Abstract
गिरफ्तारी या सुनवाई हानि रिवर्स करने के लिए वायरस की मध्यस्थता जीन स्थानांतरण के उपयोग में जांच काफी हद तक परिधीय श्रवण प्रणाली में चला गया है। कुछ अध्ययनों से केंद्रीय श्रवण प्रणाली के लिए जीन स्थानांतरण की जांच की है। श्रवण मार्ग के दूसरे क्रम न्यूरॉन्स होते हैं जो brainstem के पृष्ठीय कर्णावत नाभिक (DCN), जीन स्थानांतरण के लिए एक संभावित साइट है। इस प्रोटोकॉल में, एक पीछे खात दृष्टिकोण के माध्यम से murine DCN के प्रत्यक्ष और अधिक से अधिक लोगों तक पहुंचाने के लिए एक तकनीक का प्रदर्शन किया जाता है। यह दृष्टिकोण या तो तीव्र या अस्तित्व सर्जरी के लिए अनुमति देता है। DCN के प्रत्यक्ष दृश्य के बाद, प्रयोगों की एक मेजबान एक नीली बत्ती लेजर करने के लिए मिलकर एक ऑप्टिकल फाइबर से कर्णावत नाभिक और बाद में उत्तेजना में opsins इंजेक्शन सहित संभव हो रहे हैं। इस तरह बिजली की उत्तेजना और तंत्रिका इंजेक्टर ट्रेसिंग के रूप में अन्य Neurophysiology प्रयोगों भी संभव है। Visualiza का स्तरtion और उत्तेजना की अवधि में प्राप्त प्रयोगों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए इस दृष्टिकोण लागू कर सकते हैं।
Protocol
नोट: सभी प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं के सार्वजनिक स्वास्थ्य सेवा इंसानियत की देखभाल पर नीति और प्रयोगशाला पशुओं के उपयोग, सहित राष्ट्रीय पशु की देखभाल के दिशा निर्देशों का पालन करें जो मैसाचुसेट्स आँख का पशु की देखभाल और उपयोग समिति और कान दुर्बलता और हार्वर्ड मेडिकल स्कूल, के अनुसार में प्रदर्शन कर रहे हैं ILAR गाइड, और पशु कल्याण अधिनियम। प्रायोगिक प्रक्रिया बाईं DCN की विस्तार से लोगों तक पहुंचाने के नीचे सूचीबद्ध। अस्तित्व सर्जरी प्रदर्शन करते हुए बाँझ उपकरणों का प्रयोग करें।
1. प्राथमिक craniotomy और पृष्ठीय cochlear नाभिक एक्सपोजर
- बेहोशी
- एक intraperitoneal प्रशासन के माध्यम से xylazine 20 मिलीग्राम / किग्रा और ketamine 100 मिलीग्राम / किलो के साथ 18-24 ग्राम वजन 8-12 सप्ताह, वृद्ध एक माउस, anesthetize। निगरानी हृदय गति, श्वसन दर, साथ ही पैर की अंगुली चुटकी वापसी पलटा द्वारा उचित संज्ञाहरण की पुष्टि करें। आंखों पर रखें पशु चिकित्सक मरहम संज्ञाहरण के तहत जबकि सूखापन को रोकने के लिए। एक बार पर्याप्त रूप से संज्ञाहरण के तहत, दाढ़ी बाल overlying टीवह शल्य साइट के लिए अबाधित पहुंच प्रदान करने के लिए खोपड़ी।
- सर्जिकल स्थिति
- एक थूथन दबाना द्वारा जगह में आयोजित एक छोटे जानवर stereotaxic धारक, में सुरक्षित रूप से माउस रखें।
- थूथन दबाना पूरी तरह से माउस के सिर को स्थिर करने के लिए पर्याप्त श्वसन लेकिन काफी तंग के लिए अनुमति देने के लिए पर्याप्त ढीला है कि सुनिश्चित करें। माउस सिर ढीला है, तो जानवर प्रक्रिया के craniotomy भाग के दौरान सिर धारक से बाहर गिर जाने की संभावना है।
- दिल की दर की निगरानी के लिए अनुमति देता है जो मानक फैशन में श्रवण brainstem प्रत्यारोपण इलेक्ट्रोड रखें। श्वसन दर दृश्य द्वारा निगरानी की जानी चाहिए। सामान्य हृदय की दर और श्वसन दर माउस की उम्र के आधार पर अलग अलग होंगे कि ध्यान दें।
- एक homeothermic हीटिंग कंबल पर नियुक्ति के माध्यम से एक थर्मामीटर रख दिया गया है और euthermia सुनिश्चित किया जाता है।
- त्वचा चीरा और खोपड़ी के interparietal और पश्चकपाल हड्डियों के जोखिम
- एक microsc के तहतope, त्वचा के माध्यम से एक ऊर्ध्वाधर चीरा सीधे पंख के बीच, midline पर शुरू करने, और डब की दुम भाग के लिए बढ़ा देती है। Midline के त्वचा चीरा के बाद, पार्श्व त्वचा विस्थापित। खोपड़ी के लिए छोड़ दिया पीछे पहलू को कवर मांसपेशियों कल्पना।
- एक स्केलपेल या आईरिस कैंची के साथ उनके संबंधित हड्डियों के लिए मांसपेशियों संलग्नक के disarticulation द्वारा पेशी छोड़ दिया पार्श्विका, interparietal overlying, और खोपड़ी के पश्चकपाल हड्डियों निकालें। कटौती पेशी किनारों के साथ खून बह रहा है की एक छोटी सी डिग्री को ध्यान से देखें। 10-15 सेकंड के लिए एक कपास इत्तला दे दी applicator के साथ कोमल दबाव से इस को कम।
- Craniotomy overlying cochlear नाभिक
- बाण के समान और लैम्ब्डा टांके लाइनों (चित्रा 1, बाएं पैनल) सहित प्रासंगिक सिवनी लाइनों, पहचानें।
- Rongeurs का प्रयोग, लैम्ब्डा सीवन लाइन के लिए midline के लिए छोड़ दिया interparietal की हड्डी पर एक craniotomy, ~ 2 मिमी दुम बनाते हैं। इस क्षेत्र DCN overlies।
- Followinजी craniotomy, सेरिबैलम overlies कि ड्यूरा की एक पतली परत निरीक्षण करते हैं। एक स्केलपेल ब्लेड का प्रयोग, ड्यूरा हटा दें। (चित्रा 1, मध्यम पैनल)।
नोट: ड्यूरा का हटाया रक्तस्राव के एक छोटे से डिग्री का कारण बन सकता है। ड्यूरा दूर करने के लिए स्केलपेल ब्लेड का उपयोग कर की यह प्रक्रिया brainstem सतह और DCN की अस्पष्ट पहचान पर पूल होगा जो सेरिबैलम आकांक्षा के दौरान खून की कमी की मात्रा को कम करने का इरादा है। माउस की कुल रक्त की मात्रा 15% से अधिक> ~ 1.5 मिलीग्राम से अधिक नहीं होना चाहिए है। खून बह रहा है इस राशि से अधिक है, माउस तरल पदार्थ पूरकता के साथ साथ प्रदान की जानी चाहिए। - कपास टिप applicator के साथ सेरिबैलम overlaying coagulated खून निकालें। वैकल्पिक रूप से, धीरे खून खून को साफ करने के लिए सेरिबैलम पर एक दंत बिंदु का उपयोग खारा ड्रिप।
- अनुमस्तिष्क आकांक्षा
- DCN विज़ है जब तक एक 5 फ्रेंच सक्शन का प्रयोग, DCN overlying बाईं सेरिबैलम के पार्श्व-अधिकांश भाग महाप्राणयौन (चित्रा 1, सही पैनल)। बाएं सेरिबैलम के लगभग 1/4 1/3 के लिए निकालें। DCN से सटे मुख्य मील का पत्थर बेहतर अर्धवृत्ताकार नहर का कलसा है।
नोट: सेरिबैलम की आकांक्षा प्रोटोकॉल का महत्वपूर्ण कदम है। यह खून बह रहा हो जाएगा के रूप में यह चूषण के कई गुजरता के साथ एक एकल प्रयास में होता है और यदि नहीं, तो सेरिबैलम के निर्देशित आकांक्षा सबसे सफलतापूर्वक किया जाता है। आकांक्षा में सहायता करने के लिए, सेरिबैलम की सतह से थोड़ा बाहर का होगा, जो चीन की उम्मीद है और गहराई में माइक्रोस्कोप के फोकल हवाई जहाज़ की स्थापना की। सीएन को फोकल हवाई जहाज़ की स्थापना दृश्य में सुधार और एक तेज छवि को सुनिश्चित करेगा। - DCN पर के बाद आकांक्षा, आगे खून बह रहा है, मस्तिष्कमेरु द्रव (सीएसएफ) का निर्माण हुआ है, और सेरिबैलम विस्थापन की उम्मीद कर रहे हैं। रक्त जमावट को रोकने के लिए जल्दी से craniotomy में बाँझ खारा के 0.5 सीसी टपकाना। एक दंत बिंदु और शोषण के साथ कोमल dabbing का एक संयोजन है तो हो सकता हैDCN के प्रत्यक्ष दृश्य के लिए एक रास्ता दूर स्पष्ट करने के लिए प्रयोग किया जाता है। सीधे DCN की सतह से संपर्क न करें।
- DCN विज़ है जब तक एक 5 फ्रेंच सक्शन का प्रयोग, DCN overlying बाईं सेरिबैलम के पार्श्व-अधिकांश भाग महाप्राणयौन (चित्रा 1, सही पैनल)। बाएं सेरिबैलम के लगभग 1/4 1/3 के लिए निकालें। DCN से सटे मुख्य मील का पत्थर बेहतर अर्धवृत्ताकार नहर का कलसा है।
वायरस की मध्यस्थता जीन स्थानांतरण और सर्जिकल रिकवरी के लिए 2. दबाव Microinjection
- DCN overlying रक्त और सीएसएफ के लिए स्वतंत्र है और स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहा है, के बाद एक दो मिनट की अवधि में एक 10 μl हैमिल्टन सिरिंज का उपयोग DCN में दबाव microinjections बनाते हैं।
- टिप नहीं रह DCN की सतह के नीचे दिखाई दे रहा है, जब तक एक micromanipulator के साथ सुई का परिचय।
- अनुकूलतम प्रदर्शन के लिए, कुंद आघात को कम करने और एक पतली है जो DCN भीतर इंजेक्शन की मात्रा, स्थानीय बनाना, 45 डिग्री के रूप में, एक उथले उठाव के साथ इस तरह के एक 33 या 34 गेज सुई (34 गेज सुई के साथ एक gastight सिरिंज का उपयोग करें) का उपयोग करें और उथले brainstem संरचना (<300 माइक्रोन मोटी)।
नोट: अन्य microinjection के उपकरणों का उपयोग किया आधारित हो सकता है। आदर्श रूप में, इंजेक्शन साधन कुछ मामूली बेन के लिए अनुमति देने के लिए लचीला होना चाहिएडी, अगर सीधे DCN को लक्षित करने की जरूरत है। माउस के कारण श्वसन के लिए प्रक्रिया के दौरान थोड़ा चाल के रूप में इसके अलावा, साधन आंदोलन की मामूली मात्रा का सामना करने के लिए पर्याप्त मजबूत किया जाना चाहिए।
3. सर्जिकल रिकवरी
- तुरंत निम्नलिखित इंजेक्शन, त्वचा को फिर से अनुमानित हैं और माउस मानक वसूली प्रक्रिया के अनुसार ठीक करने के लिए अनुमति देते हैं। शेष सेरिबैलम और निशान ऊतक सेरिबैलम की आकांक्षा के कारण गुहा में भर जाएगा। पर्याप्त चेतना sternal अवलंबन बनाए रखने के लिए आ गया है जब तक लगातार जानवरों की निगरानी। दिल की धड़कन, सांस की दर, के रूप में अच्छी तरह के रूप में फ़ीड करने की क्षमता की निगरानी करें।
नोट: पूरी तरह से ठीक है जब तक कोई पशु शल्य चिकित्सा आया है कि अन्य जानवरों के साथ एक पिंजरे में लौट रहा है। - एक माउस के बाद operatively हलकों में चलने के लिए शुरू होता है, तो यह संभावना एक मुश्किल समय खिला होता है (<मामलों के 5%), त्वचा चीरा के बंद होने के बाद आम तौर पर 2-4 घंटा, तुरंत, माउस बलिदान। टीअपने पक्ष प्रभाव के कारण सेरिबैलम की आकांक्षा की संभावना है। पशु postoperatively के दर्द के लिए निगरानी की जानी चाहिए, और उचित नशीले पदार्थों संस्थागत मानकों के आधार पर पशु आराम सुनिश्चित करने के लिए दी जानी चाहिए। एंटीबायोटिक्स, आवश्यक हो संक्रमण की अगर सबूत हो सकता है।
4. माध्यमिक craniotomy और cochlear नाभिक एक्सपोजर
- चिकित्सा और वायरस की मध्यस्थता जीन स्थानांतरण ऊष्मायन के 2-4 सप्ताह के बाद, एक पहले से इंजेक्ट माउस और दोहराने कदम 1.1-1.5 इष्टतम ऊष्मायन समय हस्तांतरित जीन के प्रकार के साथ बदलता रहता है फिर से anesthetize।
- चिमटी, स्केलपेल, और Rongeurs का एक संयोजन द्वारा craniotomy साइट पर निशान ऊतक निकालें।
- Craniotomy visualizing के बाद, DCN overlying सेरिबैलम और निशान ऊतक शेष का एक संयोजन की पहचान। Overlying सेरिबैलम / (पिछले अनुमस्तिष्क आकांक्षा के समान) निशान ऊतक महाप्राण के लिए एक 5 फ्रेंच सक्शन का प्रयोग करें।
- आकांक्षा के बाद, आगे खून बह रहा है, सीएसएफ ख की उम्मीदuild-अप, और सेरिबैलम के शेष बिट्स। जल्दी से रक्त जमावट को रोकने के लिए craniotomy में खारा परिचय। DCN के प्रत्यक्ष दृश्य के लिए रास्ता साफ करने के कोमल दंत बिंदु dabbing और शोषण का एक संयोजन का उपयोग करें।
- DCN की सतह पर गौर करें। DCN अब पहुँचा जा सकता है के रूप में optogenetics आधारित फिजियोलॉजी प्रयोगों प्रदर्शन। एक optogenetics आधारित प्रयोग ड्राइव करने के लिए, एक ऑप्टिकल फाइबर (चित्रा 2) के साथ उदाहरण के लिए एक प्रकाश प्रोत्साहन, परिचय।
5. प्रोटोकॉल
- प्रयोगों के समापन के बाद, Ketamine की अधिक मात्रा के साथ माउस euthanize। 4% paraformaldehyde के द्वारा पीछा सामान्य नमक के साथ माउस छिड़कना।
- 2 घंटे के लिए खोपड़ी और बाद तय से brainstem निकालें। 24-48 घंटे के लिए 30% sucrose में brainstem Cryoprotect। धारा 60 माइक्रोन वर्गों का उपयोग करने के लिए एक मानक cryostat का उपयोग brainstem।
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Representative Results
आंशिक अनुमस्तिष्क आकांक्षा cochlear नाभिक तक पहुंच दर्शाता
खोपड़ी overlying त्वचा और मांसपेशियों में इस तरह के राज्याभिषेक और lamda सिवनी लाइनों के रूप में, खोपड़ी की सतह स्थलों, हटा रहे हैं के बाद, craniotomy की अनुमानित स्थानीयकरण प्रदर्शित करता है। Rongeurs साथ craniotomy के बाद, सेरिबैलम कल्पना की है। सेरिबैलम के छोटे से हिस्से की सावधानी से आकांक्षा तो इंजेक्ट किया जा सकता है, जो चीन, चित्रा (1) के दृश्य को दर्शाता है।
ब्लू लाइट लेजर के साथ उत्तेजना के लिए माध्यमिक cochlear नाभिक एक्सपोजर
DCN, एक opsin के साथ जीन स्थानांतरण, और ऊष्मायन अवधि की प्रारंभिक जोखिम के बाद, DCN तो एक नीले प्रकाश लेजर द्वारा प्रेरित किया जा सकता है। ऑप्टिकल उत्तेजना के लिए DCN की सतह उजागर माध्यमिक craniotomy प्राथमिक craniotomy (Supp। मूवी 1) के लिए तकनीकी दृष्टिकोण में इसी तरह की है। DCN, किया जा रहा हैमोटाई में कम से कम 300 माइक्रोन है कि एक सतह की संरचना। प्रयोगात्मक murine तैयारी 6 घंटा अप करने के लिए व्यवहार्य बनी हुई है।
चित्रा 1: आंशिक अनुमस्तिष्क आकांक्षा पृष्ठीय कर्णावत नाभिक के लिए उपयोग को दर्शाता है। वाम पैनल: माउस धारक में रखा गया है, के बाद एक चीरा गर्दन के कोमल ऊतक को खोपड़ी के पीछे पहलू के साथ त्वचा और कोमल ऊतकों के माध्यम से खड़ी किया जाता है। त्वचा lateralized है, और राज्याभिषेक सीवन लाइन overlying पेशी निकाल दिया जाता है मध्यम पैनल: क। craniotomy तो हड्डी Rongeurs साथ सेरिबैलम और अंतर्निहित पृष्ठीय कर्णावत नाभिक के क्षेत्र में पूरा हो गया है राइट पैनल:। पृष्ठीय कर्णावत नाभिक के प्रदर्शन के लिए एक 5 फ्रेंच चूषण तो सेरिबैलम महाप्राण के लिए प्रयोग किया जाता हैपृष्ठीय कर्णावत नाभिक कल्पना है जब तक कर्णावत नाभिक overlying।
चित्रा 2: नीले प्रकाश लेजर के साथ उत्तेजना के लिए कर्णावत नाभिक की सतह का एक्सपोजर एक ऑप्टिकली पैदा श्रवण brainstem प्रतिक्रिया का उत्पादन करने के लिए पृष्ठीय कर्णावत नाभिक की सतह पर एक नीले प्रकाश लेजर के लिए युग्मित ऑप्टिकल फाइबर की नियुक्ति के ऑप्टिकल उत्तेजना के लिए अनुमति देता है। opsin संक्रमित पृष्ठीय कोक्लीअ नाभिक। नीली पट्टी = 400 माइक्रोन।
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Discussion
इस पत्र में केंद्रीय श्रवण प्रणाली के हेरफेर के लिए murine मॉडल में DCN के प्रत्यक्ष दृश्य की तकनीक का वर्णन है। प्रत्यक्ष दृश्य की उल्लिखित दृष्टिकोण stereotaxic दृष्टिकोण हैं जो मुख्य वैकल्पिक अधिक महत्वपूर्ण लाभ प्रदान करता है। Stereotaxic दृष्टिकोण प्रत्यक्ष दृश्य बर्दाश्त नहीं करते, जबकि मुख्य रूप से, DCN के प्रत्यक्ष दृश्य, brainstem की साइट की तत्काल पुष्टि के लिए अनुमति देता है। वायरस की मध्यस्थता जीन स्थानांतरण में मामला है, ऊष्मायन अवधि के लंबे समय तक की जरूरत है कि प्रयोगों में, इंजेक्शन लक्ष्य स्थान "याद करते हैं," अगर कम संक्रमण दक्षता के लिए क्षमता है। इसके अलावा, एक प्रत्यक्ष दृश्य दृष्टिकोण एक विस्तृत श्रृंखला पशु उम्र में इंजेक्शन के लिए अनुमति देता है। एक अनुरूप शल्य दृष्टिकोण ऐसे चूहों और गिनी सूअरों के रूप में अन्य पशु मॉडल के साथ जीवित रहने के प्रयोगों में इस्तेमाल किया जा सकता है।
इस प्रोटोकॉल में कई महत्वपूर्ण कदम उठाए हैं। पहली,माउस स्टीरियोटैक्टिक धारक में ठीक से तैनात किया जाना चाहिए। सिर के किसी भी आंदोलन कठिनाई craniotomy बनाने में परिणाम देगा। दूसरा, craniotomy का स्थान महत्वपूर्ण है। Craniotomy उचित स्थिति में नहीं बनाया गया है, तो अगर असंभव नहीं है, सेरिबैलम की आकांक्षा निम्नलिखित DCN के दृश्य, चुनौतीपूर्ण होगा। अंत में, प्रोटोकॉल का सबसे महत्वपूर्ण कदम सेरिबैलम के आंशिक निर्देशित आकांक्षा है। सेरिबैलम की आकांक्षा करने के लिए दो तकनीकी दृष्टिकोण हैं। पहले आकांक्षा दृष्टिकोण में, सक्शन लगातार brainstem बंद, यह ऊपर की तरफ उठाने सेरिबैलम पर आयोजित किया जाता है। इस दृष्टिकोण में, DCN आंशिक रूप से सेरिबैलम नीचे देखे जा सकते हैं और सीएन पूरी तरह से कल्पना की है और सेरिबैलम हटाया जब तक सक्शन आयोजित किया जाता है। DCN कल्पना है जब तक दूसरे दृष्टिकोण में, सेरिबैलम आंशिक रूप से कई स्तरों पर होती गुजरता में aspirated है। चिकित्सकीय अंक रक्त या शेष सेरिबैलम fragme खाली करने के लिए कोमल dabbing के साथ प्रयोग किया जा सकता हैचीन से एनटीएस यह पूरी तरह से कल्पना नहीं की जा सकती है।
रक्त स्राव के प्रत्यक्ष दृश्य दृष्टिकोण की एक बड़ी खामी है और मुख्य रूप से प्रारंभिक craniotomy के दौरान और अनुमस्तिष्क आकांक्षा के बाद होता है। प्रारंभिक craniotomy के दौरान कई मामलों में, खून बह रहा है 2-5 मिनट के भीतर समय के साथ बंद हो जाएगा। रक्तस्राव के स्थल पर एक टिशू पेपर या दंत बिंदु रखकर और रक्तस्तम्भन के लिए अनुमति देता है। अनुमस्तिष्क आकांक्षा के बाद खून बह रहा है के संदर्भ में, यह रक्त पतला और सीएन के स्तर पर खून का थक्का बनने से रोकने के लिए craniotomy के स्थल पर सामान्य नमक (0.5-1 सीसी) इंजेक्षन करने के लिए महत्वपूर्ण है। सक्शन और कोमल दंत बिंदु dabbing का एक संयोजन रक्त और खारा दूर स्पष्ट करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। दरअसल, इस दृष्टिकोण का प्रमुख सीमा प्रक्रिया के आक्रामक स्वभाव है।
प्रोटोकॉल श्रवण प्रणाली के हेरफेर से परे निहितार्थ हैं। केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में में vivo जीन स्थानांतरण div के हेरफेर के लिए सक्षम बनाता हैतंत्रिका रास्ते आइरिश और स्मृति, मोटर नियंत्रण, गंध, और ऑडिशन सहित कई तंत्रिका कार्यों में अंतर्दृष्टि की पेशकश की है। 16,21-26 शल्य दृष्टिकोण, जीन स्थानांतरण और उत्तेजना के प्रयोजनों के लिए प्रत्यक्ष दृश्य को सक्रिय करने के संभावित अन्य क्षेत्रों के लिए लागू किया जा सकता है brainstem की, उन दोनों के ऊपर और दूसरों को सूचीबद्ध किया है। DCN के प्रत्यक्ष दृश्य की महारत के बाद, प्रयोगों की एक मेजबान एक नीले प्रकाश लेजर के साथ चीन में opsins के इंजेक्शन और बाद में उत्तेजना सहित संभव हो रहे हैं। इस तरह बिजली की उत्तेजना और तंत्रिका इंजेक्टर ट्रेसिंग के रूप में अन्य Neurophysiology प्रयोगों, 18 भी संभव है। दृश्य और इस दृष्टिकोण की उत्तेजना की अवधि का स्तर प्रयोगों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए कई अनुप्रयोगों के लिए अनुमति देता है।
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।
Acknowledgments
अनुदान: यह काम एक फाउंडेशन Bertarelli अनुदान (DJL), एक मेड-ईएल अनुदान (DJL), और स्वास्थ्य अनुदान DC01089 का एक राष्ट्रीय संस्थान (एमसीबी) द्वारा समर्थित किया गया।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Stereotaxic holder | Stoelting | 51500 | |
| Homeothermic blanket | Harvard | 507214 | |
| Scalpel blade #11 | Fine Surgical Tools | 10011-00 | |
| Iris scissor | Fine Surgical Tools | 14084-08 | |
| 5 French suction | Symmetry Surgical | 2777914 | |
| Dental Points | Henry Schein | 100-8170 | |
| Bone rongeur | Fine Surgical Tools | 16020-14 | |
| 10 µl Hamilton syringe | Hamilton | 7633-01 | |
| 34 gauge, needle | Hamilton | 207434 | |
| Rongeurs | Fine Surgical Tools | 16021-14 |
References
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