Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Medicine

طريقة حساسة لقياس خلايا السرطان هرمة

doi: 10.3791/50494 Published: August 2, 2013

Summary

سواء الشيخوخة يمنع تكون الأورام أو يروج تبقى مثيرة للجدل. منذ المخدرات chemotherapeutical يمكن أن تحفز الخلايا السرطانية إلى senesce، ودراسة الشيخوخة أمر ضروري لاقتراح علاجات جديدة. ومع ذلك، فإن معيار وتستخدم على نطاق واسع فحص β-غالاكتوزيداز يعرض العوائق الرئيسية. نقترح هنا تدفق فحص السريع وحساسة القائم على الخلوي لتحديد الشيخوخة.

Abstract

الخلايا البشرية لا تتكاثر إلى ما لا نهاية. عند الإشارات الخارجية و / أو الجوهرية، قد تموت الخلايا أو إدخال مستقر الخلية اعتقال دورة تسمى الشيخوخة. وقد تبين أن العديد من الآليات الخلوية، مثل تقصير التيلومير والتعبير غير طبيعي من الجينات المسرطنة مولد للتفتل، أن تسبب الشيخوخة. لا يقتصر الشيخوخة للخلايا الطبيعية، وقد تم الإبلاغ أيضا عن الخلايا السرطانية إلى senesce.

وقد ثبت أن الأدوية Chemotherapeutical للحث على الشيخوخة في الخلايا السرطانية. ومع ذلك، فإنه لا تزال موضع جدل ما إذا كانت الشيخوخة يمنع تكون الأورام أو يروج. كما أنه قد يكون في نهاية المطاف المريض محددة، سيتم قريبا المطلوبة طريقة سريعة وحساسة لتقييم الشيخوخة في الخلايا السرطانية.

وتحقيقا لهذه الغاية، ومعيار فحص β-غالاكتوزيداز، والطريقة المستخدمة حاليا، ويعرض العوائق الرئيسية: فهو مضيعة للوقت وغير حساسة. نقترح هنا تدفق مقايسة على أساس الخلوي لدراسة الشيخوخة على لىهاء الخلايا. هذا الاختبار يوفر ميزة كونها سريعة وحساسة، ويمكن أن يقترن إلى الوسم المناعي من مختلف العلامات الخلوية.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

منذ مطلع الستينات واكتشافه من قبل Hayflick ومورهيد، الشيخوخة لا يزال فضول الخلوية 1. الخلايا البشرية لا تتكاثر إلى ما لا نهاية، وبحلول الشيخوخة، Hayflick ومورهيد صاغ عملية الخلوية من الشيخوخة. الشيخوخة هو مستقر الخلية اعتقال دورة في الخلايا التي لا تزال نشطة عملية الأيض في مقابل الموت الخلوي. حتى الآن، وقد ثبت أن أربع آليات الخلوية للحث على الشيخوخة: تقصير التيلومير، الحمض النووي من التلف، اضطراب لونين، والتعبير غير طبيعي من الجينات المسرطنة مولد للتفتل 2. هذا يشير إلى أن الخلايا الطبيعية فحسب، بل أيضا الخلايا السرطانية قادرة على الخضوع الشيخوخة 3. كما واقع الأمر، عرضت خلايا السرطان الذين يخضعون الشيخوخة تشكل عائقا أمام مزيد من تطور الورم 4-5. ومع ذلك، فقد أشارت العديد من التقارير الآن إلى أنه، في ظل ظروف معينة، الشيخوخة الخلوية يمكن أيضا أن تعزز خباثة 6-7. دراسة الشيخوخة من سرطان سلLS على وشك أن تصبح الرغبة في أبحاث السرطان كما هو مستخدم حاليا أدوية العلاج الكيميائي يمكن أن يؤدي إلى الشيخوخة من الخلايا السرطانية في المختبر ليس فقط ولكن أيضا في الجسم الحي 8.

مقايسة ماستر للتحقيق لوجود خلايا هرمة هو فحص β-غالاكتوزيداز في الرقم الهيدروجيني الحمضية. ويعكس هذا الاختبار النسيجية زيادة في نشوء حيوي الليزوزومية التي تحدث في معظم خلايا هرمة. لفترة وجيزة، الخارجية X-غال، وتطبيقها على الخلايا، هو المشقوق بواسطة β-غالاكتوزيداز المخصب في الجسيمات الحالة من خلايا هرمة، مما أدى إلى اللون الأزرق 9. ويمكن بعد ذلك كميا خلايا هرمة الأزرق تحت المجهر حقل مشرق. على الرغم من شعبية جدا، الفحص β-غالاكتوزيداز يعرض العوائق الرئيسية. أولا، يتم تنفيذ هذا الاختبار على خلايا ثابتة. الثاني، هو مضيعة للوقت لأنه يعني لقياس درجة من الشيخوخة عن طريق عد عدد كبير كبير من خلايا هرمة تحت المجهر. ثالثا، هذا الاختبارليست حساسة مثل التمييز بين خلايا هرمة وغير هرمة يعتمد كليا على المراقب.

نناقش هنا ل، وسريعة، وحساسية مقايسة على أساس الخلوي غير المستغلة لتقييم وجود خلايا هرمة الحية. ويستند هذا الاختبار على التحلل من جزيء نفاذية الغشاء، و5 dodecanoylaminofluorescein دى β-D-galactopyranoside (C 12 FDG)، بواسطة β-غالاكتوزيداز المخصب في خلايا هرمة. بعد التحلل والإثارة ليزر، وC 12 FDG تنبعث مضان أخضر، وبالتالي يمكن الكشف عنها بواسطة التدفق الخلوي 10، 11. الكشف عن خلايا هرمة عبر التدفق الخلوي يوفر ميزة كبيرة من كونها سريعة وحساسة. وبالإضافة إلى ذلك، والكشف عن خلايا هرمة بواسطة التدفق الخلوي يمكن أن يقترن مع الكشف عن علامات الخلوية الأخرى. هذا الاختبار يمكن أن تستخدم لكشف خلايا هرمة ضمن مجموعة من السكان من الخلايا السرطانية تعامل مع العلاج الكيميائي ويمكن وضعها بشكل روتينيحتى على أقسام الأنسجة، بعد الخلوية التفكك، في العيادة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. إعداد C12FDG، Bafilomycin A1، والثقافة الخليوي

  1. حل مسحوق FDG C 12 في سلفوكسيد ثنائي ميثيل (DMSO) إلى التركيز النهائي من 20 ملم. قسامة وتخزينها في -20 درجة مئوية. DMSO ينبغي أن تستخدم مع شروط السلامة المناسبة.
  2. حل مسحوق A1 bafilomycin في DMSO إلى تركيز النهائي من 0.1 ملم. قسامة وتخزينها في - 20 درجة مئوية. Bafilomycin ينبغي أن تستخدم مع شروط السلامة المناسبة.
  3. زراعة RPMI 8226 خط الخلية، أو خطوط الخلايا الأخرى ملتصقة أم لا، في وسائل الإعلام التي تحتوي على 10٪ مصل بقري جنيني و 1٪ المضادات الحيوية، عند 37 درجة مئوية، 5٪ CO 2. تقدير عدد الخلايا اللازمة للتجربة. من أجل تسجيل عدد كاف من الأحداث خلال تحليل التدفق الخلوي، يطلب 5 × 10 5 خلايا. لتحديد النسبة المئوية للخلايا هرمة، هناك حاجة إلى ثلاث عينات الخلايا: عينة غير المسماة، الخلايا غير المعالجة ملطخة C 12 FDG، الخلايا المعالجة ملطخةC 12 FDG.
  4. بذور الخلايا 24 ساعة قبل إجراء التجربة بحيث الخلايا في مراحل سجل من منحنى الانتشار الخلوي.

2. تحريض الشيخوخة

  1. لحث الشيخوخة للخلايا السرطانية وذلك بإضافة المخدرات chemotherapeutical. وينبغي تكييف تركيز الدواء ومدة العلاج إلى نوع من الخلايا التي تم اختبارها. تبدأ مع العلاج الموارد البشرية 48 في تركيز النهائي من 50 نانومتر دوكسوروبيسين لتركيز من الخلايا في حوالي 10 6 خلية / مل. لا تنسى أن تشمل عينة غير المعالجة (مراقبة سلبية).

3. Bafilomycin A1 معالجة

  1. تحقق بقاء الخلية عن طريق خلط الخلايا مع التريبان الأزرق (V / V)، والدواء chemotherapeutical المستخدمة في الخطوة السابقة قد يؤدي إلى موت الخلايا المبرمج الخلية. شغل في غرفة مالاسيه وحساب عدد الخلايا الزرقاء (الخلايا الميتة) والخلايا البيضاء (الخلايا الحية). إذا كانت النسبة المئوية للبقاء أقل من 70٪، قد تكون الخلايا الميتة REMاوفيد باستخدام عدة المناسبة لضمان عدم التحيز في التحليل اللاحق الخلايا الميتة.
  2. إزالة وسائل الإعلام والثقافة، واستبدال من قبل وسائل الاعلام prewarmed ثقافة جديدة. علاج الخلايا مع تركيز النهائي من 100 نانومتر من bafilomycin A1. يستخدم Bafilomycin A1 لتحييد الحموضة الحمضية من الجسيمات الحالة. احتضان 1 ساعة عند 37 درجة مئوية، 5٪ CO 2.

4. C 12 FDG تلطيخ

  1. حل C 12 FDG في prewarmed سائل الإعلام والثقافة الطازجة إلى تركيز النهائي من 2 مم.
  2. إضافة إلى مركب الخلايا في تركيز النهائي من 33 ميكرومتر واحتضان 2 ساعة على 37 درجة مئوية، 5٪ CO 2. إذا باستخدام الخلايا غير ملتصقة، الطرد المركزي الخلايا في 300 x ج لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية (قد يكون من سرعة إلى تعديل لنوع من الخلايا المستخدمة)، وغسل 2X مع برنامج تلفزيوني. Resuspend وبيليه الخلية في 500 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني الباردة. إذا باستخدام الخلايا الملتصقة، وإزالة وسائل الاعلام وغسل 2X مع برنامج تلفزيوني. حصاد الخلايا الملتصقة باستخدام محلول التربسين وأجهزة الطرد المركزيالخلايا في 300 x ج لمدة 5 دقائق عند 4 ° C (سرعة قد يتعين تعديلها لنوع من الخلايا المستخدمة). Resuspend وبيليه الخلية في 500 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني الباردة. في كلتا الحالتين، يجب أن يكون تركيز خلية حوالي 10 6 خلية / مل.
  3. أداء المشارك الوسم المناعي لمزيد من تميز السكان من خلايا هرمة.

5. تحليل التدفق الخلوي

  1. معايرة عداد الكريات تدفق باستخدام الخرز المكافحة الموصى بها من قبل الشركة المصنعة للتدفق عداد الكريات. لجميع الخطوات، 10 على الأقل 4 الأحداث يجب أن يتم تسجيلها.
  2. تشغيل العينة الأولى التي تحتوي على خلايا غير المسماة. إعداد اثنين من المعلمة الرسم عرض القناة مبعثر إلى الأمام (FSC) مقابل الجانب قناة مبعثر (SSC). ضبط مضخم أنابيب (فرق إدارة المشاريع PMT) وتحديد المنطقة ذات الاهتمام استبعاد الخلايا الميتة والبقايا الخلوية يمكن أن تكون قد ظهرت أثناء إعداد العينة. بوابة هذه المنطقة من مصلحة في الرسم البياني، معلمة واحدة عرض FL1 على مقياس سجلللمحور X وعدد من الأحداث في المحور الصادي. إجمالي عدد الأحداث يمثل عدد الخلايا التي تم تحليلها. تعيين PMT بحيث تظهر الخلايا غير المسماة في العقد الأول على مقياس سجل من المحور س. تحديد تألق ذاتي للخلايا إذا لزم الأمر.
  3. تشغيل العينة الثانية التي تحتوي على الخلايا غير المعالجة. على الرسم البياني-معلمة واحدة عرض FL1 (مضان من C 12 FDG)، ضع المؤشر بعد السكان المسمى الخافتة. وسوف تسمح هذه العتبة التمييز بين الخلايا غير هرمة (الخلايا المسمى خافت) وخلايا هرمة (الخلايا المسمى الزاهية).
  4. تشغيل العينة الثالثة التي تحتوي على الخلايا المعالجة. المسمى الزاهية الخلايا، أي خلايا هرمة تظهر فوق العتبة المحددة في الخطوة السابقة. تقييم النسبة المئوية للخلايا هرمة بقسمة عدد من الأحداث مشرق في العدد الإجمالي للأحداث. إذا لزم الأمر، وآخر من β-غالاكتوزيداز يمكن أيضا أن يقدر باستخدام مضان يعنيكثافة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

وقد استخدم المايلوما المتعددة، وهو الورم الخبيث الدم، لتقييم الشيخوخة الناجمة عن إجراء chemotherapeutical. للقيام بذلك كان يعالج خط خلية MM المتاحة تجاريا (RPMI 8226) لأيام 2 مع دوكسوروبيسين، وهو دواء chemotherapeutical. وبعد ذلك تعرض الخلايا لعلاج bafilomycin A1 وكذلك حضنت مع C 12 FDG. وقد تم تحليل الخلايا عن طريق التدفق الخلوي. ويوضح الشكل (1) والخطوات ومعارض مختلفة أن النسبة المئوية للخلايا هرمة يمكن تحديد غضون يوم واحد مع استخدام C 12 FDG. تم تشغيل خلايا غير المسماة الأولى في قياس التدفق الخلوي. كما هو مبين في الشكل 2A، تم إنشاء منطقة الفائدة على الرسم FSC مقابل SSC لاستبعاد الخلايا الميتة والبقايا الخلوية. كانت الخلايا في هذه المنطقة من الفائدة ثم مسور على الرسم البياني عرض مضان من C 12 FDG (FL1) على المحور X وعدد من الأحداث على المحور الصادي. تم تحليل الخلايا غير المعالجة. Aتم تعيين المؤشر الأحمر بعد السكان صفت بشكل خافت كما يصور الشكل 2B: لن تظهر الخلايا غير هرمة في U المنطقة، في حين أن خلايا هرمة سوف تكون موجودة في المنطقة V. تم تشغيل الخلايا المعالجة بعد ذلك في قياس التدفق الخلوي. A السكان من الخلايا المسمى الزاهية ظهرت فوق المؤشر الأحمر تعيينها مسبقا، في المنطقة V، كما هو موضح الشكل 2C (اللوحة اليسرى). تمثل هذه الفئة من السكان خلايا هرمة، ويمكن بعد ذلك أن تحسب النسبة المئوية الخاصة بهم. في موازاة ذلك، كانت ملطخة عينة الخلية نفسها باستخدام مقايسة β-غالاكتوزيداز كما هو موضح (اللوحة اليمنى). في هذه الصورة التمثيلية، وتظهر الخلايا الأزرق تماما والخلايا الأزرق جزئيا لتوضيح صعوبة في التمييز خلايا هرمة الزرقاء حقا.

لتوضيح خصوصية C 12 FDG في تحديد النسبة المئوية للخلايا هرمة، تم علاج الخلايا مع تركيز مختلفة من دوكسوروبيسين. النسبة المئوية للتم تحديد خلايا هرمة كما في الشكل 2B. النسبة المئوية للزيادة الخلايا مشرق بوصفها وظيفة من تركيز دوكسوروبيسين المستخدمة كما هو موضح في الشكل 3. هذا يدل على أن C 12 FDG وضع العلامات المحددة لخلايا هرمة.

الشكل 1
الشكل 1. وفازت المصنفة مخطط التجربة بشكل عام. خلايا 1 24 ساعة قبل العلاج مع المخدرات chemotherapeutical 2. في يوم من التجربة، وحضنت الخلايا مع Bafilomycin A1 3 و 4 ثم مع C12FDG. ثم تم تحليل الخلايا على تدفق عداد الكريات 5.

الشكل 2
الشكل 2. تحليل التدفق الخلوي. (A) منطقة وا الفائدةو تحدد على مؤامرة FSC مقابل SSC لاستبعاد الخلايا الميتة والبقايا الخلوية. (B) تم تشغيل الخلايا غير المعالجة في تدفق عداد الكريات وتم تعيين المؤشر الأحمر. (C) تم تشغيل الخلايا المعالجة في تدفق عداد الكريات. خلايا هرمة ظهرت فوق المؤشر الأحمر. U و V تمثل المناطق ذات الاهتمام، أي خلايا غير هرمة وهرمة، على التوالي. (D) وفي موازاة ذلك (نفس العينة، نفس المعاملة)، وكانت ملطخة الخلايا باستخدام مقايسة β-غالاكتوزيداز. ملاحظة درجة مختلفة من تلطيخ الخلايا (خلايا الأزرق تماما، والخلايا الأزرق جزئيا)، والذي يوضح صعوبة وضع عتبة السماح للتمييز من خلايا هرمة. قناة إلى الأمام مبعثر (FSC)، سايد القناة مبعثر (SSC)، الإسفار 1 (FL1).

الشكل (3)
الشكل (3). خصوصية C 12FDG وضع العلامات. تم علاج الخلايا مع 5 (الرسم البياني الرمادي الداكن)، و 25 (ضوء الرسم البياني الرمادي) و 50 نيوتن متر (الرسم البياني أبيض) من دوكسوروبيسين. U يمثل المنطقة التي تحتوي على خلايا غير هرمة. يتم تقييم النسبة المئوية للخلايا هرمة بقسمة عدد من الأحداث مشرق في العدد الإجمالي للأحداث. النسب المئوية للخلايا هرمة هي 0.8٪، 15.78٪، 26.31٪ لجرعة من 5، 25، و 50 دوكسوروبيسين نانومتر، على التوالي.

C12FDG مقايسة فحص β-غالاكتوزيداز
حساسية + -
كلف = =
الإنتاجية + -
مدة الفحص - +
انطباق إلى نوع من الخلايا = =
الخلايا الخلية الحية خلية ثابتة
شرط للمعدات المتخصصة تدفق عداد الكريات المجهر حقل مشرق

الجدول 1. . مزايا وعيوب C 12 الخلوي FDG مقايسة مقرها وβ-غالاكتوزيداز مقايسة (+) يتوافق مع درجة أعلى في حين أن (-) و (=) تتوافق مع درجة بسيطة وما يعادلها، على التوالي.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

قدمنا ​​هنا طريقة تعتمد على التدفق الخلوي لقياس الشيخوخة الخلوية في الخلايا السرطانية الحية. ويستند هذا الأسلوب على استخدام مركب نفاذية الغشاء، وC 12 FDG، وبالتالي يمكن استخدامها في أي نوع من أنواع الخلايا وبعد العلاجات المختلفة طالما يتم أخذ المجمع من قبل الخلايا. على امتصاص الخلوية، وC 12 FDG هو تحلل من قبل β-غالاكتوزيداز، مما أثرى في الجسيمات الحالة من خلايا هرمة. بعد الإثارة ليزر، مجمع تنبعث مضان أخضر، والسماح لالكمي لخلايا هرمة. يمكن إما أن يتم هذا القياس الكمي لمضان أخضر من قبل التدفق الخلوي أو بواسطة المجهر مضان. ومع ذلك، في هذه الحالة، سوف الخلايا الفلورسنت يجب أن تحسب من قبل المراقب، تتطلب وقتا. منذ C 12 FDG هو تحلل من قبل β-غالاكتوزيداز، ويسمح هذا الأسلوب، بالإضافة إلى التحديد الكمي للخلايا هرمة، لقياس نشاط β-غالاكتوزيدازوتوطين الانزيم، تقديم معظمها في حويصلة الليزوزومية. على الرغم من أن الأسلوب هو بسيط، ينبغي لفت الانتباه في الخطوة 3. الكشف الناجح للخلايا هرمة يعتمد في الغالب على درجة الحموضة الأيمن من الجسيمات الحالة. للقيام بذلك، كنا bafilomycin A1 لتحييد الحموضة الحمضية من الجسيمات الحالة. اعتمادا على نوع من الخلايا المستخدمة، قد لا تكون هذه الخطوة مطلوبة. إذا كان من المتوقع الشيخوخة ويتم الكشف عن أي تلطيخ، فإننا نقترح لتشمل السيطرة السلبية لbafilomycin A1 (لا bafilomycin) وإلى زيادة تركيز bafilomycin A1. إذا كان ذلك، تأكد من أن هذه الزيادة لا يسبب موت الخلايا. بدلا من ذلك، يمكن أن تكون بديلا bafilomycin A1 مع الكلوروكين أو أي مركبات الأخرى التي هي قادرة على زيادة درجة الحموضة من الجسيمات الحالة.

باستخدام بروتوكول وصفها، وكميا بنجاح النسبة المئوية للخلايا هرمة في خلايا المايلوما المتعددة بعد العلاج دوكسوروبيسين غضون يوم واحد. هذا البروتوكول يمكن استخدامها في الغيرإيه أنواع الخلايا السرطانية، ولكن أيضا في أنواع الخلايا غير السرطانية. الشعبية ويبالغ فحص β-غالاكتوزيداز، والتي يجب أيضا أن تسيطر على درجة الحموضة الخلوية، يتطلب على الأقل 2 أيام. في الواقع ويتحقق اللون الأزرق القصوى، التي تم الحصول عليها بعد انشقاق من X-غال من قبل β-غالاكتوزيداز، بعد 12-16 ساعة من الحضانة 9. ولذا فإن هذا الاختبار هو أكثر استهلاكا للوقت من الفحص الخلوي مقرها المقترح. وعلاوة على ذلك، هذا الاختبار ليست حساسة لخلية مزرق قد يكون بمثابة الخلية هرمة في حين يجري لا هرمة حقا. الجدول 1 يلخص مزايا وعيوب الطريقتين.

ميزة أخرى لهذا الأسلوب هو أنه يمكن أن يكون مقرونا المناعية من صناع سطح الخلية. في حالة الورم النخاعي المتعدد، وهذا سمح لنا لإظهار أن متعددة الخلايا الجذعية السرطانية المايلوما لا senesce العلاج دوكسوروبيسين التالية، في حين أن الخلايا الجذعية غير السرطانية قيام 12. وقد تبين الشيخوخة ليكون مواليا لوالمضادة للأورام. منذ المخدرات chemotherapeutical يمكن أن تحدث الشيخوخة، ودراسة الشيخوخة قد تصبح مهمة في العيادة. وتحقيقا لهذه الغاية، فحوصات سريعة وحساسة لا بد من استخدامها، مثل الفحص الذي وصفها هنا.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgments

نشكر SF 4206 ICORE (جامعة كاين) لاستخدام المرفق الخلوي. تلقى JC زمالات ما بعد الدكتوراه من CONSEIL دي Radioprotection D'EDF وCONSEIL الإقليمي لباس نورماندي. وكانت تلك البيانات جزء من المشاريع الممولة من قبل الرابطة الوطنية مناهضة جنيه السرطان - مرافقة DE L'أورني وآخرون دو كالفادوس.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
5-dodecanoylaminofluorescein di-β-D-galactopyranoside Invitrogen D-2893
Dimethyl sulfoxide Sigma D2650
Bafilomycin A1 Sigma B1793
Doxorubicin Sandoz
Trypan blue Sigma T8154
RPMI 1640 cell culture medium Lonza BE12-702
Fetal calf serum PAA Laboratories GmBH A15 101
Antibiotics Gibco 5290-018
Gallios flow cytometer Beckman Coulter A94291

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Hayflick, L., Moorhead, P. S. The serial cultivation of human diploid cell strains. Experimental Cell Research. 25, 585-621 (1961).
  2. Campisi, J., d'Adda di Fagagna, F. Cellular senescence: when bad things happen to good cells. Nature Review Molecular Cell Biology. 8, (9), 729-740 (2007).
  3. Shay, J. W., Roninson, I. B. Hallmarks of senescence in carcinogenesis and cancer therapy. Oncogene. 23, (16), 2919-2933 (2004).
  4. Bartkova, J., Rezaei, N. Oncogene-induced senescence is part of the tumorigenesis barrier imposed by DNA damage checkpoints. Nature. 444, (7119), 633-637 (2006).
  5. Takacova, S., Slany, R., Bartkova, J., Stranecky, V., Dolezel, P., Luzna, P., et al. DNA damage response and inflammatory signaling limit the MLL-ENL-induced leukemogenesis in vivo. Cancer Cell. 21, 517-531 (2012).
  6. Krtolica, A., Parrinello, S., Lockett, S., Desprez, P. Y., Campisi, J. Senescent fibroblasts promote epithelial cell growth and tumorigenesis: a link between cancer and aging. Proceedings of the National Academy of Sciences. 98, 12072-12077 (2001).
  7. Coppe, J. P., Patil, C. K., Rodier, F., Sun, Y., Munoz, D. P., Goldstein, J., et al. Senescence-associated secretory phenotypes reveal cell-nonautonomous functions of oncogenic RAS and the p53 tumor suppressor. PLoS Biology. 6, 2853-2868 (2008).
  8. Roninson, I. B. Tumor cell senescence in cancer treatment. Cancer Research. 63, (11), 2705-2715 (2003).
  9. Dimri, G. P., Lee, X., et al. A biomarker that identifies senescent human cells in culture and in aging skin in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences. 92, (20), 9363-937 (1995).
  10. Kurz, D. J., Decary, S., Hong, Y., Erusalimsky, J. D. Senescence-associated (beta)-galactosidase reflects an increase in lysosomal mass during replicative ageing of human endothelial cells. Journal of Cell Science. 113, 3613-3622 (2000).
  11. Debacq-Chainiaux, F., Erusalimsky, J. D., Campisi, J., Toussaint, O. Protocols to detect senescence-associated beta-galactosidase (SA-betagal) activity, a biomarker of senescent cells in culture and in vivo. Nature Protocols. 4, (12), 1798-1806 (2009).
  12. Cahu, J., Bustany, S., Sola, B. Senescence-associated secretory phenotype favors the emergence of cancer stem-like cells. Cell Death and Disease. Dec 20, 3-e446 (2012).
طريقة حساسة لقياس خلايا السرطان هرمة
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Cahu, J., Sola, B. A Sensitive Method to Quantify Senescent Cancer Cells. J. Vis. Exp. (78), e50494, doi:10.3791/50494 (2013).More

Cahu, J., Sola, B. A Sensitive Method to Quantify Senescent Cancer Cells. J. Vis. Exp. (78), e50494, doi:10.3791/50494 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter