Protocol
1. H. pylori Vækst i forskellige betingelser for Iron Tilgængelighed og Co-kultur med Human Gastric epithelialceller
- Vælg H. pylori stamme PMSS1 til disse undersøgelser, fordi det har en intakt cag patogenicitet ø og udtrykker en fungerende type IV sekretion system. Også anvende en isogen bur mutant (PMSSI Δ bur) som en negativ kontrol. Vokse bakterier på TSA plader suppleret med 5% fåreblod (blodagarplader) i 24 timer ved 37 ° C i nærvær af 5% CO 2.
BEMÆRK: Forbered reagenser og samle materialer som beskrevet i Materialer og udstyr Bord. Slutkoncentrationer for hvert reagens er angivet i parentes. - Skrab bakterier fra pladen ved hjælp af en steril bomuld tippes applikator og pode ind modificeret brucellanæringsvæske fremstillet af komponenter (se Materialer og udstyr Table) og suppleret med kolesterol. Inkuber kulturer natten over ved 37° C i rumluft suppleret med 5% CO 2 med rystning ved 200 omdrejninger per minut (rpm).
BEMÆRK: Cholesterol anvendes i stedet for føtalt bovint serum på grund af det faktum, at serum er komplekst; indeholder mange kilder til næringsstof jern såsom hæm, som forårsager variation i resultaterne. - På dagen for bakteriel dyrkning frø AGS humane gastriske epitelceller (ATCC CRL-1739) på poly-D-lysin-behandlede dækglas i 12-brønds plader (ca. 1 x 10 5 celler pr brønd).
- Den følgende dag, fortyndes bakteriekulturer til en OD600 på 0,3 i modificeret brucellanæringsvæske alene eller suppleret med 100 uM FeCl3, 200 uM dipyridyl (en syntetisk jernkelator) eller 200 uM dipyridyl plus 250 uM FeCl3. Inkuber disse kulturer til 4 timer ved 37 ° C i rumluft suppleret med 5% CO 2 med omrystning ved 200 rpm.
- Centrifuger bakterier ved 1.000 xg til at indsamle celler og fjerne supernatanter før resuspendering in et lige volumen af frisk modificeret brucellanæringsvæske suppleret med cholesterol. Foranstaltning OD600 af kulturen (OD600 = 1,0 = 5,5 x 10 8 celler / ml) og tilsæt bakterier til epitelceller i en infektionsmultiplicitet (MOI) på 20: 1. Udføre serielle fortyndinger og plade bakterieceller på blodagarplader at vurdere bakteriel cellelevedygtighed.
- Inkuber H. pylori og AGS humane gastriske epitelceller co-kulturer til 4 timer ved 37 ° C i nærvær af 5% CO 2 under statiske betingelser, før udførelse af scanning elektronmikroskopi (SEM) prøveforberedelse.
2. SEM Prøveforberedelse at visualisere H. pylori Cag-T4SS Pili
- Fjern H. pylori og AGS co-kulturer fra inkubatoren og dekantere dyrkningssupernatant (Gem til IL-8 ELISA). Vaskes forsigtigt tre gange med 0,05 M natriumcacodylat-buffer (pH 7,4). Fix prøver til 2-4 timer ved stuetemperatur i en opløsning af 2,0% paraformaldehyd, 2,5% Glutaraldehyd og 0,05 M natriumcacodylatbuffer. Efter den primære fiksering vaskes prøverne tre gange med 0,05 M natriumcacodylatbuffer.
- Udføre sekundær fiksering anvendelse af 0,1% osmiumtetroxid i 0,05 M natriumcacodylatbuffer i to sekventielle 10 min fiksering trin. Efter sekundær fiksering vaskes prøverne tre gange med 0,05 M natriumcacodylatbuffer.
- Efter primær og sekundær fiksering dehydrere prøver ved sekventiel vask med stigende koncentrationer af ethanol pr tabel 1.
- Efter ethanol dehydrering, udføre tre sekventielle vaske med flydende carbondioxid. Så tørre prøver på et kritisk punkt ved hjælp af et kritisk punkt tørretumbler maskine ved en temperatur på 31,1 ºC og et tryk på 1073 PSI.
- Mount Dækglas på aluminium SEM prøve stubbe og male med en tynd linje af kolloidt sølv ved prøven kant for at opnå passende jordforbindelse og undgå opladning under SEM billeddannelse.
- Coat prøver med 5 nmguld-palladium anvendelse af en sputter coat maskine at øge prøve sekundær elektron signal og kant effekt.
3. Imaging Parametre for High Resolution SEM Analyser
- Se prøver med en Field-Emission Gun Scanning Electron Microscope (FEG-SEM).
- Billedet i et højvakuum tilstand ved en måleafstand på 5-10 mm.
- Indstil accelerationsspænding til 5 kV.
- Sæt spot størrelse til 2-2,5.
- Vip prøven mellem 15-25 grader for at opnå en bedre visning af vært-patogen interface.
- Prioritere billeddannelse bakterier adhærerende til kanterne af epitelcellerne for stor forstørrelse visning, da disse områder værtspatogene interaktion er beriget for pili-dannende bakterier.
4. Statistiske Analyser til Evaluer Pili kvantificeringer
- Analyser H. pylori Cag-T4SS pili hjælp ImageJ software til at kvantificere antallet af pili / celle såvel som procent af celler, der udviser den piliated phenotype pr instruktionerne nedenfor.
- Åbne mikrograf filer i ImageJ software. Identificere pili som der er dannet mellem den bakterielle celle og værtscellen, med ensartet bredde (10-13 nm) og længde (60-150 nm).
BEMÆRK: pilus struktur er til stede på WT bakteriestammer, men fraværende på isogene stammer, såsom Δ bur mutantstammer, som huser en inaktivering i genet, der koder den store ATPase, der driver type IV sekretion pilus-samling. - Kalibrer værktøj måling ved at tegne en linje med den lige linje værktøj og derefter klikke på fanen "Analyze". Vælg "Set Scale" fra rullemenuen og indtaste forstørrelsesgraden bar værdi i feltet "kendt afstand", og indstil enhed af længde til den passende indstilling (nm). Klik på "OK".
- Mål Cag-T4SS pili ved hjælp af den lige linje værktøj til at trække over længden eller bredden af pilus og tryk derefter på "Ctrl-M" for at måle hver pilus. Overhold en dialogboks med de målte værdier. Optag disse værdier eller kopiere og indsætte i et regnearksprogram.
- Brug længde og bredde parametre tidligere konstaterede 24 se bort funktioner, der ikke passer til profilen af Cag-T4SS. Så kvantificere antallet af pili baseret på værdier, der er inden cutoffs de 10-13 nm bredde og 60-150 nm længde.
- Analyser kvantificering af pili statistisk ved to-halet Students t-test under anvendelse af GraphPad Prism software.
5. Valgfrit: Evaluering af IL-8 sekretion at korrelere med Pilus Production
- Brug supematanter fra trin 2.1, udføre en IL-8 ELISA pr fabrikantens anvisninger med sættet (se Materialer og udstyr Table).
- Analysere IL-8 udskilt af værtsceller og beregne procent IL-8 induktion med hensyn til WT PMSS1 dyrket i medium alene. Statistisk analyse under anvendelse af to-halet Students t-test under anvendelse af GraphPad Prism såftware.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I denne rapport har vi vist, at betingelserne for varierende jern tilgængelighed har kapacitet til at modulere H. pylori Cag-T4SS pilus biogenese på værten patogen interface. Når dyrket i medium alene, H. pylori danner et gennemsnit på 3 pili / celle. Da H. pylori dyrkes i jern nedbryder betingelser (ved hjælp af syntetiske chelator dipyridyl), som er sub-inhiberende bakteriel vækst (figur 1), bakterierne producerer talrige Cag-T4SS pili (~ 7 pili / celle), når co-dyrket med humane gastriske celler (figur 2). Omvendt, når en exogen kilde til næringsstoffer jern er til stede, er dannelsen af Cag-T4SS pili undertrykt (mindre end 1 pilus / celle i FE prøven mindre end 1 pilus / celle i FE + DIP prøve) (figur 2). Kvantificering af pili på værtspatogene grænseflade viser, at i forhold af jern begrænsning, H. pylori udviser en 2-fold stigning i Cag-T4SS pili (p <0,000 1), og de procentvise piliated celler stiger med 11% (p <0,05) sammenlignet med celler dyrket i medium alene (figur 3). Interessant er aktiviteten af Cag-T4SS, som målt ved vært IL-8 sekretion, forbedret 107% under betingelser af jern begrænsning og undertrykt 49% under betingelser med overskydende jern tilgængelighed sammenlignet med medium alene (p = 0,03 og p < 0,001, henholdsvis) et resultat, der støtter SEM data. Men Pili dimensioner forbliver konsekvent blandt alle forhold af jern tilgængelighed (Figur 4). Desuden indeholder jern tilgængelighed ikke ændre biogenesen af pili på overfladen af et bur mutant, ændrer heller ikke denne isogene derivatets evne til at inducere en IL-8 svar fra værtsceller, der støtter den hypotese, at de strukturer vist er i virkeligheden, CAG-T4SS og ikke en yderligere uafhængig overflade funktion.
n "src =" / files / ftp_upload / 52.122 / 52122fig1highres.jpg "width =" 500 "/>
Figur 1:. Bakteriel levedygtighed bestemmes under forskellige forhold af jern tilgængelighed H. pylori blev dyrket i modificeret brucellanæringsvæske alene (medium alene) eller suppleret med 100 uM FeCl3 (FE), 200 uM dipyridyl (DIP), eller 200 uM dipyridyl plus 250 uM FeCl3 (FE + DIP). Bakterier blev fortyndet serielt og udpladet på bakteriologiske medium før inkubation i 2 dage ved 37 ° C i nærvær af 5% CO 2. Kolonier blev talt, og kolonidannende enheder / ml (CFU / ml) blev beregnet. Søjler angiver gennemsnit af tre uafhængige forsøg +/- SEM. Behandling med DIP, FE, eller FE + DIP ændrer ikke signifikant bakteriel levedygtighed.
Figur 2: Høj resolution scanningselektronmikroskopi analyser af H. pylori Cag-T4SS pili. Bakterier blev dyrket i A) medium alene, B) medium suppleret med 100 uM FeCl3, C) medium suppleret med 200 uM dipyridyl, eller D) medium suppleret med 200 uM dipyridyl plus 250 uM FeCl3 forud for co-kultur med AGS human gastriske celler. Pile angiver Cag-T4SS pili dannet ved værtspatogene interface. Prøverne blev analyseret ved høj opløsning scanning elektronmikroskopi at evaluere Cag-T4SS biogenese. Betingelser for lav jern tilgængelighed øge forekomsten af Cag-T4SS pilus dannelse, mens betingelserne for overskydende tilgængelig næringsstof jern undertrykke Cag-T4SS pilus formation.
Figur 3: Kvantificering af pili / celle og procent piliated celler dyrket i forskelligebetingelser for jern tilgængelighed. Bakterier blev dyrket i modificeret brucellanæringsvæske alene (medium alene) eller medium suppleret med 100 uM FeCl3 (FE), 200 uM dipyridyl (DIP), eller 200 uM dipyridyl plus 250 uM FeCl3 (FE + DIP) før co- kultur med humane gastriske epitelceller. Prøverne blev analyseret ved høj opløsning scanning elektronmikroskopi og pili blev optalt ved hjælp ImageJ software. A) Scatterplot af pili per celle (* p <0,0001 sammenlignet med medium alene) og B) Bar graf, der viser procent af piliated celler (* p <0,05 sammenlignet med medium alene) afledt fra 60 til 112 celler pr dyrkningsbetingelser afledt fra 3 separate biologiske forsøg.
Figur 4: pilus dimensioner målt fra celler dyrket under forskellige forhold af jern tilgængelighed. Bacteria blev dyrket i modificeret brucellanæringsvæske alene (medium alene) eller medium suppleret med 100 uM FeCl3 (FE), 200 uM dipyridyl (DIP), eller 200 uM dipyridyl plus 250 uM FeCl3 (FE + DIP) før co- kultur med humane gastriske epitelceller. Prøverne blev analyseret ved høj opløsning scanning elektronmikroskopi og pili dimensioner blev målt ved anvendelse ImageJ software. A) Pilus bredde er et gennemsnit på 13,1 +/- 2,4 nm blandt alle forhold. B) Pilus længde er et gennemsnit på 75,8 +/- 16,0 nm blandt alle forhold. Ingen signifikant forskel i pilus dimensioner ses i de forskellige betingelser af jern tilgængelighed.
Supplerende Figur 1: Høj opløsning scanning elektronmikroskopi analyser af H. pylori Cage mutant i forskellige tilstande af jern tilgængelighed. Bakterier blev dyrket i A) medium suppleret med 100 uM FeCl3, B) medium suppleret med 200 uM dipyridyl (DIP) eller C) medium suppleret med 200 uM dipyridyl (DIP) plus 250 uM FeCl3 forud for co-kultur med AGS humane gastriske celler. Prøverne blev analyseret ved høj opløsning scanning elektronmikroskopi at evaluere Cag-T4SS biogenese. Betingelser for lav eller høj jern ikke modulere nogen Cag-uafhængige pilus biogenese, underbygger hypotesen om, at de strukturer, visualiseret i figur 2 er Cag-T4SS pili.
Supplerende Figur 2: ELISA-analyse af vært IL-8 sekretion som reaktion på bakterier dyrket i varierende forhold af jern tilgængelighed. Vildtype (hvide søjler) eller et bur mutant (grå søjler) bakterier blev dyrket i modificeret brucellanæringsvæske alene (medium alene) eller medium suppleret med 100 uM FeCl3 (FE), 200 uM dipyridyl (DIP), eller 200 uM dipyridyl plus 250 uM FeCI3 (FE + DIP) forud for co-kultur med humane gastriske epitelceller. Strygejern restriktioner resulterer i øget IL-8, En vært reaktion, der er afhængig Cag-T4SS aktivitet. Søjler angiver gennemsnit +/- SEM, afledt af 3 separate biologiske forsøg. (* P <0,05 sammenlignet med PMSS1 dyrket i medium alene).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Jern er et essentielt mikronæringsstof for de fleste former for liv, herunder bakterielle patogener. I et forsøg på at begrænse levedygtigheden af invaderende mikroorganismer, hvirveldyr værter sekvestrerer næringsstof jern i en proces kendt som "ernæringsmæssig immunitet" 18. Som reaktion på dette har bakteriepatogener udviklet sig til at bruge jern som en global signalmolekyle at sanse deres omgivelser og regulere udarbejdelsen af virulens funktioner såsom erhvervelse jern systemer, toksiner og toksin sekretionsmaskineriet 19,20.
H. pylori kræver mikronæringsstoffer såsom jern, zink og magnesium til at vokse 22 og kan anvende alternative kilder for jern, såsom hæm, hæmoglobin, transferrin og lactoferrin. 23 H. pylori, ligesom de fleste succesfulde patogener, har udviklet et bredt repertoire af virulensfaktorer at hjælpe det scavenge næringsstof jern fra værten 21. En virulensfaktor, CagA, effektor molecule af Cag-T4SS, er impliceret i omdirigering transferrin fra den basolaterale side af polariserede celler til den apikale overflade, hvor den let kan anvendes af bakterielle celler som et næringsstof jernkilde og fremme replikation 15. Det synes således en intuitiv evolutionær strategi til fremme af sekretion af CagA ved lav jern tilgængelighed.
H. pylori Cag-T4SS er en vigtig bakteriel organel, på grund af de proinflammatoriske vært celle responser det fremkalder. Virkningerne af KAG-T4SS er blevet godt undersøgt i både co-kulturer og dyremodeller for infektion. Imidlertid har studier af den makromolekylære struktur og sammensætning af dette toksin sekretionssystem blevet hæmmet af manglen på høj opløsning billeddannelse protokoller. Vores tidligere offentliggjorte rapporter studerer KAG-T4SS har rapporteret et gennemsnit på fire Cag-T4SS pili pr bakteriel celle ved høj opløsning elektronmikroskopi analyser 24. Vores forbedrede metode giveren robust imaging teknik til at visualisere Cag-T4SS ved hjælp af en kultur teknik, der fremmer produktionen af denne funktion på overfladen af den bakterielle celle. Udnyttelse af dyrkningsteknikker i forbindelse med høj opløsning field-emission gun scanningselektronmikroskop er kritisk for denne imaging protokol. To-fold berigelse af KAG-T4SS overflade funktion er en betydelig stigning for efterforskerne interesseret i at udføre immunhistokemiske analyser, f.eks immunofluorescens eller immunfældningsforsøg teknikker til yderligere at karakterisere den subcellulære placering eller sammensætningen af KAG-T4SS. Når høj opløsning elektronmikroskopi billeddannelse af Cag-T4SS er styr, er det også muligt at udvikle andre applikationer, såsom immunogold-mærkning, at bestemme placeringen af bakterielle proteiner med hensyn til Cag-T4SS pilus 25.
En begrænsning af vores teknik er, at investigator stadig er begrænset til USIng en co-kultur system til visualisering af KAG-T4SS. I et enkelt felt, kun en delmængde af H. pylori under normale dyrkningsbetingelser udgør disse strukturer (ca. 50-70 procent, se Figur 3 panel B). Så mange celler i et område vil være ikke-piliated. Det er ukendt, hvorfor eksisterer disse underpopulationer på samme sted, men disse celler er altid angivet i både kvantificering af pili / celle og procent af celler med pili på overfladen. Fordi KAG-T4SS kun observeret ved host-bakteriel interface, de primære og sekundære fiksering trin i SEM prøve forberedelse er afgørende for bevarelsen af både proteinholdige strukturer og membraner i eukaryote og prokaryote celler. Imidlertid kan over-fiksering forekomme, hvis fiksering trin udføres længere end skitseret, eller hvis løsninger ikke frisklavet. Hvis over-fiksering sker, vil prøverne har en stenet udseende, når den ses under SEM og KAG-T4SS vil blive maskeret af dette. Til troubleshoot, gentag SEM prøveforberedelse den bruger mindre koncentrerede fikseringsmidler og / eller mindre tid inkuberet i nærværelse af fiksativ.
Den co-kultur-systemet gør også biokemisk karakterisering (såsom massespektrometri analyser) besværlig på grund af forurening af store mængder værtsproteiner. At forstå de molekylære mekanismer, der regulerer produktionen af denne bakterielle sekretion system kan i sidste ende føre til nye teknikker, der vil udløse Cag-T4SS pilus dannelse i fravær af værtsceller. Dette vil i høj grad forbedre isolering og oprensning af teknikker til biokemiske analyser.
Afslutningsvis vi rapportere, at betingelserne for begrænset jern tilgængelighed resulterer i øget produktion af H. pylori Cag-T4SS, der kan visualiseres ved høj opløsning scanning elektronmikroskopi teknikker. Vi rapporterer også jernafhængige undertrykkelse af denne overflade funktionen på værtspatogene interface. Dette assay kan optimeres og udnyttes for mange bakterielle patogener, der danner jernregulerede toxin-sekreter og er bredt anvendelig til en bred vifte af vært-mikrobe interaktioner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Modified brucella broth | |||
| Peptone from casein (10 g/L) | Sigma | 70172 | |
| Peptic digest of animal tissue (10 g/L) | Sigma | 70174 | |
| Yeast extract (2 g/L) | Sigma | 92144 | |
| Dextrose (1 g/L) | Sigma | D9434 | |
| Sodium chloride (5 g/L) | Thermo Fisher | S271-10 | |
| Cholesterol (250X) (4 ml/L) | Life Technologies | 12531018 | |
| Ferric chloride (100 or 250 uM) | Sigma | 157740-100G | |
| Dipyridyl (200 uM) | Sigma | D216305-100G | |
| Modified RPMI | |||
| RPMI+HEPES (1X) | Life Technologies | 22400-121 | |
| Fetal bovine serum (100 ml/L) | Life Technologies | 10438-026 | |
| Electron Microscopy Preparation | |||
| Paraformaldehyde (2.0% aqueous) | Electron Microscopy Sciences | 15713 | |
| Gluteraldehyde (2.5% aqueous) | Electron Microscopy Sciences | 16220 | |
| Sodium cacodylate (0.05 M) | Electron Microscopy Sciences | 12300 | |
| Osmium tetroxide (0.1% aqueous) | Electron Microscopy Sciences | 19150 | |
| Ethanol (absolute) | Sigma | E7023 | |
| Colloidal silver paint | Electron Microscopy Sciences | 12630 | |
| SEM sample stubs | Electron Microscopy Sciences | 75220 | |
| Coverslips | Thermo Fisher | 08-774-383 | |
| IL-8 Secretion Evaluation | |||
| Quantikine IL-8 ELISA kit | R&D Systems | D8000C |
References
- Cover, T. L., Blaser, M. J. Helicobacter pylori in health and disease. Gastroenterology. (6), 1863-1873 (2009).
- Sycuro, L. K., et al. Peptidoglycan crosslinking relaxation promotes Helicobacter pylori's helical shape and stomach colonization. Cell. 141 (5), 822-833 (2010).
- Kodaman, N., et al. Human and Helicobacter pylori coevolution shapes the risk of gastric disease. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 111 (4), 1455-1460 (2014).
- Tegtmeyer, N., Wessler, S., Backert, S. Role of the cag-pathogenicity island encoded type IV secretion system in Helicobacter pylori pathogenesis. FEBS J. 278 (8), 1190-1202 (2011).
- Fischer, W. Assembly and molecular mode of action of the Helicobacter pylori Cag type IV secretion apparatus. FEBS J. 278 (8), 1203-1212 (2011).
- Odenbreit, S., Puls, J., Sedlmaier, B., Gerland, E., Fischer, W., Haas, R. Translocation of Helicobacter pylori CagA into gastric epithelial cells by type IV secretion. Science. 287 (5457), 1497-1500 (2000).
- Bourzac, K., Guillemin, K. Helicobacter pylori-host cell interactions mediated by type IV secretion. Cell Microbiol. 7 (7), 911-919 (2005).
- Bronte-Tinkew, D. M., et al. Helicobacter pylori cytoxin-associated gene A activates the signal transducer and activator of transcription 3 pathway in vitro and in vivo. Cancer Res. 69 (2), 632-639 (2009).
- Johnson, E. M., Gaddy, J. A., Cover, T. L. Alterations in Helicobacter pylori triggered by contact with gastric epithelial cells. Front. Cell. Infect. Microbiol. (2), 17 (2012).
- Rohde, M., Puls, J., Buhrdorf, R., Fischer, W., Haas, R. A novel sheathed surface organelle of the Helicobacter pylori cag type IV secretion system. Mol. Microbiol. 49 (1), 219-234 (2003).
- Cover, T. L., Peek, R. M. Jr Diet, microbial virulence and Helicobacter pylori induced gastric cancer. Gut Microbes. 4 (6), 482-493 (2013).
- Queiroz, D. M., et al. Increased gastric IL-1β concentration and iron deficiency parameters in Helicobacter pylori infected children. PLoS One. 8 (2), 57420 (2013).
- Harris, P. R., et al. Helicobacter pylori-associated hypochlorhydria and development of iron deficiency. J. Clin. Pathol. 66 (4), 343-347 (2013).
- Noto, J. M., et al. Iron deficiency accelerates Helicobacter pylori-induced carcinogenesis in rodents and humans. J. Clin. Invest. 123 (1), 479-492 (2013).
- Tan, S., Noto, J. M., Romero-Gallo, J., Peek, R. M. Jr, Amieva, M. R. Helicobacter pylori perturbs iron trafficking in the epithelium to grow on the cell surface. PLoS Pathog. 7 (5), (2011).
- Danielli, A., Roncarati, D., Delany, I., Chiarini, V., Rappouli, R., Scarlato, V. In vivo dissection of the Helicobacter pylori Fur regulatory circuit by genome-wide location analysis. J. Bacteriol. 188 (13), 4654-4662 (2006).
- Pich, O. Q., Carpenter, B. M., Gilbreath, J. J., Merrell, D. S. Detailed analysis of Helicobacter pylori Fur-regulated promoters reveals a Fur box core sequence and novel Fur-regulated genes. Mol. Microbiol. 84 (5), 921-941 (2012).
- Cassat, J. E., Skaar, E. P.
- Nielubowicz, G. R., Mobley, H. L. Host-pathogen interactions in urinary tract infection. Nat. Rev. Urol. 7 (8), 430-441 (2010).
- Brickman, T. J., Cummings, C. A., Liew, S. Y., Relman, D. A., Armstrong, S. K. Transcriptional profiling of the iron starvation response in Bordatella pertussis provides new insights into siderophore utilization and virulence gene expression. J. Bacteriol. 193 (18), 4798-4812 (2011).
- Mobley, H. L. Helicobacter pylori factors associated with disease development. Gastroenterology. 113 (6), 21-28 (1997).
- Testerman, T. L., Conn, P. B., Mobley, H. L., McGee, D. L. Nutritional requirements and antibiotic resistance patterns of Helicobacter species in chemically defined. J. Clin. Microbiol. 44 (5), 1650-1658 (2006).
- Senkovich, O., Ceaser, S., McGee, D. J., Testerman, T. L. Unique host iron utilization mechanisms of Helicobacter pylori revealed with iron-deficient chemically defined media. Infect. Immun. 78 (5), 1841-1849 (2010).
- Shaffer, C. L., et al. Helicobacter pylori exploits a unique repertoire of type IV secretion system components for pilus assembly at the bacteria-host cell interface. PLoS Pathog. 7 (9), (2011).
- Barrozo, R. M., et al. Functional plasticity in the type IV secretion system of Helicobacter pylori. PLoS Pathog. 9 (2), (2013).
