Summary

Eterotopico mucosa engrafting Procedura di Drug Delivery diretto al cervello nei topi

Published: July 16, 2014
doi:

Summary

Un modello murino di ricostruzione base cranica endoscopica umana sviluppato che crea un'interfaccia semipermeabile tra il cervello e il naso utilizzando innesti mucose nasali. Questo metodo permette ai ricercatori di studiare consegna al sistema nervoso centrale di alto peso molecolare terapeutica che altrimenti esclusi dalla barriera emato-encefalica, se somministrati per via sistemica.

Abstract

Consegna di terapeutica nel cervello è ostacolato dalla presenza della barriera ematoencefalica (BBB) ​​che limita il passaggio di composti polari e ad alto peso molecolare dal flusso sanguigno e nel tessuto cerebrale. Alcuni successi consegna diretta negli esseri umani è stato raggiunto tramite l'impianto di cateteri transcraniali; Tuttavia questo metodo è altamente invasiva e associati con numerose complicazioni. Un'alternativa meno invasiva sarebbe dosare il cervello attraverso una impiantato chirurgicamente, membrana semipermeabile come la mucosa nasale che viene utilizzato per riparare difetti base cranica seguente endoscopica transnasale rimozione chirurgica del tumore nell'uomo. Trasferimento Drug se questa membrana potrebbe effettivamente bypassare la BBB e diffondere direttamente nel cervello e nel liquido cerebrospinale. Ispirato da questo approccio, un approccio chirurgico nei topi è stata sviluppata che utilizza una membrana mucosa del setto donatore innestato su un difetto extracranica BBB chirurgico. Questo modello è stato dimostrato efficaceconsentire il passaggio di composti ad alto peso molecolare nel cervello. Dal momento che numerosi farmaci candidati sono in grado di attraversare la BBB, questo modello è utile per l'esecuzione di sperimentazione preclinica di nuove terapie per le malattie neurologiche e psichiatriche.

Introduction

Il trattamento della malattia neurologica e psichiatrica è fortemente ostacolato dalla presenza della barriera ematoencefalica (BBB) ​​che impedisce oltre il 95% di tutti i potenziali agenti farmaceutici di raggiungere il sistema nervoso centrale 1-3. Ad esempio, derivazione gliale fattore neurotrofico (GDNF) ha dimostrato di essere efficace nel trattamento della malattia di Parkinson quando iniettato direttamente nel cervello, tuttavia è inefficace quando consegnato sistemica perché non può penetrare la BBB 4-6.

Numerosi avvicinato sono stati sviluppati per cercare di aggirare questo problema. Miglioramento della consegna sistematica di neurotheraputics è stata dimostrata utilizzando coniugati contenenti anticorpi selettivi per le proteine ​​di trasporto localizzate sull'endotelio capillare cervello; tuttavia questo metodo non ha dimostrato di essere applicabile per una vasta gamma di farmaci 7,8. Inoltre, l'apertura osmotica della BBB è stato usato clinicaalleato, tuttavia questo metodo soffre di dosaggio di farmaci sistemici rispetto a una consegna più diretto alla regione del cervello di interesse 9. Notevole sforzo è stato messo in ottimizzazione consegna transnasale nella speranza di mira direttamente il cervello 10-12. Sebbene un certo successo è stato raggiunto, risultati conclusivi sono stati ottenuti solo per farmaci che posseggono recettori endogeni, come l'insulina 13,14. Inoltre il meccanismo di consegna transnasale è stato controverso con prove che suggeriscono ingresso indiretto nel cervello attraverso olfattivo neurone assorbimento o attraverso il flusso sanguigno 11. , Consegna transcranica diretta utilizzando cateteri impiantabili è stato raggiunto, tuttavia questa procedura è altamente invasiva e associata a numerose complicanze 15,16. Ad oggi, non esiste un metodo generale, minimamente invasivo per fornire composti ad alto peso molecolare nel cervello.

Qui presentata è una procedura chirurgica murinoche crea un'interfaccia semipermeabile con il cervello. Questo si ottiene innestando un espianto membrana mucosa 17 su un difetto craniotomia chirurgica in un topo. Utilizzando questa procedura è stato dimostrato che i composti solubili fino a 500 kDa possono essere trasportati nel sistema nervoso centrale (direttamente nel parenchima cerebrale e nel liquido cerebrospinale) sia un tempo e peso molecolare di modo dipendente 18. Questo metodo di aggirare la BBB è un modello per la riparazione dei difetti di base del cranio negli esseri umani che utilizza innesti di mucosa vascolarizzati per riparare buchi nel cranio dopo la chirurgia endoscopica transnasale 19,20.

Protocol

Prima dell'intervento assicurarsi tutte le procedure da fare sono approvati dalla IACUC e qualsiasi autorità etiche o giuridiche addizionali e utilizzare crudeli pratiche di trattamento degli animali. Questo include l'utilizzo di condizioni di chirurgia sterili, anestetizzare il mouse utilizzando IACUC metodo approvato, lubrificanti occhi topi con vet unguento durante l'intervento chirurgico, e fornire assistenza post-chirurgica. Non procedere con la chirurgia se c'è qualche problema se aspetti della p…

Representative Results

Ottenere un grande abbastanza setto nasale espianto è fondamentale per le fasi successive. Questo può essere realizzato mediante foratura nella posizione sul cranio del topo donatore mostrato in Figura 1a. Tagliando lungo questo percorso produrrà un espianto di sufficiente dimensione come mostrato in Figura 1b. Se la profondità non è abbastanza profonda, l'innesto sarà troncata e sarà difficile ottenere una grande membrana sufficiente a coprire la superficie del cervello. Per…

Discussion

Il passo più difficile della procedura qui descritta è la riuscita del trasferimento di una membrana mucosa adeguate dimensioni sulla superficie del cervello. Questo passaggio è notevolmente semplificata se il setto nasale raccolto è abbastanza grande e ben puliti. Se la parte ventrale del setto viene troncato, un nuovo innesto deve essere ottenuta. L'angolo di perforazione deve essere perpendicolare alla testa mouse per assicurare che la membrana mucosa non è danneggiato dal trapano. Se viene preso un percorso…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questo studio è stato finanziato dalla Fondazione Mcihael J. Fox per la ricerca 2011 Rapid Response Innovations di Parkinson Awards Program. I finanziatori hanno avuto alcun ruolo nel disegno dello studio, la raccolta e l'analisi dei dati, la decisione di pubblicare, o preparazione del manoscritto.

Materials

Name of Material/ Equipment Company Catalog Number Comments/Description
mice Taconic C57BL/6
Isoflurane Piramal Healthcare
Student Fine Scissors Fine Science Tools 91461-11
pneumatic drill MTI Dental 333-CB
drill bit
forcepts Fine Science Tools 91106-12
0.9% Sodium Chloride Injection USP Abbott Laboratories 4925
Polystyrene Detri Dish Fisher 08-757-12 for temporarily storing graft
Bead Sterilizer Fine Science Tools 18000-45
Oxygen/Isoflurane System SurgiVet V720100
Temperature Control System Physitemp TCAT-2LV
Small Animal Stereotaxic Instrument KOPF Model 940
Eye Ointment
Electric shaver
Cotton-Tipped Applicators Fisher 23-400-106
7.5% Provadone Iodine Betadine surgical scrub
70% Ethanol
Surgical Blade Stainless Feather 2976#10
Scalpel Handle – #3 Fine Science Tools 10003-12
3% Hydogen Peroxide for cleaning the skull
Vetbond Tissue Adhesive 3M 1469SB
needles Becton, Dickinson and Company 305176 needle tip cut off and used as well
syringes Becton, Dickinson and Company 309597
nitrile gloves Denville Scientific Inc G4162 for well closure and protection of graft
5-0 Nylon Suture Thread
Student Halsey Needle Holder Fine Science Tools 91201-13
cyanoacrylate adhesive commecially available super glue
Dental Cement Kit, 1 lb, Pink Opaque Stoelting 51458
isobutane (2-methylbutane) Aldrich M32631 for dry ice bath
dry ice

References

  1. Cardoso, F. L., et al. Looking at the blood-brain barrier: Molecular anatomy and possible investigation approaches. Brain Res. Rev. 64, 328-363 (2010).
  2. Pardridge, W. M. Drug transport across the blood-brain barrier. J. Cereb. Blood Flow Metab. 32, 1959-1972 (2012).
  3. Chen, Y., Liu, L. Modern methods for delivery of drugs across the blood-brain barrier. Adv. Drug Deliv. Rev. 64, 640-665 (2012).
  4. Cheng, F. -. C., et al. Glial cell line-derived neurotrophic factor protects against 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP)-induced neurotoxicity in C57BL/6 mice. Neurosci. Lett. 252, 87-90 (1998).
  5. Grondin, R., et al. controlled GDNF infusion promotes structural and functional recovery in advanced parkinsonian monkeys. Brain. 125, 2191-2201 (2002).
  6. Kirik, D., et al. Localized striatal delivery of GDNF as a treatment for Parkinson disease. Nat. Neurosci. 7, 105-110 (2004).
  7. Pardridge, W. M. Drug and gene targeting to the brain with molecular trojan horses. Nat. Rev. Drug Discov. 1, 131-139 (2002).
  8. Pardridge, W. M. Blood-brain barrier delivery of protein and non-viral gene therapeutics with molecular Trojan horses. J. Control. Release. 122, 345-348 (2007).
  9. Bellavance, M. -. A., et al. Recent advances in blood-brain barrier disruption as a CNS delivery strategy. AAPS J. 10, 166-177 (2008).
  10. Merkus, F. H. M., Berg, M. Can nasal drug delivery bypass the blood-brain barrier. Drugs R. D. 8, 133-144 (2007).
  11. Dhuria, S. V., et al. Intranasal delivery to the central nervous system: Mechanisms and experimental considerations. J. Pharm. Sci. 99, 1654-1673 (2010).
  12. Illum, L. Nasal drug delivery-possibilities, problems and solutions. J. Control. Release. 87, 187-198 (2003).
  13. Craft, S., et al. Intranasal insulin therapy for alzheimer disease and amnestic mild cognitive impairment: A pilot clinical trial. Arch. Neurol. 69, 29-38 (2012).
  14. Freiherr, J., et al. Intranasal insulin as a treatment for Alzheimer’s Disease: A review of basic research and clinical evidence. CNS Drugs. 27, 505-514 (2013).
  15. Gill, S. S., et al. Direct brain infusion of glial cell line-derived neurotrophic factor in Parkinson disease. Nat. Med. 9, 589-595 (2003).
  16. Love, S., et al. Glial cell line-derived neurotrophic factor induces neuronal sprouting in human brain. Nat. Med. 11, 703-704 (2005).
  17. Antunes, M. B., et al. Murine nasal septa for respiratory epithelial air-liquid interface cultures. BioTechniques. 43, 195-204 (2007).
  18. Bleier, B. S., et al. Permeabilization of the blood-brain barrier via mucosal engrafting: implications for drug delivery to the brain. PLoS ONE. 8, (2013).
  19. Bernal-Sprekelsen, M., et al. Closure of cerebrospinal fluid leaks prevents ascending bacterial meningitis. Rhinology. 43, 277-281 (2005).
  20. Bleier, B. S., et al. Laser-assisted cerebrospinal fluid leak repair: An animal model to test feasibility. Otolaryngol. Head Neck Surg. 137, 810-814 (2007).

Play Video

Cite This Article
Kohman, R. E., Han, X., Bleier, B. S. Heterotopic Mucosal Engrafting Procedure for Direct Drug Delivery to the Brain in Mice. J. Vis. Exp. (89), e51452, doi:10.3791/51452 (2014).

View Video