रास V12 और कुछ लिखा, ट्यूमर कोशिकाओं को भी आक्रामक व्यवहार प्रदर्शित जहां ड्रोसोफिला में ट्यूमर के विकास में परिणाम की तरह सेल polarity जीन में उत्परिवर्तन की तरह एक सक्रिय ओंकोजीन के बीच सहयोग. यहाँ सौम्य और आक्रामक ट्यूमर के शामिल होने और अवलोकन के लिए एक सरल प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया है.
ड्रोसोफिला यह जटिल रोगों 1-7 की हमारी समझ के लिए बेहद योगदान करने के लिए जारी है पिछले कई दशकों और आज के लिए सामान्य विकास और रोग के आनुवंशिक आधार के बारे में हमारी समझ के प्रबुद्ध गया है. एक metastatic राज्य के लिए एक सौम्य से ट्यूमर को बढ़ने से एक जटिल घटना 8 और हमें बेहतर इस रोग 9 के आनुवंशिक आधार को समझने में मदद करने के लिए ड्रोसोफिला में मॉडलिंग कर दिया गया है. यहाँ मैं आनुवंशिक रूप से प्रेरित निरीक्षण और फिर ड्रोसोफिला लार्वा में ट्यूमर की प्रगति का विश्लेषण करने के लिए एक सरल प्रोटोकॉल उपस्थित थे. ट्यूमर प्रेरण तकनीक MARCM प्रणाली 10 पर आधारित है और एक सक्रिय ओंकोजीन, रास V12 और सेल polarity जीन की हानि (कुछ लिखा, डिस्क बड़े और घातक विशाल लार्वा) आक्रामक ट्यूमर 9 उत्पन्न करने के बीच सहयोग का लाभ उठाते है. मैं इन ट्यूमर बरकरार लार्वा में कल्पना की जा सकती प्रदर्शन कैसे औरतो कैसे इन आगे के विश्लेषण के लिए बाहर विच्छेदित किया जा सकता है. यहाँ प्रस्तुत सरलीकृत प्रोटोकॉल यह संभव है कि इस तकनीक ट्यूमर आक्रमण में एक जीन की भूमिका को समझने में दिलचस्पी जांचकर्ताओं द्वारा उपयोग किया जा करने के लिए करना चाहिए.
एक metastatic राज्य के लिए एक सौम्य से ट्यूमर को बढ़ने से शरीर 8 में मौजूद सुरक्षा तंत्र की चोरी की विशेषता है कि एक कदम बुद्धिमान प्रक्रिया है. उदाहरण के लिए शरीर में ट्यूमर कोशिकाओं, apoptosis और प्रतिरक्षा प्रणाली से बचने के तहखाने झिल्ली बुलाया विशेष बाह्य मैट्रिक्स (ईसीएम) सफलता और आसपास की कोशिकाओं 8 द्वारा लगाए गए किसी भी सामाजिक नियंत्रण पर काबू पाने के लिए सक्षम होना चाहिए. यह कैंसर कोशिकाओं मेटास्टेसिस नामक प्रक्रिया में दूर के स्थानों की ओर पलायन और उपनिवेश स्थापित करने की क्षमता हासिल है कि एक कदम वार प्रगति के माध्यम से है. ट्यूमर सेल शरीर द्वारा लगाया बाधाओं पर काबू की हमारी समझ हालांकि, अनुसंधान से उभरती तस्वीर कैंसर की कोशिकाओं को 11-13 से सामान्य विकास की प्रक्रिया और संकेत रास्ते में से एक दोहराया का उपयोग करने के लिए इस प्रकार अब तक अंक किया, अपनी प्रारंभिक अवस्था में है.
फल ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर हमारी समझ के लिए काफी योगदान दिया है मक्खीपिछले कई दशकों से 14-17 से अधिक विकसित परिष्कृत आनुवंशिक तकनीक के उपयोग के माध्यम से सामान्य विकास और रोग की erstanding. हम विभिन्न ओंकोजीन और ट्यूमर शमन जीनों 18-22 की एक बेहतर समझ में आ चुके हैं mutagenesis और overexpression उपकरणों का उपयोग करना. हालांकि, ट्यूमर मेटास्टेसिस सेल संस्कृति मॉडल 23,24 के साथ ही विभिन्न xenograft मॉडल 25-27 में मुख्य रूप से अध्ययन किया गया है कि कई आनुवंशिक घावों के बीच सहयोग का एक परिणाम है. वे पूरी तरह से एक जीवित जीव में पाया शर्तों की नकल नहीं है के रूप में इन मॉडलों को शक्तिशाली हालांकि अपनी सीमाएं हैं. इसके अलावा, चूहों में उपलब्ध ट्रांसजेनिक मॉडल बोझिल और आक्रामक व्यवहार 28,29 के आनुवांशिक विश्लेषण के लिए अनुकूल नहीं हैं. कई अध्ययनों से ड्रोसोफिला 30,31 में ट्यूमर कोशिकाओं के आक्रमण को समझने का प्रयास किया है. इन तकनीकों में मुख्य रूप से मेजबान टीम के लिए प्राथमिक ट्यूमर के प्रत्यारोपण का उपयोग और फिर टीआरए ट्रैकिंग पर भरोसापड़ोसी ऊतकों 32,33 के आक्रमण के लिए ट्यूमर nsplanted. MARCM 10 नामक एक शक्तिशाली तकनीक ड्रोसोफिला 9 में ट्यूमर आक्रमण मॉडल पर PAGLIARINI और जू द्वारा रूपांतरित किया गया. ट्यूमर आक्रमण की यह खूबसूरत आनुवंशिक मॉडलिंग एक सक्रिय ओंकोजीन और सेल polarity के नुकसान के बीच सहयोग का फायदा उठाया. इस मॉडलिंग की सत्ता में आक्रामक ट्यूमर इस प्रकार के ऊतकों के प्रत्यारोपण के लिए जरूरत circumventing एक अक्षुण्ण जीव में बनाया जाता है कि तथ्य में निहित है. Oncogenic सहयोग के बारे में लाने के लिए, रास V12 तरह एक सक्रिय ओंकोजीन लार्वा आंख स्पर्शतंतु डिस्क में कोशिकाओं के क्लोन में व्यक्त किया है. MARCM तकनीक का एक परिणाम के रूप में इन क्लोन भी आसान दृश्य के लिए हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) के साथ चिह्नित कर रहे हैं और घातक विशाल लार्वा, कुछ लिखा है, और बड़े डिस्क की तरह सेल polarity म्यूटेंट के लिए homozygous बना रहे हैं. परिणाम GFP में आक्रामक ट्यूमर में चिह्नित है मस्तक जटिल. इस रिपोर्ट में मैंप्रेरित करने के लिए प्रदर्शन, और एक अक्षुण्ण लार्वा के संदर्भ में और बाहर विच्छेदित मस्तक परिसर में इन दोनों आक्रामक ट्यूमर कल्पना. यहाँ प्रस्तुत ट्यूमर प्रेरण ड्रोसोफिला के दूसरे गुणसूत्र पर अभिकर्मकों का इस्तेमाल करता. तालिका 2 में, मैं एक ही उद्देश्य के लिए उपयोग किया जा सकता है कि एक्स और 3 गुणसूत्रों पर शेयरों की एक सूची प्रदान करते हैं. मैं इस सरल प्रोटोकॉल ट्यूमर प्रगति की आणविक आधार को समझने में दिलचस्पी शोधकर्ताओं के लिए इस तकनीक को आसानी से सुलभ बनाना होगा कि विश्वास करते हैं.
कैंसर अतीत की तुलना में एक बेहतर समझ के साथ आज एक जटिल बीमारी है. हालांकि, अभी भी बहुत कुछ सीखा है और हम अंतर्निहित तंत्र की एक पूरी तस्वीर है पहले समझाया जाना चाहिए. यहाँ प्रस्तुत सरल प्रोटोकॉल यह संभव आ?…
The authors have nothing to disclose.
मेरी प्रयोगशाला में अनुसंधान जीवविज्ञान स्टार्टअप धन की wku विभाग, wku रिसर्च फाउंडेशन RCAP मैं # 11-8032 अनुदान और के द्वारा समर्थित है राष्ट्रीय संस्थानों की जनरल मेडिकल साइंसेज के राष्ट्रीय संस्थान से एक माता पिता के अनुदान के माध्यम से वित्त पोषित एक KBRIN क्षेत्र अनुदान द्वारा स्वास्थ्य का पुरस्कार संख्या 5P20GM103436-13 के तहत. मैं भी प्रयोगशाला जिसका मैं पहले जू प्रयोगशाला में इस तकनीक की स्थापना की है जो इस तकनीक और डा. रेमंड PAGLIARINI के लिए पेश किया गया था डॉ. तियन जू में स्वीकार करना चाहते हैं.
10X PBS (phosphate buffered saline) pH 7.2 stock solution | Invitrogen, Sigma Aldrich | ||
Chilled 1X PBS pH7.2 working solution | Invitrogen, Sigma Aldrich | Make fresh and refrigerate, can be used up to a week | |
Flynap | Carolina Biologicals | Fly anesthesia needed to anesthetize larvae | |
Fixative | 0.1M PIPES, pH 7.2, 4% Paraformaldehyde | Needed to fix the dissected cephalic complex | |
Ice Bucket | Several | Maintain solutions on ice. Also, dissect cephalic complex in chilled 1X PBS and then place on ice in an Eppendorf tube | |
1.7ml Eppendorf tube | Various | ||
Glass slides, cover glass | Fisher Scientific | ||
Vectashield Mounting Media or any other mounting media | Vector Laboratories | ||
Halocarbon 200 or 700 Oil | Polysciences Inc. or Halocarbon.com | Halocarbon 200 is used to mount the larvae for visualization on a fluorescence stereoscope | |
Sally Hansen “Hard as Nails” nail polish | Can be found at any general merchandise store | Needed to seal the edges of Coverslip | |
A Leica MZ16.5 fluorescence stereomicroscope or any other fluorescence stereomicroscope | Leica and others | Needed to observe the GFP fluorescence in larvae | |
Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | ||
Pyrex 9 well spot plate or any other dissection dish | Sigma Aldrich | ||
Paint Brush | Can be found at any general merchandise store | ||
Table 1. Materials needed to perform the experimental protocol presented in this article. |