Summary

Registrazione e analisi dei ritmi circadiani in Running-ruota Attività nei roditori

Published: January 24, 2013
doi:

Summary

Ritmi circadiani in volontario ruote in esecuzione di attività nei mammiferi sono strettamente accoppiati alle oscillazioni molecolari di un master clock nel cervello. Come tali, questi ritmi quotidiani di comportamento può essere usato per studiare l'influenza dei fattori genetici, farmacologici e ambientali sul funzionamento di questo orologio circadiano.

Abstract

Quando i roditori hanno libero accesso a una ruota in esecuzione nella loro gabbia di stabulazione, l'uso volontario di questa ruota dipende dal momento della giornata 1-5. Roditori notturni, tra cui topi, criceti e topi, sono attivi durante la notte e relativamente inattiva durante il giorno. Molte altre misure comportamentali e fisiologici mostrano anche ritmi quotidiani, ma nei roditori, esegue ruote attività serve come misura particolarmente affidabile e conveniente dell'uscita del orologio circadiano, il nucleo soprachiasmatico (SCN) dell'ipotalamo. In generale, attraverso un processo chiamato trascinamento, il modello quotidiano di esecuzione ruote attività sarà naturalmente allinearsi con l'ambiente ciclo luce-buio (LD ciclo, ad esempio, 12 hr-luce: 12 hr-scuro). Tuttavia i ritmi circadiani sono endogenamente generato modelli di comportamento che presentano un periodo di 24 ore ~, e persistono nel buio costante. Pertanto, in assenza di un ciclo di LD, la registrazione e l'analisi di rodaggio ruota attività puòessere utilizzato per determinare il personale ora del giorno. Poiché questi ritmi sono diretti dall'orologio circadiano del personale ora del giorno viene definito come il tempo circadiano (CT). Al contrario, quando un ciclo di LD è presente, l'ora del giorno, che è determinata dal ciclo ambientale LD è chiamato tempo zeitgeber (ZT).

Anche se i ritmi circadiani in rodaggio ruota attività sono in genere collegati all'orologio SCN 6-8, oscillatori circadiani in molte altre regioni del cervello e del corpo 9-14 potrebbe essere coinvolta nella regolazione dei ritmi di attività giornalieri. Per esempio, ritmi quotidiani negli alimenti-anticipatorio attività non richiedono l'SCN 15,16 e invece, sono correlati con i cambiamenti nell'attività di extra-SCN oscillatori 17-20. Così, eseguendo ruote registrazioni di attività può fornire importanti informazioni comportamentali non solo l'uscita del clock SCN master, ma anche l'attività di extra-SCN oscillatori. Di seguito DESCRIBE dell'attrezzatura e dei metodi utilizzati per registrare, analizzare e visualizzare ritmi circadiani attività locomotoria nei roditori da laboratorio.

Protocol

1. Di ricovero per animali Cage: Per registrare il funzionamento ruote attività di un roditore individuale, ogni gabbia dovrebbe ospitare un roditore singolo e rodaggio ruota. Poiché le ruote in esecuzione può essere considerata una forma di arricchimento, tutti i roditori di ogni studio dovrebbe avere accesso simile a una ruota in esecuzione. Modifiche letterecci: movimentazione degli animali così come cambiamenti nelle gabbie o biancheria da letto possono aver…

Representative Results

I programmi per computer: programmi informatici specializzati sono in genere utilizzati per la generazione di actograms e il calcolo del periodo circadiano. Questi programmi includono, ma non sono limitati a, ActiView (Minimitter, Bend, OR) e Circadia. Actograms: Actograms fornire una rappresentazione grafica dei modelli quotidiani di rodaggio ruota attività. Ci sono singoli tracciati (asse x = 24 ore) e fare doppio tracciati (asse x = 48 ore) actograms. Entrambi i metodi di giorno trama in …

Discussion

Monitoraggio ritmi di attività giornalieri con ruote di scorrimento è il metodo più comunemente usato e affidabile per valutare l'uscita del master clock circadiano nei roditori notturni. Wheel-running attività, tuttavia, è solo uno dei molti aspetti del comportamento e fisiologia che può essere monitorato in continuo. Sebbene la maggior parte di rodaggio ruota attività si verifica durante la notte, oltre il 30% del totale veglia si verifica durante il giorno 25,26. Altri endpoint possono essere ut…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Gli autori desiderano ringraziare premi salariali, borse di studio, attrezzature e fondi operativi da Fonds de la recherche en santé Québec (FRSQ), Istituti canadesi di ricerca sulla salute (CIHR), le scienze naturali e ingegneria Research Council del Canada (NSERC), e la Concordia University Research Chairs Program (CRUC), così come l'attenti commenti su questo manoscritto del Dr. Jane Stewart.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
Vitalview Card & Software Mini Mitter #855-0030-00 (Bend, OR, USA)
DP24 Dataport Mini Mitter #840-0024-00 (Bend, OR, USA)
QA4-Module Mini Mitter #130-0050-00 (Bend, OR, USA)
Magnetic Switch Mini Mitter #130-0015-00 (Bend, OR, USA)
C-50 Cable assembly Mini Mitter #060-0045-10 (Bend, OR, USA)
Rat running wheel assembly Mini Mitter #640-0700-00 (Bend, OR, USA)
Cage and tray support Mini Mitter #640-0400-00 (Bend, OR, USA)
Useable cut away cage Mini Mitter #664-2154-00 (Bend, OR, USA)
Grid floor for cage Mini Mitter #676-2154-00 (Bend, OR, USA)
Waste tray Mini Mitter #684-2154-00 (Bend, OR, USA)
Lamp housing Microlites Scientific #R-101 (Toronto, ON, Canada)
4W Fluorescent lamps Microlites Scientific #F4T5/CW (Toronto, ON, Canada)
Isolation chambers Custom built 28″H x 20″W x 28″D ½” Black Melamine.

References

  1. Pittendrigh, C. S., Daan, S. A Functional Analysis of Circadian Pacemakers in Nocturnal Rodents. V. Pacemaker Structure: A Clock for All Seasons. J. Comp. Physiol. 106, 333-355 (1976).
  2. Pittendrigh, C. S., Daan, S. A Functional Analysis of Circadian Pacemakers in Nocturnal Rodents. IV. Entrainment: Pacemaker as Clock. J. Comp. Physiol. 106, 291-331 (1976).
  3. Pittendrigh, C. S., Daan, S. A Functional Analysis of Circadian Pacemakers in Nocturnal Rodents. III. Heavy Water and Constant Light: Homeostasis of Frequency?. J. Comp. Physiol. 106, 267-290 (1976).
  4. Pittendrigh, C. S., Daan, S. A Functional Analysis of Circadian Pacemakers in Nocturnal Rodents. II. The Variability of Phase Response Curves. J. Comp. Physiol. 106, 253-266 (1976).
  5. Pittendrigh, C. S., Daan, S. A Functional Analysis of Circadian Pacemakers in Nocturnal Rodents. I. The Stability and Lability of Spontaneous Frequency. J. Comp. Physiol. 106, 223-252 (1976).
  6. Ralph, M. R., Foster, R. G., Davis, F. C., Menaker, M. Transplanted suprachiasmatic nucleus determines circadian period. Science. 247, 975-978 (1990).
  7. Moore, R. Y., Eichler, V. B. Loss of a circadian adrenal corticosterone rhythm following suprachiasmatic lesions in the rat. Brain Res. 42, 201-206 (1972).
  8. Stephan, F. K., Zucker, I. Circadian rhythms in drinking behavior and locomotor activity of rats are eliminated by hypothalamic lesions. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 69, 1583-1586 (1972).
  9. Abe, M., et al. Circadian rhythms in isolated brain regions. J. Neurosci. 22, 350-356 (2002).
  10. Yamazaki, S., et al. Resetting central and peripheral circadian oscillators in transgenic rats. Science. 288, 682-685 (2000).
  11. Lamont, E. W., Robinson, B., Stewart, J., Amir, S. The central and basolateral nuclei of the amygdala exhibit opposite diurnal rhythms of expression of the clock protein Period2. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 4180-4184 (2005).
  12. Amir, S., Lamont, E. W., Robinson, B., Stewart, J. A circadian rhythm in the expression of PERIOD2 protein reveals a novel SCN-controlled oscillator in the oval nucleus of the bed nucleus of the stria terminalis. J. Neurosci. 24, 781-790 (2004).
  13. Yoo, S. H., et al. PERIOD2::LUCIFERASE real-time reporting of circadian dynamics reveals persistent circadian oscillations in mouse peripheral tissues. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 5339-5346 (2004).
  14. Guilding, C., Piggins, H. D. Challenging the omnipotence of the suprachiasmatic timekeeper: are circadian oscillators present throughout the mammalian brain?. Eur. J. Neurosci. 25, 3195-3216 (2007).
  15. Boulos, Z., Terman, M. Food availability and daily biological rhythms. Neurosci. Biobehav. Rev. 4, 119-131 (1980).
  16. Boulos, Z., Rosenwasser, A. M., Terman, M. Feeding schedules and the circadian organization of behavior in the rat. Behav. Brain Res. 1, 39-65 (1980).
  17. Verwey, M., Amir, S. Food-entrainable circadian oscillators in the brain. Eur. J. Neurosci. 30, 1650-1657 (2009).
  18. Davidson, A. J., Poole, A. S., Yamazaki, S., Menaker, M. Is the food-entrainable circadian oscillator in the digestive system?. Genes Brain Behav. 2, 32-39 (2003).
  19. Hara, R., et al. Restricted feeding entrains liver clock without participation of the suprachiasmatic nucleus. Genes Cells. 6, 269-278 (2001).
  20. Damiola, F., et al. Restricted feeding uncouples circadian oscillators in peripheral tissues from the central pacemaker in the suprachiasmatic nucleus. Genes Dev. 14, 2950-2961 (2000).
  21. Mrosovsky, N. Phase response curves for social entrainment. J. Comp. Physiol. A. 162, 35-46 (1988).
  22. Cain, S. W., et al. Reward and aversive stimuli produce similar nonphotic phase shifts. Behav. Neurosci. 118, 131-137 (2004).
  23. Antle, M. C., Mistlberger, R. E. Circadian clock resetting by sleep deprivation without exercise in the Syrian hamster. J. Neurosci. 20, 9326-9332 (2000).
  24. Banjanin, S., Mrosovsky, N. Preferences of mice, Mus musculus, for different types of running wheel. Lab Anim. 34, 313-318 (2000).
  25. Verwey, M., Lam, G. Y., Amir, S. Circadian rhythms of PERIOD1 expression in the dorsomedial hypothalamic nucleus in the absence of entrained food-anticipatory activity rhythms in rats. Eur. J. Neurosci. 29, 2217-2222 (2009).
  26. Gooley, J. J., Schomer, A., Saper, C. B. The dorsomedial hypothalamic nucleus is critical for the expression of food-entrainable circadian rhythms. Nat. Neurosci. 9, 398-407 (2006).

Play Video

Cite This Article
Verwey, M., Robinson, B., Amir, S. Recording and Analysis of Circadian Rhythms in Running-wheel Activity in Rodents. J. Vis. Exp. (71), e50186, doi:10.3791/50186 (2013).

View Video