BS 01T
Needle 0.45 x 12 mm Terumo NN 2613R
Petri dish 5 cm VWR 89000-300
Needle 30G, 25 mm hypodermic Burkard Mfg. Co. Ltd. PDE0005

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Lemaitre, B., Hoffmann, J. The host defense of Drosophila melanogaster. Annu. Rev. Immunol. 25, 697-743 (2007).
  2. Vodovar, N., Acosta, C., Lemaitre, B., Boccard, F. Drosophila: a polyvalent model to decipher host-pathogen interactions. Trends Microbiol. 12, 235-242 (2004).
  3. Dalhammar, G., Steiner, H. Characterization of inhibitor A, a protease from Bacillus thuringiensis which degrades attacins and cecropins, two classes of antibacterial proteins in insects. Eur. J. Biochem. 139, 247-252 (1984).
  4. Jander, G., Rahme, L. G., Ausubel, F. M. Positive correlation between virulence of Pseudomonas aeruginosa mutants in mice and insects. J. Bacteriol. 182, 3843-3845 (2000).
  5. Purves, J., Cockayne, A., Moody, P. C., Morrissey, J. A. Comparison of the regulation, metabolic functions, and roles in virulence of the glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase homologues gapA and gapB in Staphylococcus aureus. Infect. Immun. 78, 5223-5232 (2010).
  6. Chadwick, J. S. Serological responses of insects. Fed. Proc. 26, 1675-1679 (1967).
  7. Chadwick, J. S., Caldwell, S. S., Chadwick, P. Adherence patterns and virulence for Galleria mellonella larvae of isolates of Serratia marcescens. J. Invertebr. Pathol. 55, 133-134 (1990).
  8. Gao, W., et al. Two novel point mutations in clinical Staphylococcus aureus reduce linezolid susceptibility and switch on the stringent response to promote persistent infection. PLoS Pathog. 6, e1000944 (2010).
  9. Peleg, A. Y., et al. Reduced susceptibility to vancomycin influences pathogenicity in Staphylococcus aureus infection. J. Infect. Dis. 199, 532-536 (2009).
  10. Salamitou, S., et al. The plcR regulon is involved in the opportunistic properties of Bacillus thuringiensis and Bacillus cereus in mice and insects. Microbiology. 146, 2825-2832 (2000).
  11. Cadot, C., et al. InhA1, NprA and HlyII as candidates to differentiate pathogenic from non-pathogenic Bacillus cereus strains. J. Clin. Microbiol. 48, 1358-1365 (2010).
  12. Rejasse, A., et al. Temperature-dependent production of various PlcR-controlled virulence factors in Bacillus weihenstephanensis strain KBAB4. Appl. Environ. Microbiol. 78, 2553-2557 (2012).
  13. Jones, R. T., et al. Photorhabdus adhesion modification protein (Pam) binds extracellular polysaccharide and alters bacterial attachment. BMC Microbiol. 10, 141 (2010).
  14. Finney, D. J. Probit analysis. , Cambridge University Press. (1971).
  15. Fedhila, S., Nel, P., Lereclus, D. The InhA2 metalloprotease of Bacillus thuringiensis strain 407 is required for pathogenicity in insects infected via the oral route. J. Bacteriol. 184, 3296-3304 (2002).
  16. Guillemet, E., et al. The InhA metalloproteases of Bacillus cereus contribute concomitantly to virulence. J. Bacteriol. 192, 286-294 (2010).
  17. Nielsen-LeRoux, C., Gaudriault, S., Ramarao, N., Lereclus, D., Givaudan, A. How the insect pathogen bacteria Bacillus thuringiensis and Xenorhabdus/Photorhabdus occupy their hosts. Curr. Opin. Microbiol. 15, 1-12 (2012).
  18. Bottone, E. J. Bacillus cereus, a volatile human pathogen. Clin. Microbiol. Rev. 23, 382-398 (2010).
  19. Stenfors Arnesen, L., Fagerlund, A., Granum, P. From soil to gut: Bacillus cereus and its food poisoning toxins. FEMS Microbiol. Rev. 32, 579-606 (2008).
  20. Lecadet, M., Blondel, M. O., Ribier, J. Generalized transduction in Bacillus thuringiensis var. berliner 1715, using bacteriophage CP54. Ber. J. Gen. Microbiol. 121, 203-212 (1980).
  21. Sanchis, V., Agaisse, H., Chaufaux, J., Lereclus, D. Construction of new insecticidal Bacillus thuringiensis recombinant strains by using the sporulation non-dependent expression system of cryIIIA and a site specific recombination vector. J. Biotechnol. 48, 81-96 (1996).
  22. Tran, S. L., Guillemet, E., Gohar, M., Lereclus, D., Ramarao, N. CwpFM (EntFM) is a Bacillus cereus potential cell wall peptidase implicated in adhesion, biofilm formation and virulence. J. Bacteriol. 192, 2638-2642 (2010).
  23. Tran, S. L., et al. Hemolysin II is a Bacillus cereus virulence factor that induces apoptosis of macrophages. Cell Microbiol. 13, 92-108 (2011).
  24. Fedhila, S., et al. Comparative analysis of the virulence of invertebrate and mammalian pathogenic bacteria in the oral insect infection model Galleria mellonella. J. Invertebr. Pathol. 103, 24-29 (2010).
  25. Daou, N., et al. IlsA, a unique surface protein of Bacillus cereus required for iron acquisition from heme, hemoglobin and ferritin. PLoS Pathog. 5, e1000675 (2009).
  26. Mason, K. L., et al. From commensal to pathogen: translocation of Enterococcus faecalis from the midgut to the hemocoel of Manduca sexta. MBio. 2, e00065-00011 (2011).
  27. Goldsmith, M. R., Shimada, T., Abe, H. The genetics and genomics of the silkworm, Bombyx mori. Annu. Rev. Entomol. 50, 71-100 (2005).
  28. Fraser, M. J. Insect transgenesis: current applications and future prospects. Annu. Rev. Entomol. 57, 267-289 (2012).

Tags

Infeksjon mikrobiologi immunologi molekylær biologi bakteriologi entomologi Bakterier, Større voks møll insektlarver intra haemocoelic injeksjon inntak dyr modell vert patogen interaksjoner
Insektet<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Som en kraftig infeksjon Model for å etterforske Bakteriell Patogenese
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Ramarao, N., Nielsen-Leroux, C.,… More

Ramarao, N., Nielsen-Leroux, C., Lereclus, D. The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis. J. Vis. Exp. (70), e4392, doi:10.3791/4392 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter