Abstract
Insektet olfaktoriske system spiller en vigtig rolle i påvisning semiochemicals i miljøet. Især den antennal sensilla der huser enkelte eller flere neuroner inde, anses for at gøre det største bidrag med at reagere på de kemiske stimuli. Ved direkte registrering af handling potentiale i olfaktoriske sensillum efter udsættelse for stimuli, enkelt sensillum optagelse (SSR) teknik giver en kraftfuld metode til at undersøge de neurale reaktioner insekter til kemiske stimuli. Til sengen bug, som er en berygtet menneskelig parasit, har flere typer af olfaktoriske sensillum blevet karakteriseret. I denne undersøgelse, vi demonstrerede neurale reaktioner bed bug olfaktoriske sensilla til to kemiske stimuli og dosisafhængige reaktioner på en af dem ved hjælp af SSR-metoden. Denne tilgang gør det muligt for forskerne at foretage tidlig screening for individuelle kemiske stimuli på sengen bug olfaktoriske sensilla, hvilket vil give værdifulde oplysninger til udvikling af nye bed bug tiltrækker eller frastøder og fordele bed bug kontrolindsats.
Introduction
Den fælles væggelus Cimex lectularius L (Hemiptera: Cimicidae), som en midlertidig ektoparasit, er en forpligtet blodsugende insekter, hvilket betyder, deres overlevelse, udvikling og reproduktion kræver blod kilder fra værter, herunder både mennesker og dyr 1,2. Selvom virus transmission sjældent er blevet rapporteret som følge af C. lectularius, den bidende gener genereret af et angreb i alvorlig grad påvirker værter både fysisk og psykisk 3. Indførelse og udbredte anvendelse af kemiske insekticider, især DDT, sænkede risikoen for angreb, og ved udgangen af 1950'erne angreb var på et så lavt niveau, at de ikke længere var en alvorlig bekymring i offentligheden. Imidlertid har en række mulige faktorer førte til genopblussen i bed bug befolkninger i hele verden, såsom den reducerede brug af insekticider, et fald på offentlig bevidsthed, øget rejse aktivitet, og udviklingen af resistens over for insekticider 4-9. </ p>
Kemiske signaler i miljøet opdages og anerkendt af insekter gennem olfaktoriske organer såsom antenner og maxillary palps. Den olfaktoriske sensilla på insekt antenner spille en afgørende rolle i at opdage disse kemiske signaler. De kemiske molekyler ind i antennal neglebånd gennem porer på neglebånd overfladen. Lugtstof bindende proteiner i antennal lymfeknuder binder til disse kemiske molekyler og transportere dem på de lugtstofreceptorer 10. De lugtstofreceptorer og deres co-receptor fra den ikke-selektive kation ionkanal på neurale membran, som vil blive depolariseret når disse kemiske molekyler er anerkendt af de lugtstofreceptorer 11.
Single sensillum optagelse (SSR) blev udviklet for at detektere det ekstracellulære ændring i aktionspotentialet forårsaget af anvendelsen af enten kemiske eller ikke-kemiske stimuli. Ved at indsætte en optagelse elektrode ind i sensillum lymfeknuder og en referenceelektrodei en anden del af insektets krop (som regel enten sammensatte øjne eller maven), kan afbrændingstakten af neuroner som reaktion på stimuli registreres 12. Ændringer i antallet af pigge repræsenterer følsomhed insektet til specifikke stimuli. Kemiske stimuli af forskellige identiteter og koncentration vil fremkalde forskellige neurale reaktioner med forskellige fyring satser og tidsmæssige strukturer, og kan således anvendes til at undersøge kodningsprocessen insektets for bestemte kemikalier.
Til fælles bed bug begge seksuelle former deler samme mønster af olfaktoriske sensilla på antennerne: ni rillede pind C sensilla, 29 hår-lignende E (E1 og E2) sensilla, og et par enkelte Dα, Dβ, Dγ glat pind sensilla 13,14. Som flere neuroner er blevet identificeret i hver type sensillum, er det ikke let at skelne de aktionspotentialer fra forskellige neuroner anbragt i samme sensillum, så for dette eksperiment total antal aktionspotentialer blev talt off-line for en 500 ms perioden før og efter stimulering. Antallet af aktionspotentialer efter stimulering blev derefter trækkes fra antallet af aktionspotentialer før stimulering og ganget med to for at kvantificere ændringerne i fyring sats i hvert enkelt sensillum i pigge per sekund 15.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Fremstilling af instrumenter, stimuli Solutions, og seng Bugs
- Der fremstilles en 50% KNO 2-opløsning (vægt / volumen) i en 20 ml flaske.
- Skærpe to wolfram mikroelektroder i KNO 2-opløsning ved 5 V ved gentagne gange at dyppe wolframelektroder ind og ud af opløsningen.
- Groft skærpe wolframtråd ved at dyppe ca. 10 mm af wolfram tråd i og ud af KNO 2-opløsning ved en hastighed på 2 dips / sek i ca. 5 minutter, hvilket i høj grad kan forbruge den forreste ende af wolframtråd.
- Fint skærpe elektroden ved at dyppe ca. 1 mm af tråden spids ind og ud af opløsningen ved en hastighed på 2 dips / sek i mindst 1 min, således at en fin og skarp spids af elektroden. Kontroller elektrode spids diameter under mikroskop hyppigt, indtil den når 0,2-0,5 um, hvilket burde være fint nok til at punktere neglebånd af sengen bug olfaktoriske sensillum.
Bemærk: Mens manuelt skarpkelse elektroden, dypning hastigheden af wolframtråd i KNO 2-opløsning ikke er konstant hele tiden. Med mere praksis er det meget nemmere at holde en relativt konstant hastighed i slibning elektroden. Den skarphed tid er også usikkert, afhængigt af hvor fint elektroden skal være. Her en elektrode spids med diameteren af ~ 0,2 um er tilstrækkelig til at punktere gennem olfaktoriske sensillum.
- Fortynd hver af de kemiske stimuli i dimethylsulfoxid (DMSO) fra det rene forbindelse til en startkoncentration på 1:10 v / v som en stamopløsning. Skabe en række dekadisk fortyndinger afhængigt af hvor mange doser der kræves i eksperimentet igen med DMSO, fra hver af stamopløsningerne for hvert kemikalie. Her skal du bruge 10% (+) - β-pinen og eucalyptol.
- Placer unfed eller syv dage efter fodring voksne væggelus (enten mandlige eller kvindelige) fra Ft. Dix koloni (en gave fra Dr. Haynes i University of Kentucky), der skal anvendes i tHan eksperimenterer i en petriskål.
Bemærk: Der er ingen præcise antal for væggelus placeret i petriskålen. Det kan være et par eller et parti.
2. Bed Bug Antenner Forberedelse
- Bedøve seng bugs på is (2-3 min).
- Lave både antenner og insekt krop på et mikroskop dækglas med dobbeltklæbende tape og fjern benene med fine saks.
- Brug en lille pin til forsigtigt at røre antenner for at holde dem på båndet støt.
- Resten dækglasset mod en lille kugle (~ 1 cm i diameter) af dental voks for at lette manipulation og tilpasse den til en passende vinkel (~ 90 °) til optagelse elektrode (figur 1).
- Når sikret, placere seng fejl under et stereo mikroskop, tænde for kold lyskilde og justere intensiteten af belysning, indtil antennen er klart præsenteret, og fokusere mikroskopet på den anden flagellum af sengen bug antenne ved stor forstørrelse (720X) .
Note: Intensiteten af belysningen anvendt i eksperimentet ikke kvantificeres, som virkelig afhænger af, hvordan eksperimentatorens øjne føler intensiteten af belysningen.
3. Enkelt Sensillum Optagelse
- Tilslut forforstærker (10X) med købet signal controller, som er forbundet med computeren for signal optagelse og visualisering. Tænd for computeren og starte softwaren, f.eks AutoSpike32 og klik på "Record" mode i menulinjen. Vælg derefter "bølge" for at starte optagelse den bølge signaler.
Bemærk: En flad linje fra venstre til højre af skærmen gentagne gange skulle nu være synlig. Her optagelsen vinduet varer 40 sek. Max bølge optagelse er 10 sek. Valgt samplingfrekvens er 96000 og digital sampling rate er 240. Der er 0% offset og ingen filtrering, ingen berigtigelse for optagelsen signaler. Alle disse parameterindstillinger i softwaren kan ændres efter behov. <li> Tænd højttaler forbundet til forforstærkeren, som bruges til at præsentere toning tilstand for de neuronale reaktioner fra antennal sensillum. - Sæt referenceelektroden i maven af det stabiliserede bed bug.
Bemærk: Referenceelektroden blev holdt af en metal står magnetisk fastgjort til luft-bord. - Efter referenceelektroden er tilsluttet bed bug abdomen, flytte registreringselektroden, som er forbundet med forforstærkeren og manipuleres ved hjælp af en mikromanipulator, mod den bageste ende af bed bug antenne.
- Når optagelsen elektroden er i kontakt med den rette spidsen af antennen, tænde mikroskopet og lokalisere elektroden ved lav forstørrelse.
- Juster registreringselektroden samtidig gradvis forøgelse af forstørrelsen, indtil både elektroden og antennal sensillum er i samme plan og klart synlige under mikroskopet.
Bemærk: På dette tidspunkt mikroskopet er sædvanligely på højeste forstørrelse. - Sæt registreringselektroden ind i skakten af sensillum hjælp af mikromanipulator og gå lidt dybere, hvis baggrundsstøjen er høj sammenlignet med aktionspotentialet.
- Når klare aktionspotentialer er observeret fra indspillede sensillum, fylde en mikropipette med 10% (+) - β-pinen. Brug mikropipette til at deponere 10 pi alikvot af 10% (+) - β-pinen på et filter papirstrimmel (~ 3 x 15 mm) anbragt i en glas Pasteur-pipette.
- Slut indlæst pipette til udløbet af pulsen strømningsrøret af stimulus controlleren og placere spidsen af pipetten ind i det lille hul i røret orienteret mod antennen.
- Når alle disse forbindelser har stabiliseret sig, trykkes på fodkontakten af stimulus controller til at levere en 0,5 sek pust af stimulus (0,5 L / min) i den kontinuerlige befugtet luftstrøm. Registreringen af aktionspotentialer vil blive iværksat samtidigt, når footswitch er deprimeret. Optagelsen proces vil være sidste i 10 sek start 1 sek før stimulering.
- Tæl aktionspotentialer off-line for to 500 msek perioder, en før og en efter stimulering. Fratræk enhver ændring i spidsen kurs under 500 ms efter stimulering fra den spontane aktivitet registreret i de foregående 500 msek og konvertere tællingerne i den konventionelle omfanget af pigge / s ved at gange dem med 2.
4. Stimulus Erstatning i SSR
- Når fodpedalen er udløst, levere 10% (+) - β-pinen i pipetten på sengen bug antenner og registrere svar på dette specifikke lugtstof i 10 sek, hvorefter pipetten fjernes.
- Mærk anden ny pipette med 0,001% eucalyptol, der skal testes. Placere en lille stykke filtrerpapir, på hvilket er påført 10 pi af stimulus, i den nye pipette.
- Vente 2-5 min, indtil stimulus er fuldstændig vaporized i glaspipette. Fastgør pipetten på udløbet af pulsen strømningsrøret.
- Sæt pipettespidsen i det lille hul i røret orienteret mod antennen. Træd fodkontakten, og start 10 sek optagelse.
- Afbryd pipette og forberede en anden pipette med 0,01% eucalyptol.
- Test alle resten af doserne af eucalyptol (fra 0,001% til 10%) på den antennal sensilla at observere dosisafhængige reaktioner. Test fra de mest fortyndes til de mindst fortynde doser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Enkelt sensillum optagelse er en kraftfuld efterforskningsmæssige teknik, der anvendes i studier af insekter kemisk økologi og neurale fysiologi. Undersøgelse de neurale reaktioner af insekter på forskellige flygtige forbindelser, især dem menes at være økologisk relateret til overlevelse og udvikling af insekter, ikke kun giver os uvurderlige indsigt i insekt olfaction proces, men også åbner lovende nye veje der potentielt kan medføre til udvikling af nyttige nye reagenser til skadedyrsbekæmpelse.
Den fælles væggelus, som en berygtet urban skadedyr, har helt sikkert tiltrukket sig opmærksomhed fra mange forskere. Blandt de forskellige studieområder relateret til væggelus, deres olfaction mekanisme er af allerstørste betydning for den kemiske økologi væggelus. Tidligere undersøgelser har udtrykkeligt beskrev mængden og fordelingen af forskellige typer af olfaktoriske sensillum på sengenbug antenner. Som vist i figur 2A, bed bug antenner have fire segmenter (SC, PE, F1 og F2). Størstedelen af det olfaktoriske sensilla præsenteres på den bageste ende af 2. flagel (F2), men deres udbredelse er tydeligt forskellig for hver type: D sensilla, nemlig Dα, Dβ og Dγ er kun placeret langs den indvendige side af antenner (figur 2C), mens C og E (E1 og E2) sensilla findes på begge sider af antenner (figur 2B). Derfor med henblik på at sikre, at vi registrerer den neurale respons af D sensilla, er afgørende omhyggelig placering af antennen.
Da begge seksuelle former for bed bug deler samme mønster af sensilla typer og den indvendige side af deres antenner indeholder alle typer sensilla, målretning dette område gør det meget nemmere at optage de kemiske reaktioner i alle de forskellige typer af sensilla separat på antennene (figur 3A). I enkelt sensillum optagelse, sensilla forskellige olfaktoriske udstille neurale signaler med markant forskellige tiltag potentielle typer og amplituder (figur 3B). For eksempel er E sensilla kendt for at have en eller to neuroner inde, mens D-type sensilla hus flere neuroner end enten E eller C sensilla, der producerer mere komplicerede aktionspotentialer end de andre som resultat. Amplituderne af de neurale reaktioner fra C sensilla er meget mindre end de andre sensillum typer.
Når elektrode tilslutninger er sat op, kan der optages de neurale reaktioner fra hver type sensillum til hver stimulus baseret på deres identitet og intensitet. For nogle stimuli, som væggelus er ekstremt følsomme, kan den neurale respons være meget stærke og sidste mange sekunder uden ophør stimulering. For eksempel, som respons på 10% (+) - β-pinen, viste væggelusen stærk reaktion med en enorm fyringshastighed (≥200 pigge / sek) og super-vedvarende tidsmæssige dynamik i sammenligning med kontrolgruppen med opløsningsmiddel alene som stimulus (figur 4A og B). Forskellige stimuli kan udløse helt forskellige neurale reaktioner fra samme sensillum og forskellige koncentrationer af den samme stimulus vil sandsynligvis generere helt andre fyring frekvenser. Som vist i figur 5, forøgelse af koncentrationen af eucalyptol hævede fyring frekvenser fra 30 spikes / sek ved 0,001% til 240 pigge / sek ved 10% på en dosis-afhængig måde.
Figur 1. Et skematisk diagram, der viser proceduren for væggelus fiksering. Er sengen bug stabiliseret på dækglasset med antennerne fast på båndet. Den samlede prøve anbringes dernæst på en magnetisk fase. Orienteringen og højden af prøven cen justeres til en passende vinkel mellem seng bug antenner og optagelsen elektroden. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2. Fordeling af olfaktoriske sensilla på sengen bug antenner. (A) En scanning Elektrode (SEM) billede af en seng bug antenne. Antennen har fire segmenter, for Sculpus (SC), Pedecel (PE), den første flagel (F1) og det andet flagel (F2). De fleste af de olfaktoriske sensilla er placeret på F2, selv om et par olfaktoriske sensilla også blevet fundet på F1, som menes at være relateret til deres funktion sammenlægning feromon detektion for væggelus 16. (B) En SEM-billede af den ydre side af F2, som huser C og E olfactory sensilla. (C) En SEM billede af indersiden af F2, som viste sig at huse alle de forskellige typer af olfaktoriske sensilla: D (Dα, Dβ, Dγ), C og E. Klik her for at se en større version af dette tal .
Figur 3. Typisk neurale signaler af forskellige typer af olfaktoriske sensilla på sengen bug antenner. (A) Høj opløsning SEM billeder af hver type olfaktoriske sensillum på sengen bug antenner. (B) Typiske neurale signaler i de forskellige olfaktoriske sensilla før udsættelse for en stimulus. Dα, Dβ, Dγ og C sensilla, som huser flere olfaktoriske sensoriske neuroner (OSN), udviser mere komplicerede virkningspotentialer end E1 og E2 sensilla, som contain kun en eller to OSN. Amplituder af aktionspotentialer fra C sensilla er meget mindre end i andre sensillum typer. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4. Repræsentative neural respons på stimuli, der væggelus er følsomme over for. (A) Signal spor, der viser den typiske neurale respons af olfaktoriske sensillum (Dγ) til opløsningsmidlet, der anvendes som kontrol i det indre sensillum optagelse. De signal spor er indstillet til at starte 1 sek inden 0,5 sek pust af stimulus. De signal spor fortsætter optagelsen i 10 sek efter indledningen af den stimulus pust. (B) Signal spore viser den meget stærke neurale respons på en olfaktorisksensillum (Dγ) til en botanisk stimulus, 10% (+) - β-pinen. Efter pust af (+) - β-pinen leveres til Dγ sensillum, er OSN opstaldet inde i denne sensillum fyret med høj frekvens og en langvarig tidsmæssig dynamik. Den hvide bar over det signal spor indikerer 1 sek interval før stimulus eksponering, den røde bjælke over spor svarer til levering af stimulus pust på olfaktoriske sensillum, og den sorte bar over spor angiver signalet registreres efter afslutningen af stimulus pust. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5. Repræsentative dosisafhængige reaktioner OSN til stimuli. Brug en anden botanisk stimulus, eucalyptol som en EXAmple, at Dγ sensilla viste en dosisafhængig reaktion på forskellige koncentrationer af eucalyptol. Da koncentrationerne steg fra 0,001% til 10%, de fyring frekvenser steg fra 30 pigge / sek til 240 pigge / sek. Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Det indre Sensillum Recording teknik er blevet flittigt brugt i at teste de neurale reaktioner insekter som bananfluer, myg og væggelus til forskellige kemiske stimuli i miljøet. Disse kemiske stimuli er ofte opløses og fortyndes i et fælles opløsningsmiddel for at fremstille forskellige doser af behandlinger. Dog kan forskellige opløsningsmidler producere helt andre release rater for stimuli. Tidligere undersøgelser på nogle grundigt undersøgt insekter såsom Drosophila melanogaster, malariamyg, Culex quinquefasciatus og Aedes aegypti har normalt anvendes paraffinolie som opløsningsmiddel til opløsning af stimuli, da disse insekter er relativt ufølsomme over for paraffinolie 17-20. Paraffinolie er også blevet anvendt i tidligere enkelt sensillum optagelse studier af væggelus, af samme grund 14. Imidlertid kan den mest almindeligt anvendte opløsningsmiddel ikke være den bedste for hver insektarter. I CASE for væggelus, både paraffinolie og DMSO, som væggelus også udviser ufølsomhed, er blevet anvendt til at opløse stimuli i forskellige undersøgelser 14,15, men de samme doser af stimuli fortyndet i DMSO synes at fremkalde meget stærkere neurale reaktioner på den sensilla af væggelus. For eksempel, DMSO-opløst R - (+) - limonen og S - (-) - limonen genereret neurale reaktioner på ≥70 pigge / sek fra Dγ sensilla på bed bug antenner, mens paraffinolie opløst limonen fremkaldte neurale reaktioner på kun ≤25 pigge / sek fra Dγ sensilla. Dette fald i de neurale reaktioner er ganske almindeligt i stimuli, der er blevet fortyndet med paraffinolie, sandsynligvis på grund af den langsommere frigivelseshastighed paraffinolie sammenlignet med DMSO. Denne langsommere frigivelseshastighed reducerer mængden af stimulus afgivet på overfladen af sensillum og kan resultere i en vildledende konklusion med hensyn til følsomhed over for visse insekter semiochemicals.
To kritiske steps for at gennemføre det indre sensillum optagelse er forberedelse 1) prøve og 2) signal optagelse. Til fremstilling prøve, da seng bugs har meget stærke ben og aktivt flytter antenner, er det meget vigtigt at fjerne alle ben og holde antennerne fast på dobbeltklæbende tape. I signalet optageprocessen, nogle gange, er det umuligt for positionsmæssigt elektroden til at pege i sensillum akslen. Hvis dette er tilfældet, kan elektroden punktere den bageste ende af sensillum, hvilket altid giver en meget ren og klart signal med meget lidt baggrundsstøj.
Da der er flere neuroner, der huses i D og C-type sensilla, er det ofte svært at skelne mellem individuelle neuroner baseret på amplituderne og former af aktionspotentialer produceret under SSR. Det er dog stadig muligt at se forskelle i bed bug svar på forskellige stimuli baseret på den kombinerede fyring hyppigheden af alle neuroner i samme sensillum. Teoretisk væggelus er følsomme over for visse stimuli med kraftig stimulering, mens ufølsom over for andre stimuli med svag stimulering med samme dosis. Yderligere undersøgelser integrerer adfærd tests og informationer om deres neurale respons på disse stimuli vil derfor give meningsfulde oplysninger om økologisk beslægtede semiochemicals for væggelus.
I denne undersøgelse anvendte vi også SSR teknik til at teste de neurale reaktioner af olfaktoriske sensilla til forskellige doser af stimuli. Vi observerede en dosisafhængig mønster i bed bug neurale reaktioner på forskellige kemikalier. Men i betragtning af den komplekse miljø væggelus lever i, vil den faktiske dosis af flygtige stoffer stødt af seng bugs i deres normale omgivelser være meget lav. Som et resultat, semiochemicals der fremkalder stærke neural respons ved lave doser ned til 1:10 5 v / v og 1:10 4 v / v er mere tilbøjelige til at være biologisk meningsfuld for væggelus end andre kemikalier that kun fungere ved høje doser. Derfor disse semiochemicals der virker ved lave doser spiller sandsynligvis en vigtig rolle i chemoreception af væggelus, hjælpe dem med at finde en vært eller undgå negative faktorer, og vil således give nyttig vejledning i screening for lovende bed bug tiltrækker eller frastøder til brug i både laboratorie- og felt-analyser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Tungsten wire | A-M SYSTEMS | #716500 | Used for preparing the electrode |
| KNO2 | Sigma | #310484 | Used for sharpening the tungsten wire |
| AC Power Supply | BK Precision | 1653A | Providing the voltage in sharpening the tungsten wire |
| Leica Z6 APO Microscope | Leica | 10447424 | Used for observing the sensilla on antennae |
| Simulus controller | Syntech | CS-55 | Used for controlling the stimulus application |
| 4-Channel USB Acquisition Controller | Syntech | IDAC-4 | Real-time on screen display of all signals before and during recording |
| Light Source | SCHOTT | A20500 | Providing light sources for observation |
| Micromanupulator | Leica | 115378 | Used for minor movement of electrode |
| Speaker | Juster | 95a | Connected with Acquisition Controller IDAC-4 and providing sound for the signal |
| Magnetic stand | Narishige | GJ-1 | Used to hold the reference electrode, stablized bed bug and stimulus delivery tube |
| TMC Vibration Isolation Table | TMC | 63-500 | Used for isolating the vibration from the equipments |
| Coverslip | Tedpella | 2225-1 | Used for holding the bed bug |
| Double-sided Tape | 3M | XT6110 | Used for stablizing the bed bug on the coverclip |
| Dental Wax | Dentakit | DK-R012 | Used for supporting the coverclip where bed bug is stablized |
References
- Bartonicka, T., Gaisler, J. Seasonal dynamics in the numbers of parasitic bugs (Heteroptera, Cimicidae): a possible cause of roost switching in bats (Chiroptera, Vespertilionidae). Parasitol Res. 100 (6), 1323-1330 (2007).
- Thomas, I., Kihiczak, G. G., Schwartz, R. A. Bed bug bites: a review. Int J Dermatol. 43 (6), 430-433 (2004).
- Anderson, A. L., Leffler, K. Bed bug infestations in the news: a picture of an emerging public health problem in the United States. J Environ Health. 70 (9), 24-27 (2008).
- Boase, C. Bed bugs (Hemiptera: Cimicidae): an evidence-based analysis of the current situation. Sixth international conference on urban pests. OOK-Press Kft. Robinnson, W., Bajomi, D. Budapest, Hungary, , (2008).
- Doggett, S. L., Geary, M. J., Russell, R. C. The Resurgence of bed bugs in Australia: with notes on their ecology and control. Environ Health. 4 (2), 30-38 (2004).
- Ter Poorten, M. C., Prose, N. S.
- Yoon, K. S., Kwon, D. H., Strycharz, J. P., Craig, S., Lee, S. H., Clark, J. M. Biochemical and molecular analysis of deltamethrin resistance in the common bed bug (Hemiptera: Cimicidae). J Med Entomol. 45 (6), 1092-1101 (2008).
- Wang, L., Xu, Y., Zeng, L. Resurgence of bed bugs (Hemiptera: Cimicidae) in mainland China. Fla Entomol. 96 (1), 131-136 (2013).
- Haynes, K. F., Potter, M. F. Recent progress in bed bug management. Advanced technologies for managing insect pests. Ishaaya, I., Palli, S. R., Horowitz, A. R. , Springer. New York. 269-278 (2013).
- Carey, A. F., Carlson, J. R. Insect olfaction from model systems to disease control. Proc Natl Acad Sci. 108 (32), 12987-12995 (2011).
- Leal, W. S. Odorant reception in insects: roles of receptors, binding proteins, and degrading enzymes. Annu Rev Entomol. 58, 373-391 (2013).
- Den Otter, C. J., Behan, M., Maes, F. W. Single cell response in female Pieris brassicae. (Lepidoptera: Pieridae) to plant volatiles and conspecific egg odours. J Insect Physiol. 26 (7), 465-472 (1980).
- Levinson, H. Z., Levinson, A. R., Muller, B., Steinbrecht, R. A. Structural of sensilla, olfactory perception, and behavior of the bed bug, Cimex lectularius., in response to its alarm pheromone. J Insect Physiol. 20 (7), 1231-1248 (1974).
- Harraca, V., Ignell, R., Löfstedt, C., Ryne, C. Characterization of the antennal olfactory system of the bed bug (Cimex lectularius). Chem Senses. 35 (3), 195-204 (2010).
- Liu, F., Haynes, K. F., Appel, A. G., Liu, N. Antennal olfactory sensilla responses to insect chemical repellents in the common bed bug, Cimex lectularius. J Chem Ecol. 40 (6), 522-533 (2014).
- Olson, J. F., Moon, R. D., Kells, S. A., Mesce, K. A. Morphology, ultrastructure and functional role of antennal sensilla in off-host aggregation by the bed bug, Cimex lectularius. Arthropod Struct Dev. 43 (2), 117-122 (2014).
- Bruyne, M., Foster, K., Carlson, J. R.
- Qiu, Y. T., Loon, J. J. A., Takken, W., Meijerink, J., Smid, H. M. Olfactory coding in antennal neurons of the malaria mosquito, Anopheles gambiae. Chem Senses. 31 (9), 845-863 (2006).
- Ghaninia, M., Ignell, R., Hansson, B. S. Functional classification and central nervous projections of olfactory receptor neurons housed in antennal trichoid sensilla of female yellow fever mosquito, Aedes aegypti. Eur J Neurosci. 26 (6), 1611-1623 (2007).
- Hill, S. R., Hanson, B. S., Ignell, R. Characterization of antennal trichoid sensilla from female southern house mosquito, Culex quinquefasciatus Say. Chem Senses. 34 (3), 231-252 (2009).
