Protocol
Примечание: Убедитесь, что все процедуры, связанные с культурой клеток и вирусную инфекцию проводятся в сертифицированных биобезопасности капюшонами, которые подходят для уровня биобезопасности образцов обрабатывается. Для целей описания протоколов, Gaussia репортера люциферазы с метками ВГС используется в качестве модели вируса 32. В контексте представительных результатов, соединения chebulagic кислоты (CHLA) и punicalagin (МОПС) используются в качестве кандидатов противовирусных, которые нацелены на вирусные гликопротеин взаимодействие с клеточной поверхности гликозаминогликанов в течение раннего вирусного входа шаги 31. Гепарин, который, как известно мешать ввода многих вирусов 30,31,33,34, используется в качестве положительного контроля лечения в таком контексте. Для основного фона по методам вирусологических, распространения вирусов, определения титра вируса, и выражение инфекционной дозы в бляшкообразующих единиц (БОЕ), сосредоточиться единиц (БОЕ) или множественность заражения (МВД), читатель вновьпривилегированных ссылаться 35. Для предыдущих примерах и оптимальных условиях, используемых для вирусов, показанных в представительных результатов, отсылая читателя к ссылкам 30-32,36-39, а также деталей, перечисленных в таблице 1, рис 1А, 2А и рис.
1. Культура клеток, соединение Подготовка и соединение цитотоксичность
- Выращивают соответствующую клеточную линию для системы вирусной инфекции, которые будут проанализированы (таблица 1). Для HCV, растут Ха-7,5 клеток в модифицированной среде Дульбекко Игла (DMEM) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), 200 Ед / мл пенициллина G, 200 мкг / мл стрептомицина и 0,5 мкг / мл амфотерицина В.
- Подготовка тестовых соединений и управления с использованием их соответствующих растворителей, например, растворить CHLA и Мопс в диметилсульфоксиде (ДМСО); подготовки гепарин в стерильной бидистиллированной воды. Для всех последующих разведений, используйте питательные среды.
Примечание: окончательное ОБОГАЩЕНИЯРацион ДМСО в тест-соединение лечения является менее 1% в экспериментах; 1% ДМСО входит в качестве отрицательного контроля лечения в анализах для сравнения. - Определить цитотоксичность испытуемых соединений (например, CHLA и Мопсом) на клетки для вирусной инфекции с помощью жизнеспособность клеток определяющую реагентом, таким как ХТТ (2,3-бис [2-метокси-4-нитро-5-сульфофенил] -5-ил) карбонил] -2Н-тетразолия гидроксида):
- Для ВГС, семена Хух-7,5 клеток в 96-луночного планшета (1 × 10 4 клеток на лунку) и инкубировать при 37 ° С в 5% СО 2 инкубатора в O / N, чтобы получить монослой.
- Применение контроля ДМСО (1%) или увеличение концентрации испытуемых соединений CHLA и PUG (напр. 0, 10, 50, 100 и 500 мкм) с культурой скважин в трех экземплярах.
- Инкубируют при 37 ° С в течение 72 ч, а затем выбросить среды в пластине и промыть клетки с 200 мкл забуференного фосфатом физиологического раствора (PBS) дважды.
- Добавить 100 мкл assayinг раствора из ХТТ основе набора в пробирке токсикологии анализа в каждую лунку и инкубируют планшеты при 37 ° С в течение еще 3 ч, чтобы позволить ХТТ формазана производства.
- Определить оптическую плотность с помощью микропланшет-ридера в тестовом волны 492 нм и длине волны сравнения 690 нм.
- Рассчитывают процент выживших клеток по следующей формуле: Жизнеспособность клеток (%) = В / В × 100%, где "в" и "В" относятся к поглощению испытуемых соединений и контроля растворителя (EX 1% ДМСО. ) процедуры, соответственно. Определить концентрацию 50% клеточной цитотоксичности (CC 50) испытуемых соединений с аналитическим программным обеспечением, такие как GraphPad Prism в соответствии с протоколом производителя.
2. Считывание вирусной инфекции
Примечание: считывание вирусной инфекции зависит от используемой системы вируса и может включать такие методы, как налет анализов или МЭАряя репортер сигналы от репортеров-тегами вирусов. Способ диагностики инфекции репортер-ВГС на основе люциферазы активности описан ниже.
- Собирают супернатанты от инфицированных скважин и уточнить при 17000 х г в микроцентрифуге в течение 5 мин при 4 ° С.
- Смешайте 20 мкл тестируемого супернатанта к 50 мкл субстрата люциферазы из анализа люциферазы комплект Gaussia и непосредственно измерить с люминометра в соответствии с инструкциями изготовителя.
- Экспресс инфекционность вируса гепатита как журнал 10 относительных световых единицах (RLU) для определения вирусной ингибирование (%) и вычислить 50% эффективную концентрацию (EC 50) испытуемых соединений против инфекции HCV, используя алгоритмы из программного обеспечения GraphPad Prism в соответствии с протоколом производителя.
3. Анализ вирусной инактивации
Примечание: Примеры инкубационного периода и вирусные дозы для различных Вирусыповторно перечислены на фиг.1А. Более высокие концентрации вируса также могут быть проверены путем увеличения МВД / ОРП.
- Семенной Ха-7,5 клеток в 96-луночный планшет (1 × 10 4 клеток на лунку) и инкубируют при 37 ° С в 5% СО 2 инкубаторе O / N, чтобы получить монослой.
- Инкубируйте тестируемых соединений или управления (окончательные концентрации: CHLA = 50 мкМ; МОПС = 50 мкМ; гепарин = 1000 мкг / мл; ДМСО = 1%) с частицами HCV при 37 ° С (фиг.1А, "Long-Term" ) в соотношении 1: 1. Например, для вирусной посевного 100 мкл, содержащей 1 х 10 4 ФФУ, добавить 100 мкл рабочего разведения в 100 мкМ CHLA; это дает лечение CHLA в конечной концентрации 50 мкМ.
- Развести смесь вирус-наркотиков, чтобы "субтерапевтическая" (неэффективной) концентрации испытуемых соединений. Например, неэффективная концентрация CHLA и PUG против ВГС на 1 мкМ 31; следовательноэто требует 50-кратное разбавление смеси вируса лекарственной которые могут быть выполнены с 9,8 мл базальной среды (среды для культивирования клеток с 2% FBS).
Примечание: Разбавление до субтерапевтическом концентрации предотвращает значительное взаимодействие между тестируемыми соединениями и поверхности клетки-хозяина и позволяет исследовать эффект лечения на вирионов бесклеточных. Заметим, что это разбавление зависит от противовирусного ответа дозы испытуемых соединений против конкретного вирусной инфекции, и определяется перед выполнением этой конкретной анализа 31. - Для сравнения, смешать с вирусом испытуемых соединений и сразу не развести (не инкубационный период) к югу от терапевтической концентрации до заражения (рис 1А ", краткосрочный рейтинг").
- Добавить 100 мкл разбавленной смеси ВГС лекарственной на Huh-7,5 монослоя клеток (количество вируса в настоящее время находится 1 х 10 2 ФФУ; конечная МВД = 0,01) и инкубируют в течение 3 ч при 37 ° С, чтобы позволить вирусныйадсорбции.
- После инфекции, удалить разбавленный инокулята и осторожно мыть скважин с 200 мкл PBS в два раза.
Примечание: Выполните моет осторожно, чтобы избежать подъема клеток. - Применение 100 мкл минимальной среды в каждую лунку и инкубируют при 37 ° С в течение 72 ч.
- Анализ полученного инфекции путем анализа супернатанта на активность люциферазы, как описано в "2. Считывание вирусной инфекции.
4. Вирусный Приложение Анализ
Примечание: Примеры инкубационного периода и вирусной дозы для различных вирусов, перечислены на фиг.2А, "Приложение". Более высокие концентрации вируса также могут быть проверены путем увеличения МВД / ОРП.
- Семенной Ха-7,5 клеток в 96-луночный планшет (1 × 10 4 клеток на лунку) и инкубируют при 37 ° С в 5% СО 2 инкубаторе O / N, чтобы получить монослой.
- Предварительно охладить монослоев клеток в планшеты при 4 ° С FOR 1 ч.
- Совместное лечение клеток с инокулята HCV (MOI = 0,01) и тестируемые соединения или управления (конечные концентрации являются: CHLA = 50 мкМ; МОПС = 50 мкМ; гепарин = 1000 мкг / мл; ДМСО = 1%) при 4 ° С в течение 3 ч. Например, в вирус инокулята, содержащего 90 мкл 1 × 10 2 ФФУ, добавить 10 мкл готового раствора 500 мкМ CHLA; это дает лечение CHLA в конечной концентрации 50 мкМ и инфекцию ВГС в МВД = 0,01 на клеточный монослой.
Примечание: Важно провести эксперимент при 4 ° С, так как это позволяет вируса связывания, но исключает запись, которая наиболее эффективно происходит при температуре 37 ° С. Выполнение добавление вирусных и тестируемых соединений на льду и последующий инкубации в 4 ° C холодильником для того, чтобы поддерживать температуру на уровне 4 ° C. - Удалить супернатант и осторожно мыть клеточный монослой с 200 мкл охлажденного льдом PBS дважды.
Примечание: Выполните моет осторожно, чтобы избежать подъема клеток <./ LI> - Применение 100 мкл минимальной среды в каждую лунку и инкубируют при 37 ° С в течение 72 ч.
- Анализ полученного инфекции путем анализа супернатанта на активность люциферазы, как описано в "2. Считывание вирусной инфекции.
5. Вирусный входа / Fusion Анализ
Примечание: Пример инкубационного периода и вирусной дозы для различных вирусов перечислены на фигуре 2a 'входа / Fusion ". Более высокие концентрации вируса также могут быть проверены путем увеличения МВД / ОРП.
- Семенной Ха-7,5 клеток в 96-луночный планшет (1 × 10 4 клеток на лунку) и инкубируют при 37 ° С в 5% СО 2 инкубаторе O / N, чтобы получить монослой.
- Предварительно охладить монослоев клеток в планшеты при 4 ° С в течение 1 часа.
- Инфицировать клетки с HCV (MOI = 0,01) при 4 ° С в течение 3 ч. Например, можно использовать вирусную прививочный 100 мкл, содержащую 1 х 10 2 ФФУ.
Примечание: Выполните Аддиции вирусной посевного материала на льду и последующего инкубации в 4 ° C холодильником, чтобы поддерживать температуру в 4 ° С, что позволяет вирусной связывания, но не запись. - Удалить супернатант и осторожно мыть монослоев клеток с 200 мкл охлажденного льдом PBS дважды.
Примечание: Выполните моет осторожно, чтобы избежать подъема клеток. - Treat лунки тестовых соединений или управления (конечные концентрации являются: CHLA = 50 мкМ; МОПС = 50 мкМ; гепарин = 1000 мкг / мл; ДМСО = 1%) и инкубируют при 37 ° С в течение 3 ч. Например, добавьте 10 мкл рабочего разведения 500 мкМ CHLA 90 мкл среды, перемешать, и лечить скважин; это дает лечение CHLA в конечной концентрации 50 мкМ.
Примечание: Переход от 4 ° С до 37 ° С в настоящее время облегчает вирусную событие входа / сварки и, следовательно, позволяет оценить эффект испытуемых соединений по этой "конкретной стадии. - Аспирируйте наркотиков, содержащих супернатант и удаления не усвоенывнеклеточные вирусы либо промыванием 200 мкл цитратного буфера (50 мМ цитрат натрия, 4 мМ хлорида калия, рН 3,0) или PBS. Применение 100 мкл минимальной среде перед инкубацией при 37 ° С в течение 72 ч.
- Анализ полученного инфекции путем анализа супернатанта на активность люциферазы, как описано в "2. Считывание вирусной инфекции.
Representative Results
На рисунке 1, "вирусная инактивация анализ" было проведено с целью изучить ли два конкретных природных соединений CHLA и мопс может инактивировать различные вирусов с оболочкой в бесклеточной государства и предотвратить последующую инфекцию. Ответ на дозу цитотоксичность и противовирусную этих соединений были определены перед выполнением механистическую исследование 31. Эти вирусы были предварительно обработаны испытуемыми соединениями, а затем смеси вирус-лекарственное средство разбавляли до суб-терапевтических концентраций, прежде чем прививки на соответствующий монослоя клеток для каждого вируса системы. Как показано на рисунке 1, и CHLA и МОПС-видимому, взаимодействуют с вирионов бесклеточных, в результате чего необратимых эффектов, которые защищали клеточный монослой из последующего инфицирования. Два испытания соединения достигается почти 100% -ное ингибирование против HCMV, ВГС и DENV-2, в то время как 60 а - 80% блок наблюдалось против М.В. и RSV. Эти результаты suggТекущая что CHLA и мопс есть прямое воздействие на этих свободных вирусных частиц по их инактивации и нейтрализации инфекционность.
На рисунке 2, привязанность и ввода / слияния анализы были проведены для изучения эффекта CHLA и PUG против этих ранних вирусных событий входа связанных с HCMV, ВГС, DENV-2, М., и RSV. Оба CHLA и мопс эффективно предотвратить связывание исследуемых вирусов на соответствующей клетке-хозяине, как показано ингибирование на полученной вирусной инфекции (рис 2, '' Attachment: светло-серый бар). Ингибирующий эффект на вложение вируса от обоих соединений были похожи HCMV (Фигура 2В), HCV (фиг.2с), DENV-2 (рис 2D) и РСВ (рис 2F), от 90 - 100%. С другой стороны, МОПС оказались более эффективными, чем CHLA против MV связывания (рис 2E), со скоростью ингибирования от TWO соединения различной между 50 - 80%. Лечение управления гепарин, который, как известно, чтобы блокировать проникновение вирусов, многие также ингибирует прикрепление HCMV, DENV-2, RSV, объявление MV, но менее эффективным в отношении HCV. Последовавшая "вирусный вход / слияние анализ" рассматривается CHLA и мопс сохранил ли свою деятельность на этапе входа в вирус / слияния (рис 2, "Вступление / Fusion": темные серые полосы). Опять же, как и CHLA МОПС наблюдались эффективно снижать вирусную шаг записи / слияния вирусов исследованных (Фигура 2В - F), что дает 50 - 90% защитное действие на соответствующем монослоя клеток. Гепарин также мощно ингибирует вход / слияние в DENV-2 и RSV инфекций, но менее эффективны против HCMV, ВГС и MV (<40% ингибирование в среднем).
| Вирус | Тип клетки |
| ЦМВ | <TD> HEL|
| ВГС | Хух-7,5 |
| DENV-2 | Веро |
| М.В. | СНО-SLAM |
| RSV | Нер-2 |
Таблица 1:. Тип клетки-хозяина для вирусной инфекции типа клеток используется для каждой вирусной инфекции системе, описанной в представительных результатов указывается. Дополнительные подробности, касающиеся клетки могут быть найдены в справочнике 31.
Рисунок 1. Инактивация вирусных инфекций к CHLA тестируемых соединений и PUG Различные вирусы были обработаны испытуемыми соединениями в течение длительного периода. (Инкубируют в течение 1,5 - 3 часов, прежде чем титрования; светло-серые столбики) или короткий период (сразу разводили; темно-серый бары) при 37 ° С до разведении в суб-терапевтических Concentraние и последующий анализ инфекции на соответствующий клеток-хозяев. (А) Схема эксперимента (показана слева) с конечной концентрации вируса (БОЕ / хорошо или МВД), долгосрочные период вируса наркотиков Инкубационный (я), и последующее время инкубации (II) указывается для каждого вируса в таблице справа. Анализы для (В) HCMV, (C) HCV, (D) DENV-2 (Е) М.В., (F), РСВ указаны в каждом дополнительном панели. Результаты приведены в отношении ДМСО отрицательной контрольной обработки для вирусной инфекции и данными, показанными являются средние значения ± стандартная ошибка среднего (SEM) от трех независимых экспериментов. Эта цифра была изменена с ссылкой на 31. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2. Оценка противовирусной активности в CHLA тестируемых соединений и PUG против вируса прикрепления и входа / слияния. (А) Экспериментальная процедура, концентрация вируса (БОЕ / лунку или МВД), а время сложения и обработки тестируемых соединений (I, II, III) представлены для каждого вируса в схемах и таблицах связанных. В анализе связывания вируса (светло серые столбцы), монослои клеток различных типов предварительно охлажденным при 4 ° С в течение 1 ч, затем совместно обрабатывали соответствующих вирусов и испытуемых соединений при 4 ° С (1,5 - 3 ч; I) Перед смывая прививает и испытания соединений для последующей инкубации (37 ° С; II) и экспертиза вирусной инфекции. В вирусной записи / анализа синтеза (темно-серые столбцы), отобранный клеточные монослои были предварительно охлажденной при 4 ° С в течение 1 ч, а затем заражали соответствующих вирусов при температуре 4 ° С в течение 1,5 - 3 часов (I). Затем клеткипромывали и обрабатывали испытуемыми соединениями в течение дополнительного периода инкубации (II), в течение которого температура была сдвинута до 37 ° С, чтобы облегчить вирусной событие входа / фьюжн. В конце инкубации, внеклеточные вирусы были удалены либо цитратном буфере (рН 3,0) или PBS стирок и клетки дополнительно инкубировали (III) для анализа вирусной инфекции. Результаты для (В) HCMV, (C) HCV, (D) DENV-2 (Е) М.В., (F), РСВ указаны в каждом дополнительном панели. Данные приведены по отношению к ДМСО отрицательной контрольной обработки вирусной инфекции и представлены в виде ± SEM трех независимых экспериментов. Эта цифра была изменена с ссылкой на 31. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM | GIBCO | 11995-040 | |
| FBS | GIBCO | 26140-079 | |
| Penicillin-Streptomycin | GIBCO | 15070-063 | |
| Amphotericin B | GIBCO | 15290-018 | |
| DMSO | Sigma | D5879 | |
| In vitro toxicology assay kit, XTT-based | Sigma | TOX2 | |
| PBS pH 7.4 | GIBCO | 10010023 | |
| Microplate reader | Thermo Scientific | 89087-320 | |
| Microcentrifuge | Thermo Scientific | 75002420 | |
| BioLux Gaussia luciferase assay kit | New England Biolabs | E3300L | |
| Luminometer | Promega | GloMax-20/20 | |
| Sodium citrate, dihydrate | Sigma | 71402 | |
| Potassium chloride | Sigma | P5405 |
References
- Munier, C. M., Andersen, C. R., Kelleher, A. D. HIV vaccines: progress to date. Drugs. 71, 387-414 (2011).
- Rothman, A. L. Immunity to dengue virus: a tale of original antigenic sin and tropical cytokine storms. Nat Rev Immunol. 11, 532-543 (2011).
- Sung, H., Schleiss, M. R. Update on the current status of cytomegalovirus vaccines. Expert Rev Vaccines. 9, 1303-1314 (2010).
- Torresi, J., Johnson, D., Wedemeyer, H. Progress in the development of preventive and therapeutic vaccines for hepatitis C virus. J Hepatol. 54, 1273-1285 (2011).
- Wright, M., Piedimonte, G. Respiratory syncytial virus prevention and therapy: past, present, and future. Pediatr Pulmonol. 46, 324-347 (2011).
- Christou, L. The global burden of bacterial and viral zoonotic infections. Clin Microbiol Infect. 17, 326-330 (2011).
- Cascio, A., Bosilkovski, M., Rodriguez-Morales, A. J., Pappas, G. The socio-ecology of zoonotic infections. Clin Microbiol Infect. 17, 336-342 (2011).
- Grais, R. F. Measles vaccination in humanitarian emergencies: a review of recent practice. Confl Health. 5, 21 (2011).
- Gautret, P. Emerging viral respiratory tract infections-environmental risk factors and transmission. Lancet Infect Dis. 14, 1113-1122 (2014).
- Sampathkumar, P. Middle East respiratory syndrome: what clinicians need to know. Mayo Clin Proc. 89, 1153-1158 (2014).
- Burd, E. M. Ebola Virus: a Clear and Present Danger. J Clin Microbiol. 53, 4-8 (2015).
- Bishop, B. M. Potential and Emerging Treatment Options for Ebola Virus Disease. Ann Pharmacother. , (2014).
- Arduino, P. G., Porter, S. R. Oral and perioral herpes simplex virus type 1 (HSV-1) infection: review of its management. Oral Dis. 12, 254-270 (2006).
- Mitrasinovic, P. M. Advances in the structure-based design of the influenza A neuraminidase inhibitors. Curr Drug Targets. 11, 315-326 (2010).
- Soriano, V. Directly acting antivirals against hepatitis C virus. J Antimicrob Chemother. 66, 1673-1686 (2011).
- Haqqani, A. A., Tilton, J. C. Entry inhibitors and their use in the treatment of HIV-1 infection. Antiviral Res. 98, 158-170 (2013).
- Melby, T., Westby, M. Inhibitors of viral entry. Handb Exp Pharmacol. , 177-202 (2009).
- Vanderlinden, E., Naesens, L. Emerging antiviral strategies to interfere with influenza virus entry. Med Res Rev. 34, 301-339 (2014).
- Antoine, T. E., Park, P. J., Shukla, D. Glycoprotein targeted therapeutics: a new era of anti-herpes simplex virus-1 therapeutics. Rev Med Virol. 23, 194-208 (2013).
- Pawlotsky, J. M., Chevaliez, S., McHutchison, J. G. The hepatitis C virus life cycle as a target for new antiviral therapies. Gastroenterology. 132, 1979-1998 (2007).
- Beyleveld, G., White, K. M., Ayllon, J., Shaw, M. L. New-generation screening assays for the detection of anti-influenza compounds targeting viral and host functions. Antiviral Res. 100, 120-132 (2013).
- Kilianski, A., Baker, S. C. Cell-based antiviral screening against coronaviruses: developing virus-specific and broad-spectrum inhibitors. Antiviral Res. 101, 105-112 (2014).
- Caillet-Saguy, C., Lim, S. P., Shi, P. Y., Lescar, J., Bressanelli, S. Polymerases of hepatitis C viruses and flaviviruses: structural and mechanistic insights and drug development. Antiviral Res. 105, 8-16 (2014).
- Frey, S. Temperature dependence of cell-cell fusion induced by the envelope glycoprotein of human immunodeficiency virus type 1. J Virol. 69, 1462-1472 (1995).
- Tscherne, D. M. Time- and temperature-dependent activation of hepatitis C virus for low-pH-triggered entry. J Virol. 80, 1734-1741 (2006).
- Madan, R. P. Molecular umbrellas: a novel class of candidate topical microbicides to prevent human immunodeficiency virus and herpes simplex virus infections. J Virol. 81, 7636-7646 (2007).
- Haywood, A. M., Boyer, B. P. Time and temperature dependence of influenza virus membrane fusion at neutral pH. J Gen Virol. 67 (Pt 12), 2813-2817 (1986).
- Haywood, A. M., Boyer, B. P. Sendai virus membrane fusion: time course and effect of temperature, pH, calcium, and receptor concentration). Biochemistry. 21, 6041-6046 (1982).
- Wang, G., Hernandez, R., Weninger, K., Brown, D. T. Infection of cells by Sindbis virus at low temperature. Virology. 362, 461-467 (2007).
- Lin, L. T. Hydrolyzable tannins (chebulagic acid and punicalagin) target viral glycoprotein-glycosaminoglycan interactions to inhibit herpes simplex virus 1 entry and cell-to-cell spread. J Virol. 85, 4386-4398 (2011).
- Lin, L. T. Broad-spectrum antiviral activity of chebulagic acid and punicalagin against viruses that use glycosaminoglycans for entry. BMC Microbiol. 13, 187 (2013).
- Marukian, S. Cell culture-produced hepatitis C virus does not infect peripheral blood mononuclear cells. Hepatology. 48, 1843-1850 (2008).
- Baba, M., Snoeck, R., Pauwels, R., de Clercq, E. Sulfated polysaccharides are potent and selective inhibitors of various enveloped viruses, including herpes simplex virus, cytomegalovirus, vesicular stomatitis virus, and human immunodeficiency virus. Antimicrob Agents ChemotheR. 32, 1742-1745 (1988).
- Barth, H. Cellular binding of hepatitis C virus envelope glycoprotein E2 requires cell surface heparan sulfate. J Biol CheM. 278, 41003-41012 (2003).
- Flint, S. J., Enquist, L. W., Racaniello, V. R., Skalka, A. M. Principles of Virology. , 3rd edn, ASM Press. (2008).
- Brown, M. G. Dramatic caspase-dependent apoptosis in antibody-enhanced dengue virus infection of human mast cells. J Leukoc Biol. 85, 71-80 (2009).
- Huang, Y., Cyr, S. L., Burt, D. S., Anderson, R. Murine host responses to respiratory syncytial virus (RSV) following intranasal administration of a Protollin-adjuvanted, epitope-enhanced recombinant G protein vaccine. J Clin Virol. 44, 287-291 (2009).
- Isaacson, M. K., Compton, T. Human cytomegalovirus glycoprotein B is required for virus entry and cell-to-cell spread but not for virion attachment, assembly, or egress. J Virol. 83, 3891-3903 (2009).
- Leonard, V. H., et al. Measles virus blind to its epithelial cell receptor remains virulent in rhesus monkeys but cannot cross the airway epithelium and is not shed. J Clin Invest. 118, 2448-2458 (2009).
- Ciesek, S. The green tea polyphenol, epigallocatechin-3-gallate, inhibits hepatitis C virus entry. Hepatology. 54, 1947-1955 (2011).
- Lin, L. T. Saikosaponin b2 is a naturally occurring terpenoid that efficiently inhibits hepatitis C virus entry. J Hepatol. 62, 541-548 (2015).
- Atkins, C., Evans, C. W., White, E. L., Noah, J. W. Screening methods for influenza antiviral drug discovery. Expert Opin Drug Discov. 7, 429-438 (2012).
- Zhang, J. Identification of novel virus inhibitors by influenza A virus specific reporter cell based screening. Antiviral Res. 93, 48-54 (2012).
