Monitoramento da Migração de Células dendríticas usando 19 F / 1 H Ressonância Magnética

Summary

Rastreamento de células usando MRI ganhou notável atenção nos últimos anos. Este protocolo descreve a marcação das células dendríticas com flúor ( ¹⁹ Partículas F)-ricos, em aplicação vivo destas células, e acompanhamento do alcance de sua migração para o linfonodo de drenagem com ¹⁹ F / ¹ H ressonância magnética e ¹⁹ F MRS.

Abstract

Avanços contínuos nos métodos de imagem não invasivos, como a ressonância magnética (RM) tem melhorado muito a nossa capacidade de estudar os processos fisiológicos ou patológicos em organismos vivos. MRI também está provando ser uma ferramenta valiosa para capturar células transplantadas in vivo. Estratégias de rotulagem de células iniciais para utilização de agentes de contraste de MRI que influenciam os tempos de relaxação de RM (T1, T2, T2 *) e conduzem a um acessório (T1) ou depleção (T2 *) do sinal onde células marcadas estão presentes. T2 * agentes de melhoramento tais como ultrasmall agentes de óxido de ferro (USPIO) foram utilizados para estudar a migração de células e alguns têm sido aprovados pela FDA para uso clínico. A desvantagem de T2 * agentes é a dificuldade de distinguir a extinção do sinal criado pelas células rotuladas de outros artefatos, como coágulos de sangue, micro hemorragias ou bolhas de ar. Neste artigo, descrevemos uma técnica emergente para as células de monitoramento in vivo quebaseia-se na marcação das células com flúor ^(19F) ricos em partículas. Estas partículas são preparadas por emulsão de perfluorocarbono compostos (PFC) e, em seguida, utilizado para as células de etiqueta, que, posteriormente, pode ser visualizada, por ¹⁹ F RM. Vantagens importantes de PFC para o rastreamento de células in vivo incluem (i) a ausência de carbono ligado a ¹⁹ C, in vivo, o que proporciona então as imagens de fundo e livres de células completo selectivityand (ii) a possibilidade de quantificar o sinal de células por ¹⁹ F MR espectroscopia .

Introduction

O rastreamento de células in vivo é um aspecto crucial em vários campos da biomedicina. Para isso, as técnicas de imagem não invasivas, que pode selectivamente células localizam ao longo de um período de tempo são extremamente valiosos. Antes do desenvolvimento de tridimensional ressonância magnética (IRM), o seguimento da migração de células imunitárias foi limitado a análises microscópicas ou biópsias de tecidos. Rastreamento celular com a ajuda da ressonância magnética ganhou imensa atenção nos últimos anos, não só para estudar o comportamento de células imunologistas imune in vivo, mas também para investigadores clínicos e de células estaminais.....

Protocol

Todos os procedimentos com animais devem ser aprovados pelo comitê institucional local, bem-estar animal antes da execução. Durante as medições MR um nível adequado de anestesia e de monitorização fisiológica (temperatura corporal, freqüência respiratória) são requisitos indispensáveis.

1. Geração de Rato derivadas da medula óssea células dendríticas

1. Extrair as células da medula óssea de ratinhos C57BL / 6, como previamente descrito ^12. Esse protocolo remonta a 1992 e ¹³ foi originalmente descrito por um grupo de Ralph M. Steinman (1943-2011), descobridor da célula dendrítica ^14.
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Results

Dezoito de 21 horas após a aplicação intradérmica, ¹⁹ células dendríticas F-rotulada (DC) migram para o nó de linfa poplíteos de drenagem. O movimento de CC através dos canais linfáticos para o nó de linfa de drenagem politeal pode ser apreciado por sobrepondo as imagens anatómicas H ¹ com as imagens DC ¹⁹ F (Figura 2A). Temos anteriormente relatado na migração dessas células in vivo, bem como o impacto de ¹⁹ tamanho de partícula em F-CC imunobiologia.......

Discussion

Este método de empregar ¹⁹ F / ¹ H MRI para seguir o movimento de CC no nó de linfa dá a oportunidade de estudar os padrões de migração de células imunitárias in vivo. As células dendríticas são excelentes exemplos de rápida migração de células do sistema imunológico que são capazes de manobrar através de estruturas tridimensionais sem fortemente aderidos a substratos específicos ^17. Embora a resolução espacial baixa (gama im) da técnica descrita não é comparável com a que pode .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
REAGENTS
C57BL/6 camundongos	Charles River, Berlim
RPMI	Gibco	21875-091
FBS Superior	Biochrom AG	S 0615
HEPES	Gibco-Invitrogen	15630-056
Penicilina-estreptomicina	Gibco	15140-122
L-glutamina	Gibco	25030-024
Dulbecco's PBS	Sigma Aldrich	D8662
PFA	Santa Cruz	sc-281692
Perfluoro-15-coroa-5-éter	ChemPur	391-1996
Placas de Petri Pluronic F-68	Sigma Aldrich	P5556
(35 x 10 mm)	VWR, Alemanha	391-1996
27 ½ G syringes	VWR, Alemanha	612-0151
Filtros de células de nylon (100 μ m mesh)	VWR, Alemanha	734-0004
Tubos de RMN	VWR, Alemanha	634-0461
EQUIPMENT
Ferramentas de dissecação	FST
CO2 incubadora	Aglutinante
Sistema de RM para pequenos animais	Bruker Biospin		9.4T BioSpec 94/20 USR, Software de Aquisição e Processamento ParaVision
1H/19F bobina RF de volume duplo ajustável	Rapid Biomed, Wü rzburg, Alemanha		35 mm de diâmetro interno, 50 mm de comprimento
19F bobina de espectroscopia	bobina de loop de	tune/match interna, 4 voltas, diâmetro interno 5 mm, 10 mm de comprimento, dois capacitores para sintonizar e combinar
	hr Medical Instruments GmbH
Sistema de monitoramento de animais Modelo 1025	SA Instruments Inc., Nova York, EUA