זיהום haemocolic אוראלי ותוך של זחלים של עש השעווה הגדולה יותר<em> גלרית mellonella</em> הוא תאר. חרק זה יכול לשמש כדי לחקור גורמים ארסיים של entomopathogenic כמו גם חיידקים אופורטוניסטים יונקים. גידול של החרקים, שיטות של זיהום ודוגמאות של<em> In vivo</em> ניתוח מתואר.
המחקר של חיידקים ארסיים לעתים קרובות מחייב מודל חיה מתאימה. מודלי יונקים של זיהום הם יקרים ועשויים להעלות סוגיות אתיות. השימוש בחרקים כמודל לזיהום מספק חלופה רבה ערך. בהשוואה למארחי מודל שאינם בעלי חוליות אחרים, כגון נמטודות, חרקים יש מערכת מתקדמת יחסית של הגנות מיקרוביאלית ולכן הם נוטים יותר להפקת מידע רלוונטי לתהליך ההדבקה של יונקים. כמו יונקים, חרקים בעלי מערכת חיסון מולדת מורכבת 1. תאים בhemolymph מסוגלים phagocytosing או encapsulating פולשי מיקרוביאלי, ותגובות הומורלית כוללות ייצור המושרה של פפטידים Lysozyme והקטנים אנטיבקטריאליות 2,3. בנוסף, אנלוגיות נמצאות בין תאי האפיתל של midguts זחל חרקים ותאי מעי מערכת עיכול של יונקים. לבסוף, מספר מרכיבים בסיסיים חיוניים לתהליך זיהום החיידקים כגון הידבקות תא, התנגדותפפטידים מיקרוביאלית, ניוון רקמות ואת ההסתגלות לסטרס חמצונים, סביר שיהיה חשוב בשני חרקים ויונקים 1. לכן, חרקים הם כלים רבים ערכיים לזיהוי והאפיון של גורמים ארסיים מיקרוביאלי המעורב בזיהומים ביונקים.
זחלים של העש הגדול שעוות Galleria mellonella הוכחו לספק תובנה שימושית לפתוגנזה של מגוון רחב של זיהומים מיקרוביאליים כוללים פטרייתי יונקים (Fusarium oxysporum, אספרגילוס fumigatus, קנדידה אלביקנס) וחיידקים פתוגנים, כגון סטפילוקוקוס אוראוס, vulgaris פרוטאוס , Aeruginosa Serratia marcescens Pseudomonas, monocytogenes יסטריה או Enterococcus faecalis 4-7. ללא קשר למיני חיידקים, תוצאות שהושגו עם זחלי Galleria הנגועים על ידי הזרקה ישירה דרך העור המת באופן עקבי לתאם עם אלה של סימיlar מחקרי יונקים: זני חיידקים שנחלשו במודלים של יונקים להפגין אלימות נמוכה בגלריה, וזני גרימת זיהומי אדם חמורים גם ארסיים ביותר במודל Galleria 8-11. דלקת פה של גלריה היא הרבה פחות משומשת ותרכובות נוספות, כמו רעלים מסוימים, יש צורך להגיע לתמותה.
מספר יתרונות G. mellonella זחלים נוכחיים טכניים: הם גדולים יחסית (זחלי instar אחרונים לפני ההתגלמות הם 250 מ"ג משקל ארוכים בערך 2 סנטימטר ו), ובכך מאפשר הזרקה של מנות מוגדרות של חיידקים, הם יכולים להיות שגדלו בטמפרטורות שונות (20 מעלות C עד 30 ° C) וזיהום מחקרים יכולים להתנהל בין 15 ° C למעל 37 מעלות צלזיוס 12,13, המאפשרים ניסויים המחקים סביבה של יונקים. בנוסף, גידול חרקים הוא קל וזול יחסית. זיהום של הזחלים מאפשר ניטור ארסיות חיידקים על ידי מספר אמצעים, includinחישוב גרם של LD 50 14, מדידה של הישרדות חיידקים 15,16 ובחינה של תהליך ההדבקה 17. כאן, אנו מתארים את הגידול של החרקים, המכסים את כל שלבי החיים של ג mellonella. אנו מספקים פרוטוקול מפורט של זיהום על ידי שני מסלולים של חיסון: haemocoelic פה ופנים. מודל החיידקים השתמש בפרוטוקול זה הוא cereus Bacillus, הפתוגן גראם חיובי מעורבים במערכת עיכול כמו גם בזיהומים אחרים חמורים מקומיים או מערכתיים אופורטוניסטיים 18,19.
השימוש בחרקים ובמיוחד בשלב הזחל, כמודלים לזיהום כמה פתוגנים, הופך תכוף. מודל של בחירה בהיבטים מסוימים הוא דרוזופילה (מודל הזבוב) משמשת כמבוגרים ו1,2 שלב זחל. Lepidopteran החרקים ג mellonella גם שמש בעיקר לassaying ארסיות חיידקים בהזרקה. היתרון של לסבול טמפרטורות גבוהו…
The authors have nothing to disclose.
ברצוננו להודות לאליזבת Guillemet, כריסטוף בואסון ולודוויק Bridoux לקבלת סיוע טכני מעולה. אנחנו חוב גדולים לסילבי Salamitou וSinda Fedhila להתקנת המערכת הראשונית.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Wax and pollen | La Ruche Roanaise | 303000 | Any honey producer |
Automated syringe pump | KD Scientific | KDS 100 | |
Syringe 1 ml | Terumo | BS 01T | |
Needle 0.45 x 12 mm | Terumo | NN 2613R | |
Petri dish 5 cm | VWR | 89000-300 | |
Needle 30G, 25 mm hypodermic | Burkard Mfg. Co. Ltd. | PDE0005 |