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Biology

दबाव Myography का प्रयोग Murine प्रतिरोध धमनी समारोह का आकलन

Published: June 7, 2013 doi: 10.3791/50328
Automatic Translation
1, 1
1Anesthesia Center for Critical Care Research, Department of Anesthesia, Critical Care, and Pain Medicine, Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School

Summary

दबाव myography में, एक जहाज के एक अक्षुण्ण छोटे खंड दो छोटे cannulas पर मुहिम शुरू की है और एक उपयुक्त luminal दबाव के लिए दबाव डाला. यहाँ, हम माउस 3 की vasorelaxation प्रतिक्रिया को मापने की विधि का वर्णन

Abstract

दबाव myograph प्रणाली, छोटी धमनियों के कार्यात्मक मूल्यांकन में नजाकत से उपयोगी होते हैं एक उपयुक्त transmural दबाव के लिए दबाव डाला. दबाव myography में हासिल निकट शारीरिक हालत संवहनी बिस्तर के vivo व्यवहार में लिए extrapolated किया जा सकता है, जो औषधीय और शारीरिक उत्तेजनाओं, के लिए आंतरिक प्रतिक्रियाओं की गहराई लक्षण वर्णन परमिट. दबाव myograph पारंपरिक तार myographs पर कई फायदे हैं. उदाहरण के लिए, छोटे प्रतिरोध वाहिकाओं कसकर नियंत्रित और physiologically प्रासंगिक intraluminal दबाव में अध्ययन किया जा सकता है. यहाँ, हम acetylcholine के जवाब में vaso-आराम करने phenylephrine साथ preconstricted 3 आदेश mesenteric धमनियों (लंबे समय तक 3-4 मिमी), की क्षमता का अध्ययन. Mesenteric धमनियों 60 mmHg के लगातार दबाव में बनाए रखा है कि एक दबाव और सील प्रणाली से जुड़े दो cannulas पर बढ़ रहे हैं. पोत के लुमेन और बाहरी व्यास continuou हैंधूर्त क्रमशः phenylephrine और acetylcholine के जवाब में वाहिकासंकीर्णन और vasorelaxation की वास्तविक समय मात्रा का ठहराव की अनुमति, एक वीडियो कैमरा का उपयोग कर दर्ज की गई.

हृदय रोग के एटियलजि अध्ययन करने के लिए दबाव myography की प्रयोज्यता प्रदर्शन करने के लिए, हम प्रणालीगत उच्च रक्तचाप के एक murine मॉडल में अन्तःचूचुक पर निर्भर नाड़ी समारोह का आकलन किया. घुलनशील guanylate साइक्लेस (- / - sGCα 1) के α 1 सबयूनिट में कमी चूहे जब एक 129S6 (S6) पृष्ठभूमि (sGCα 1 -/-S6) पर उच्च रक्तचाप से ग्रस्त हैं, लेकिन नहीं है जब एक C57BL / 6 (बी -6) पृष्ठभूमि (sGCα पर 1 -/-B6). दबाव myography का प्रयोग, हमें पता चलता है कि भ्रष्ट अन्तःचूचुक पर निर्भर vasorelaxation में sGCα 1 की कमी का परिणाम है. संवहनी रोग sGCα 1 में से sGCα 1 -/-S6 में अधिक स्पष्ट है -/-B6 चूहों, संभावना contributisGCα 1 -/-B6 चूहों में से sGCα 1 -/-S6 में उच्च रक्तचाप के लिए एनजी.

दबाव myography जिससे हृदय रोग अंतर्निहित तंत्र में हमारी जानकारी बढ़ाने, संवहनी संकुचन और विश्राम पर विभिन्न उत्तेजनाओं के प्रभाव का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि एक अपेक्षाकृत आसान है, लेकिन संवेदनशील और mechanistically उपयोगी तकनीक है.

Introduction

दबाव myograph सिस्टम छोटे धमनियों, नसों और अन्य जहाजों की शारीरिक समारोह और गुणों को मापने के लिए किया जाता है. एक धमनी या शिरा के एक अक्षुण्ण छोटे खंड दो छोटे गिलास cannulas पर घुड़सवार और पोत विवो विशेषताओं (आंकड़े 1 और 2) में अपने से ज्यादातर को बनाए रखने की अनुमति देता है, एक उपयुक्त luminal दबाव के लिए दबाव डाला जाता है. एक दबाव myograph में पास शारीरिक हालत पृथक वाहिकाओं के आंतरिक गुणों (जैसे myogenic स्वर) की जांच की अनुमति, संवहनी बिस्तर के vivo व्यवहार को दर्शाता है. मांसपेशियों के संकुचन एक बल ट्रांसड्यूसर 1 से प्रत्यक्ष यांत्रिक युग्मन द्वारा मूल्यांकन किया है जहां तार myography, अधिक दबाव myography के लाभ में से कुछ, जबकि नाड़ी तंत्र में विकसित समग्र प्रतिरोध को परिभाषित जो सूक्ष्म प्रतिरोध धमनियों का अध्ययन किया जा सकता है (मैं) में शामिल तार myograph बड़ा नाली धमनियों, (दो) टी तक सीमित हैकोई तार (तीन) पोत के प्राकृतिक स्वरूप को बेहतर बनाए रखा है कि, पोत लुमेन के माध्यम से पारित करने की आवश्यकता के बाद से अन्तःचूचुक नुकसान को टोपी जोखिम कम हो जाता है, और (iv) कि पोत आयाम एक विस्तृत श्रृंखला के में अध्ययन किया जा सकता है दबाव या कतरनी तनाव 2.

सूक्ष्म वाहिकाओं का अध्ययन कर उच्च रक्तचाप जैसे हृदय रोगों में बदल संवहनी टोन करने के लिए योगदान करते हैं कि pathophysiology, और आणविक तंत्र को समझने में मदद करने के लिए बड़ा नाली धमनियों अध्ययन से अधिक जानकारीपूर्ण हो सकता है. उदाहरण के लिए, 8 सप्ताह के लिए चूहों के एक उच्च वसा आहार खिलाने के साथ जुड़े endothelial समारोह की हानि नहीं बल्कि महाधमनी के छल्ले में 2 एन डी के आदेश mesenteric धमनियों 3 (चित्रा 3) में प्रदर्शन किया जा सकता है. दबाव myography का एक अन्य लाभ यह है कि दबाव पोत की आंतरिक myogenic कसना मौजूद है, और इस घटना में अन्तःचूचुक की भूमिका और समारोह का अध्ययन किया जा सकता है. यहाँ, हम descrबिगड़ा नाइट्रिक ऑक्साइड (सं) cGMP संकेत की एक सेटिंग में माउस मेसेंतेरिक 3 आदेश प्रतिरोध धमनियों की संवहनी जेट अध्ययन करने के लिए एक दबाव myograph का उपयोग IBE.

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Protocol

1. समाधान की तैयारी

  1. 500X ईडीटीए स्टॉक: 500 मिलीग्राम EDTA ना 2 • 2H 2 हे वजन और 50 मिलीलीटर विआयनीकृत पानी में भंग. कमरे के तापमान पर स्टोर.
  2. KCl समाधान depolarizing.
    1. 3.69 छ NaCl, 18.64 छ KCl, 0.36 छ 4 MgSO निर्जल, 0.41 छ 2 के.एच. पीओ 4, 0.46 छ 2 CaCl • 2H 2 ओ: K10X शेयर समाधान तैयार 250 मिलीलीटर विआयनीकृत पानी में भंग. कमरे के तापमान पर स्टोर.
    2. 100 मिलीलीटर अंतिम KCl समाधान 1X depolarizing के लिए: 0.21 3 NaHCO, 90 मिलीलीटर विआयनीकृत पानी में 0.18 ग्राम ग्लूकोज भंग. K10X शेयर समाधान के 10 मिलीलीटर जोड़ें. 500X EDTA समाधान के 95 μl जोड़ें. अच्छी तरह से मिलाएं. 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर एक सप्ताह के भीतर का उपयोग करें.
  3. प्रयोग के दिन (1 लीटर) पर ताजा HEPES-पीएसएस समाधान तैयार है.
    1. 6.96 छ NaCl, 0.35 ग्राम KCl, .288 छ 4 MgSO • 7 2 हे, 0.1605 छ 2 के.एच. पीओ 4, 2.38 ग्राम HEPES. 100 मिलीलीटर में भंगविआयनीकृत पानी. कुप्पी ए के रूप में चिह्नित
    2. 0.312 छ 2 CaCl • 2H 2 ओ 100 मिलीलीटर विआयनीकृत पानी में भंग. कुप्पी बी के रूप में चिह्नित करें
    3. 1.25 छ 3 NaHCO, 0.991 ग्राम ग्लूकोज. 98 मिलीलीटर विआयनीकृत पानी में भंग. कुप्पी सी. के रूप में चिह्नित करें
  4. कुप्पी सी. एक बड़ा फ्लास्क में 700 मिलीलीटर विआयनीकृत पानी लो में 500X EDTA के 2 मिलीलीटर जोड़ें. निरंतर vortexing के साथ बड़ा फ्लास्क में कुप्पी ए, बी और सी की सामग्री डालो. NaOH के साथ 7.4 पीएच को समायोजित करें.

2. दवाओं का इस्तेमाल

  1. Phenylephrine (10 -2 एम): 10 मिलीलीटर विआयनीकृत पानी में 20.37 मिलीग्राम भंग. -80 पर विभाज्य 1 मिलीलीटर और दुकान डिग्री सेल्सियस क्रमानुसार प्रयोग के दिन पर 10 -3, 10 -4, 10 -5, और 10 -6 मोल / एल प्राप्त करने के लिए पतला.
  2. Acetylcholine (10 -2 एम): 10 मिलीलीटर विआयनीकृत पानी में 18.17 मिलीग्राम भंग. -80 पर विभाज्य 1 मिलीलीटर और दुकान डिग्री सेल्सियस क्रमानुसार 10 -3, 10 -4, 10 -5, और 10 -6 प्राप्त करने के लिए पतलामोल / प्रयोग के दिन पर एल.

3. चूहे

नर WT और sGCα 1 - / - S6 और बी -6 पृष्ठभूमि पर चूहों इस अध्ययन के दौरान अध्ययन किया गया. sGCα 1 - / - वर्णित पहले 4,5 के रूप में उत्पन्न किया गया. आवास और प्रयोगात्मक जानवरों (चूहों) को शामिल प्रक्रियाओं मैसाचुसेट्स जनरल अस्पताल, बोस्टन, एमए की रिसर्च पशु की देखभाल पर उपसमिति द्वारा अनुमोदित किया गया.

4. Mesenteric धमनी में संवहनी जेट का मापन

  1. साथ चूहों euthanize pentobarbital (200 मिलीग्राम / किग्रा, आईपी). उदर गुहा खोलें और mesenteric ऊतक काटना. अलग करने और संयोजी और वसा ऊतकों से मुक्त 3 आदेश की एक mesenteric धमनी काटना, और बर्फ ठंड में HEPES-पीएसएस 95% 2 हे / 5% 15 मिनट के लिए सीओ 2 के साथ पूर्व equilibrated समाधान. धमनी जगह कोई मेसेंतेरिक से शाखाओं में बंटी के साथ 2-3 मिमी लंबाई के छल्ले में कटौतीधमनी. वाहिकाओं में खून नहीं है जब वहाँ सूक्ष्म वाहिकाओं स्तर पर धमनियों और नसों के बीच फर्क करना समस्याग्रस्त है. यह इसे बाहर विदारक से पहले अभी भी जानवर में बरकरार है, जबकि इसलिए, हम पोत की पहचान करने की सलाह देते हैं.
  2. इनलेट और आउटलेट वाल्व के माध्यम से एक 10 मिलीलीटर सिरिंज की सहायता से HEPES-पीएसएस समाधान के साथ दबाव myograph चैम्बर (डीएमटी मॉडल 110P और 11P संस्करण 1.31, चित्रा 2) में कांच cannulas में भरें. अत्यधिक दबाव cannulas से जुड़े नाजुक ट्रांसड्यूसर नुकसान पहुंचा सकता है के रूप में प्रवेशनी के भरने धीरे और सावधानी से किया जाना चाहिए. भरने के बाद cannulas कसकर इनलेट और आउटलेट वाल्व दोनों बंद.
  3. सही प्रवेशनी पर पोत के एक छोर माउंट और ध्यान से नायलॉन सीवन के ठीक एक कतरा साथ टाई. एक सिरिंज की मदद से, फ्लश और इनलेट वाल्व के माध्यम से HEPES के समाधान के साथ बर्तन में भरें. करीब पोत को छोड़ दिया प्रवेशनी में लाओ और इसे पर पोत के दूसरे छोर माउंट. नायलॉन सीवन के साथ टाई. भरनाकक्ष के ऊपर HEPES के समाधान के साथ 10 मिलीलीटर के साथ. धीरे एक सिरिंज की सहायता से इनलेट वाल्व के माध्यम से HEPES के समाधान धक्का द्वारा लीक के लिए जाँच करें.
  4. Myograph पर और वीडियो कैमरे के तहत कक्ष स्थापित करें. चैम्बर में ऑक्सीजन और गर्मी (37 डिग्री सेल्सियस) को प्रारंभ करें. वाल्व बंद कर दिया है, जबकि पहले HEPES के समाधान जलाशय से ट्यूब P1 के साथ इनलेट वाल्व जुड़ें. ट्यूब में कोई बुलबुले हैं जब तक ट्यूब के माध्यम से किसी भी बुलबुले और समाधान के पास चलो. वाल्व खुला.
  5. ट्यूब p2 के दबाव नियामक से आने के साथ कक्ष के बाएँ वाल्व जुड़ें. किसी भी बुलबुले के लिए फिर से जाँच करें. पूरे सिस्टम में किसी भी बुलबुले या रिसाव नहीं होना चाहिए.
  6. Myo-इंटरफेस पैनल पर या सॉफ्टवेयर में दबाव मेनू पर जाएँ और प्रवाह बंद रही है जबकि पंप पर बारी.
  7. कार्यक्रम खोलें और इकट्ठा क्लिक करें. पोत अब स्क्रीन (चित्रा 3) पर देखा जाना चाहिए. पोत monitori की अनुमति, एक माइक्रोस्कोप पर लगे एक कैमरे के साथ कल्पना हैएनजी और पोत लुमेन, पोत व्यास, और दीवार मोटाई का विश्लेषण.
  8. धीरे - धीरे myo इंटरफ़ेस पैनल में या कार्यक्रम में P1 के दबाव का चयन करके P1 के वाल्व के माध्यम से interluminal दबाव बढ़ा और के रूप में दबाव मान दर्ज, 5 mmHg → 10 → 20 → 40 → 60 mmHg. तनाव को समायोजित या खड़ी या अनुदैर्ध्य micropositioner (चित्रा 2) की मदद से तदनुसार तनाव, पोत कुछ समय मोड़ या दबाव बढ़ता जा रहा है, जबकि convolute जाता है. 60 mmHg पर पोत संतुलित करना और 37 डिग्री सेल्सियस 45 मिनट के लिए कम से कम. संतुलन के दौरान पूर्व गर्म HEPES के साथ एक बार स्नान समाधान बदलें.
  9. KCl depolarizing समाधान के 10 मिलीलीटर लागू करें, पूरी तरह से चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं बिगाड़ना और अधिकतम कसना प्राप्त करने के लिए स्नान करने के लिए, 37 डिग्री सेल्सियस पर prewarmed. स्थिर कसना बाद, HEPES के समाधान 3 बार हर 10 मिनट के साथ स्नान कुल्ला.
  10. स्थिर और reproduc द्वारा endothelium के पोत और अखंडता की व्यवहार्यता की जांच करेंphenylephrine के अलावा (10 -5 एम) और के लिए acetylcholine ible प्रतिक्रियाओं (10 -5 एम). HEPES के समाधान के लिए हर 10 मिनट के साथ 3 बार कुल्ला.
  11. (10 -5 एम) phenylephrine जोड़ें पोत preconstrict करने के लिए, और एक स्थिर कसना प्राप्त किया गया है जब, acetylcholine की बढ़ती खुराक (10 -9, 3 एक्स 10 का क्रमिक अलावा द्वारा एक संचयी एकाग्रता वाहिकाप्रसरण प्रतिक्रिया वक्र (सीआरसी) प्रदर्शन - 9, 10 -8, 3 एक्स 10 -8, 10 -7, 3 एक्स 10 -7, 10 -6, 3 एक्स 10 -6, और 10 -5 एम). अंतिम खुराक के बाद, HEPES के समाधान के साथ 3 बार नए सीआरसी शुरू करने से पहले हर 10 मिनट कुल्ला.
  12. 2 मिमी EGTA युक्त 2 + मुक्त पीएसएस सीए लगाने से निष्क्रिय लुमेन व्यास का निर्धारण करते हैं. सभी मापदंडों की गणना करने के लिए उपयोग किया जाएगा जो प्रत्येक खुराक प्रतिक्रिया (चित्रा 4) के लिए दर्ज की ट्रेसिंग उपाय लुमेन व्यास से.
  13. Perc रूप में सभी acetylcholine की छूट प्रतिक्रियाएं व्यक्तphenylephrine preconstriction बाद लुमेन व्यास में entage परिवर्तन निम्न समीकरण का उपयोग, phenylephrine कसना बाद कैल्शियम मुक्त व्यास और व्यास के बीच अंतर के साथ तुलना:
  14. प्रतिशत फैलाव = 100% एक्स [(डी एक्स - डी मैं) / (डी सीए मुक्त - डी मैं)], जहां डी मापा लुमेन व्यास और एक्स, मैं है, और सीए से मुक्त एगोनिस्ट की प्रत्येक खुराक में धमनी व्यास निरूपित (एक्स), प्रारंभिक व्यास निम्नलिखित (मैं) कसना phenylephrine, और सीए 2 + मुक्त बफर में (सीए) मुक्त.

5. सांख्यिकीय विश्लेषण

सभी निरंतर माप मतलब ± SEM के रूप में व्यक्त कर रहे हैं. mesenteric धमनियों में संवहनी जेट दोहराया उपायों दो तरह से एनोवा से विश्लेषण किया है. सभी मामलों में, पी <0.05 सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना जाता है.

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Representative Results

कोई केंद्रीय मनुष्य 6 में और पशु मॉडल 7 में दोनों रक्तचाप homeostasis के रखरखाव में शामिल है. संवहनी चिकनी मांसपेशी छूट को नियंत्रित करने के लिए नहीं की क्षमता घुलनशील guanylate साइक्लेस (SGC) cGMP, 8 उत्पन्न एक हीम युक्त heterodimeric एंजाइम द्वारा मध्यस्थता है. हाल ही में, एक रक्तचाप को संशोधित आनुवंशिक संस्करण मनुष्य 9 में रक्तचाप को विनियमित करने में SGC की प्रासंगिकता को दर्शाता हुआ, sGCα 1 और sGCβ 1 जीन होता है कि एक लोकस में पहचान की थी. दिलचस्प है, SGC (sGCα 1 - / -) के α 1 सबयूनिट में कमी नर चूहों उच्च रक्तचाप से ग्रस्त हैं जब एक 129S6 (S6) पृष्ठभूमि (sGCα 1 -/-S6) 5 पर नहीं बल्कि जब एक C57BL / 6 (बी -6) पृष्ठभूमि पर (sGCα 1 -/-B6) 4. हम मेसेंतेरिक निवासियों में acetylcholine के जवाब में संवहनी छूट अध्ययन करने के लिए दबाव myography इस्तेमाल किया/ - - S6 और बी -6 पृष्ठभूमि और phenylephrine (चित्रा 4) के साथ preconstricted पर चूहों रुख धमनियों WT और sGCα 1 से अलग किया. वे परम प्रतिरोध और नाड़ी तंत्र के अनुपालन को परिभाषित करने और इस प्रकार सीधे रक्तचाप को नियंत्रित क्योंकि हम प्रतिरोध धमनियों का अध्ययन किया. sGCα 1 की कमी परवाह किए बिना अध्ययन चूहों (चित्रा 4 और 5) के आनुवंशिक पृष्ठभूमि की, नाड़ी छूट पैदा करने के लिए एक cetylcholine की एक कम क्षमता के साथ जुड़े थे. / - - बी -6 पृष्ठभूमि पर चूहों (चित्रा 5) 10 sGCα 1 में से S6 पृष्ठभूमि पर चूहों - / - हालांकि, अन्तःचूचुक पर निर्भर विश्राम अधिक स्पष्ट रूप से sGCα 1 में बिगड़ा हुआ था. साथ में, इन निष्कर्षों एन्दोथेलिअल पर निर्भर विश्राम करने vasculature की कमी हुई संवेदनशीलता SGC और alph में तनाव विशेष उच्च रक्तचाप के लिए योगदान कर सकते हैंएक, 1 - / - चूहों.

चित्रा 1
चित्रा 1. योजनाबद्ध. दबाव myograph चैम्बर (डीएमटी) के विभिन्न भागों का चित्रण इनसेट कक्ष में cannulas पर एक मुहिम शुरू की वाहिकाओं से पता चलता है. बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .

चित्रा 2
चित्रा 2. (ए) बेसल और (बी) phenylephrine प्रेरित कसना तहत एक 2 एन डी आदेश माउस mesenteric धमनी की वीडियो रिकॉर्डिंग के दौरान कब्जा कर लिया छवियों प्रतिनिधि,,. बाहरी व्यास और पोत लुमेन क्रमशः, हरे और लाल रेखाओं द्वारा चित्रित कर रहे हैं. सही पैनल में निशान की गिरफ्तारी में मापा संकेत तीव्रता का प्रतिनिधित्वEa के बाहरी व्यास (हरी तीर) और लुमेन व्यास (लाल तीर) के लिए, बाईं तरफ छवियों में नीले बॉक्स से परिभाषित किया.

चित्रा 3
चित्रा 3. 8 सप्ताह के लिए उच्च वसा वाले आहार के साथ खिलाया चूहों में endothelial रोग महाधमनी के छल्ले में स्पष्ट नहीं था. Endothelial समारोह phenylephrine में acetylcholine (10 -9 से 10 -5 एम) (10 -5 एम) पूर्व से प्रेरित vasorelaxation प्रतिक्रिया द्वारा मापा गया था महाधमनी के छल्ले-अनुबंधित. मानक आहार, जंगली प्रकार चूहों एक मानक आहार (एन = 8) खिलाया, उच्च वसा वाले आहार, जंगली प्रकार चूहों 4-6 सप्ताह (एन = 13) के लिए एक उच्च वसा आहार खिलाया.

चित्रा 4
4 चित्रा. Phenylephrine-proconstricted 2 आदेश मीटर पर acetylcholine की एक खुराक प्रतिक्रिया वक्र के प्रतिनिधि मूल ट्रेसिंगएक WTB6 (ए) और एक sGCα 1 -/-S6 माउस (बी). तीर से अलग esenteric धमनियों acetycholine की बढ़ती खुराक (10 -9 से 10 -5 एम) का संचयी अलावा प्रतिनिधित्व करते हैं. एक्स अक्ष समय (सेकंड में) का प्रतिनिधित्व करता है, वाई अक्ष लुमेन व्यास (माइक्रोन में) का प्रतिनिधित्व करता है. बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .

चित्रा 5
चित्रा 5. sGCα 1 में तनाव विशेष उच्च रक्तचाप - / - चूहों sGCα 1 में संवहनी जेट की अधिक हानि -/-S6 चूहों sGCα 1 -/-B6 चूहों की तुलना में अधिक के साथ जुड़ा हुआ है acetylcholine की क्षमता (10 -9 से 10 -5. ) उत्पन्न करने के लिए विश्राम phenylephrine पी में quantitated है/ - (- खुला symbnols, धराशायी लाइन) बी -6 पर चूहों (हलकों) या S6 (वर्ग) आनुवंशिक पृष्ठभूमि पुरुष जंगली प्रकार (गुम्मट, बंद प्रतीकों, पूरी लाइन) और sGCα 1 से recontracted (10 -5 एम) mesenteric धमनियों . Acetycholine प्रेरित संवहनी छूट sGCα 1 -/-B6 चूहों में से sGCα 1 -/-S6 में एक बड़ी हद तक प्रभावित है. एन = sGCα 1 के लिए 3,5,3 और 6 -/-S6, क्रमशः sGCα 1 -/-B6, WTS6,. † * पी ​​<0.05 बनाम बनाम sGCα 1 sGCα 1 -/-B6, पी 0.05 <- / - एक ही आनुवंशिक पृष्ठभूमि की. अनुकूलित प्रपत्र खरीदता, एट अल. (2012).

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Discussion

चूहे भाग में, क्योंकि इस तरह मानव pathophysiology के लिए माउस मॉडल पैदा आनुवंशिक संशोधन, शुरू करने की संभावना के कारण, कई जांचकर्ताओं के लिए पसंद की प्रयोगात्मक मॉडल हैं. vasoactive छोटे प्रतिरोध की स्थिति नहीं है लेकिन बड़ा नाली वाहिकाओं का काफी हद तक नाड़ी तंत्र 11 में रक्त प्रवाह के नियमन को परिभाषित करता है. चूहों जैसे छोटे जानवर, में प्रतिरोध धमनियों का आकार माइक्रोवैस्कुलर समारोह का अध्ययन करने के लिए एक तार myograph के इस्तेमाल को रोकता है. दबाव myographs केवल इस सीमा को पार, लेकिन यह भी निकट शारीरिक शर्तों के तहत नाड़ी समारोह की माप के लिए अनुमति नहीं दी.

हम पहले से sGCα 1 में कमी नर चूहों जब एक 129S6 (S6) पृष्ठभूमि (sGCα 1 -/-S6) 5 पर उच्च रक्तचाप से ग्रस्त हैं, लेकिन नहीं है जब एक C57BL 6 / (बी -6) पृष्ठभूमि (sGCα 1 -/-B6) पर सूचना दी है कि 4. हम धारणा है कि यह है/ - - बी -6 और S6 पृष्ठभूमि पर चूहों रक्तचाप में ट्रेन संबंधी असमानता sGCα 1 के बीच संवहनी जेट में मतभेद की वजह से है. एक दबाव myograph उपयोग करना, हम 3 आदेश mesenteric धमनियों में अन्तःचूचुक पर निर्भर vasorelaxation प्रतिक्रियाओं का अध्ययन किया. Acetylcholine intracellular सीए 2 + एकाग्रता में वृद्धि के माध्यम से endothelial नाइट्रिक ऑक्साइड synthase (एनोस) को सक्रिय करने के endothelium में अपने रिसेप्टर को बांधता है कि एक muscarinic रिसेप्टर agonist है. कोई बाद में छूट पैदा करने के लिए अंतर्निहित चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं की परत में SGC सक्रिय कर सकते हैं.

/ - - WT और sGCα 1 से अलग vasorelax mesenteric धमनियों को कोई व्युत्पन्न endothelial की क्षमता की तुलना करने के लिए दबाव myography का प्रयोग / - - बी -6 और S6 पर चूहों S6 और बी -6 पृष्ठभूमि पर चूहों, हम sGCα 1 के बीच संवहनी जेट में मतभेद की पहचान पृष्ठभूमि 10. sGCα 1 -कमी S6 और बी -6 चूहों दोनों में बिगड़ा अन्तःचूचुक पर निर्भर vasorelaxation के साथ जुड़े थे. हालांकि, इस हानि sGCα 1 -/-B6 चूहों में से sGCα 1 -/-S6 में अधिक से अधिक था. S6 के चूहों में vasorelaxation प्रेरित करने के लिए acetylcholine की कमी हुई क्षमता होने की संभावना नहीं है लेकिन sGCα 1 -/-B6 चूहों में sGCα 1 -/-S6 चूहों में मनाया रक्तचाप में वृद्धि करने के लिए योगदान देता है. ऊंचा रक्तचाप अक्सर गुर्दे की असामान्यताएं 12 के लिए जिम्मेदार ठहराया जाता है, इन परिणामों के रूप में बिगड़ा नहीं, cGMP संकेत 10,13 के साथ जुड़े उदाहरण के लिए संवहनी चिकनी मांसपेशी टोन के प्राथमिक असामान्यताएं, सीधे प्रणालीगत उच्च रक्तचाप के विकास में योगदान कर सकते हैं कि उभरते परिकल्पना को मजबूत 14.

अंत में, दबाव myograph तकनीक संवहनी विज्ञानी या औषध के हाथ में एक बहुत शक्तिशाली उपकरण है और कर सकते हैं खई माइक्रो पोत समारोह का विश्लेषण करने के लिए प्रयोग किया जाता है. हमारे अध्ययन से प्रणालीगत उच्च रक्तचाप के एक मॉडल में अंतर्निहित संवहनी असामान्यताएं का पता लगाने में दबाव myography की प्रयोज्यता दर्शाता है.

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgments

लेखक डीआरएस स्वीकार करना चाहते हैं. डीएमटी दबाव myograph और डीआरएस के इस्तेमाल के लिए पॉल हुआंग और डिमिट्री Atochin. उच्च वसा आहार या मानक आहार के साथ खिलाया चूहों को उपलब्ध कराने के लिए Binglan यू और चोंग ली.

धन के स्रोत

इस काम के हार्वर्ड मेडिकल स्कूल (ते के लिए खरीदता है) से चिकित्सा के लिए विद्वान वैज्ञानिक विकास अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन (ते के लिए खरीदता है) से अनुदान 10SDG2610313, और एक एलेनोर और मीलों शोर 50 वीं वर्षगांठ फैलोशिप प्रोग्राम द्वारा समर्थित किया गया था.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
NaCl Fisher Scientific BP358
CaCl2 (2H2O) Fisher Scientific C79-500
KCl Sigma P9333
MgSO4 Fisher Scientific M65-500
KH2PO4 Sigma P3786
NaHCO3 Fisher Scientific BP328
NaOH Fisher Scientific S318
D-Glucose Sigma G8270
EDTA Fisher Scientific BP121
HEPES Sigma H3375
Phenylephrine Acros Organics AC20724
Acetylcholine Sigma A6625
Pressure Myograph System DMT

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References

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Shahid, M., Buys, E. S. Assessing… More

Shahid, M., Buys, E. S. Assessing Murine Resistance Artery Function Using Pressure Myography. J. Vis. Exp. (76), e50328, doi:10.3791/50328 (2013).

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