Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Immunology and Infection

والحشرات doi: 10.3791/4392 Published: December 11, 2012

Summary

haemocolic العدوى عن طريق الفم وداخل يرقات العث من الشمع أكبر

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. تربية الحشرات

دورة كاملة من البيض إلى يرقات الطور مشاركة يستمر حوالي 5 أسابيع في C. ° 25 وهناك حاجة إلى واحد أو 2 أسابيع إضافية للحصول على الفراشات الكبار.

  1. وضع لا يقل عن 100 الشرانق أو دمجها حديثا G. الكبار الفراشات في قفص mellonella شبكات الأسلاك المعدنية 5-لتر. الفراشات الذكور قياس 10 حتي 15 مم. الفراشة الذكور البالغين هو البيج مع الضوء الخافت وعلامات داكنة. أنثى الفراشات تدبير حوالي 20 ملم. الإناث أكثر قتامة من الذكور مع اللون البني / الرمادي.
  2. تعليق علبتين من أربع طبقات الورق في قفص لزرع البيضة. بعد 2 أيام، فإن الإناث البالغات وضع البيض على حافة بين الأوراق.
  3. مرتين في الأسبوع، ضع البيضة حزم ورقة في صناديق جديدة تربية البلاستيكية التي تحتوي على شبكات للسماح للهواء تعمم، التي تحتوي على حبوب اللقاح وشمع النحل. يفقس البيض في حوالي 3 أيام واليرقات الصغيرة بداية لتطوير طريق تغذية على الشمع وحبوب اللقاح. وبدلا من ذلك، يمكن وضع اليرقات على الغذاء الاصطناعي consistinغرام من مزيج العسل السائل من 500 غرام، 400 غرام الغليسرين، 100 غرام خميرة البيرة المجففة، 250 غرام دقيق القمح، و 200 غرام من مسحوق الحليب الخالي من الدسم و 400 غرام عصيدة من دقيق الذرة. لتوفير نسبة مناسبة من المواد الغذائية في يرقة، فصل بانتظام اليرقات في صناديق جديدة وتجديد الطعام كل يومين.
  4. وتربى اليرقات خلال المراحل الست ملعب اليرقة. ويتميز كل ملعب من قبل انزلاق الكبسولة رئيس اليرقات. عندما تصل إلى مرحلة اليرقات قبل التشرنق مشاركة، بحيث يمنعه من التغذية والبدء في بناء شرنقة الحرير الخفيفة.
  5. في شرنقتهن واقية، فإن يرقات تتحول إلى الراحة والشرانق. الديدان الشمع تبقى في مرحلة الخادرة لمدة أسبوع أو أسبوعين لنخرج الى العث الكبار. والعث الكبار لا تشرب ولا تأكل. يحدث التزاوج والديدان الشمع دورة "الحياة تبدأ من جديد.
  6. لتوحيد فحص الأمراض، واتخاذ اليرقات خلال المرحلة اليرقية الماضي. خلال هذه المرحلة بحيث يمنعه من التغذية، والانتقال إلى غطاء مربع تربية والبدء في إنتاج الحرير. هذا قالمئوية يستمر حوالي 5 أيام.

2. الحشرات اختيار للعدوى

  1. حدد مشاركة الطور اليرقات، والتي هي 2-3 سم طويلة و180-250 ملغ في الوزن، وعلى مدار 24 ساعة قبل العدوى ووضعها في علبة فارغة لتجويعهم.
  2. إزالة شرنقة الحرير الوليدة حول اليرقات.

3. إعداد البكتيرية

  1. إعداد المعلقات البكتيرية العصوية للحصول على تركيزات النهائي تتراوح بين 10 وحدات مستعمرة تشكيل 4 (كفو) / مل إلى 10 8 وت م / مل للحقن داخل وhaemocoelic من 3x10 6 وت م / مل إلى 1x10 8 وت م / مل لابتلاع (كفو للحصول على وLD 50 يعتمد على الأنواع البكتيرية). في حالتنا، B. ويزرع في وسط الشمعية مرق لوريا Bertani-(LB، 10 غرام / لتر تريبتون، 5 خلاصة الخميرة ز / لتر، 10 غرام / لتر كلوريد الصوديوم) عند 37 درجة مئوية تحت الإثارة حتى دخول مرحلة ثابتة، المقابلة لانحناء داخلي للنمو المنحنى. قياس OD 600 نيوتن متر (بين 1 و 2 للB. الشمعية) واستخدامها لتقييم تركيز البكتيريا، وذلك باستخدام منحنى المعايرة التي سبق. خفف الحصاد البكتيريا بواسطة الطرد المركزي عند 5000 x ج لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة و resuspend في الفوسفات المالحة (PBS: 1M KH 2 PO 1M K 2 HPO كلوريد الصوديوم 5M، ودرجة الحموضة 7.2). سوف تتلقى كل يرقة 10 ميكرولتر من التعليق البكتيرية في التركيز المطلوب.
  2. بدلا من ذلك، أن تكون مستعدة لتعليق بوغ العدوى. الحصول على جراثيم من البكتيريا زراعة في تبوغ HCT المتوسطة (5 ز / L تريبتون، 2 ز / L الكازين حلامة، 12.5 مم K 2 HPO 12.5 مم MgSO 0.05 ملم MnSO 1.2 مم ZnSO الحديد 1.2 مم 2 (4 SO) 0.5٪ H 2 SO 25 مم CaCl 2) 20 ° 30 C في مدة 3 أيام. الحصاد الجراثيم بواسطة الطرد المركزي (10،000 XG و 15 دقيقة)، ويغسل مرتين في الماء المقطر المعقم. إعادة تعليق على PEL بوغدعونا في الماء المقطر المعقم والحرارة لمدة 15 دقيقة في 78 ° C لإزالة البكتيريا الخضري المتبقية. أحصى والتعليق من الطلاء التخفيفات المسلسل على لوحات أجار LB. سوف تتلقى كل يرقة 10 ميكرولتر من التعليق بوغ في التركيز المطلوب.

4. البكاء إعداد السمية

  1. إعداد السم Cry1C من B. سلالة ثورينجينسيس 407 تتحول مع ال 21 pHTF31C بلازميد يحمل الجين الترميز Cry1C. ثقافة السلالة في 100 مل المتوسطة HCT في 30 ° C لمدة 72 ساعة مع المضادات الحيوية (الاريثروميسين 10mg/ml) للسماح تبوغ كامل، إنتاج السم الكريستال والتحرر في طاف الثقافة.
  2. تنقية البلورات من طاف على التدرج 72٪ -79٪ سكروز. إضافة أول 17 مل من السكروز 79٪ في أنبوب 40 مل. 17 طبقة بعناية مل من السكروز 72٪ على رأس السكروز 79٪. وأخيرا، طبقة 5-6 مل من ثقافة 10X sporulated المركزة وإغلاق الأنبوب. أجهزة الطرد المركزي لمدة 14 ساعة أنبوب في 20،000 XG، 4 ° C، لفصل البلورات من الجراثيم. جمع بلورات في واجهة التدرج. إعادة تعليق بيليه الكريستال في 25 مل من الماء المعقم البارد لغسل عليه. أجهزة الطرد المركزي في 8000 x ج لمدة 20 دقيقة. ويتكرر ثلاث مرات هذه الخطوة لإزالة كافة السكروز التمسك البلورات. إعادة تعليق بلورات الماء في 5 مل العقيمة ومراقبة تحت المجهر لتقييم النقاء.
  3. تقييم السم تركيز البروتين من تلطيخ برادفورد الكلاسيكية على حل الكريستال presolubilized في هيدروكسيد الصوديوم 50 مم. ويمكن تخزين بلورات السم في -20 درجة مئوية حتى الاستخدام.

5. حاقن إعداد

  1. للسيطرة على حجم الحقن الدقيق، واستخدام مضخة محقنة الآلي (مثل KD العلمية KDS 100) مع سرعة الإعداد إلى 1 ميكرولتر / ثانية (الشكل 1A).
  2. ملء حقنة 1 مل تحت الجلد مع 300 ميكرولتر المياه أو الحل البكتيرية (1 حقنة في حالة) للإصابة من 20-25 اليرقات. إزالة الفقاعات التي كتبها تا بعنايةpping الحقنة، ثم نعلق 0،45 X 12 ملم إبرة الحقنة إلى.
  3. وضع الحقنة في حاقن.
  4. إجراء حقن فارغة من 10 ميكرولتر في أنبوب فارغ للسيطرة على حجم حقن.

6. Intrahaemocoelic حقن الحشرات

  1. وضع الحشرات يدويا بين الإبهام والسبابة. ثم أدخل إبرة مثبتة في حاقن في الجلد اليرقة (بشرة) (الشكل 1C).
  2. الحفاظ على الحشرات في المكان في حين حقن ال 10 ميكرولتر حل البكتيرية (بكتيريا بوغ أو الخضري).
  3. إزالة بعناية الحشرة من الإبرة.
  4. وضع الحشرات المصابة في طبق بتري صغيرة (5 سم في القطر)، 5 يرقات لكل طبق.
  5. تصيب اليرقات لا يقل عن 20 حالة لكل التجريبية.
  6. ضع الأطباق في C ° 37 في حاضنة لمدة 48 ساعة.

7. الحشرات التغذية الإجبارية (الابتلاع)

  1. في أنبوب إيبندورف 2 مل، مزيج 0،2 ميكروغرام / م وش؛ لتر من السم Cry1C مع أي تعليق الخلية بوغ أو الخضري للحصول على تركيزات تتراوح بين 3x10 النهائي 4 إلى 7 في 1x10 10 ميكرولتر.
  2. ملء حقنة 1 مل مع 30G، 25 مم إبرة تحت الجلد مع 300 ميكرولتر من الحل السم البكتيري-Cry1C لإصابة اليرقات من 20-25. إزالة الفقاعات من الحقنة.
  3. وضع الحشرات يدويا بحيث فمه يدخل إبرة مثبتة في حاقن (1D الشكل)، والتغذية القسرية مع 10 ميكرولتر من الحل البكتيرية باستخدام مضخة محقنة الآلي.
  4. تصيب اليرقات لا يقل عن 20 حالة لكل التجريبية.
  5. وضع الحشرات المصابة في صغير 5 سم طبق بتري (5 يرقات لكل طبق). ضع الأطباق في C ° 37 في حاضنة لمدة 48 ساعة.

8. تسجيل وفيات الحشرات

  1. بعد تجارب التغذية القسرية أو الحقن، والحفاظ على اليرقات في طبق بتري دون طعام عند درجة حرارة 25 مئوية أو 37 درجة مئوية. تحقق اليرقات موrtality بانتظام على مدى فترة 48 ساعة. اليرقات الميتة هي خاملة وعادة ما تتحول الأسود (1B الشكل).
  2. ويمكن تحليل البيانات باستخدام برنامج فيات سجل الاحتمالية-14. هذا البرنامج باختبار الخطي من المنحنيات وفيات الجرعة والجرعة القاتلة يوفر (LD 50). وبدلا من ذلك، يمكن استخدام برامج أخرى، مثل بريزم (الرسم البياني لوحة)، وتحليل البيانات وفيات أو البقاء على قيد الحياة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

haemocoelic الحقن داخل البكتيريا إلى G. وقد ثبت mellonella مفيدة جدا لتحديد عوامل الفوعة التعامل مع العديد من تلف الأنسجة والمقاومة لعوامل المناعة الفطرية من مسببات الأمراض البشرية عدة. على سبيل المثال، يمثل الرقم 2A فيات الحشرات بعد حقن جرعات مختلفة من B. البكتيريا الشمعية (نوع السلالات البرية ومتحولة) 22. 2B الرقم يمثل بقاء البكتيرية بعد إصابة G. mellonella من الزائفة الزنجارية 4.

استخدام غاليريا كنموذج العدوى عن طريق الفم لB. الشمعية وB. ثورينجينسيس تعتمد على تقييم تأثير متناغم من البكتيريا أو الجراثيم الخضري على نشاط الحشرات من السم Cry1C 10. اليرقات هي عرضة للابتلاع بوغ / خليط السم ولكن ليست سوى عرضة ضعيفة إلى ابتلاع Cry1C السم وحده. لقد وصلت نتائج فاة اليرقات من تسمم الدم بعد البكتيريا بالمادة اللبنية النقية بعد انهيار الحواجز المعوية. الشكل 3 وفيات يمثل اليرقات بعد تناول أي نوع البلورات وسلالات متحولة أو البرية من البكتيريا العصوية 10.

وقد تم اختبار عدد قليل البكتيريا لعدوى عن طريق الفم في غاليريا. من بين مسببات الأمراض البشرية اختبار، B. كانت سلالات الشمعية مع السم الأكثر ضراوة Cry1C لG. mellonella بعد الإصابة عن طريق الفم 24. ويمكن استخدام هذه الطريقة لرصد العدوى / استعمار الامعاء المسالك المعدية. في الواقع، كما هو موضح في الشكل 4، ويمكن استخراج الجهاز الهضمي اليرقة بعد الإصابة، والتعديلات الخلية المضيفة وكذلك الاستعمار الجرثومي يمكن تصور على أقسام البارافين النسيجية. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن استخدام ابتلاع البكتيريا الفلورية لمتابعة مسار والمؤيدة الاستعمارسيس على طول حجرات مختلفة من اليرقات. وأخيرا، يمكن رصد التعبير محددة من الجين في حجرات مختلفة من الحشرة الفلورسنت المجهري 25.

الشكل 1
الشكل 1. (A) مضخة محقنة الآلي حاقن. (B) الميت (أعلى، أسود) وعلى قيد الحياة (أسفل والأبيض) G. mellonella اليرقات. (C) يتم حقن البكتيريا في بالمادة اللبنية النقية من G. mellonella اليرقات. (D) G. اليرقات هي mellonella تغذيتهم بالقوة مع إعداد البكتيرية: الإبرة يدخل الفم من يرقات الحشرات.

الشكل 2
الشكل 2. النتائج بعد الحقن داخل haemocoelic. (A) CwpFM الفوعة ضد G. اليرقات mellonella 22. تركيزات مختلفة B. الشمعية فيلتم تلقيح د من نوع (بي تي 407) وسلالات متحولة إلى ΔcwpFM بالمادة اللبنية النقية من 20 G. mellonella اليرقات. تم تسجيل وفيات بعد 24 ساعة عند C. ° 37 (B) طبعا وقت الإصابة الزائفة الزنجارية في PA14 G. mellonella 4. تم حقن خمسة وعشرين البكتيريا في اليرقة في وقت الصفر. سحقت اليرقات في الوقت المشار إليه نقطة العدوى وآخر تم تحديد العد البكتيري عن طريق الطلاء. كل نقطة بيانات يمثل المتوسط ​​والانحراف المعياري للبكتريا من 10 مجموعات من 10 اليرقات. توفي اليرقات حوالي 48 ساعة بعد الحقن، وعندما وصلت تركيزات الجرثومي 10 9 / ز.

الشكل 3
الشكل 3. التآزر من جراثيم وسموم بلورات Cry1C وتقييم المرضية في G. اليرقات mellonella بعد الابتلاع عن طريق الفم 10. G. mellonella يرقةأصيب شفويا ه مع أي بلورات السم Cry1C (1 ميكروغرام لكل يرقة)، أو مع 10 6 B. ثورينجينسيس جراثيم، أو مع مزيج من السم وCry1C B. ثورينجينسيس جراثيم. تم تقييم وفيات اليرقات بعد 48 ساعة عند C. ° 25

الشكل 4
الشكل 4 العدوى عن طريق الفم من اليرقات: الاستعمار وتوطين الأنسجة من البكتيريا. (A) وقدم 10 ميكرولتر من محلول الصبغة الزرقاء من التغذية القسرية في الفم من G. mellonella اليرقة. تم تشريح اليرقة لتكشف الأمعاء مليئة الصبغة الزرقاء. (B) وقدم مزيج من سلالة 407 بريتيش تيليكوم والسم Cry1C إلى G. اليرقات mellonella بواسطة التغذية القسرية. بعد 24 ساعة، وكانت جزءا لا يتجزأ من البارافين اليرقات كله، وقطع وثابتة. كانت ملطخة أقسام طولية النسيجي (هيماتوكسيلين وصبغة فوسفورية حمراء واجهاد غرام). الصورة المجهرية ضوء (400X) يظهر القناة الهضمية (الأرجواني الداكن) وعصيات غرام الملون (البنفسجي الداكن) مترجمة على سطح الأمعاء. (C) وقدم مزيج من سلالة الفلورسنت المعدل وراثيا في Gfp 407-Cry1C والسمية في G. اليرقات mellonella بواسطة التغذية القسرية. بعد 24 ساعة، وصلت البكتيريا بالمادة اللبنية النقية ويتم تعبئة جيفة الحشرات مع B. الشمعية التعبير عن بروتين الفلورية الخضراء. (د) تحليل التعبير إيلسا في الجسم الحي 25. أجريت الملاحظات المجهرية من epifluorescence على B. الشمعية تحمل pHT315-pilsA'gfp. تم عزل البكتيريا من hemocoel القتلى على مدار 24 ساعة اليرقات بعد الإصابة عن طريق الفم. البكتيريا الخضراء تشير إلى التعبير عن GFP بسبب تفعيل المروج إيلسا. هذا يدل على التعبير معينة من هذا الجين (إيلسا) عندما تدخل البكتيريا قد وصلت بالمادة اللبنية النقية.

الفيلم 1. نشر الحل في القناة الهضمية للحشرات عن طريق الفم بعد تناول طعاماأيون. وقدم 10 ميكرولتر من محلول الصبغة الزرقاء من التغذية القسرية في الفم من حفار الذرة الأوروبي يرقة nubilalis Ostrinia. الصبغة تملأ بسرعة في تجويف الأمعاء من يرقات الحشرات. انقر هنا لمشاهدة الفيلم .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

استخدام الحشرات وخاصة مرحلة اليرقات، ونماذج عدة أنواع العدوى، أصبحت متكررة. نموذج المفضل لبعض الجوانب غير ذبابة الفاكهة (ذبابة النموذج) تستخدم كل من البالغين واليرقات 1،2 المرحلة. الحشرة lepidopteran G. كما تم mellonella تستخدم أساسا لمعايرة الفوعة البكتيرية عن طريق الحقن. ميزة التسامح مع ارتفاع درجات الحرارة (أعلى من 37 درجة مئوية) من ذبابة الفاكهة (الحد الأقصى 25 درجة مئوية) المهم عند الثدييات مسببات الأمراض هي التي يتعين دراستها. أيضا حجم غاليريا هو أكثر ملاءمة لدراسة حركية الإصابة وتلف الأنسجة. وأخيرا، لدينا بروتوكول يصف إمكانية استخدام غاليريا للعدوى عن طريق الفم، والتي هي ميزة للدراسات المتعلقة الجهاز الهضمي. وبالمثل، يتم استخدام اليرقات مرحلة أخرى يرقة كبيرة، ماندوكا سيكستا، لدراسة العدوى عن طريق الحقن في بالمادة اللبنية النقية، ومؤخرا للعدوى عن طريق الفم 26.B. موري والأنواع ورق القطن، والتي يتم الجينوم التسلسل كما تقدم بدائل 27 مثيرة للاهتمام، ويمكن اغلاق المضيف الجينات بنسبة أساليب التلاعب الجيني أو رني الأخرى 28. هنا، نحن تصف بطريقة بسيطة، وكيفية تربية اليرقات غاليريا، وكيفية نقل العدوى اليهم وبعض الأمثلة على كيفية متابعة عملية العدوى والوفيات نقاط من أجل إظهار إمكانات مثل هذه النماذج.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgments

نود أن نشكر اليزابيث Guillemet، وكريستوف بويسون Bridoux لودوفيك للمساعدة التقنية الممتازة. نحن مدينون كثيرا لSalamitou سيلفي وFedhila SINDA لإعداد النظام الأولي.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Wax and pollen La Ruche Roanaise 303000 Any honey producer
Automated syringe pump KD Scientific KDS 100
Syringe 1 ml Terumo BS 01T
Needle 0.45 x 12 mm Terumo NN 2613R
Petri dish 5 cm VWR 89000-300
Needle 30G, 25 mm hypodermic Burkard Mfg. Co. Ltd. PDE0005

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Lemaitre, B., Hoffmann, J. The host defense of Drosophila melanogaster. Annu. Rev. Immunol. 25, 697-743 (2007).
  2. Vodovar, N., Acosta, C., Lemaitre, B., Boccard, F. Drosophila: a polyvalent model to decipher host-pathogen interactions. Trends Microbiol. 12, 235-242 (2004).
  3. Dalhammar, G., Steiner, H. Characterization of inhibitor A, a protease from Bacillus thuringiensis which degrades attacins and cecropins, two classes of antibacterial proteins in insects. Eur. J. Biochem. 139, 247-252 (1984).
  4. Jander, G., Rahme, L. G., Ausubel, F. M. Positive correlation between virulence of Pseudomonas aeruginosa mutants in mice and insects. J. Bacteriol. 182, 3843-3845 (2000).
  5. Purves, J., Cockayne, A., Moody, P. C., Morrissey, J. A. Comparison of the regulation, metabolic functions, and roles in virulence of the glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase homologues gapA and gapB in Staphylococcus aureus. Infect. Immun. 78, 5223-5232 (2010).
  6. Chadwick, J. S. Serological responses of insects. Fed. Proc. 26, 1675-1679 (1967).
  7. Chadwick, J. S., Caldwell, S. S., Chadwick, P. Adherence patterns and virulence for Galleria mellonella larvae of isolates of Serratia marcescens. J. Invertebr. Pathol. 55, 133-134 (1990).
  8. Gao, W., et al. Two novel point mutations in clinical Staphylococcus aureus reduce linezolid susceptibility and switch on the stringent response to promote persistent infection. PLoS Pathog. 6, e1000944 (2010).
  9. Peleg, A. Y., et al. Reduced susceptibility to vancomycin influences pathogenicity in Staphylococcus aureus infection. J. Infect. Dis. 199, 532-536 (2009).
  10. Salamitou, S., et al. The plcR regulon is involved in the opportunistic properties of Bacillus thuringiensis and Bacillus cereus in mice and insects. Microbiology. 146, 2825-2832 (2000).
  11. Cadot, C., et al. InhA1, NprA and HlyII as candidates to differentiate pathogenic from non-pathogenic Bacillus cereus strains. J. Clin. Microbiol. 48, 1358-1365 (2010).
  12. Rejasse, A., et al. Temperature-dependent production of various PlcR-controlled virulence factors in Bacillus weihenstephanensis strain KBAB4. Appl. Environ. Microbiol. 78, 2553-2557 (2012).
  13. Jones, R. T., et al. Photorhabdus adhesion modification protein (Pam) binds extracellular polysaccharide and alters bacterial attachment. BMC Microbiol. 10, 141 (2010).
  14. Finney, D. J. Probit analysis. Cambridge University Press. (1971).
  15. Fedhila, S., Nel, P., Lereclus, D. The InhA2 metalloprotease of Bacillus thuringiensis strain 407 is required for pathogenicity in insects infected via the oral route. J. Bacteriol. 184, 3296-3304 (2002).
  16. Guillemet, E., et al. The InhA metalloproteases of Bacillus cereus contribute concomitantly to virulence. J. Bacteriol. 192, 286-294 (2010).
  17. Nielsen-LeRoux, C., Gaudriault, S., Ramarao, N., Lereclus, D., Givaudan, A. How the insect pathogen bacteria Bacillus thuringiensis and Xenorhabdus/Photorhabdus occupy their hosts. Curr. Opin. Microbiol. 15, 1-12 (2012).
  18. Bottone, E. J. Bacillus cereus, a volatile human pathogen. Clin. Microbiol. Rev. 23, 382-398 (2010).
  19. Stenfors Arnesen, L., Fagerlund, A., Granum, P. From soil to gut: Bacillus cereus and its food poisoning toxins. FEMS Microbiol. Rev. 32, 579-606 (2008).
  20. Lecadet, M., Blondel, M. O., Ribier, J. Generalized transduction in Bacillus thuringiensis var. berliner 1715, using bacteriophage CP54. Ber. J. Gen. Microbiol. 121, 203-212 (1980).
  21. Sanchis, V., Agaisse, H., Chaufaux, J., Lereclus, D. Construction of new insecticidal Bacillus thuringiensis recombinant strains by using the sporulation non-dependent expression system of cryIIIA and a site specific recombination vector. J. Biotechnol. 48, 81-96 (1996).
  22. Tran, S. L., Guillemet, E., Gohar, M., Lereclus, D., Ramarao, N. CwpFM (EntFM) is a Bacillus cereus potential cell wall peptidase implicated in adhesion, biofilm formation and virulence. J. Bacteriol. 192, 2638-2642 (2010).
  23. Tran, S. L., et al. Hemolysin II is a Bacillus cereus virulence factor that induces apoptosis of macrophages. Cell Microbiol. 13, 92-108 (2011).
  24. Fedhila, S., et al. Comparative analysis of the virulence of invertebrate and mammalian pathogenic bacteria in the oral insect infection model Galleria mellonella. J. Invertebr. Pathol. 103, 24-29 (2010).
  25. Daou, N., et al. IlsA, a unique surface protein of Bacillus cereus required for iron acquisition from heme, hemoglobin and ferritin. PLoS Pathog. 5, e1000675 (2009).
  26. Mason, K. L., et al. From commensal to pathogen: translocation of Enterococcus faecalis from the midgut to the hemocoel of Manduca sexta. MBio. 2, e00065-00011 (2011).
  27. Goldsmith, M. R., Shimada, T., Abe, H. The genetics and genomics of the silkworm, Bombyx mori. Annu. Rev. Entomol. 50, 71-100 (2005).
  28. Fraser, M. J. Insect transgenesis: current applications and future prospects. Annu. Rev. Entomol. 57, 267-289 (2012).
والحشرات<em&gt; جاليريا mellonella</em&gt; نموذجا عدوى قوية المعنية بالتحقيق في إمراض البكتيرية
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Ramarao, N., Nielsen-Leroux, C., Lereclus, D. The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis. J. Vis. Exp. (70), e4392, doi:10.3791/4392 (2012).More

Ramarao, N., Nielsen-Leroux, C., Lereclus, D. The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis. J. Vis. Exp. (70), e4392, doi:10.3791/4392 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter