Summary
يمكن أن التغيرات الناجمة عن المصايد السمكية لاستغلال القشريات مثل جراد البحر السمكية الأمريكية، يحتمل تأثير ديناميات الإنجاب، مما يؤدي إلى انخفاض في نجاح التزاوج. وكان هدف هذه الدراسة إلى تطوير طريقة موسع للتحقق من نجاح التزاوج من الإناث الكركند التي قد تكون من الناحية الفسيولوجية أو ناضجة وظيفيا.
Abstract
على الرغم من كونها واحدة من الأكثر إنتاجية مصائد الأسماك في شمال غرب المحيط الأطلسي، لا يزال هناك الكثير غير معروف حول ديناميات الإنجابية الطبيعية من الكركند الأمريكية. العمل الأخيرة في السكان القشريات استغلالها (سرطان البحر والكركند) تشير إلى أن هناك ظروف حيث الإناث الناضجة غير قادرين على تحقيق إمكانات الإنجابية الكاملة بسبب قيود الحيوانات المنوية. لفحص هذه الإمكانية في مناطق مختلفة من الأسماك وجراد البحر الأمريكي، تم تطوير طريقة موثوقة وموسع لأخذ العينات أعداد كبيرة من الإناث الكركند في البحر. ينطوي هذا الأسلوب إدخال إبرة حادة ذات الرؤوس في وعاء المنوية الأنثى لتحديد وجود أو عدم وجود الحيوانات المنوية والمكونات لسحب عينة التي يمكن دراستها عن وجود الحيوانات المنوية. أجريت سلسلة من الدراسات التحكم في قفص الاتهام وفي المختبر لاختبار موثوقية هذه التقنية. تنطوي هذه الجهود أخذ العينات 294 الكركند الإناث للتأكد من أن وجود سوكان اتحاد كرة القدم الحيوانات المنوية المكونات مؤشرا موثوقا من الحيوانات المنوية داخل وعاء، وبالتالي، التزاوج. تفاصيل هذه الورقة المنهجية والنتائج التي تم الحصول عليها من مجموعة فرعية من إجمالي الإناث العينة. من 230 الكركند الإناث عينات من بنك جورج وكيب آن، MA (المدى = 71-145 حجم ملم في الطول درع)، وكانت 90.3٪ إيجابي للحيوانات المنوية. التفسيرات المحتملة لعدم وجود الحيوانات المنوية في بعض الإناث ما يلي: عدم النضج (عدم النضج الفسيولوجي)، وانهيار سد الحيوانات المنوية بعد استخدامها لتسميد مخلب من البيض، وقلة النشاط التزاوج. وتشير استطلاعات الرأي أن هذه التقنية لدراسة نجاح التزاوج من الإناث الكركند هو الوكيل الموثوق بها التي يمكن استخدامها في هذا المجال لتوثيق النشاط الإنجابية في العشائر الطبيعية.
Introduction
جراد البحر الأمريكي (Homarus americanus) هي واحدة من الأكثر إنتاجية مصائد الأسماك في شمال المحيط الأطلسي (~ 56،000 طن متري عام 2011، قيمتها أكثر من $ 390،000،000) 1. ومع ذلك، هناك نقص عام في التفاهم بشأن ديناميات الإنجابية من هذا النوع في الأنواع البرية. توليد تقديرات أكثر دقة من الناتج الإنجابية، بما في ذلك عدد وأحجام مختلفة من الأفراد المشاركين بنشاط في الإنجاب، قد تحسين عملية تقييم الأسهم. على سبيل المثال، تم تحديد الإناث التي يتم منعها من تحقيق الإمكانات الكاملة الإنجابية بسبب قيود الحيوانات المنوية كمنشأة لعدة القشريات البحرية المستغلة تجاريا بما في ذلك: الكركند الشائك 2، وسرطان البحر الأزرق 3، 4 السرطانات الملك، وسرطان البحر حجر 5، وسرطان الثلج 6. والهدف العام هو تحديد ما إذا كان الحد الحيوانات المنوية قد يكون عاملا في مناطق معينة من الأسماك وجراد البحر الأمريكي أيضا.
NT "<لوحظت أول علامات وجود مشكلة محتملة في الحد المنوية الكركند حين إجراء دراسة العلامات لا علاقة لها مع الكركند الإناث منتج للبيض (مع سليمة بشكل واضح، والبيض مقذوف مؤخرا). الاسترداد تقارير من الصيادين قد أشارت إلى أن ~ 15٪ من هذه الحيوانات انخفض براثن البيض على بعد أشهر فقط 1-2. كانت فرضية العمل أن بعض الكركند كانوا يحملون البيض التي لم المخصبة، ونتيجة لذلك، 'سقط' 7. وقد أكدت البيانات الأولية من دراسة لاحقة أن الكركند سوف قذف البيض حتى إن لم تكن قد تزاوج بنجاح وتتم هذه البويضات غير الملقحة فقط ل~ 1 الشهر 8. لذلك، ونظرا للمراقبة الإناث تحمل بويضة غير مخصبة في العشائر الطبيعية، سعينا لتحديد إلى أي مدى يمكن أن تسهم في الحد من الحيوانات المنوية مستوى submaximal الاستنساخ بواسطة الكركند ناضجة جنسيا، ولتحقيق هذا الهدف، تم تطوير تقنية للكشف عن النطفةphore أودعتها الذكور خلال التزاوج.هذه الورقة والفيديو وصف موسع، وضعت طريقة بسيطة للتحقق من نجاح التزاوج من الإناث الكركند. ويمكن استخدام هذه التقنية بسرعة وبشكل موثوق في البحر، إما على متن البحوث أو سفن الصيد التجارية. يتم عرض تفاصيل هذه الطريقة أخذ العينات فضلا عن بعض النتائج ممثل لتوضيح تطبيق هذه التقنية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
الجزء ألف: أخذ العينات الميدانية وتقنيات
1. الإناث القياسات
- لكل جراد البحر الإناث، قياس طول درع (CL) وعرض الجزء الثاني البطن إلى أقرب 1.0 ملم باستخدام زوج من الفرجار.
ملاحظة: يتم قياس الجزء الثاني البطن لأن العرض من البطن (حيث تحمل الإناث بيضها) هو مؤشر على مرحلة النضج الجنسي. بالإضافة إلى ذلك، قد يكون من المفيد للتأكد من المرحلة فقد شعره لمطابقة هذه البيانات مع المرحلة الإنجابية في وقت لاحق (انظر الخطوة 1.2). - مقطع جزء القاصي صغيرة قبالة واحد من pleopods البطن (بروتوكول المنهجية القياسية في الكركند) وتخزين pleopod في مياه البحر النظيفة لمشاهدتها لاحقا مع المجهر تشريح 9.
ملاحظة: هذه الخطوة قد تكشف أيضا عن وجود الغدد الاسمنت على pleopods، وهي إشارة إلى أن الإناث يستعدون لقذف البيض 10.
2. إبرة INSErtion
- إدراج إبرة حقنة (18 G، انظر الجدول 1) ~ 1 سم في وعاء المنوي، الزاوية نحو الذيل في 45 ~ ° (الشكل 1).
ملاحظة: في الكركند مع المقابس الحيوانات المنوية سليمة، قد الإبرة تلبية بعض المقاومة أثناء الإدراج، كما يتم الضغط عليه من خلال المكونات الحيوانات المنوية قبل الوصول إلى أعلى تركيز الحيوانات المنوية في الجزء السفلي من وعاء المنوي (الشكل 1).
ملاحظة: إن وجود المكونات، في حد ذاته، هو مؤشر موثوق بها ان الكركند وتزاوج. في بعض الحيوانات قد تكون هناك مقاومة تذكر، ربما لأنه لا يوجد محفظة منوية هو الحاضر، ومحفظة منوية صغيرة، إلا أنها لم تصلب في المكونات بعد، أو أنه قد تم بالفعل تستخدم لتسميد واحد أو أكثر براثن البيض.
الشكل 1. غرز الإبرة وعرض من جراد البحر وعاء المنوي. إدخال إبرة حادة ذات الرؤوس المنوي في وعاء من جراد البحر لاستخراج عينة الحيوانات المنوية. زاوية وعمق الإبرة حاسمة لكلا الحصول على عينات متسقة. الحق: عرض من وعاء المنوي الذي تم تشريح وتقسيم عموديا. المكونات الحيوانات المنوية تحتل الجزء العلوي أو الخارجية من وعاء، في حين توجد الحيوانات المنوية في الجزء السفلي (أعمق نقطة) في وعاء. من المهم أن نلاحظ أن أخذ العينات تحت هذا العمق قد ثقب وعاء ويؤدي في عينة الدم الملوثة. اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .
3. اختراق الحيوانات المنوية التوصيل
- بعد الإدراج الأولي، يزداد انحدارا زاوية الإبرة إلى عمودي تقريبا (عمودي على محور الجسم)، وتبدأ ببطء جدا للعمل عليهنزولا في وعاء.
- الحفاظ على إبرة في زاوية مائلة بحيث يتم أشار غيض قليلا نحو الذيل. في هذه الحالة طرف الإبرة وضغط أعلى من المكونات، حتى يخرقها في نهاية المطاف إلى المصفوفة.
- مواصلة دفع ببطء الإبرة إلى أسفل حتى يشعر المقاومة مرة أخرى - وهذا هو الجزء السفلي من وعاء وحيث يتم أخذ العينة.
4. إزالة الحيوانات المنوية
- إزالة عينة (غالبا مواد المكونات الصلبة، السائلة الحيوانات المنوية والسوائل الأخرى) من الجزء السفلي من وعاء وتودع العينة إلى المسمى 2.0 مل أنبوب بلاستيكي.
- مسح عاء مع ~ 0.1-0.5 مل من مياه البحر الباردة.
- إزالة ما يقرب من 0.3 مل من السوائل والمكان في نفس الأنبوب.
- عينات الحيوانات المنوية متجر على الجليد حتى يمكن فحصها في المختبر.
الجزء باء: فحص عينات الحيوانات المنوية في المختبر
ملاحظة: عينات إزالتها من أوعية المنوي من لتر الفردية obsters ينبغي فحص لتحديد ما إذا كانت الخلايا المنوية حاضرا أو غائبا. - إزالة ~ 50 ميكرولتر من السائل من كل أنبوب من البلاستيك، ومكان على شريحة زجاجية مع انزلاق الغطاء، وعرض في 100X مع المجهر المركب.
- تسجيل العينات و: الحيوانات المنوية نادرة، عديدة، أو غائبة (لم هذه الدراسة تحديد أعداد الحيوانات المنوية لا الفعلية، الشكل 2).
الشكل 2. عينة من الصور جراد البحر الحيوانات المنوية. صور من عينات الحيوانات المنوية المأخوذة من جراد البحر وعاء المنوية الأنثى، كما شوهدت مع المجهر المركب في 40X التكبير. الصورة على اليسار يظهر عينة التي تحتوي على العديد من الحيوانات المنوية في حين أن الآخر (يمين) يوضح عينة قليلة (شريط النطاق = 10 ميكرون).. JPG "الهدف =" _blank "> اضغط هنا لمشاهدة صورة أكبر.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
كانت البيانات الواردة هنا عن مجموعة فرعية من الكركند الإناث التي نشأت من كلا الشاطئية والمواقع البحرية. تألفت المجموعة من 44 الكركند الشاطئية التي تم التقاطها في المياه الساحلية بالقرب من كيب آن، ماساتشوستس ونقلها في مبردات إلى المختبر للفحص. تم القبض على ما مجموعه 186 الكركند البحري على الضفة جورج وأخذ عينات في منشأة تجارية عقد في نيو هامبشاير.
وتم الحصول على عينات الحيوانات المنوية من كل من الحيوانات وفحصها على الفور لوجود أو عدم وجود الحيوانات المنوية وفقا للأساليب المذكورة أعلاه. وكان ما مجموعه 90.3٪ من مجموع الإناث في هذه المجموعة الفرعية الحيوانات المنوية في أوعية بهم المنوي. من المستغرب، وتلك التي تفتقر الحيوانات المنوية ليست بالضرورة في نهاية أصغر من حجم مجموعة (الشكل 3).
ighres.jpg "سرك =" / files/ftp_upload/50498/50498fig3.jpg "العرض =" 600px ل"/>
الرقم 3. نتائج العينات لوجود الحيوانات المنوية في الكركند. نسبة الإناث في الكركند 5 ملم حجم صناديق CL الفئة التي كان الحيوانات المنوية في أوعية بها المنوية (نسبة إيجابية) كمؤشر على التزاوج. تم القبض على الإناث من المياه بالقرب من كيب آن، MA (71-83 ملم CL) والبنك من جورج (89-154 ملم CL). أرقام داخل القضبان تمثل بلغ حجم العينة لأن بن ل. اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
هذا المخطط الفيديو والورق ويبرهن على وجود طريقة لتحديد ما إذا كان قد تزاوج الإناث الكركند بنجاح. هذا النهج هو بسيط يكفي أنه يمكن استخدامها على نطاق واسع أخذ عينات من الكركند في البحر من قبل مجموعة متنوعة من المستخدمين. ويستند هذا الأسلوب على الكشف عن وجود محفظة منوية في وعاء المنوية التي يتم تمريرها من الذكور إلى الإناث الكركند أثناء التزاوج. هذه أمهات المني تتصلب جزئيا إلى المكونات المنوية بعد وقت قصير أنها تترسب في وعاء، وبالتالي فإن وجود المكونات السائل المنوي يدل أيضا على نجاح التزاوج. وفي هذه الدراسة، فضلا عن الدراسة الكبيرة اللاحقة، تقرر أن معظم المقابس الحيوانات المنوية الحيوانات المنوية قد يرتبط معهم 11. ومع ذلك، في حين أن وجود المكونات هو مؤشر موثوق للنشاط التزاوج، غيابها ليست كذلك.
على الرغم من أننا لا نستطيع أن نجزم تماما إذا منهجية أخذ العينات هذه تتكبدها تأثير سلبي على قدرة الإناث الكركند لتفرخ ود يخصب البيض مخلب بنجاح، هناك جوانب لهذا البروتوكول أخذ العينات المنوية التي تشير إلى أن الضرر سيكون الحد الأدنى إما إلى محفظة منوية أو وعاء. هناك بيانات (من الدراسات المخبرية الجارية) التي تشير إلى بعض الكركند، وأخذ العينات آخر الحيوانات المنوية، لا يزال قذف براثن المخصبة البيض (ن = 3) وتكون قادرة على تخصيب مخلب واحد أو أكثر من البيض باستخدام نفس محفظة منوية. هذه البويضات تطوير ويفقس على نحو مماثل لالكركند التي لم يتم أخذ عينات. بالإضافة إلى ذلك، هذه التقنية أخذ العينات لا يؤدي إلا إلى عينة جزء صغير من مجموع الحيوانات المنوية. وليس المقصود بها لأخذ عينات كميا محتويات كاملة من وعاء. ويرجع ذلك إلى بنية جسدية معقدة من وعاء 12،13، ستكون هناك حاجة تقنية مختلفة (مثل تشريح) الحصول على تلك الأنواع من النتائج.
تم العثور على الحيوانات المنوية في عدد من عينات الحيوانات التي تفتقر إلى المكونات الحيوانات المنوية، وربما لأن محفظة منوية كان ن نسبيا مصريات، وأنه لم تصلب بعد في المكونات، أو محفظة منوية كانت تستخدم سابقا لتسميد واحد أو أكثر براثن البيض وتدهورت. لذلك، من أجل الحصول على المؤشر الأكثر دقة لنجاح التزاوج من المهم لكلا الاختيار عن المكونات الحيوانات المنوية وعينة للحيوانات المنوية.
التوجه دقيقة من الإبرة أثناء إجراء أخذ العينات أمر بالغ الأهمية لعدة أسباب. الأولى، مؤكدا أن الإبرة موازية لطائرة الجسم الجانبي يمنعها من اختراق الجانب رقيقة من وعاء المنوي. عندما يتم تنفيذ هذه التقنية بشكل صحيح، فإنه يتسبب أي وفيات، والإبرة تخترق أبدا في الواقع تجويف الجسم. الثاني، زاوية الإدراج 45 درجة مئوية، تليها شدة انحدار الإبرة، ويساعد على ضمان أن الإبرة تصل إلى الجزء السفلي من وعاء حيث تتركز الحيوانات المنوية دون اختراق جدار محفظة منوية ودخول الجيوب الأنفية الجسم المجاورة (الشكل 1) .
ق ق = "jove_content"> وكان هناك بعض التدهور في عينات الحيوانات المنوية إذا كانوا لم يتم التعامل معها بشكل مناسب. جراد البحر المنوية الخضوع رد فعل الجسم الطرفي بهم بسهولة تامة، وأحيانا نتيجة الانفعالات الميكانيكية 13. مرة واحدة وكان رد فعل الحيوان المنوي، فإنها تبدأ لكسر في العينة ويصبح من الصعب التعرف عليها. لهذا السبب، يجب أن تبقى تسخين العينة قارورة إلى الحد الأدنى. حفظ العينات بارد يبدو أيضا للمساعدة في الحفاظ على سلامة الحيوانات المنوية. أخيرا، يقترح استخدام مياه البحر المعقمة عند تجهيز العينات. هذا قد تعمل على تقليل نمو البكتيريا والكائنات الدقيقة الأخرى (أكثر من 36-48 ساعة) التي قد تضر الحيوانات المنوية.
وكان معظم (90.3٪) من الإناث الكركند عينات تزاوج بنجاح، على أساس وجود الحيوانات المنوية في أوعية بهم المنوي. ما تبقى من الحيوانات ربما لم تكن الحيوانات المنوية إيجابية بسبب إما غير ناضجة جنسيا كانوا قد المقابس السائل المنوي لديهم تدهورت مع مرور الوقت أو كان ليكونأون استخدامها بالكامل لتسميد واحد أو أكثر براثن البيض، أو أنها قد تزاوج قط، ربما لأنهم لم اجه الذكور المناسب في الوقت المناسب في دورة تساقط بهم 11. الكركند الإناث في المنطقة بنك جورج لديها حجم كبير نسبيا، في تاريخ الاستحقاق، مع 50٪ فقط من الإناث الناضجة في 100 ملم 14. الإناث الرأس آن تنضج في حجم أصغر قليلا من القيام الكركند في الخارج، مع 50٪ من الإناث الناضجة في 90 ملم CL 15. لذلك، بالنظر إلى أن أصغر الإناث كانت 71 مم CL، فمن غير المعقول أن تشير إلى أن بعض الإناث التي تفتقر إلى المقابس الحيوانات المنوية من المرجح غير ناضجة، وبالتالي، لن يكون تزاوج. العديد من الكركند الإناث الكبيرة، مثل تلك التي لدينا في عينات فرعية في الخارج، قد تفرخ في سنوات متتالية دون طرح الريش وremating 16.
بالتخصيب متعددة باستخدام نفس محفظة منوية قد يؤدي في النهاية إلى انهيار المواد والمكونات قد تستخدم حتى الحيوانات المنوية الواردة في باستقبالacle، مما أسفر عن نتيجة سلبية. ومع ذلك، لم، على حد علمنا، وصفت عطل ميكانيكي من المكونات الحيوانات المنوية مع مرور الوقت. أخيرا، فمن الممكن أن تلك الإناث دون الحيوانات المنوية في أوعية بهم لم يتمكنوا من تحديد موقع زميله. وقد تم توثيق نسب الإناث منحرفة في جورج جراد البحر بنك الأسهم 17، واحتمال أن يؤدي ذلك إلى الحد من الحيوانات المنوية يستحق مزيدا من الاهتمام بسبب العواقب المحتملة لإخراج الإنجابية للسكان جراد البحر.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح.
Acknowledgments
فإن الكتاب أود أن أشكر جميع lobstermen التجارية نيو انغلاند التي سمح لنا لأخذ عينات من القوارب - هو محل تقدير تعاونهما من ذلك بكثير. بالإضافة إلى ذلك، نشكر ليتل شركة خليج جراد البحر (نوينغاتون، NH) وتشامبلن في المأكولات البحرية (نقطة جوديث، RI) الذي سمح لنا لإجراء أخذ العينات في مرافقها. قدم الطلاب مقر الأمم المتحدة التالية مساعدة لا تقدر بثمن في جميع أنحاء هذه الدراسة: هالي الأبيض، فرانسواز موريسون، سارة هافنر، أودرا Chaput، ومايو غروس. وأيد هذا المشروع من المنح المقدمة من NH SeaGrant لWHW (مشروع # R/CFR-11) وبرنامج منح مقر الأمم المتحدة البحرية لJSG.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Calipers | Mitutoyo Digimatic | 500-196-20 | http://www.globalindustrial.com |
| 3 ml Luer-Lok syringe | Beckton-Dickinson | 309585 | www.bd.com |
| Monoject aluminum hub blunt needles, 18 G x 1 | Webster Veterinary | 8881202348 | www.mywebstervet.com |
| 2.0 ml Plastic storage tubes | Eppendorf | wu-06333-72 | http://www.coleparmer.com |
| Styrofoam cooler with ice | |||
| Compound light microscope | Olympus | BH System | http://www.olympusamerica.com |
| Glass sides with cover slip | 75 mm x 25 mm, ~1 mm thickness | ||
| Pipettor with disposable tips |
References
- FAO and Agriculture Organization of the United Nations). Fisheries and Aquaculture Department. , Available from: http://www.fao.org (2012).
- MacDiarmid, A., Butler, M. J. Sperm economy and limitation in spiny lobsters. Behav. Ecol. Sociobiol. 46, 14-24 (1999).
- Kendall, M. S., Wolcott, D. L., Wolcott, T. G., Hines, A. H. Influence of male size and mating history on sperm content of ejaculates of the blue crab Callinectes sapidus. 230, 235-240 (2002).
- Sato, T., Ashidate, M., Goshima, S. Effects of male mating frequency and male size on ejaculate size and reproductive success of female spiny king crab, Parolithodes brevipes. Mar. Ecol. Prog. Ser. 296, 251-262 (2005).
- Sato, T., Goshima, S. Impacts of male-only fishing and sperm limitation in manipulated populations of an unfished crab, Hapalogaster. 313, 193-204 (2006).
- Rondeau, A., Sainte-Marie, B. Variable mate-guarding time and sperm allocation by male snow crabs (Chionoecetes opilio) in response to sexual competition, and their impact on the mating success of females. Biol. Bull. 201, 204-217 (2001).
- Waddy, S. L., Aiken, D. E. Mating and insemination in the Ameri can lobster,Homarus americanus. Crustacean sexual behavior. Bauer, R. T., Martin, J. W. , Columbia University Press. NY. 126-144 (1990).
- Johnson, K. J., Goldstein, J. S., Watson, W. H. Two methods for determining the fertility status in early-stage American lobster, Homarus americanus, eggs. J. Crust. Biol. 31, 693-700 (2011).
- Aiken, D. E. Proecdysis, setal development, and molt prediction in the American lobster (Homarus). 30, 1337-1344 (1973).
- Aiken, D. E., Waddy, S. L. Cement gland development, ovary maturation, and reproductive cycles in the American lobster Homarus americanus. J. Crust. Biol. 2, 315-327 (1982).
- Pugh, T. L., Goldstein, J. S., Lavalli, K. L., Clancy, M., Watson, W. H. At-sea determination of female American lobsters (Homarus americanus) mating activity: Patterns vs. expectations. Fish. Res. 147, 327-337 (2013).
- Bauer, R. T. Phylogenetic trends in sperm transfer and storage complexity in decapod crustaceans. J. Crust. Biol. 6, 313-325 (1986).
- Talbot, P., Helluy, S. Reproduction and embryonic development. Biology of the Lobster: Homarus americanus. Factor, J. R. , Academic Press. NY. 177-216 (1995).
- Cooper, R. A., Uzmann, J. R. Ecology of juvenile and adult Homarus. The biology and management of lobsters. Cobb, J. S. 2, Academic Press. NY. 97-142 (1980).
- Estrella, B. T., McKiernan, D. J. Catch-per-unit-effort and biological parameters from the Massachusetts coastal lobster (Homarus americanus) resource: description and trends. NOAA Tech. Rep. NMFS. 81, (1989).
- Waddy, S. L., Aiken, D. E. Multiple fertilization and consecutive spawning in large American lobster, Homarus americanus. Can. J. Fish. Aquat. Sci. 43, 2291-2294 (1986).
- Atlantic States Marine Fisheries Commission (ASMFC). American lobster stock assessment report for peer review. ASMFC Stock Assessment. , Washington, D.C. (2009).
