Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

الأمثل نظام لرصد الإرواء الدماغي في نموذج الفئران من السكتة الدماغية داخل اللمعة انسداد الشريان الدماغي الأوسط

Published: February 17, 2013 doi: 10.3791/50214

Summary

وقد تجلى الدماغي الرصد لتحسين التروية الدقة في نماذج السكتة الدماغية. الصعوبات الفنية غالبا ما تحد من استخدام هذه الأداة الأساسية للبحث الدماغية. في هذا الفيديو، يظهر نظام الأمثل للحصول على الرصد واحدة أو متعددة خلال الدورة الدموية الموقع داخل اللمعة الأوسط انسداد الشريان الدماغي في الفئران.

Abstract

إمكانية متعدية من البحوث ما قبل السريرية السكتة الدماغية تعتمد على دقة النمذجة التجريبية. الدماغي الرصد نضح في النماذج الحيوانية من السكتة الدماغية الحادة يسمح لتأكيد الانسداد الشرياني ناجحة وشاملة نزف تحت العنكبوتية. ويمكن أيضا رصد الدماغي نضح أن تستخدم لدراسة ضمانات التداول داخل الجمجمة، والتي تبرز كعامل محدد من نتائج قوية والسكتة الدماغية هدفا محتملا العلاجية. على الرغم من الدور المعترف به من رصد ليزر دوبلر نضح كجزء من المبادئ التوجيهية الحالية لنقص التروية الدماغية التجريبية، عددا من الصعوبات التقنية التي تحد من استخدامها موجودة على نطاق واسع. واحدة من القضايا الرئيسية والحصول على مرفق آمن وطويل الأمد لتحقيق اختراق عميق ليزر دوبلر في الجمجمة الحيوان. في هذا الفيديو، وتبين لنا نظامنا الأمثل لرصد التروية الدماغية العابرة خلال انسداد الشريان الدماغي الأوسط من خيوط داخل اللمعة في الفئران. وضعنا طن البيت طريقة بسيطة للحصول على حامل العرف المزدوج للألياف (في أعماق الاختراق) ليزر دوبلر تحقيقات، والتي تسمح في مواقع متعددة الرصد إذا لزم الأمر. يمكن بسهولة للرصد المستمر والمطول لنضح الدماغي يمكن الحصول على أكثر من الجمجمة سليمة.

Introduction

البحث متعدية على عوامل التي تؤثر على الدورة الدموية والسكتة الدماغية والفيزيولوجيا المرضية العلاج يجب أن يتم تنفيذه، لأن هذه المسألة الهامة في كثير من الأحيان إهمال المفارقة من الدراسات البحثية الأساسية 1.

الدماغي الرصد نضح أداة أساسية، ولكن لا تستخدم بكثرة، لنمذجة دقيقة السكتة الدماغية 2. وبصرف النظر عن تأكيد انسداد الأوعية الشريانية والاستبعاد من نزيف تحت العنكبوتية قد نضح المراقبة المستمرة الدماغي توفير بيانات مفيدة عن مدى اتساق والعجز التروية، والحالة الوظيفية للأوعية جانبية داخل الجمجمة وتأثير الدورة الدموية من النهج العلاجي الجديد.

دراسة حديثة تشير إلى مجموعتنا من يمكن استخدام الرصد أن الدورة الدموية في مواقع متعددة داخل الجمجمة لتقييم ضمانات التداول ويمكن التنبؤ حجم احتشاء والعجز وظيفية 4. هذه النتائج التجريبية هي و consiالدعامة مع الدراسات السريرية التي أظهرت أن الأداء الوظيفي للضمانات التداول الدماغي هو التنبؤية لنتائج السريرية في مرضى السكتة الدماغية الإقفارية 5، 6. لهذا السبب، تم الضمانات دعا الدماغية كهدف محتمل التداوي في المرحلة الحادة من 7 السكتة الدماغية.

الليزر دوبلر (LD) الصكوك هي أداة الأكثر شيوعا التي تستخدم لقياس التروية الدماغية السكتة الدماغية في التجريبية وينصح استخدامها من قبل الإرشادات الأخيرة حول هذا الموضوع 8. LD الصكوك نضح الاوعية الدموية الدقيقة في قياس حجم والقشرية الصغيرة، وعمق في الإشارات المسجلة كونها تعتمد على عرض الفصل الألياف، مع الألياف التوأم تحقيقات LD السماح لاختراق أعمق مقارنة مع واحد من الألياف تحقيقات LD 9. يتم التعبير عن القيم تدفق الدم وحدات نضح التعسفي (PU) والتي تشير إلى النسبية المطلقة بدلا من تدفق الدم إلى المخ. عادة ما يتم إجراء معايرة PU النقيبمعايير الحركة غرام، وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. LD flowmetry يسمح المراقبة المستمرة الحيوية وتوليد البيانات الكمية في الدورة نفسها.

ومن بين المشاكل التقنية التي تحد حاليا استخدام LD، قضية رئيسية والحصول على مرفق آمن وطويل الأمد لتحقيق اختراق عميق ليزر دوبلر في الجمجمة الحيوان. هذا أمر ضروري لرصد طويلة وإذا تم استخدام مجسات متعددة لمختلف الأراضي الشرايين الدماغية، ونحن أداء في مختبرنا.

على وجه الخصوص، يتطلب وقتا الجراحية لفترات طويلة إذا تعلق تحقيقات في الجمجمة باستخدام مسامير أو ثقوب في الجمجمة لدغ، بينما إشارة الفقراء ومرفق غير آمن يحدث إذا تعلق الألياف واحد (منخفض الاختراق) تحقيقات LD في الجمجمة بواسطة الغراء الجراحية البسيطة. التوأم الألياف (اختراق عميق) تحقيقات LD توفير أعلى إشارة وأكثر اتساقا، لكنها أكبر من الألياف واحد وتحقيقات لا يمكن أن يكون فيtached في الجمجمة باستخدام الغراء الجراحية فقط.

في هذا الفيديو، وتبين لنا نظامنا الأمثل لرصد التروية الدماغية العابرة خلال انسداد الشريان الدماغي الأوسط من خيوط داخل اللمعة في الفئران. وصفنا طريقة بسيطة للحصول على، والعرف الصنع كفاءة، حامل منخفضة التكلفة لواحد أو عدة المزدوج الألياف (اختراق عميق) تحقيقات LD، لاستخدامها في رصد التروية الدماغية طويلة من خلال الجمجمة سليمة.

يمكن أن ينظر إلى عملية جراحية لMCAO عابر في الفئران في المادة عن طريق الفيديو من Uluç وزملاء العمل 10 و لا يظهر في هذا الفيديو.

Protocol

1. كيفية جعل حامل دقق (موقع واحد أو مواقع متعددة)

  1. المواد المطلوبة هي المطاط الطبيعي، وأنابيب بلاستيكية صغيرة ومرود المعادن. يمكن تخصيص صاحب التحقيق إلى حجم الحيوان، وعدد وحجم تحقيقات دوبلر ليزر، والأوعية الدموية الدماغية أراضي التي يجب أن يتم رصدها.
  2. قطع المطاط الطبيعي لحجم الحاجة (حوالي 10 مم × 10 مم للفأر ز 300).
  3. بمناسبة مواقف التحقيق (ق) وbregma على المطاط الطبيعي، وفقا لإحداثيات التجسيمي المطلوب، لانسداد الشريان الدماغي الأوسط، من المتوقع أن إحداثيات نموذجية لالأساسية الدماغية في bregma مم -1، 5 مم الوحشي لل خط الوسط، لإقليم borderzone الدماغية الطرفية، يمكن أن تكون على إحداثيات المتوقعة مم +2 ​​bregma، 2 مم الوحشي على خط الوسط.
  4. علامة واضحة جدا موقف bregma مع X، وهذا هو العلامة المميزة لربط صاحب التحقيق في الجمجمة. </ لى>
  5. إدراج مرود في أنبوب بلاستيكية صغيرة (حجمها يحتاج لتتناسب مع حجم التحقيق).
  6. إدراج مرود في المطاط الطبيعي في مكان التحقيق لابد من وضعه؛ دفع مرود في المطاط حتى يتم إدخال الأنبوب البلاستيك والمطاط في أيضا.
  7. سحب مرود.
  8. إذا كانت هناك حاجة تحقيقات متعددة، كرر الخطوات من 1،5-1،7 لشغل وظائف التحقيق الأخرى.
  9. اختياري لتحقيقات متعددة: التفاف شريط حول أنابيب بلاستيكية لضمان تحسين استقرار تحقيقات.
  10. اختياري: أداء التعقيم الكيميائي للتحقيق العديد من أصحاب للاستخدامات المستقبلية.

2. إعداد سابق للجراحة

  1. عادة ما يتم إجراء MCAO السكتة الدماغية النموذج بوصفه عملية جراحية البقاء. في هذه الحالة، كما هو موضح في الفيديو لدينا (الوقت البقاء على قيد الحياة 24 ساعة بعد الجراحة)، ويستخدم الجراح تقنية العقيم مع الصكوك تعقيم واللوازم.
  2. تخدير الفئران مع isoflurane (inductio 3٪ن المرحلة والصيانة 1.5٪).
  3. وضع الفئران في موقف المعرضة على طاولة العمليات.
  4. حلاقة بلطف رئيس الفئران.
  5. تطبيق محلول مطهر لتطهير الشاش والجلد.
  6. إدارة يدوكائين 2٪ 5 ملغ / كغ تحت الجلد في منطقة الجمجمة.

3. والتحقيق لتحديد المواقع تأمين أكثر من الجمجمة سليمة

  1. جعل الجلد ناصف الحق شق (لMCAO اليمين) وتشريح الأنسجة تحت الجلد للوصول إلى اللفافة القحفية (الخوذة السفافي).
  2. جعل شق ناصف الحق في اللفافة الجمجمة وأداء تشريح حادة للوصول إلى عظم الجمجمة، وإعداد منطقة عظم الجمجمة التي هي كبيرة بما يكفي لتطبيق حامل التحقيق.
  3. يرجى ملاحظة: لا حاجة لحفر أو ترقق العظام.
  4. تطبيق ميربرومين حل لتطهير وتجفيف سطح الجمجمة.
  5. استخدام مجفف الشعر (مجموعة الهواء البارد ل) لتسريع تجفيف سطح الجمجمة. في هذه المرحلة، والخيوط الجراحية في الجمجمة وbregma هم اضحة للعيان.
  6. تخصيص صاحب التحقيق عن طريق قطع حواف مع مقص العقيمة.
  7. تطبيق كمية صغيرة من الغراء الجراحية (CYANOACRYLATE، والطب البيطري وافقت عليها) إلى السطح تحت حامل التحقيق، وتجنب بعناية افتتاح السفلي من الأنابيب البلاستيكية (يرجى ملاحظة: إذا كمية كبيرة من الغراء لا يزال بين سطح البصرية لجنة التحقيق و الجمجمة، وهذا قد تنتج إشارة المنخفضة الدخل وتحقيق قد يؤدي إلى تلف بعد الاستخدامات المتعددة).
  8. تطبيق حامل التحقيق إلى السطح الجمجمة، مطابقة بعناية bregma مع المعلم X. تطبيق ضغط لطيف على حامل التحقيق.
  9. استخدام مجفف الشعر (مجموعة الهواء البارد ل) لتسريع تجفيف الغراء الجراحية.
  10. تأمين حامل التحقيق من خلال ربط الخيط الجراحي حول صاحب التحقيق ورئيس الحيوان؛ توخي الحذر لوضع الموضوع على mandibula الجراحية، وتجنب المنطقة تحت الفك السفلي واله الرقبة.
  11. اختياري: ملء أنبوب بلاستيكي (ق) لصاحب التحقيق مع هلام البصرية (مثل الموجات فوق الصوتية أو هلام المشتركة كهربية)، وهذا سيزيد من جودة الإشارة LD.
  12. وضع المسبار (ق) في حامل التحقيق والتحقق من القراءة الفعلية للمقياس التدفق LD. استخدام مقياس التدفق LD وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.
  13. تأمين التحقيق (ق) ربطهم حول رأس الحيوان؛ توخي الحذر لوضع الموضوع على mandibula الجراحية، وتجنب المنطقة تحت الفك والرقبة.

4. رصد الإرواء الدماغي خلال MCAO

  1. وضع الفئران في موقف ضعيف، وتجنب بعناية القوات tractional على التحقيق (ق) أو حامل التحقيق.
  2. بدء الرصد الدماغي نضح خلال MCAO.

5. إزالة دقق (ق) ودقق حامل

  1. قطع خيوط حول (ق) التحقيق، حامل التحقيق ورئيس الحيوان.
  2. تخفف بلطف تشريح الأنسجة الرخوة والجلد الجمجمة حول قاعدة المطاط الطبيعي لصاحب التحقيق.
  3. إزالة حامل التحقيق.
  4. تطبيق محلول مطهر لسطح الجمجمة.
  5. خياطة الجلد الجمجمة.

6. رعاية ما بعد الجراحة

  1. 2.5 مل من إدارة محلول ملحي تحت الجلد لمنع الجفاف والحفاظ على الحيوانات باستخدام الدافئ وسادة التدفئة بعد وقف التخدير الغازية.
  2. البقاء على قيد الحياة لعملية جراحية: توفير تسكين استباقية مع كيتوبروفين 4 ملغ / كغ تحت الجلد و يكرر نفس الجرعة في 12 ساعة بعد الجراحة
  3. لدينا في ظل ظروف تجريبية، تم تنفيذ القتل الرحيم في 24 ساعة بعد الجراحة عن طريق الاستنشاق 2 CO.

Representative Results

كان المستحث MCAO عابر (60 دقيقة) عن طريق إدراج خيوط السيليكون مغلف بالمطاط في الشريان السباتي الخارجي. وقد دفعت بعد ذلك حتى نهاية خيوط من محطة الشريان السباتي الداخلي حتى أصل MCA، تحت مراقبة LD. والمغطي عابر الشريان السباتي المشترك والشريان pterygopalatin خلال الإدراج الجراحي للخيوط. ويرد التمثيل التخطيطي لعملية جراحية في الشكل 1A.

تم اختيار إحداثيات الجمجمة لكي يتبوأ تحقيقين LD فقا لالأرض الشرياني الأساسي. وأظهرت التجارب الأولية مع رذاذ الحبر الجيلاتين (1B الشكل) أنه من المتوقع أن الدماغية الأساسية في إقليم MCA المركزية (bregma مم -1، 5 مم من خط الوسط، دقق 1)، في حين يتوقع تدفق ضمانات في إقليم borderzone بين القشرية الدماغية فروع الشرايين المتوسطة والأمامية (bregma +2 مم، 2 مم من خط الوسط، دقق 2).

ديناميكا الدم الدماغي تمت دراسة استخدام الليزر في مواقع متعددة تحقيقات دوبلر خلال كامل فترة العملية الجراحية، قبل أي وأثناء وبعد MCAO (الشكل 2). وكان العجز التروية الدماغية خلال MCAO أصغر حجما وأظهر درجة أعلى من التباين في دقق 2 مقارنة دقق 1، مما يدل بين الفروق الفردية في الأداء الوظيفي للضمانات داخل الجمجمة تحت ظروف الدماغية. موقع متعدد رصد دوبلر الليزر يسمح أيضا لدراسة التغيرات الدماغية خلال الدورة الدموية انسداد الشرايين خارج الجمجمة القريبة الدماغي (الشريان السباتي المشترك، الشريان السباتي الداخلي، الشريان pterygopalatin).

تم تقييم نتائج السكتة الدماغية 24 ساعة بعد ضخه من حيث الحجم احتشاء، وتحسب على التوالي في 19 أقسام ملطخة البنفسجي الكريزيل (الشكل 3)، وغارسيا وظيفية neuroscore 11. المناعية لأسو علامات محددةتم إجراء ciated مع إصابات الدماغ الدماغية، من أجل الحصول على التوزيع الطبوغرافية من فقدان الخلايا العصبية (بروتين يرتبط أنيبيب 2، MAP2) وشبه الظل الدماغية (الصدمة الحرارية من البروتين-70، HSP70) فيما يتعلق رصد في مواقع متعددة داخل الجمجمة الدورة الدموية من التداول (الشكل 4).

الشكل 1
الشكل 1. الدماغي الرصد خلال نضح MCAO داخل اللمعة في الفئران. A. تمثيل تخطيطي العملية الجراحية لMCAO عابرة. واستخدم خيوط السيليكون المغلفة لتسد أصل MCA، بعد أن أدخلت في الشريان السباتي الخارجي ودفعت من خلال الشريان السباتي الداخلي. وligated إما الشرايين عنق الرحم القريبة (الشريان السباتي الخارجي) أو المغطي عابر (الشريان pterygopalatin والشريان السباتي المشترك) خلال اإلجراءاتويرد dure. B. A الدماغ ممثل الجيلاتين بعد تلطيخ الحبر. أجريت نضح Transcardiac من الجيلاتين الحبر حل 60 دقيقة بعد ظهور نقص التروية، دون ضخه. كانت ملطخة الدماغ perfused عادة الحبر الجيلاتين، وبدا كما الملونة الرمادي مع الأسود الملون السفن، في حين أن المنطقة الدماغية (NOT-perfused) ظلت غير ملوثين (الوردي اللون). وتظهر إحداثيات الجمجمة لكي يتبوأ تحقيقين LD. التحقيق 1 = مم -1 من bregma، 5 مم من خط الوسط، دقق 2 = +2 مم من bregma، 2 مم من خط الوسط.

الشكل 2
الشكل 2. تسجيلات الدورة الدموية الدماغية باستخدام الليزر في مواقع متعددة تحقيقات دوبلر. ويرد نمط نموذجي الدورة الدموية داخل الجمجمة مما يوحي الضمانات الفعالة وظيفيا في ظل ظروف الدماغية. في هذا الحيوان، وأظهرت اقتفاء أثر LD صغيرةإيه العجز نضح في القناة 2 دقق، مقارنة للتحقيق 1 قناة، خلال انسداد CCA كل وانسداد MCA. MCA-O = انسداد الشريان الدماغي الأوسط. CCA-O = انسداد الشريان السباتي المشترك. وحدات PU = نضح.

الشكل 3
الشكل 3. تم إصلاحها في بارافورمالدهيد 4٪ والملون مع البنفسجي الكريزيل 0.1٪ أقسام الدماغ ممثل لحساب حجم احتشاء أقسام نسيجية الاكليلية (+2.5 ملم إلى bregma -3،0 مم 50 ميكرومتر؛، ن = 19 ميكرومتر مع فاصل 250). يتم حساب حجم احتشاء باستخدام يماغيج برامج معالجة الصور، لتصحيح الاختلالات بين نصف الكرة الأرضية بسبب الوذمة الدماغية، وأعرب في مم 3. اضغط هنا لمشاهدتها بشكل اكبر شخصية

الشكل 4. المناعية الواسمات الجزيئية لفقدان الخلايا العصبية وشبه الظل وتظهر الممثل أقسام الدماغ على التوالي، والتي كانت ملطخة البنفسجي الكريزيل 0.1٪ (A) أو immunostained مع علامات فقدان الخلايا العصبية (بروتين يرتبط أنيبيب 2، MAP2؛ B). وشبه الظل الدماغية (الحرارة صدمة البروتين-70، HSP70؛ C).

Discussion

وضعنا في منزل نظام بسيط ومنخفض التكلفة لمرفق آمن واحد أو متعددة الألياف المزدوج (اختراق عميق) تحقيقات LD في الجمجمة سليمة من الفئران أثناء إجراء MCAO. وإن كان على ما يبدو مشكلة تافهة، والحصول على المرفقات موثوق بها لجنة التحقيق LD في الجمجمة هو في الواقع قضية رئيسية في هذا الإعداد التجريبية، لأنه هو شرط أساسي لكشف إشارة على نحو سلس وناجح للرصد من نضح الدماغي.

إجراءات الغازية، مثل الثقوب لدغ ومسامير العظام، وإطالة الوقت عادة الجراحية وإدخال متغيرات أكثر تجريبية تتعلق حج القحف، وهذا يمكن أن تثبط الباحثين والامتناع عن استخدام LD لهم الرصد. من ناحية أخرى، واستخدام الألياف واحد (اختراق الأقل) تحقيقات، والتي هي أرق وأسهل نسبيا ليتم لصقها مباشرة إلى سطح الجمجمة، ويعطي المنخفضة جودة الإشارة والتي لا يمكن استخدامها بشكل موثوق مع الفئران الكبار دون حفر أو ترقق الجمجمة.

استخدمنا مواد بسيطة ومنخفضة التكلفة، مثل المطاط الطبيعي، وأنابيب بلاستيكية ومعدنية مرود. يمكن أن تنتج A حامل التحقيق حسب الطلب في غضون دقائق قليلة، وتكييفها وفقا لظروف تجريبية. يمكن لهذه أصحاب التحقيق استيعاب واحد أو أكثر في أعماق الاختراق تحقيقات LD، لرصد الكلاسيكية موقع واحد على جوهر الدماغية أو متعدد رصد موقع في الأراضي الشرياني مختلفة في نصف الكرة نفسه أو عبر نصفي الكرة الأرضية. يمكن أن تنتج العديد من أصحاب التحقيق، تعقيم كيميائيا، وتخزينها لاستخدامها في المستقبل. يتم استخدام الغراء البيطرية التي وافق عليها الجراحية (cyanoacrilate)، تسارع من الهواء البارد، لإرفاق صاحب التحقيق إلى السطح من الجمجمة سليمة الفئران، وفقا لإحداثيات الجمجمة المطلوب. وأخيرا، يتم تأمين مزيد من التحقيق انشاء وضعتها خيوط مشتركة.

الوقت العام لهذا التحقيق LD انشاء، بعد اتقان هذه التقنية، هو حوالي 10 دقيقة.

كما هو موضح طن هذا الفيديو، ونحن مراقبة روتينية التروية الدماغية في إقليم MCA المركزية (LD التحقيق 1: الأساسية الدماغية) وMCA في إقليم الطرفية (LD التحقيق 2: أساسا منطقة الناقص). في دراستنا الأخيرة أظهرت لنا أن تقلب التغيرات في تدفق الدم التحقيق LD 2 (يعني ± 52٪ 16٪ SD، بالمقارنة مع خط الأساس) أعلى بالمقارنة مع التحقيق LD 1 (يعني 31٪ ± 6٪ SD، مقارنة مع ويمكن استخدام خط الأساس) والسكتة الدماغية 4 للتنبؤ النتائج.

وقد تقدم بعض النصائح حل المشاكل للباحثين التي ترغب في استخدام لدينا في منزل نظام المتقدمة. في بداية التجربة، وتوخي الحذر لتجف بشكل جيد للغاية على سطح الجمجمة (مع ميربرومين والهواء البارد) قبل إرفاق صاحب التحقيق لمنع انفصال سابق لأوانه. وعلاوة على ذلك، يجب التأكد من تطبيق الغراء على المطاط الطبيعي، وتجنب الاتصال مع نهاية مفتوحة للأنبوب من البلاستيك والسطح البصري للتحقيق LD، لمنع إشارة الفقراء واحتمال حدوث تلف في التحقيق. عندما ربط الخيط حول الرأس من الحيوان، وتوخي الحذر من أجل تجنب انسداد مجرى الهواء (يتم منع هذا عن طريق وضع الخيط على العظام الفك السفلي). بعد تحديد المواقع وتأمين تحقيقات، يجب الحرص على عدم جر الكابلات التحقيق عندما تحول هذا الحيوان في موقف ضعيف لجراحة سرطان عنق الرحم، وهذا عادة ما يتطلب خطوة شخصين، شخص واحد يمسك الحيوان والشخص الثاني عقد الكابلات التحقيق وتحديد المواقع بلطف لهم إلى الموضع المطلوب. وأخيرا، تتم إدارة التلوث بسهولة في نهاية المطاف دم التحقيق LD المزدوج الألياف اتباع الإرشادات المقدمة تنظيف من قبل الشركة المصنعة.

يمكن أن نظامنا الأمثل لرصد التروية الدماغية، كما هو مبين في هذا الفيديو، وتوفير بديل أسهل، أسرع وأكثر موثوقية للتحقيق انشاء نظم التي تباع حاليا من قبل الشركات التجارية في هذا المجال. وعلاوة على ذلك، نعتقد أن استخدام هذا النظام من قبل الباحثين الآخرين قد يعزز مسمارذ من ديناميكا الدم الدماغي في حقل السكتة الدماغية التجريبية، مما أدى إلى تطوير جيل جديد من العلاجات الجانبية الدماغي.

Disclosures

وقدمت التمويل لإنتاج هذه المادة عن طريق الفيديو من قبل مور الصكوك المحدودة (اكسمينستر، ديفون، المملكة المتحدة)، التي تنتج ليزر دوبلر الصكوك هو مبين في دراستنا التجريبية.

تمت الموافقة على بروتوكول تجريبي لجنة رعاية الحيوان من جامعة ميلانو بيكوكا، وفقا لمبادئ توجيهية وطنية بشأن استخدام الحيوانات المختبرية (DL 116/1992) وتوجيه الاتحاد الأوروبي للتجارب الحيوانية (2010/63/EU )، بموجب ترخيص المشروع (ن 219/2011-B) من وزارة الصحة الإيطالية.

Acknowledgments

السيدة كارولين نشكر روبرتسون لأكثر من صوت والسيدة ايلينا بيروفانو لمساعدتها في إنتاج الفيديو. وأيد هذه الدراسة من جامعة ميلانو بيكوكا "Fondo دي أتينيو 2011".

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Equipment
MoorVMS-LDF 2-channel Laser Doppler Monitor Moor Instruments
VP12 probe Moor Instruments
Reagent/Material
Doccol silicon-coated filament size 4-0, diameter with coating 0.39mm Doccol Corporation 403956PK10
Natural rubber, e.g. common pacifiers for newborns Multiple suppliers
Metal stylet, e.g. from spinal needle 18 GA x 90 mm Multiple suppliers
Plastic tubes, e.g. from vein set for infusion 25 GA x 20 mm Multiple suppliers
Nonabsorbable suture, coated, braided silk Multiple suppliers
Cyanoacrylate surgical glue Multiple suppliers
Isoflurane (100% v/v) for veterinary use Multiple suppliers

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Sutherland, B. A., Papadakis, M., Chen, R. L., Buchan, A. M. Cerebral blood flow alteration in neuroprotection following cerebral ischemia. J. Physiol. 589, 4105-4114 (2011).
  2. Prinz, V., Endres, M. Chapter 3 Modeling focal cerebral ischemia in rodents: Introduction and overview. Rodent models of stroke. Dirnagl, U. Human Press. (2010).
  3. Schmid-Elsaesser, R., Zausinger, S., Hungerhuber, E., Baethmann, A., Reulen, H. J. A critical reevaluation of the intraluminal thread model of focal cerebral ischemia: evidence of inadvertent premature reperfusion and subarachnoid hemorrhage in rats by laser-Doppler flowmetry. Stroke. 29, 2162-2170 (1998).
  4. Riva, M., Pappadà, G. B., et al. Hemodynamic monitoring of intracranial collateral flow predicts tissue and functional outcome in experimental ischemic stroke. Exp. Neurol. 233, 815-820 (2012).
  5. Menon, B. K., Smith, E. E., et al. Regional leptomeningeal score on CT angiography predicts clinical and imaging outcomes in patients with acute anterior circulation occlusions. Am. J. Neuroradiol. 32, 1640-1645 (2011).
  6. Bang, O. Y., et al. Collateral flow predicts response to endovascular therapy for acute ischemic stroke. Stroke. 42, 693-699 (2011).
  7. Shuaib, A., Butcher, K., Mohammad, A. A., Saqqur, M., Liebeskind, D. S. Collateral blood vessels in acute ischaemic stroke: a potential therapeutic target. Lancet Neurol. 10, 909-921 (2011).
  8. Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. Rodent Stroke Model Guidelines for preclinical stroke trials (1st edition). J. Exp. Stroke Transl. Med. 2, 2-27 (2009).
  9. Shepherd, A. P., Öberg, P. A. Laser-Doppler Blood Flowmetry. Kluwer Academic Publishers. (1990).
  10. Uluç, K., Miranpuri, A., Kujoth, G. C., Aktüre, E., Başkaya, M. K. Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat. J. Vis. Exp. (48), e1978 (2011).
  11. Garcia, J. H., Wagner, S., Liu, K. F., Hu, X. J. Neurological deficit and extent of neuronal necrosis attributable to middle cerebral artery occlusion in rats. Statistical validation. Stroke. 26, 627-634 (1995).
الأمثل نظام لرصد الإرواء الدماغي في نموذج الفئران من السكتة الدماغية داخل اللمعة انسداد الشريان الدماغي الأوسط
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Beretta, S., Riva, M., Carone, D., Cuccione, E., Padovano, G., Rodriguez Menendez, V., Pappadá, G. B., Versace, A., Giussani, C., Sganzerla, E. P., Ferrarese, C. Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion. J. Vis. Exp. (72), e50214, doi:10.3791/50214 (2013).More

Beretta, S., Riva, M., Carone, D., Cuccione, E., Padovano, G., Rodriguez Menendez, V., Pappadá, G. B., Versace, A., Giussani, C., Sganzerla, E. P., Ferrarese, C. Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion. J. Vis. Exp. (72), e50214, doi:10.3791/50214 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter