用改进的袖套法小鼠颈部心脏移植模型
Summary
鼠异位心脏移植模型非常适合于免疫学以及缺血再灌注损伤的研究。我们使用非缝合袖口技术改性的方法，用这种方法进行的1000多个成功的移植。
在此，我们提供这种技术，以补充视频的额外细节。
Abstract
小鼠模型是因为各种各样的单克隆抗体的研究特别感兴趣，并规定商业自交系和基因敲除菌株可以在体内研究进行机械。虽然首次研制成功的心脏移植模型使用缝合技术，翻译成同样广泛使用的小鼠等同由于显微操作的技术复杂性是从来没有实现。与此相反，非缝合袖口技术，还大鼠开发起初，成功地适合于在小鼠1-3使用。这种技术血运重建包括两个主要步骤一）外翻收件人器中的聚乙烯袖口;二）拉在原外翻受区血管的供体船，并与圆周领带拿着到位。这确保了内皮细胞层，手术时间短和非常高的通畅率4的连续性。
T“>使用这种技术的血管吻合我们进行了1000余异位心脏移植手术有95％的成功率。动脉流入颈总动脉和近端主动脉弓进行吻合导致移植心脏的逆行灌注。用于静脉引流的接枝的肺动脉吻合与接受者5的外颈静脉。在此，我们提供这种技术，以补充视频的额外细节。
Introduction
心脏移植代表的首选治疗患者不同的终末期心脏疾病的人。在外科手术技术，感染的更有效的预防，以及新颖的免疫抑制方案的进步导致器官移植6的显着改善的结果。然而，移植物长期存活并没有严格的改进，在过去几年7。慢性排斥反应，其特征在于，移植动脉硬化仍然是一个主要障碍移植物长期存活8-11。
异位心脏移植小鼠模型提供了免疫机制急性分析过程中一个重要而有效的工具，以及慢性排斥12-15。
到目前为止，最常见的移植模型仍然使用缝合技术腹部小鼠心脏移植。供体心脏的升主动脉的吻合了Abdominal主动脉与肺动脉吻合收件人的下腔静脉。多的缝合模式的显微难度是基于血管，这是缝合16,17的小尺寸。
与此相反的缝合模型的心脏被放置在外部颈静脉吻合肺动脉和普通颈动脉供体的主动脉接受者的颈部区域。
颈部心脏移植模型采用套管法的发展的理论基础是有一个动物模型，这使得实现高成功率基本显微外科技能，使这种模式的广泛应用。该方法的主要优点是显著较少发生吻合时相比，缝合模型18相关的像出血和血栓形成并发症。
Protocol
动物被容纳在阻挡病原体的分类设施。所有的动物都得到人性的关怀符合“校长实验动物照护”，被国家由全国社会医学研究“和”指南编制的国家科学院实验动物“的护理和使用制定并公布卫生研究院（NIH公开号86-23，修订1985）。所有的实验都是由奥地利教育部，科学和文化的批准。 1，收件人准备麻醉受体动物与肌肉注射甲苯噻嗪（5毫克/千克体重）和氯胺酮（100…
Representative Results
图2示出了从BALB / c小鼠供体移植心脏移植后的存活代表数据转换成完全MHC错配的C57BL / 6的收件人。心中都拒绝在移植后7±1天。移植的同种异体移植物的手指触诊是一个敏感的方法来检测移植排斥反应的时间依赖性过程。在我们的系列中执行的所有同种心脏移植存活下去（> 150天）。 <img alt="图1" src="/files/ftp_upload/50753/50753fig1highres.jpg"…
Discussion
血管移植物排斥反应蕴涵A过多的只能用体外模型无法充分评估不同的步骤。像收件人的敏化作用，抗原加工在次级淋巴器官，而且免疫感受态细胞的分化和增殖的现象是较好表征的体内 。动物模型，从而为翻译研究16的理想工具。小鼠模型仍然代表了基本的移植和免疫学研究的黄金标准，因为各种转基因和基因敲除小鼠是可用的，并且有大量的免疫和诊断工具已经开发专门?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors declare that they have no competing financial interests.
Materials
| Yasargil Clip Mini Permanent 7mm | Aesculap | FE720K | |
| Micro vessel clip | S & T | B1 00396 V | |
| Microscissor | FST | 14075-11 | |
| Vesseldilatator | S & T | D-5a.2 00125 | |
| Microforceps | FST | Dumont 11271- 30 | |
| Clipapplicator | S & T | CAF-4 00072 | |
| Microvessel clip | S & T | B1 00396 V |
References
- Brandacher, G., et al. Tetrahydrobiopterin compounds prolong allograft survival independently of their effect on nitric oxide synthase activity. Transplantation. 81, 583-589 (2006).
- Schneeberger, S., et al. The effect of secretory leukocyte protease inhibitor (SLPI) on ischemia/reperfusion injury in cardiac transplantation. Am J Transplant. 8, 773-782 (2008).
- Sucher, R., et al. IDO and regulatory T cell support are critical for cytotoxic T lymphocyte-associated Ag-4 Ig-mediated long-term solid organ allograft survival. JImmunol. 188, 37-46 (2012).
- Yamashita, K., et al. Heme oxygenase-1 is essential for and promotes tolerance to transplanted organs. FASEB J. 20, 776-778 (2006).
- Kienzl, K., et al. Proteomic profiling of acute cardiac allograft rejection. Transplantation. 88, 553-560 (2009).
- Aurora, P., et al. Registry of the International Society for Heart and Lung Transplantation: tenth official pediatric lung and heart/lung transplantation report–2007. J Heart Lung Transplant. 26, 1223-1228 (2007).
- Häyry, P. Chronic allograft vasculopathy new strategies for drug development. Transplant Proc. 30, 3989-3990 (1998).
- Hosenpud, J. D. Immune mechanisms of cardiac allograft vasculopathy an update. Transpl Immunol. 1, 237-249 (1993).
- Libby, P., Pober, J. S. Chronic rejection. Immunity. 14, 387-397 (2001).
- Kouwenhoven, E. A., de Bruin, R. W., Heemann, U. W., Marquet, R. L., Ijzermans, J. N. Late graft dysfunction after prolonged cold ischemia of the donor kidney inhibition by cyclosporine. Transplantation. 68, 1004-1010 (1999).
- Kouwenhoven, E. A., Ijzermans, J. N., de Bruin, R. W. Etiology and pathophysiology of chronic transplant dysfunction. Transpl Int. 13, 385-401 (2000).
- Chen, Z. H. A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice. Transplantation. 52, 1099-1101 (1991).
- Huang, X., Chen, D., Chen, L. [A modified model of cervical heterotopic cardiac transplantation for chronic rejection research]. Zhongguo Xiu Fu Chong Jian Wai Ke Za Zhi. 22, 1508-1510 (2008).
- Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy. Nat Protoc. 2, 471-480 (2007).
- Wang, C. Y., et al. Suppression of murine cardiac allograft arteriopathy by long-term blockade of CD40-CD154 interactions. Circulation. 105, 1609-1614 (2002).
- Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique. Transplantation. 51, 896-898 (1991).
- Tomita, Y., et al. Improved technique of heterotopic cervical heart transplantation in mice. Transplantation. 64, 1598-1601 (1997).
- Zhou, Y., Gu, X., Xiang, J., Qian, S., Chen, Z. A comparative study on suture versus cuff anastomosis in mouse cervical cardiac transplant. Exp Clin Transplant. 8, 245-249 (2010).
- Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection. Transplantation. 16, 343-350 (1973).
- Kamada, N., Calne, R. Y. Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage. Transplantation. 28, 47-50 (1979).
- Zimmermann, F. A., et al. Techniques for orthotopic liver transplantation in the rat and some studies of the immunologic responses to fully allogeneic liver grafts. Transplant Proc. 11, 571-577 (1979).
- Maglione, M., et al. Donor pretreatment with tetrahydrobiopterin saves pancreatic isografts from ischemia reperfusion injury in a mouse model. Am J Transplant. 10, 2231-2240 (2010).
- Heron, I. A technique for accessory cervical heart transplantation in rabbits and rats. Actapathologica et microbiologica Scandinavica Section A, Pathology. 79, 366-372 (1971).
Cite This Article
Oberhuber, R., Cardini, B., Kofler, M., Ritschl, P., Oellinger, R., Aigner, F., Sucher, R., Schneeberger, S., Pratschke, J., Brandacher, G., Maglione, M. Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique. J. Vis. Exp. (92), e50753, doi:10.3791/50753 (2014).