Rein murin Transplant Technique
Summary
The goal of this manuscript is to describe the steps required to perform a kidney transplant in a mouse, paying particular attention to the details of the arterial anastomosis.
Abstract
The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique using the donor aorta to form the arterial anastomosis instead of the renal artery was developed and reported in 1993 by Kalina and Mottram 2 with a further advancement coming from the same laboratory in 1999 3. While one can become proficient in this model, a search of the literature reveals that many labs still experience a high proportion of graft loss due to arterial thrombosis. We describe here a technique that was devised in our laboratory that vastly reduces the arterial thrombus reported by others 4,5. This is achieved by forming a heel-and-toe cuff of the donor infra-renal aorta that facilitates a larger anastomosis and straighter blood flow into the kidney.
Introduction
Depuis 1973, le modèle de greffe de rein chez la souris a été un précieux outil de recherche, mais des problèmes techniques ont entravé son utilisation généralisée. Au cours des années, plusieurs articles ont été publiés en détail les améliorations / améliorations apportées à cette procédure. Comme un modèle de transplantation d'organes solides principalement vascularisé cette procédure est probablement le deuxième seulement pour le modèle de transplantation cardiaque hétérotopique qui a également été conçu par le laboratoire Russell en 1973 6. Les deux modèles se prêtent à la recherche sur les réponses de rejet allogénique, le développement de la fonction du greffon retardée et les lésions d'ischémie reperfusion.
Une des questions les plus courantes à être rapportés avec la transplantation rénale est l'incidence relativement élevée de thrombose artérielle 4,5,7 que nous avons également vécu dans notre laboratoire. Nous mettons donc à effectuer une revue de la littérature de la formation de thrombus et peut-être trouver la cause de ce problème technique et d'élaborer aussi unsolution possible. La cause la plus probable de la thrombose est le chemin tortueux peu le sang prend de l'aorte bénéficiaire, dans l'aorte rénale des bailleurs de fonds lors de l'artère rénale des bailleurs de fonds. Cette voie provoque une turbulence dans l'artère rénale qui peut conduire à l'activation des plaquettes et la formation de thrombus. Basé sur les observations récentes et une recherche de la littérature pertinente 8-14 nous sommes arrivés avec une nouvelle technique qui a réduit la thrombose de 0%.
La technique décrite ici varie de techniques précédemment rapportées dans la formation d'une artère talon-orteil qui brassard installations améliorées circulation sanguine et réduit considérablement la formation de thrombus. La manchette est formée en divisant l'aorte sous-rénale sur la face de l'ostium des artères rénales à un angle inférieur à 45 ° à l'axe longitudinal de l'aorte (figure 1A et 1B). Cela se traduit par une manchette d'environ 2 mm de longueur. Un patch Carrel veineuse est formé par sectionnant la rénal la veine IVC en augmentant ainsi le diamètre du brassard. Le donneur aorte abdominale talon-orteil brassard sous-rénale est de bout en côté anastomosée au destinataire aorte abdominale et la veine rénale des bailleurs de fonds / patch IVC est de bout en côté anastomosée au destinataire abdominale veine cave inférieure (VCI) . L'uretère est ensuite introduit dans et ancrée à la vessie telle que décrite par Han et al trois.
Pour cette étude des greffes non traités avec des temps d'ischémie chaude seulement (ie., Aucune ischémie froide) sont comparées. Dans ce cas ischémie chaude se réfère au moment de la cessation du flux sanguin dans le rein d'un donneur (étape 1.11 ci-dessous) et la reperfusion du greffon chez le receveur (étape 2.11 ci-dessous). Ischémie froide se réfère au temps que le rein perfusé est pas et est conservé en chambre froide jusqu'à ce que le début de la procédure d'implantation.
Protocol
Representative Results
Discussion
La maîtrise de cette technique de greffe est difficile, mais une fois accomplie, il est un outil de recherche très puissant. Le patient chirurgien / chercheur sera récompensé par une attention aux détails et la cohérence de la technique, qui est la clé de la maîtrise de toute intervention chirurgicale, plus encore dans de petits modèles animaux. Les difficultés techniques de maîtrise de la greffe de rein de souris sont nombreux plis, et il est hautement probable que l'expérience dans d'autres petits …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été financé en partie par 1R03DK096151.
Materials
| Instrument | Roboz # | Fine Science Tools # | Arosurgical # |
| Straight micro-dissecting forcep #5 | RS-5015 | 11295-51 | |
| Curved micro-dissecting forcep #7 | RS-5047 | 11297-00 | |
| Curved serrated forcep | RS-5137 | 11052-10 | |
| Vannas micro-dissecting scissors, short | RS-5610 | 09.140.08 | |
| Micro-dissecting scissors, straight, sharp, long | 11.602.11 | ||
| Micro spring handle needle holder | 11.549.15 | ||
| Straight mosquito forcep | 91308-12 | ||
| Micro-dissecting scissors, straight, blunt | RS-5962 | 14078-10 | |
| Micro-dissecting scissors, curved, blunt | RS-5981 | 14079-10 | |
| Micro retractor | RS-6540 | ||
| Instrument tray, 10” x 6 ½” x ¾” | RT-1350S | ||
| Silk suture, 5/0, 22.5m spool | 18020-50 | ||
| Suture | |||
| 10/0 nylon | T4A10Q07 | ||
| 5/0 silk | E19A05N | ||
| Gloves | Drapes | ||
| Biogel from Medex Supply | Precept, #64-9012-9 | ||
| Syringes | Cotton applicators | ||
| B-D 1cc insulin, #329424 | Fisher-brand, #23-400-100 | ||
| Povidone-Iodine swabs | |||
| PDI, #B40600 | |||
| 4/0 Cotton ties | |||
| Domestic cotton autoclaved with instruments | |||
References
- Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity. Transplant Proc. 5 (1), 721-725 (1973).
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