Oral e intra infecção haemocolic de larvas de traça da cera<em> Galleria mellonella</em> É descrito. Este insecto pode ser utilizada para estudar factores de virulência de entomopatogênico bem como mamíferos bactérias oportunistas. Criação dos insetos, os métodos de infecção e exemplos de<em> In vivo</em> Análise são descritos.
O estudo da virulência bacteriana requer frequentemente um modelo animal adequado. Modelos de mamíferos de infecção são caros e pode levantar questões éticas. O uso de insetos como modelos de infecção proporciona uma alternativa valiosa. Comparado com outros hospedeiros não vertebrados modelo tais como nemátodos, insectos têm um sistema relativamente avançado de defesas antimicrobianas e são por isso mais susceptíveis de produzir a informação relevante para o processo de infecção de mamíferos. Como mamíferos, insetos possuem um sistema complexo imune inata 1. As células na hemolinfa são capazes de encapsular ou fagocitando invasores microbianos, e as respostas humorais incluem a produção induzida de lisozima e pequenos péptidos antibacterianos 2,3. Além disso, as analogias são encontrados entre as células epiteliais do intestino médio de insectos e larvas de células intestinais de sistemas digestivo de mamíferos. Por fim, vários componentes básicos essenciais para o processo de infecção bacteriana, como a adesão celular, a resistência àpéptidos antimicrobianos, a degradação do tecido e de adaptação ao stress oxidativo são susceptíveis de ser importante, em ambos os insectos e mamíferos 1. Assim, os insectos são ferramentas polivalentes para a identificação e caracterização de factores de virulência microbianas envolvidas em infecções de mamíferos.
As larvas de traça da cera maior Galleria mellonella foram mostrados para fornecer uma visão útil para a patogénese de uma grande variedade de infecções microbianas, incluindo fungos de mamíferos (Fusarium oxysporum, Aspergillus fumigatus, Candida albicans) e os agentes patogénicos bacterianos, tais como Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris , Serratia marcescens Pseudomonas aeruginosa, Listeria monocytogenes ou Enterococcus faecalis 4-7. Independentemente das espécies bacterianas, os resultados obtidos com Galleria larvas infectadas por injecção directa através da cutícula consistentemente correlacionados com aqueles de simiLar estudos de mamíferos: estirpes de bactérias que são atenuadas em modelos de mamíferos demonstram menor virulência em Galleria, e as tensões que causam graves infecções humanas são também altamente virulenta no modelo Galleria 8-11. A infecção oral de Galleria é muito menos utilizada e adicional de compostos, como as toxinas específicas, são necessárias para atingir a mortalidade.
Larvas de G. mellonella apresentam várias vantagens técnicas: são relativamente grandes (larvas de último estádio antes pupação são cerca de 2 cm de comprimento e de peso mg 250), permitindo assim a injecção de doses definidas de bactérias, podem ser criados em várias temperaturas (20 ° estudos C a 30 ° C) e a infecção pode ser realizada entre 15 ° C e acima de 37 ° C 12,13, permitindo experiências que simulam um ambiente de mamíferos. Além disso, a criação de insetos é fácil e relativamente barato. Infecção das larvas permite monitorar a virulência bacteriana por vários meios, including cálculo de LD 50 14, a medida de sobrevivência bacteriana 15,16 e exame do processo de infecção 17. Aqui, descrevemos a criação dos insetos, abrangendo todas as fases de vida de G. mellonella. Nós fornecemos um protocolo detalhado de infecção por duas vias de inoculação: haemocoelic oral e intra. O modelo bacteriano utilizado no presente protocolo é uma Bacillus cereus, de agentes patogénicos Gram-positivos implicada na gastrointestinal, bem como em outros locais ou sistémicas graves infecções oportunistas 18,19.
O uso de insetos e principalmente o estágio larval, como modelos de infecção por vários patógenos, está se tornando freqüente. Um modelo de escolha para alguns aspectos é Drosophila (o modelo mosca), utilizado como adultos e 1,2 estágio larval. O inseto lepidóptero G. mellonella também tem sido principalmente utilizado para o ensaio de virulência bacteriana por injecção. A vantagem de tolerar temperaturas mais elevadas (acima de 37 ° C) do que a Drosophila (máximo 25…
The authors have nothing to disclose.
Gostaríamos de agradecer Elisabeth Guillemet, Christophe Buisson e Ludovic Bridoux para assistência técnica excelente. Temos uma grande dívida para Sylvie Salamitou e Fedhila Sinda para a configuração inicial do sistema.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Wax and pollen | La Ruche Roanaise | 303000 | Any honey producer |
Automated syringe pump | KD Scientific | KDS 100 | |
Syringe 1 ml | Terumo | BS 01T | |
Needle 0.45 x 12 mm | Terumo | NN 2613R | |
Petri dish 5 cm | VWR | 89000-300 | |
Needle 30G, 25 mm hypodermic | Burkard Mfg. Co. Ltd. | PDE0005 |