Protocollo di esame clinico per rilevare la scrapie atipica e classica negli ovini

Summary

Viene presentato un breve protocollo di esame clinico per aiutare nell'individuazione della scrapie classica e atipica negli ovini e nei caprini.

Abstract

La diagnosi di scrapie, un'encefalopatia spongiforme trasmissibile (EST) di ovini e caprini, si basa attualmente sull'individuazione di proteine prionali associate alla malattia mediante test post mortem. A meno che un campione casuale della popolazione ovina o caprina non sia attivamente monitorato per la scrapie, l'identificazione dei casi di scrapie si basa sulla segnalazione di sospetti clinici, che dipende dalla familiarizzazione dell'individuo con la malattia e dalla capacità di riconoscere i segni clinici associati alla scrapie. La scrapie non può essere considerata nella diagnosi differenziale delle malattie neurologiche nei piccoli ruminanti, in particolare nei paesi a bassa prevalenza di scrapie, o non riconosciuta se si presenta come forma nonpruritica come la scrapie atipica. Per aiutare nell'identificazione degli indagati clinici, viene presentato un breve protocollo di esame per valutare la visualizzazione di segni clinici specifici associati a forme pruriginotiche e nonprurito di TSE negli ovini, che potrebbero essere applicati anche alle capre. Ciò include la valutazione del comportamento, della visione (testando la risposta della minaccia), del prurito (testando la risposta ai graffi) e del movimento (con e senza benda). Ciò può portare a un esame neurologico più dettagliato della segnalazione degli animali come sospetti scrapie. Potrebbe anche essere utilizzato in studi sperimentali sulle TSE su ovini o caprini per valutare la progressione della malattia o per identificare il punto finale clinico.

Introduction

La scrapie è un'encefalopatia spongiforme trasmissibile (EST) di ovini e caprini, che appartiene al gruppo dei disturbi da errata delle proteine, come l'encefalopatia spongiforme bovina (BSE) nei bovini, la malattia cronica da sprecare nei cervi e il morbo di Creutzfeldt-Jakob nell'uomo. La diagnosi viene fatta post mortem rilevando la forma anomala della proteina prione, che è resistente alle proteinasi, di solito nel cervello. Si possono distinguere due grandi forme di scrapie presenti in natura, che sono epidemiologicamente, patologicamente e biochimicamente diverse: scrapie classica e scrapie atipica. Inoltre, una malattia neurologica con segni clinici classici simili alla scrapie può essere indotta negli ovini e nei caprini da un'infezione sperimentale^{con l'agente dell'ESB 6,10-11}. In effetti, l'ESB presente in natura è stata diagnosticata nelle capre^3,17. Il controllo della scrapie classica (e dell'ESB negli ovini se si è verificata naturalmente) è stato ottenuto mediante allevamento per una resistenza genetica mirata al gene delle proteine prioniche, ma ciò è più difficile per la scrapie atipica, che si ritiene sia una malattia sporadica ed è stata diagnosticata in paesi considerati esenti dalla scrapie classica, ad esempio la Nuova Zelanda⁷.

La scrapie è una malattia neurologica di pecore e capre adulte che porta a cambiamenti nel comportamento, nella sensazione e nel movimento, ma la malattia è lentamente progressiva e i segni clinici spesso non sono riconosciuti perché il custode o il veterinario potrebbe non avere familiarità con i segni clinici o la scrapie non è affatto considerata nella diagnosi differenziale delle malattie neurologiche nei piccoli ruminanti.

Il protocollo d'esame proposto è stato concepito per aiutare nella diagnosi clinica della scrapie con due scopi in mente: dovrebbe essere considerevolmente breve consentire la scansione di molti animali in un breve periodo di tempo, ma abbastanza specifico da consentire l'individuazione di animali colpiti da scrapie, che si ottiene valutando la presenza di segni clinici frequentemente riscontrati negli animali colpiti dalla scrapie. Questo protocollo è una leggera modifica rispetto a quello utilizzato per monitorare le capre alla ricerca di segni di scrapie^{classica 11} e include la benda dell'animale, che può esacerbare i segni clinici non normalmente associati alla scrapie⁹.

Protocol

1. Valutazione della postura

1. Valutare la postura dell'animale mentre è indisturbato.
2. Gli animali affetti da TSE possono stare con arti a base larga, possono apparire curvo o stare con un carrello a testa bassa.

2. Valutazione del comportamento

1. Studia il comportamento dell'animale, quando viene lasciato solo, quando viene avvicinato e quando viene maneggiato.
2. Gli animali colpiti dalle TSE possono mostrare una mutazione alterata stando separati dagli altri ovini o non immediatamente dopo altri ovini.
3. Quando l'animale viene avvicinato, può scappare e crollare, o collassa sul pavimento quando viene maneggiato. Il cerchio compulsivo in senso orario o antiorario può essere visto nelle pecore con scrapie atipica.

3. Test di risposta alle minacce

1. Tieni la testa dell'animale per testare la risposta della minaccia: sposta la mano o più dita più volte verso ogni occhio dell'animale per indurre una risposta lampeggiante, ma fai attenzione a non toccare i peli del viso o creare turbolenze d'aria che possono causare l'animale a lampeggiare.
2. La risposta alla minaccia può essere assente negli animali colpiti dalla scrapie, in particolare negli ovini con scrapie atipica. Sebbene il test della risposta alla minaccia sia l'unico test del nervo cranico utilizzato come parte del protocollo, l'ispezione visiva del viso durante questa procedura può rivelare altri segni di deficit neurologici normalmente non visti nella scrapie, ad esempio la paralisi facciale. Se l'animale non lampeggia in risposta alla minaccia, è consigliabile testare il riflesso palpebrale toccando le palpebre per garantire che l'incapacità dell'animale di lampeggiare non sia causata dalla paralisi facciale.

4. Test della risposta ai graffi

1. Assicurati che l'animale sia calmo durante questa procedura perché il test non può essere interpretato in un animale in difficoltà.
2. Graffiare le aree della schiena nelle regioni toracica, lombare e sacrale, fermandosi tra ogni episodio graffiante.
3. Se l'animale risponde con movimenti ritmici della testa o del corpo, o si muove o lecca le labbra graffiando una particolare area, ripetere il test scratch per confermare la riproducibilità della risposta graffiante.
4. Una risposta ripetibile viene solitamente suscitata in animali che sono pruritosi, che di solito include pecore con scrapie classica o capre con la forma pruritica di scrapie, ma generalmente non c'è risposta negli ovini con scrapie atipica a meno che non siano presenti altre condizioni cutanee pruritiche o ectoparassiti.

5. Controllo della perdita di lana e delle lesioni cutanee

1. Ispezionare la pelle.
2. Il prurito dovuto alla scrapie di solito causa la caduta dei capelli, che può essere sul sondaggio, sulla schiena, sulla groppa, sul lato del torace o sull'addome a causa di uno sfregamento eccessivo o graffio in cui la pelle sottostante appare normale.
3. Le abrasioni possono apparire in seguito se l'animale ha l'opportunità di strofinare oggetti appuntiti. Possono apparire ferite da morso, in particolare sugli arti, a causa di un eccessivo rosicchiamento degli arti.

6. Condizione del corpo di punteggio

1. Valutare le condizioni del corpo dell'animale palpando i processi dorsali e trasversali delle vertebre lombari.
2. La scrapie può causare una progressiva perdita delle condizioni del corpo in cui i processi trasversali delle vertebre lombari possono essere facilmente sentiti individualmente e le estremità dei processi appaiono nitide.

7. Bendare l'animale

1. Coprire gli occhi dell'animale con un cappuccio, che può essere fatto utilizzando qualsiasi sacchetto non trasparente in cui un angolo viene tagliato per consentire la respirazione dell'animale.
2. Rilasciare l'animale solo se non ci sono problemi di sicurezza e non vi è alcun rischio di lesioni a causa di un animale in preda al panico; altrimenti tenere in mano gli ovini e studiare i movimenti degli animali pur mantenendo il controllo dell'animale.
3. Bendare può esacerbare i segni di un sistema vestibolare o disfunzione cerebellare, che può essere oscurata dalla capacità dell'animale di compensare attraverso la sua visione. La perdita di equilibrio, l'incoordinazione o il circling possono essere provocati, in particolare in ovini altrimenti clinicamente insignificanti con scrapie atipica.

8. Valutazione del movimento degli animali

1. Studia l'andatura e i movimenti muscolari dell'animale quando si muove liberamente.
2. L'incoordinazione può essere caratterizzata da movimenti a base ampia degli arti posteriori, saltellando con entrambi gli arti posteriori o ondeggiando eccessivamente nei quarti posteriori, il che può causare inciampare o sedersi brevemente.
3. La presenza di un tremore alla testa è spesso sottile quando l'animale è indisturbato ma può diventare più evidente durante o dopo il completamento dell'esame clinico.

9. Interpretazione

1. Si consideri l'importanza dei risultati per quanto riguarda la scrapie.
2. Sebbene la presenza di singoli segni, come una risposta ripetibile a graffi, tremore, comportamento anomalo, giri, episodi collassante, atassia o una risposta di minaccia assente, possa avere varie cause, il verificarsi combinato di due o più di questi segni è altamente suggestivo della scrapie nelle pecore o nelle capre.

Representative Results

Pecore clinicamente sane. Sondaggio Dorset wether da un gregge senza scrapie intracerebrally inoculato con cervello bovino di origine neozelandese ed esaminato a 49 mesi dopo l'inoculazione. Questa pecora ha una postura normale, si comporta normalmente, mostra una normale risposta di minaccia (Figura 1), non reagisce al test dei graffi, ha un pile intatto e un'ottima condizione corporea. È clinicamente insignificante quando bendata e non mostra segni di un disturbo del movimento.

Ovini scrapie atipici che presentano la forma nonpruritica delle TSE negli ovini. Cheviot wether da un gregge privo di scrapie intracerebrally inoculato con omogeneato cerebrale da un caso di campo scrapie atipico dello stesso genotipo di proteina prione (AHQ/AHQ) ed esaminato a 36 mesi dopo l'inoculazione. Questa pecora ha anche una postura normale ma si comporta in modo diverso dalle altre pecore nella penna e gira in senso orario. Non lampeggia quando viene testata la risposta di minaccia. Graffiare non suscita alcuna risposta e nessun cambiamento di pile è evidente, ma le condizioni del corpo sono solo giuste. Gira in senso orario quando è bendato (Figura 2) e perde equilibrio. L'andatura è atassica e un bel tremore alla testa è visibile.

Ovini atipici dell'ESB che presentano la forma pruritica delle TSE negli ovini, che è clinicamente simile alla presentazione clinica degli ovini classici colpiti dalla scrapie. Per questo motivo, un classico caso di scrapie non è incluso. Sondaggio Dorset wether da un gregge privo di scrapie intracerebrally inoculato con omogeneato cerebrale bovino atipico (tipo L) BSE ed esaminato a 50 mesi dopo l'inoculazione. Questa pecora è leggermente curva, tende a mantenere gli arti posteriori a base larga e cade sul pavimento quando viene catturata. La risposta della minaccia è debole. Graffiare varie aree della schiena provoca movimenti della testa o delle labbra (Figura 3), e c'è perdita di lana con un piccolo trauma cutaneo sul sondaggio. Le condizioni del corpo sono buone. Quando è bendato, è riluttante a muoversi e poggia la sua parte posteriore sull'ostacolo per mantenere l'equilibrio. La pecora è atassica e mostra ipermetria dell'arto anteriori.

Figura 1. Test di risposta alla minaccia. Un gesto minaccioso verso l'occhio dell'animale induce una risposta lampeggiante. Clicca qui per visualizzare l'immagine più grande.

Figura 2. Bendaggio. Girando in senso orario suscitato bendando le pecore con un cappuccio. Clicca qui per visualizzare l'immagine più grande.

Figura 3. Test della risposta graffiante. Graffiare la parte posteriore provoca leccare le labbra con movimenti laterali della testa Fare clic qui per visualizzare un'immagine più grande.

Discussion

La scrapie è una malattia elencata dall'Organizzazione mondiale della sanità per la salute degli animali (OIE), che, in assenza di un test ante mortem rapido e affidabile, si basa sulla capacità degli agricoltori o dei veterinari di riconoscere i segni clinici associati a questa malattia. La maggior parte dei casi di scrapie, in particolare quelli atipici, tuttavia, sono attualmente riscontrati mediante sorveglianza mirata delle TSE, vale a dire mediante esame cerebrale di piccoli ruminanti soggetti a macellazione o animali morti. Allevare pecore per la resistenza alla scrapie classica, che ha ridotto il numero di casi classici di scrapie, molto probabilmente ha anche ridotto la consapevolezza delle persone per la malattia in modo che sia meno spesso considerata nella diagnosi differenziale dei disturbi neurologici negli ovini. La scrapie atipica ha anche una bassa prevalenza con circa cinque casi nei mattatoi e otto casi in scorte cadute ogni 10.000 testati in Europa⁴. Inoltre, il prurito, solitamente evidente come alopecia con o senza escoriazione, è spesso considerato un segno caratteristico della scrapie¹³. Pertanto, una malattia neurologica senza prurito concomitante osservata nella scrapie atipica¹² o nella forma nonpruritica della scrapie caprina^{11 non} può sollevare sospetti di scrapie.

Questo protocollo d'esame è stato concepito per identificare i segni clinici delle TSE negli ovini valutando specifici segni clinici associati a vari tipi di scrapie (scrapie atipica e classica, quest'ultima rappresentata da un'pecora atipica inoculata all'ESB, che presentava segni classici simili a scrapie). Nella scrapie classica, la percentuale di casi che mostravano una risposta graffiata positiva ("riflesso del mordicchiare") variava da 50-77 in oltre 100 pecore^{studiate 5,8}. I disturbi del movimento possono essere osservati fino all'81% dei casi classici di scrapie sulla base di vari^{studi 18}. L'incoordinazione è anche un segno importante in vari casi naturali di scrapie atipica, spesso accompagnata da cambiamenti comportamentali¹, ma ulteriori segni riportati sia nelle pecore scrapie atipiche naturalmente che sperimentalmente infette stavano girando e la^{compromissione visiva 12,15,16}, motivo per cui la benda e il test della risposta alla minaccia sono inclusi nel protocollo d'esame. Il punteggio della condizione corporea, ad esempio utilizzando un sistema di punteggio di 6 punti¹⁴, consente la valutazione dell'emaciazione, che può essere osservata nelle pecore colpite dalla scrapie⁵. Sebbene in precedenza siano stati proposti criteri clinici per aiutare l'individuazione della scrapie^{negli ovini 2}, questi riguardavano solo l'individuazione della scrapie classica e prendevano in considerazione la storia clinica, che potrebbe non essere disponibile se gli animali vengono presentati in un mattatoio.

L'attuale protocollo consente lo screening di molti animali per i segni di scrapie in un breve periodo di tempo. Inoltre, il protocollo d'esame può essere applicato a studi sperimentali sulla scrapie negli ovini e nei caprini per monitorare l'insorgenza clinica, la progressione e il punto finale. Tuttavia, non sostituisce un esame fisico e neurologico più dettagliato con un'adeguata registrazione della casistica clinica, eventualmente seguita da esami diagnostici accessori (esame del sangue e del liquido cerebrospinale; tecniche di imaging più sofisticate, se del caso), che possono essere necessarie successivamente per escludere varie altre condizioni in piccoli ruminanti che presentano segni simili , come malattie neurologiche metaboliche o infiammatorie, ascessi cerebrali o tumori.

Sebbene un esame clinico sia generalmente meno sensibile nell'individuazione degli animali affetti da TSE rispetto ai test post mortem basati sull'individuazione della proteina prione^2,11, in particolare in una fase precoce del periodo di incubazione, questo è attualmente l'unico metodo di rilevamento negli animali vivi e più rilevante per quei paesi che non hanno un sistema di sorveglianza mirato per identificare i piccoli ruminanti colpiti dalle TSE.