We describe a protocol for aortic interposition grafting in mice. The goal of the protocol is to provide a model with which to study pathological processes and therapeutic strategies relevant to alloimmune reactions in arteries and the resultant arterial changes that contribute to organ transplant failure.
Vascular rejection that leads to transplant arteriosclerosis (TA) is the leading representation of chronic heart transplant failure. In TA, the immune system of the recipient causes damage of the arterial wall and dysfunction of endothelial cells and smooth muscle cells. This triggers a pathological repair response that is characterized by intimal thickening and luminal occlusion. Understanding the mechanisms by which the immune system causes vasculature rejection and TA may inform the development of novel ways to manage graft failure. Here, we describe a mouse aortic interposition model that can be used to study the pathogenic mechanisms of vascular rejection and TA. The model involves grafting of an aortic segment from a donor animal into an allogeneic recipient. Rejection of the artery segment involves alloimmune reactions and results in arterial changes that resemble vascular rejection. The basic technical approach we describe can be used with different mouse strains and targeted interventions to answer specific questions related to vascular rejection and TA.
За последние 30 с лишним лет, прогресс в иммуносупрессивных препаратов уменьшились отторжения трансплантата вследствие острого отторжения, но хроническое отторжение остается главной задачей. Основным проявлением хронического отторжения трансплантата сердце пересадки атеросклероз (ТА) 1,2. Это условие характеризуется гиперплазией интимы и вазомоторного дисфункции аллотрансплантата артерий и развивается в результате иммунологической нацеливания эндотелиальных и гладкомышечных клетках получателем иммунной системы. Таргетинга привитого сосудистой связи с признанием иностранных пептидов главного комплекса гистосовместимости (МНС) подсвечивается развития ТА исключительно в привитых артерий, щадя хозяев сосуды 3. В соответствии с этим является наблюдение, что ТА не происходит экспериментально, когда получатель является генетически идентичны донору или когда получатель не имеет Т- и В-клетки 4. Иммунная опосредованной сосудистой травмы и dysfunctioп приводит к развитию утолщением интимы и фиброза, а также аномальным накоплением липидов и белков ЕСМ в TA 5. Утолщение интимы, как правило, быть концентрическими по всей артериального дерева 4-6. Потери трансплантата и смерть обычно происходит в результате прогрессирующей ишемии вследствие окклюзии просвета артерии аллотрансплантата 4.
В 1991 году Mennander др. 7 впервые аорты модель вмешательство на крысах модели TA. Несколько групп впоследствии адаптированы эту процедуру для использования в мышах. В этой модели, аллотрансплантатов аортального сегменты развиваются повреждения, которые имеют особенности, сопоставимые с ТА наблюдается в клинических трансплантаций. Это включает в себя утолщение интимы, характеризующийся накоплением гладких мышечных клеток, как и лейкоцитов получателей 7. За последние 2 десятилетия эта модель была использована для создания важное понимание механизмов повреждения сосудов, неприятия и ТП. Это может быть намиред изучить вопросы, связанные с иммунной и сосудистых реакций в ходе артериальной патологии. Выбор антигена несоответствия воздействий способность должным образом решать эти вопросы.
Трансплантация по полной МНС барьеров позволяет комплексную оценку иммунного ответа, что, как известно, участвует в отторжение трансплантата. Это включает в себя прямое признание клеток CD4 и CD8 T и адресности иностранных пептид-MHC, представленный привитых клеток, полученных, косвенные CD4 (и, возможно, CD8) Т признание клеток и адресности привитых полученных аллоантигенам представленных получателя антиген-представляющих клеток, и антитело опосредованной признание аллоантигенам на поверхности клеток сосудистых 8. Тем не менее, сосудистый ответ на повреждение в полных МНС-несогласованных экспериментов может быть различным, чем это наблюдалось клинически. Джонсон и др. 9, показал, что в аорты разъединению трансплантатов, пересаженных через полное несоответствие МНС барьер, большинство изв неоинтимальная клетки реципиента происхождения, а не донорской происхождения. Это отличается от, что наблюдается в человеческих трансплантатов, где большинство внутреннюю оболочку клетки гладких мышц, донорской происхождения 9,10. Для учета этого ограничения, альтернативные экспериментальные модели, которые включают прививки по незначительных несоответствий антиген гистосовместимости были разработаны, которые вызывают сосудистые реакции, которые больше напоминают те, наблюдается в клинической трансплантации 11. В то время как эти альтернативные модели позволяют важных выводов, который можно сделать о сосудистых реакций, которые приводят в развитие ТА, иммунологических процессов, которые вызывают сосудистый отказ в Малой антиген гистосовместимости несогласованных трансплантатов не полностью заново капитулировать тех, которые происходят в клинических условиях. Например, незначительные антигены гистосовместимости признаются плохо от привитых реактивных антител 12. Учитывая вышеизложенные соображения, важно рассмотреть патологический questiна изучаются при выборе типа антигена несоответствия, используемого в модели аорты разъединения. Здесь мы опишем подробный протокол для мыши аорты разъединительных прививки. Мы описываем вмешательство прививки между полными MHC-несогласованных мышей, но тот же протокол используется для прививки через другие антиген несогласованных линиях мышей.
Мы описали протокол для аорты промежуточным прививки у мышей, что является полезным для изучения иммунной опосредованного сосудистой неприятие и TA. Эта модель может быть использована для расследования причин ТА, а также развитие новых терапевтических стратегий. Он был использован в п…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана грантами от Канадского института исследований в области здравоохранения и сердца и инсульта Фонда до н.э. и Юкон (СКК).
Name | Company | Catalogue | Comments |
C57BL/6J (H-2b) | Jackson Laboratories, Bar Harbour ME | Strain# 000664 | |
Balb/cBYJ | Jackson Laboratories, Bar Harbour ME | Strain# 001026 | |
Ketamine Hydrochloride Injection USP 100 mg/ mL | Ketalean | DIN 00612316 | |
Xylazine Injection 20 mg/mL | Rompum | DIN 02169592 | |
Ketoprofen Injection 100 mg/mL | Anafen | DIN 01938126 | |
Butorphanol Tartrate injection 10 mg/mL | Torbugesic | DIN 008450000 | |
Buprenorphine Injection 0.3 mg/mL | Reckitt Benckiser | B.N. 5241 | |
Atipamezole hydrochloride sterile injectable solution | Antisedan | DIN 02237744 | |
Heparin Sodium Injection, USP, 1000 units/mL | McKesson Distribution | DIN 02264315 | |
Tears naturale ophthalmic ointment | Alcon | DIN 02082519 | |
Stereomicroscope | Leica | M80 | |
0.9% Sodium Chloride, sterile | Baxter Corporation | ||
Lactated Ringer’s solution, sterile | Baxter Corporation | ||
0.9% Sodium Chloride Injection, sterile, 10 mL | Baxter Corporation | ||
Alcohol Prep Pads | Loris | ||
Povidone Iodine | Betadine | ||
Chlorohexidine Gluconate 4% w/v | Germi-Stat | ||
Black Polyamide Monofilament | AROSurgical Instruments | T4A10Q07 | |
Suture, 10-0 suture, 70 microns | Corporation | ||
Blue monofilament suture 5-0, P3 needle | Ethicon | 8698G | |
1 ml Syringe | BD | REF 309659 | |
10 ml Syringe | BD | REF 309604 | |
1cc TB insulin syringe with 28G 1/2 | BD | REF 309309 | |
25G 7/8, hypodermic needle | BD | REF 305124 | |
27G 1/2, hypodermic needle | BD | REF 305109 | |
Colibri Retractor- 1.5cm spread 4cm | Fine Science Tools | 17000-04 | |
S&T CAF-4 Clip applying forceps, without lock | Fine Science Tools | 00072-14 | |
Supergrip forceps, S&T | Fine Science Tools | 00632-11 | |
Medical No.5 forceps | Fine Science Tools | 11253-20 | |
Lexer Baby Scissors | Fine Science Tools | 14078-10 | |
Micro Adson forceps serrated | Fine Science Tools | 11018-12 | |
Vannas-Tubingen microscissors | Fine Science Tools | 15003-08 | |
Micro clamps, b-1; 3.5mm x 1mm; 7mm length | Fine Science Tools | 00396-01 | |
Graefe-forceps, 10cm 1×2 teeth | Fine Science Tools | 11054-10 | |
Castroviejo with lock and tungsten jaws | Fine Science Tools | 12565-14 | |
Hot glass bead sterilizer | Inotech 250 | IS-250 – Steri-250 | |
Non-woven gauzes | Progene | ||
Cotton Tipped Applicators | Puritan | ||
Beard Trimmer | Wahl | ||
Heating pad | Sunbeam |