We show the preparation and address the feasibility of cellular vehicles containing gold nanorods for the photoacoustic imaging of cancer.
nanorods oro sono attraenti per una gamma di applicazioni biomediche, quali l'ablazione fototermica e di imaging fotoacustico di cancro, grazie alla loro assorbanza ottica intensa nella finestra vicino infrarosso, bassa citotossicità e potenziale per casa in tumori. Tuttavia, la loro consegna ai tumori rimane ancora un problema. Un approccio innovativo consiste dello sfruttamento del tropismo di macrofagi associati al tumore che può essere caricato con nanotubi oro in vitro. Qui, descriviamo la preparazione e l'ispezione dei veicoli fotoacustica cellulari contenenti nanotubi d'oro. nanorods oro PEG sono modificati con composti di ammonio quaternario, per ottenere un profilo cationico. A contatto con macrofagi murini in piatti ordinari Petri, queste particelle si trovano a subire massiccia diffusione in vescicole endocytic. Poi queste cellule sono incorporati in idrogel biopolimerico, che vengono utilizzati per verificare che la stabilità della conversione fotoacusticadelle particelle viene mantenuto il loro inserimento in veicoli cellulari. Siamo certi che questi risultati possono fornire nuovi spunti per lo sviluppo di nuove strategie per fornire particelle plasmoniche ai tumori.
Negli ultimi dieci anni, varie particelle plasmoniche, come nanotubi d'oro, nanoshells e nanocages, hanno ricevuto una notevole attenzione per le applicazioni in ottica biomedica 1, 2, 3, 4. In contrasto con nanosfere oro standard, queste particelle filtrate risuonano nella finestra vicino infrarosso (NIR) che prevede più profonda penetrazione ottica attraverso il corpo e alto contrasto ottico sui componenti endogene 1. Questa caratteristica ha destato l'interesse per applicazioni innovative, come il fotoacustico (PA) imaging e l'ablazione fototermica di cancro. Tuttavia, diversi problemi frenano la penetrazione clinica di queste particelle. Per esempio, la loro attivazione ottica tende ad indurre il loro surriscaldamento e modificare le loro forme funzionali verso profili più sferiche, che controlla una fotoinstabilità 5, 6, 7, 8 </sup>, 9. Un altro problema che domina il dibattito scientifico è la loro consegna sistemica in tumori. In particolare, nanotubi d'oro si combinano dimensioni che sono l'ideale per pervadere tumori che mostrano una maggiore permeabilità e ritenzione e la facilità di coniugazione con sonde specifiche di marcatori maligni. Pertanto, la loro preparazione per iniezione diretta nel flusso sanguigno è percepito come un regime fattibile 10, 11, 12, 13. Comunque, questa via rimane problematica, con la maggior parte delle particelle diventando catturati dai fagociti mononucleati 10, 11, 12. Inoltre, un'altra preoccupazione è la stabilità ottica e biochimica delle particelle dopo la circolazione attraverso il corpo 14. Quando le particelle perdono la loro stabilità colloidale e di aggregazione, le loro caratteristiche plasmoniche e dinamiche di trasferimento di calore possono soffrire di accoppiamento plasmoniche 15, </sup> 16, 17 e cross-surriscaldamento 18.
Più recentemente, l'idea di sfruttare il tropismo di macrofagi associati al tumore è emerso come un'alternativa intelligente 19, 20, 21. Queste celle contengono una innata capacità di rilevare e pervadere i tumori con elevata specificità. Pertanto, una prospettiva potrebbe essere quella di isolare queste cellule da un paziente, caricarli con nanotubi d'oro in vitro e poi iniettare di nuovo nel paziente, con l'intento di usarli come veicoli cellulari responsabili della consegna. Un altro vantaggio sarebbe quello di ottenere un maggiore controllo sulla stabilità ottica e biochimico delle particelle, in quanto la loro interfaccia biologica sarebbe costruita in vitro. Ancora, le prestazioni di questi veicoli cellulari come agenti di contrasto ottici hanno bisogno di una analisi critica.
In questo lavoro, si descrive la preparazione e criticità di Cellulveicoli ar contenenti nanotubi d'oro per la formazione immagine PA di cancro. Nanorods oro PEG sono modificati con composti di ammonio quaternario 22, al fine di ottenere un profilo cationico che si prevede di promuovere le loro interazioni con membrane plasmatiche 23, 24. Queste particelle subiscono l'assorbimento efficiente e aspecifica dalla maggior parte dei tipi cellulari, si spera senza interferire molto con le loro funzioni biologiche. macrofagi murini sono caricati con un massimo di ben 200, 000 nanotubi d'oro cationici per cella, che diventano trovino all'interno di vescicole endocytic stretti. Questa configurazione dovrebbe sorgere preoccupazione, a causa della minaccia di accoppiamento plasmoniche e cross-surriscaldamento all'interno di queste vescicole. Pertanto, i macrofagi sono incorporati in idrogel biopolimerico che imitano i tessuti biologici, per verificare che la maggior parte della stabilità della conversione PA delle particelle è trattenuto nel trasferimento dal mezzo di crescita per le vescicole endocitiche. effectivcriteri di valutazione e sono elaborati al fine di misurare la stabilità della conversione PA in condizioni di immediato interesse per l'imaging PA. Una soglia rimodellare è impostato per lo insorgenza di instabilità ottica dopo un treno di 50 impulsi laser con la frequenza di ripetizione tipica di 10 Hz.
Siamo certi che questi risultati possono fornire lo slancio per lo sviluppo di nuove strategie per fornire particelle plasmoniche ai tumori.
La nozione di indirizzare i macrofagi associati al tumore sta emergendo come un concetto potente per combattere il cancro 34, 35, 36. Qui, invece della loro distruzione, queste cellule vengono reclutati come veicoli cellulari per portare nanotubi d'oro in un tumore, dallo sfruttamento del loro tropismo. Questa prospettiva richiede una progettazione attenta delle particelle, la loro integrazione nelle cellule e la loro caratterizzazione. Abbiamo trovato che la fo…
The authors have nothing to disclose.
Questo lavoro è stato parzialmente supportato dalla Regione Toscana e della Comunità Europea all'interno della cornice della bolla ERANET + Progetti LUS e BI-TRE.
Hexadecyltrimethylammonium bromide | Sigma-Aldrich | H6269 | To synthesize gold nanorods |
Gold(III) chloride trihydrate | Sigma-Aldrich | 520918 | To synthesize gold nanorods |
Silver nitrate | Sigma-Aldrich | S6506 | To synthesize gold nanorods |
L-ascorbic acid | Sigma-Aldrich | A5960 | To synthesize gold nanorods |
Sodium borohydride | Sigma-Aldrich | To synthesize gold nanoseeds | |
MeO-PEG-SH | Iris Biotech | PEG1171 | To PEGylate gold nanorods. Molecular weight about 5,000 Da |
Acetic acid | Sigma-Aldrich | 320099 | To PEGylate gold nanorods and solubilize chitosan |
Sodium acetate | Sigma-Aldrich | S8750 | To PEGylate gold nanorods |
(11-Mercaptoundecyl)-N,N,N-trimethylammonium bromide | Sigma-Aldrich | 733305 | To modify gold nanorods with quaternary ammonium compounds |
Dimethyl sulfoxide | Sigma-Aldrich | 276855 | To solubilize (11-mercaptoundecyl)-N,N,N-trimethylammonium bromide |
Polysorbate 20 | Sigma-Aldrich | P2287 | To centrifuge PEGylated gold nanorods |
PBS | Lonza | BE17-516F | To suspend gold nanorods before incubation with cells and to treat pellets of cells |
J774a.1 | ATCC | TIB-67 | Monocyte/macrophage murine cell line |
DMEM | Lonza | BE12-707F | Cell culture medium |
FBS | Lonza | DE14-801F | To be added to cell culture medium |
L-glutamine | Lonza | BE17-605E | To be added to cell culture medium |
Penicillin/streptomycin | Lonza | DE17-602E | To be added to cell culture medium |
Petri dish | NEST | 705001 | Cell culture dish |
Cell scraper | EuroClone | ES7018 | To detach cells |
Formaldehyde | Fluka | 47630 | To fix cells |
Chitosan, low molecular weight | Sigma-Aldrich | 448869 | 75-85% deacetylated. Molecular weight about 120,000 Da |
Sodium hydroxyde | Sigma-Aldrich | 306576 | To insolubilize chitosan and generate the hydrogel |
Polystyrene cell culture plates | NEST | 702011 | Used as molds to fabricate chitosan hydrogels |
Optical parametric oscillator pumped by the third harmonic of a Q-switched Nd:YAG laser | Continuum, Santa Clara, USA | Surelite OPO plus | Source of optical excitation for photoacoustic tests |
Pyroelectric detector | Gentec, Quebec, Canada | QE8SP | To monitor optical fluence for photoacoustic tests |
Pre amplified needle hydrophone | Precision Acoustic, Dorset, UK | Model with 1 mm sensor diameter and 1-20 MHz frequency range | To measure photoacoustic signals |