Protocol
1. H. pylori Groei in diverse omstandigheden van de beschikbaarheid van ijzer en co-cultuur met Human maagepitheelcellen
- Selecteer H. pylori stam PMSS1 voor deze studies aangezien het een intact cag pathogeniteit eiland en drukt een soort werking IV secretiesysteem. Ook gebruik maken van een isogene kooi mutant (PMSSI Δ kooi) als negatieve controle. Groeien bacteriën op TSA-platen aangevuld met 5% schapenbloed (agarplaten) gedurende 24 uur bij 37 ° C in aanwezigheid van 5% CO2.
OPMERKING: Bereid reagentia en assembleren materialen zoals beschreven in de materialen en apparatuur Table. Eindconcentraties voor elk reagens wordt tussen haakjes weergegeven. - Schraap bacteriën uit de plaat met behulp van een steriel wattenstaafje en te enten in gewijzigde Brucella bouillon bereid uit componenten (zie materialen en apparatuur tabel) en aangevuld met cholesterol. Incubeer culturen overnacht bij 37° C in kamerlucht aangevuld met 5% CO2 met schudden bij 200 omwentelingen per minuut (rpm).
OPMERKING: Cholesterol wordt gebruikt in plaats van foetaal runderserum omdat dat serum complex; met talrijke bronnen van voedingsstoffen ijzer zoals heem die variabiliteit in resultaten veroorzaakt. - Op de dag van bacteriële kweken, zaad AGS menselijke maagepitheelcellen (ATCC CRL-1739) op met poly-D-lysine behandelde dekglaasjes in platen met 12 putjes (ongeveer 1 x 10 5 cellen per putje).
- De volgende dag, verdund bacterieculturen tot een OD600 van 0,3 in gewijzigde Brucella bouillon alleen of gesupplementeerd met 100 pM FeCl3, 200 uM dipyridyl (een synthetisch ijzercheleringsmiddel), of 200 uM dipyridyl plus 250 pM FeCl3. Incubeer deze kweken gedurende 4 uur bij 37 ° C in kamerlucht aangevuld met 5% CO2 met schudden bij 200 rpm.
- Centrifuge bacteriën op 1000 xg om cellen te verzamelen en bovenstaande vloeistoffen te verwijderen voordat resuspenderen in een gelijk volume verse gemodificeerde Brucella-bouillon aangevuld met cholesterol. Meet OD600 van de cultuur (OD600 = 1,0 = 5,5 x 10 8 cellen / ml) en bacteriën aan de epitheelcellen in een multipliciteit van infectie (MOI) van 20: 1. Voer seriële verdunningen en plaat bacteriële cellen op bloed agar platen om bacteriële levensvatbaarheid van de cellen te bepalen.
- Incubeer H. pylori en AGS menselijke maagepitheelcellen co-kweken gedurende 4 uur bij 37 ° C in aanwezigheid van 5% CO2 in rusttoestand voor het uitvoeren scanning elektronenmicroscopie (SEM) monstervoorbereiding.
2. SEM Monstervoorbereiding naar Visualiseer H. pylori Cag-T4SS Pili
- Verwijder H. pylori en AGS co-culturen uit de incubator en decanteren kweeksupernatans (sparen voor IL-8 ELISA). Voorzichtig driemaal met 0,05 M natriumcacodylaat (pH 7,4). Fix monsters gedurende 2-4 uur bij kamertemperatuur in een oplossing van 2,0% paraformaldehyde, 2,5% Glutaaraldehyde en 0,05 M natriumcacodylaat buffer. Na primaire fixatie, wassen monsters driemaal met 0,05 M natriumcacodylaat buffer.
- Voer secundaire fixatie met behulp van 0,1% osmiumtetroxide in 0,05 M natriumcacodylaat buffer in twee opeenvolgende 10 min fixatie stappen. Na de middelbare fixatie, wassen monsters drie keer met 0,05 M natriumcacodylaat buffer.
- Na primaire en secundaire fixatie, gedehydreerd monsters door opeenvolgende wassen met toenemende concentraties ethanol volgens tabel 1.
- Na ethanol uitdroging, voeren drie opeenvolgende wasbeurten van vloeibare kooldioxide. Dan droge monsters op een kritiek punt met behulp van een kritisch punt droger bij een temperatuur van 31,1 ° C en een druk van 1073 psi.
- Mount coverslips op aluminium SEM monster stubs en schilderen met een dunne lijn van colloïdaal zilver op het monster rand om passende aarding te realiseren en te voorkomen dat het opladen tijdens SEM beeldvorming.
- Coat monsters met 5 nm vangoud-palladium met een sputter jas machine monster secundaire elektron signaal en edge-effect te vergroten.
3. Imaging Parameters voor hoge resolutie SEM Analyses
- Bekijk monsters met een Field-Emission Gun Scanning Electron Microscope (FEG-SEM).
- Beeld in een hoog vacuüm modus bij een werkafstand van 5-10 mm.
- Stel de versnellingsspanning 5 kV.
- Stel spotgrootte naar 2-2,5.
- Kantel het monster tussen de 15-25 graden om een beter beeld van de gastheer-pathogeen-interface te bereiken.
- Prioriteit afbeelden bacteriën aanhanger van de randen van de epitheelcellen voor sterk vergrotende bekijken, aangezien deze gebieden van gastheer-pathogeen interactie aanrijking-pili bacteriën.
4. Statistische analyses te evalueren Pili Quantificaties
- Analyseer H. pylori Cag-T4SS pili behulp ImageJ software om aantal pili / cel evenals procent van de cellen te kwantificeren tentoonstellen van de piliated phenotype per onderstaande instructies.
- Open microfoto bestanden ImageJ software. Identificeer pili als structuren gevormd tussen de bacteriële cel en gastheercel met uniforme breedte (10-13 nm) en lengte (60-150 nm).
OPMERKING: De pilus structuur aanwezig WT bacteriestammen, maar afwezig isogene stammen zoals Δ kooi mutante stammen, die een inactivering in het gen coderend voor het ATPase belangrijkste krachten die type IV secretie pilusassemblage haven is. - Kalibreer het meetinstrument door een lijn te trekken met de rechte lijn gereedschap en vervolgens te klikken op de tab "Analyseren". Selecteer "Set Schaal" uit het dropdown menu en voer de vergroting bar waarde in het vakje "bekende afstand" en stel de lengte-eenheid om de juiste instelling (nm). Klik op "OK".
- Meet Cag-T4SS pili volgens de lineaire tool om te tekenen over de lengte of de breedte van de pilus en druk op "Ctrl-M" aan elke pilus meten. Houd u een dialoogvenster met de gemeten waarden. Noteer deze waarden of kopiëren en plakken in een spreadsheet programma.
- Gebruik de lengte en breedte parameters eerder 24, veronachtzaming kenmerken die niet in het profiel passen CAG-T4SS opgericht. Kwantificeren dan het aantal pili gebaseerd op waarden die binnen de 10-13 nm breedte en 60-150 nm lengte afgrenzingsprocedures.
- Analyseer de kwantificering van pili statistisch door tweezijdige Student t-test met behulp van GraphPad Prism software.
5. Optioneel: Evaluatie van IL-8 secretie te correleren met Pilus Production
- Middels supernatanten van Stap 2.1 Voer een IL-8 ELISA instructies van de fabrikant met de kit (zie Materialen en uitrusting tabel).
- Analyseer de IL-8 uitgescheiden door gastheercellen en bereken het percentage IL-8-inductie ten opzichte van WT PMSS1 alleen in medium gekweekt. Uitvoeren van statistische analyse met behulp van een tweezijdige Student t-test met behulp van GraphPad Prism zoftware.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
In dit rapport hebben we aangetoond dat de voorwaarden van wisselende beschikbaarheid van ijzer hebben de capaciteit om te moduleren H. pylori Cag-T4SS pilus biogenese bij de gastheer-pathogeen-interface. Wanneer gekweekt in medium alleen, H. pylori vormt een gemiddelde van 3 pili / cel. Toen H. pylori wordt gekweekt in ijzer afbrekende omstandigheden (de synthetische chelator dipyridyl) die sub-remmend bacteriegroei (figuur 1), de bacteriën talrijke Cag-T4SS pili (~ 7 pili / cel) wanneer samen gekweekt met menselijke maag cellen (Figuur 2). Omgekeerd, wanneer een exogene nutriënt ijzer is, de vorming van Cag-T4SS pili wordt onderdrukt (minder dan 1 pilus / cel in FE monster minder dan 1 pilus / cel in FE + DIP monster) (Figuur 2). Kwantificering van de pili bij de gastheer-pathogeen-interface laat zien dat in omstandigheden van ijzer beperking, H. pylori vertoont een 2-voudige toename in Cag-T4SS pili (p <0.000 1) en het percentage piliated cellen stijgt met 11% (p <0,05) vergeleken met cellen gekweekt in medium alleen (figuur 3). Interessant is dat de activiteit van de Cag-T4SS, zoals gemeten door gastheer IL-8 secretie, verbeterde 107% onder omstandigheden van ijzer beperking en onderdrukt 49% onder omstandigheden van overmaat beschikbaarheid ijzer vergeleken medium alleen (p = 0,03 en p < 0.001, respectievelijk), een resultaat dat de SEM gegevensdragers. Echter, pili afmetingen consistent blijven onder alle omstandigheden ijzerbeschikbaarheid (figuur 4). Voorts is ijzerbeschikbaarheid niet biogenese pili veranderen het oppervlak van een kooi mutant, evenmin wijzigt mogelijkheid deze isogene derivaat om een IL-8 reactie van gastheercellen te induceren, ondersteunen de hypothese dat de structuren aangetoond, in feite, CAG-T4SS en niet een andere niet-verbonden oppervlak functie.
n "src =" / files / ftp_upload / 52122 / 52122fig1highres.jpg "width =" 500 "/>
Figuur 1:. Bacteriële levensvatbaarheid bepaald in verschillende omstandigheden van de beschikbaarheid van ijzer H. pylori werd gekweekt in gemodificeerd Brucella bouillon alleen (alleen medium) of aangevuld met 100 pM FeCl3 (FE), 200 uM dipyridyl (DIP), of 200 uM dipyridyl plus 250 pM FeCl3 (FE + DIP). Bacteriën werden serieel verdund en uitgeplaat op bacteriologische medium voor incubatie gedurende 2 dagen bij 37 ° C in aanwezigheid van 5% CO2. Kolonies werden geteld en kolonievormende eenheden / ml (CFU / ml) werden berekend. Balken geven de gemiddelde van drie onafhankelijke experimenten +/- SEM. Behandeling met DIP, FE, of FE + DIP geen significante invloed heeft bacteriële levensvatbaarheid.
Figuur 2: High rRESOLUTIE scanning elektronenmicroscopie analyse van H. pylori Cag-T4SS pili. Bacteriën werden gekweekt in A) alleen medium, b) medium aangevuld met 100 pM FeCl3, C) medium aangevuld met 200 uM dipyridyl, of D) medium aangevuld met 200 uM dipyridyl plus 250 pM FeCl3 voor co-kweek met AGS menselijke maag cellen. Pijlen geven Cag-T4SS pili gevormd bij de gastheer-pathogeen-interface. Monsters werden geanalyseerd door hoge resolutie scanning elektronenmicroscopie Cag-T4SS biogenese evalueren. Voorwaarden van lage beschikbaarheid van ijzer verhogen de prevalentie CAG-T4SS pilus formatie, terwijl de toestand van te grote beschikbare voedingsstoffen ijzer onderdrukken Cag-T4SS pilus formatie.
Figuur 3: Kwantificering van pili / cel en procent piliated cellen gekweekt in diversevoorwaarden van de beschikbaarheid van ijzer. Bacteriën werden gekweekt in gemodificeerd Brucella bouillon alleen (medium alleen) of medium aangevuld met 100 pM FeCl3 (FE), 200 uM dipyridyl (DIP), of 200 uM dipyridyl plus 250 pM FeCl3 (FE + DIP) voor co- cultuur menselijke maag epitheelcellen. Monsters werden geanalyseerd door hoge resolutie scanning elektronenmicroscopie en pili werden geteld met behulp ImageJ software. A) Scatterplot pili per cel (* p <0,0001 in vergelijking met medium alleen) en B) staafdiagram procent piliated cellen (* p <0,05 vergeleken met alleen medium) afgeleid 60-112 cellen per kweekomstandigheid afgeleid van 3 afzonderlijke biologische experimenten.
Figuur 4: Pilus afmetingen gemeten van cellen gekweekt in verschillende omstandigheden van de beschikbaarheid van ijzer. Bacteria werden gekweekt in gemodificeerd Brucella bouillon alleen (medium alleen) of medium aangevuld met 100 pM FeCl3 (FE), 200 uM dipyridyl (DIP), of 200 uM dipyridyl plus 250 pM FeCl3 (FE + DIP) voor co- cultuur menselijke maag epitheelcellen. Monsters werden geanalyseerd door hoge resolutie scanning elektronenmicroscopie en pili afmetingen werden gemeten met ImageJ software. A) Pilus breedte is gemiddeld 13,1 +/- 2,4 nm onder alle omstandigheden. B) Pilus lengte is gemiddeld 75,8 +/- 16,0 nm onder alle omstandigheden. Geen significant verschil in pilus dimensies zijn te zien in de verschillende omstandigheden van de beschikbaarheid van ijzer.
Aanvullende Figuur 1: Hoge resolutie scanning elektronenmicroscopie analyses van H. pylori kooi mutant in verschillende omstandigheden van de beschikbaarheid van ijzer. Bacteriën werden gekweekt in A) medium aangevuld met 100 pM FeCl3, B) medium aangevuld met 200 uM dipyridyl (DIP) of C) medium aangevuld met 200 uM dipyridyl (DIP) plus 250 pM FeCl3 voor co-kweek met AGS menselijke maag cellen. Monsters werden geanalyseerd door hoge resolutie scanning elektronenmicroscopie Cag-T4SS biogenese evalueren. Voorwaarden van lage of hoge strijken niet moduleren elke Cag-onafhankelijke pilus biogenese, de ondersteuning van de hypothese dat de structuren gevisualiseerd in figuur 2 zijn Cag-T4SS pili.
Bijkomende Figuur 2: ELISA-analyse van gastheer IL-8 secretie in reactie op bacteriën gekweekt in verschillende omstandigheden ijzerbeschikbaarheid. Wild-type (witte balken) of kooi mutant (grijze balken) bacteriën werden gekweekt in gewijzigde Brucella bouillon alleen (alleen medium), of medium aangevuld met 100 pM FeCl3 (FE), 200 uM dipyridyl (DIP), of 200 uM dipyridyl plus 250 uM FeCl3 (FE + DIP) voorafgaand aan co-kweken met menselijke maag epitheelcellen. Iron beperking resulteert in een verhoogde IL-8, Een host-reactie die afhankelijk Cag-T4SS activiteit is. Balken geven de gemiddelde +/- SEM, afgeleid van 3 afzonderlijke biologische experimenten. (* P <0,05 vergeleken met PMSS1 alleen in medium gekweekt).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
IJzer is een essentieel micronutriënt voor de meeste levensvormen, waaronder bacteriële pathogenen. In een poging om de levensvatbaarheid van binnendringende micro-organismen te beperken, gewervelde gastheren afzonderen voedingsstof ijzer in een proces dat bekend staat als "nutritionele immuniteit" 18. In reactie daarop bacteriële pathogenen ontwikkeld ijzer gebruiken als een globale signaalmolecule hun omgeving waarnemen en regelen de uitwerking van virulentie functies zoals ijzer acquisitie systemen, toxinen, toxine en uitscheidingsmachinerie 19,20.
H. pylori vereist micronutriënten zoals ijzer, zink en magnesium te groeien 22 en kunnen alternatieve ijzer bronnen zoals heem, hemoglobine, transferrine gebruiken en lactoferrine 23. H. pylori, zoals de meeste succesvolle ziekteverwekkers, heeft een breed repertoire van virulentiefactoren geëvolueerd te helpen bij het vangen voedingsstof ijzer uit de gastheer 21. Een virulentiefactor, CagA, de effector molecule van de Cag-T4SS, is betrokken bij omleiding transferrine uit de basolaterale zijde van gepolariseerde cellen aan het apicale oppervlak waar het gemakkelijk kan worden gebruikt door de bacteriecellen als voedingsstof ijzerbron en bevorderen replicatie 15. Het lijkt dus een intuïtieve evolutionaire strategie om de afscheiding van CagA bevorderen in omstandigheden van lage beschikbaarheid van ijzer.
H. pylori Cag-T4SS is een belangrijke bacteriële organel, door de pro-inflammatoire responsen van de gastheercel het opwekt. De effecten van de Cag-T4SS zijn goed gekarakteriseerd in zowel co-culturen en diermodellen van infectie. Studies hebben echter de macromoleculaire structuur en samenstelling van dit toxine secretiesysteem gehinderd door het gebrek aan hoge-resolutie beeldvormingsprotocollen. Onze eerder gepubliceerde rapporten bestuderen CAG-T4SS hebben gemeld een gemiddelde van vier Cag-T4SS pili per bacteriële cel met een hoge resolutie elektronenmicroscopie analyses 24. De verbeterde methode verschafteen robuuste beeldvormingstechniek de Cag-T4SS visualiseren met een cultuur techniek die de productie van deze functie op het oppervlak van de bacteriële cel bevordert. Benutting van cultuur technieken in combinatie met een hoge resolutie veld-emissie pistool scanning elektronenmicroscoop is van cruciaal belang voor deze imaging protocol. Tweevoudige verrijking van de Cag-T4SS oppervlakte kenmerk een significante verhoging van onderzoekers geïnteresseerd in het uitvoeren immunohistochemische analyses zoals immunofluorescentie technieken of immunoprecipitatie verder karakteriseren subcellulaire locatie of samenstelling van de Cag-T4SS. Zodra de hoge-resolutie elektronenmicroscopie beeldvorming van de Cag-T4SS wordt beheerst, is het ook mogelijk om andere applicaties, zoals immunogoud labeling ontwikkelen, de plaats van bacteriële eiwitten bepalen ten opzichte van de Cag-T4SS pilus 25.
Een beperking van onze techniek is dat de onderzoeker nog beperkt tot using een co-cultuur systeem voor visualisatie van CAG-T4SS. In één veld, maar een subset van H. pylori onder normale kweekomstandigheden vormen deze structuren (ongeveer 50-70 procent, zie figuur 3 B paneel). Zo talrijk cellen in een veld wordt niet piliated. Het is niet bekend waarom deze subpopulaties bestaan in dezelfde plaats, maar deze cellen zijn altijd verwerkt in zowel de kwantificering pili / cel en het percentage cellen met pili op het oppervlak. Omdat de Cag-T4SS wordt alleen waargenomen bij de gastheer-bacteriële-interface, de primaire en secundaire fixatie stappen in de SEM monstervoorbereiding cruciaal zijn voor het behoud van zowel eiwitachtige structuren en membranen van eukaryote en prokaryote cellen. Echter, over-fixatie optreden als fixatie stappen langer dan worden uitgevoerd geschetst, of de oplossingen niet vers bereid. Als over-fixatie optreedt, zal monsters een stenige uitstraling hebben wanneer bekeken onder SEM en CAG-T4SS zal worden gemaskeerd door dit. Om troubleshoot Herhaal de SEM monstervoorbereiding met minder geconcentreerd fixeermiddelen en / of minder tijd geïncubeerd in aanwezigheid van het fixeermiddel.
De co-kweeksysteem maakt ook biochemische eigenschappen (zoals massaspectrometrie analyses) lastig vanwege de besmetting van grote hoeveelheden gastheereiwitten. Een volledig begrip van de moleculaire mechanismen die de productie van deze bacteriële secretie systeem reguleren kan uiteindelijk leiden tot nieuwe technieken die Cag-T4SS pilus vorming activeert in de afwezigheid van gastheercellen. Dit zou sterk verbeteren van de isolatie en zuivering technieken voor biochemische assays.
Tot slot vermelden wij dat de toestanden van beperkt de beschikbaarheid van ijzer leiden tot een verhoogde productie van H. pylori Cag-T4SS die kunnen worden gevisualiseerd door een hoge resolutie scanning elektronenmicroscopie technieken. We melden ook de ijzer-afhankelijke onderdrukking van dit oppervlak functie bij de gastheer-pathogeen interface. Deze test kan worden geoptimaliseerd en gebruikt voor talrijke bacteriële pathogenen die ijzer gereguleerde toxine-afscheidingen vormen en is breed toepasbaar op een verscheidenheid van gastheer-microbe interacties.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Modified brucella broth | |||
| Peptone from casein (10 g/L) | Sigma | 70172 | |
| Peptic digest of animal tissue (10 g/L) | Sigma | 70174 | |
| Yeast extract (2 g/L) | Sigma | 92144 | |
| Dextrose (1 g/L) | Sigma | D9434 | |
| Sodium chloride (5 g/L) | Thermo Fisher | S271-10 | |
| Cholesterol (250X) (4 ml/L) | Life Technologies | 12531018 | |
| Ferric chloride (100 or 250 uM) | Sigma | 157740-100G | |
| Dipyridyl (200 uM) | Sigma | D216305-100G | |
| Modified RPMI | |||
| RPMI+HEPES (1X) | Life Technologies | 22400-121 | |
| Fetal bovine serum (100 ml/L) | Life Technologies | 10438-026 | |
| Electron Microscopy Preparation | |||
| Paraformaldehyde (2.0% aqueous) | Electron Microscopy Sciences | 15713 | |
| Gluteraldehyde (2.5% aqueous) | Electron Microscopy Sciences | 16220 | |
| Sodium cacodylate (0.05 M) | Electron Microscopy Sciences | 12300 | |
| Osmium tetroxide (0.1% aqueous) | Electron Microscopy Sciences | 19150 | |
| Ethanol (absolute) | Sigma | E7023 | |
| Colloidal silver paint | Electron Microscopy Sciences | 12630 | |
| SEM sample stubs | Electron Microscopy Sciences | 75220 | |
| Coverslips | Thermo Fisher | 08-774-383 | |
| IL-8 Secretion Evaluation | |||
| Quantikine IL-8 ELISA kit | R&D Systems | D8000C |
References
- Cover, T. L., Blaser, M. J. Helicobacter pylori in health and disease. Gastroenterology. (6), 1863-1873 (2009).
- Sycuro, L. K., et al. Peptidoglycan crosslinking relaxation promotes Helicobacter pylori's helical shape and stomach colonization. Cell. 141 (5), 822-833 (2010).
- Kodaman, N., et al. Human and Helicobacter pylori coevolution shapes the risk of gastric disease. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 111 (4), 1455-1460 (2014).
- Tegtmeyer, N., Wessler, S., Backert, S. Role of the cag-pathogenicity island encoded type IV secretion system in Helicobacter pylori pathogenesis. FEBS J. 278 (8), 1190-1202 (2011).
- Fischer, W. Assembly and molecular mode of action of the Helicobacter pylori Cag type IV secretion apparatus. FEBS J. 278 (8), 1203-1212 (2011).
- Odenbreit, S., Puls, J., Sedlmaier, B., Gerland, E., Fischer, W., Haas, R. Translocation of Helicobacter pylori CagA into gastric epithelial cells by type IV secretion. Science. 287 (5457), 1497-1500 (2000).
- Bourzac, K., Guillemin, K. Helicobacter pylori-host cell interactions mediated by type IV secretion. Cell Microbiol. 7 (7), 911-919 (2005).
- Bronte-Tinkew, D. M., et al. Helicobacter pylori cytoxin-associated gene A activates the signal transducer and activator of transcription 3 pathway in vitro and in vivo. Cancer Res. 69 (2), 632-639 (2009).
- Johnson, E. M., Gaddy, J. A., Cover, T. L. Alterations in Helicobacter pylori triggered by contact with gastric epithelial cells. Front. Cell. Infect. Microbiol. (2), 17 (2012).
- Rohde, M., Puls, J., Buhrdorf, R., Fischer, W., Haas, R. A novel sheathed surface organelle of the Helicobacter pylori cag type IV secretion system. Mol. Microbiol. 49 (1), 219-234 (2003).
- Cover, T. L., Peek, R. M. Jr Diet, microbial virulence and Helicobacter pylori induced gastric cancer. Gut Microbes. 4 (6), 482-493 (2013).
- Queiroz, D. M., et al. Increased gastric IL-1β concentration and iron deficiency parameters in Helicobacter pylori infected children. PLoS One. 8 (2), 57420 (2013).
- Harris, P. R., et al. Helicobacter pylori-associated hypochlorhydria and development of iron deficiency. J. Clin. Pathol. 66 (4), 343-347 (2013).
- Noto, J. M., et al. Iron deficiency accelerates Helicobacter pylori-induced carcinogenesis in rodents and humans. J. Clin. Invest. 123 (1), 479-492 (2013).
- Tan, S., Noto, J. M., Romero-Gallo, J., Peek, R. M. Jr, Amieva, M. R. Helicobacter pylori perturbs iron trafficking in the epithelium to grow on the cell surface. PLoS Pathog. 7 (5), (2011).
- Danielli, A., Roncarati, D., Delany, I., Chiarini, V., Rappouli, R., Scarlato, V. In vivo dissection of the Helicobacter pylori Fur regulatory circuit by genome-wide location analysis. J. Bacteriol. 188 (13), 4654-4662 (2006).
- Pich, O. Q., Carpenter, B. M., Gilbreath, J. J., Merrell, D. S. Detailed analysis of Helicobacter pylori Fur-regulated promoters reveals a Fur box core sequence and novel Fur-regulated genes. Mol. Microbiol. 84 (5), 921-941 (2012).
- Cassat, J. E., Skaar, E. P.
- Nielubowicz, G. R., Mobley, H. L. Host-pathogen interactions in urinary tract infection. Nat. Rev. Urol. 7 (8), 430-441 (2010).
- Brickman, T. J., Cummings, C. A., Liew, S. Y., Relman, D. A., Armstrong, S. K. Transcriptional profiling of the iron starvation response in Bordatella pertussis provides new insights into siderophore utilization and virulence gene expression. J. Bacteriol. 193 (18), 4798-4812 (2011).
- Mobley, H. L. Helicobacter pylori factors associated with disease development. Gastroenterology. 113 (6), 21-28 (1997).
- Testerman, T. L., Conn, P. B., Mobley, H. L., McGee, D. L. Nutritional requirements and antibiotic resistance patterns of Helicobacter species in chemically defined. J. Clin. Microbiol. 44 (5), 1650-1658 (2006).
- Senkovich, O., Ceaser, S., McGee, D. J., Testerman, T. L. Unique host iron utilization mechanisms of Helicobacter pylori revealed with iron-deficient chemically defined media. Infect. Immun. 78 (5), 1841-1849 (2010).
- Shaffer, C. L., et al. Helicobacter pylori exploits a unique repertoire of type IV secretion system components for pilus assembly at the bacteria-host cell interface. PLoS Pathog. 7 (9), (2011).
- Barrozo, R. M., et al. Functional plasticity in the type IV secretion system of Helicobacter pylori. PLoS Pathog. 9 (2), (2013).
