छोटे प्रदूषण की रोग प्रतिरक्षण विश्लेषण के लिए पानी के नमूनों की स्वचालित ठोस चरण निष्कर्षण के लिए एक सरल विधि
Summary
A protocol for the extraction and pre-concentration of estradiol from water samples by using an automated and miniaturized system is presented.
Abstract
पर्यावरण के पानी के नमूनों की ठोस चरण निष्कर्षण (एसपीई) के लिए एक नई विधि का प्रस्ताव है। विकसित प्रोटोटाइप लागत प्रभावी और उपयोगकर्ता के अनुकूल है, और तेजी से स्वचालित और सरल एसपीई प्रदर्शन करने के लिए सक्षम बनाता है। पूर्व केंद्रित समाधान के लिए एक कम कार्बनिक विलायक सामग्री के साथ, प्रतिरक्षा द्वारा विश्लेषण के साथ संगत है। एक विधि 100 मिलीलीटर पानी के नमूनों में प्राकृतिक हार्मोन 17β-एस्ट्राडियोल की निकासी और पूर्व एकाग्रता के लिए वर्णित है। रिवर्स चरण एसपीई octadecyl-सिलिका Sorbent साथ किया जाता है और क्षालन मेथनॉल 50% v / वी के 200 μl के साथ किया जाता है। Eluent मेथनॉल की राशि को कम करने के लिए डी-पानी जोड़कर पतला है। मैन्युअल एसपीई स्तंभ तैयार करने के बाद, समग्र प्रक्रिया 1 घंटा के भीतर स्वचालित रूप से किया जाता है। प्रक्रिया के अंत में, एस्ट्राडियोल एकाग्रता एक वाणिज्यिक एंजाइम से जुड़ी प्रतिरक्षा-Sorbent परख (एलिसा) का उपयोग करके मापा जाता है। 100 गुना पूर्व एकाग्रता हासिल की है और केवल 10% v / वी में मेथनॉल सामग्री। अणु का पूर्ण वसूलियां1 एनजी के साथ प्राप्त कर रहे हैं / एल-डे आयनित और सिंथेटिक समुद्र के पानी के नमूनों नुकीला।
Introduction
नमूना तैयार किसी भी विश्लेषणात्मक प्रक्रिया में एक महत्वपूर्ण कदम है। विशेष रूप से, मैट्रिक्स प्रभाव, हस्तक्षेप की कमी है, और विश्लेष्य के संवर्धन को हटाने के सटीक परिणाम प्राप्त करने और पता लगाने के लिए कम सीमा तक पहुंचने के लिए जरूरी हैं। अंत: स्रावी में खलल न डालें यौगिकों (EDCs) की वजह से रहने वाले जीवों पर अपनी कार्रवाई करने के लिए विशेष रूप से चिंता का विषय हैं, तब भी जब वातावरण में वर्तमान में बहुत कम स्तर। प्राकृतिक हार्मोन 17β-एस्ट्राडियोल यूरोपीय जल फ्रेमवर्क निर्देशक के तहत विनियमित प्राथमिकता पदार्थों की सूची में जोड़े जाने के लिए यूरोपीय संघ के जल प्रदूषण दृश्य सूची पर उपस्थित होने का खतरा है। ठोस चरण निष्कर्षण (एसपीई) आमतौर पर दोनों रासायनिक 1-5 (क्रोमैटोग्राफी, मास स्पेक्ट्रोमेट्री) और प्रतिरक्षा 6-9 तरीकों का पता लगाने के साथ पानी में छोटे प्रदूषण के विश्लेषण के लिए आवेदन किया है। उत्तरार्द्ध immunoassays, स्वरूपों की बड़ी विविधता में उपलब्ध हैं टा करने के लिए विशिष्ट हैं, के रूप में पर्यावरण की निगरानी के क्षेत्र में ब्याज अर्जित कियाविश्लेष्य rget, और पता लगाने के लिए कम सीमा तक पहुँचने। 6, 7, 10, 11 विभिन्न एंजाइम से जुड़ी immunosorbent assays (एलिसा) व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं और एक बहु अच्छी तरह से थाली पर एक बार में कई नमूने का विश्लेषण करने के लिए सक्षम। प्रक्रिया में कुछ घंटे लग सकते हैं कि लगातार प्रतिक्रिया चरणों में होते हैं। प्रतिक्रिया की अंतिम उत्पाद एक अंशांकन वक्र के आधार पर लक्ष्य अणु की एकाग्रता का निर्धारण करने के लिए ऑप्टिकली पता लगाया जा सकता है।
शास्त्रीय एसपीई प्रक्रियाओं eluent के वाष्पीकरण द्वारा Sorbent पूर्व कंडीशनिंग, नमूना निष्कर्षण, कपड़े धोने, क्षालन, और एकाग्रता शामिल हैं। इस निकालने के कमजोर पड़ने के लिए इस्तेमाल किया विलायक पहचान पद्धति के आधार पर चुना जाता है। प्रतिरक्षाविज्ञानी तरीकों के लिए, दृढ़ता से कार्बनिक विलायक प्रभावों विधि की संवेदनशीलता की राशि। 12
वसूली और पूर्व एकाग्रता प्रदर्शन के अलावा, विधि भी सरल हो सकता है और लागत प्रभावी करने की जरूरत है। Procedur के स्वचालनई मानव से संबंधित त्रुटियों को कम करने में मदद करता है। हमारे पिछले काम 13 में हम स्वचालित एसपीई के लिए हमारे प्रोटोटाइप पेश किया, और हमारे विधि समुद्र के पानी के नमूनों में प्राकृतिक हार्मोन 17β-एस्ट्राडियोल का विश्लेषण करने के लिए लागू किया गया था। वर्तमान वीडियो के साथ हम एसपीई, और इम्युनो प्रतिक्रियाओं से पता लगाने के साथ अपने विशेष अनुकूलता परंपरागत बंद लाइन के लिए और ऑन लाइन की तुलना में हमारे विधि के तकनीकी लाभ पर प्रकाश डाला करना चाहते हैं। हम 17β-एस्ट्राडियोल का पता लगाने के लिए पानी के नमूने के लिए लागू प्रोटोकॉल का वर्णन है। एसपीई octadecyl-सिलिका (C18) Sorbent चरण और क्षालन पतला मेथनॉल के साथ किया जाता है के साथ किया जाता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
प्रतिरक्षा का उपयोग कर विश्लेषण के बाद पानी के नमूनों की तैयारी के लिए एक नई विधि का प्रस्ताव रखा था। साधन एक स्वचालित और उपयोगकर्ता के अनुकूल तरीके से ठोस चरण निष्कर्षण प्रदर्शन करने के लिए सक्षम बना?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work was funded by the European Union Seventh Framework Program FP7/2007-2013 under grant agreement no. 265721. The authors thank the RIKILT Institute for Food Safety (NL) for their support in this project.
Materials
| Filter membrane 0.2 μm pore size | Merck Millipore | GNWP04700 | For sample filtration |
| Nylon membrane 11 μm pore size | Merck Millipore | NY1104700 | For SPE column |
| Disposable biopsy punch 5 mm | Medical Budget | 39302439 | |
| Nucleodur C18 ec | Macherey Nagel | 713550.01 | 50 μm particle diameter |
| Synthetic sea water | Sigma Aldrich | SSWS500-500ML | |
| Methanol | VWR | ||
| 17beta-estradiol standard | Enzo Life Science | 300 ng/ml | |
| 17beta-estradiol ELISA kit | Enzo Life Science | ADI-900-008 | 96 wells, range 30 – 3000 ng/L |
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