Summary
Den vanligast använda metoden för nanostrukturerade lipidbärare (NLC) syntes involverar olja-i-vatten-emulsion, homogenisering och stelning. Detta ändrades här genom att applicera hög skjuvning dispersion efter stel att uppnå en NLC med önskvärd storlek, förbättrad läkemedels inkapsling och läkemedelsladdningseffektivitet som en potentiell bärare för dakarbazin leverans.
Abstract
Den enda formeln för dakarbazin (DAC) i klinisk användning är intravenös infusion och presenterar en dålig terapeutisk profil beroende på den låga dispersiteten av läkemedlet i vattenlösning. För att övervinna detta har en nanostrukturerade lipidbärare (NLC) som består av glycerylpalmitostearat och isopropylmyristat utvecklats för att inkapsla Dac. NLCS med reglerad storlek uppnåddes med användning av hög skjuvning dispersion (HSD) efter stelning av olja-i-vatten-emulsion. Syntesparametrar, inklusive ytaktivt koncentration, hastigheten och tiden för HSD har optimerats för att uppnå den minsta NLC med storlek, polydispersionsindex och zetapotential av 155 ± 10 nm, 0,2 ± 0,01, och -43,4 ± 2 mV, respektive. De optimala parametrarna användes även för Dac-loaded NLC beredning. Den resulterande NLC laddad med Dac besatt storlek, polydispersionsindex och zetapotential av 190 ± 10 nm, 0,2 ± 0,01, och -43,5 ± 1,2 mV, respektive. Läkemedlet inkapsling efvitet och läkemedelsbelastning nådde 98% och 14%, respektive. Detta är den första rapporten om inkapsling av Dac använder NLC, vilket innebär att NLC kan vara en ny potentiell kandidat som läkemedelsbärare för att förbättra den terapeutiska profilen hos DAC.
Introduction
Dakarbazin (DAC) är ett alkyleringsmedel som utövar antitumöraktivitet genom nukleinsyror metylering eller direkt DNA-skada, vilket leder till cellcykelstopp och celldöd 1.
Som en första linje kemoterapeutiskt medel, har Dac använts ensamma eller i kombination med andra läkemedel kemoterapi för behandling av olika cancerformer 2-6. Det är den mest aktiva medlet hittills använts vid behandling av kutan och metastatiskt melanom, som är den mest aggressiva formen av hudcancer 3,7,8. Svarsfrekvensen är emellertid endast 20% i bästa, och de terapeutiska effekterna åtföljs ofta med svåra systemiska biverkningar.
I sin naturliga form, är Dac hydrofil och är instabil på grund av dess ljuskänslighet 9. Den enda tillgängliga formeln för klinisk användning är för närvarande ett sterilt pulver som skall användas i suspension för intravenös infusion 7,8. Den låga svarsfrekvensen och hög systemisk toxicitet råt av läkemedlet är till stor del tillskrivas dess dåliga vattenlöslighet, därför låg tillgänglighet vid målplatsen, och hög utdelning på icke-målställen, vilket begränsar den maximala dosen av läkemedlet 10. Den snabba nedbrytning och metabolism efter intravenös entré tillsammans med utvecklingen av läkemedelsresistens begränsa den kliniska tillämpningen och terapeutiska effekten av läkemedlet 11. Därför finns det ett akut behov av att utveckla alternativa Dac formuleringar för behandling av malignt melanom.
Kolloidala system innehållande liposomer, miceller eller nanostrukturerade partiklar har undersökts intensivt för deras användning i läkemedelstillförsel som granskats av Marilene 12 nanostrukturerade partiklar som potentiella läkemedelsbärare har allt större uppmärksamhet under det senaste decenniet et al. På grund av deras förmåga att öka läkemedelsladdning effektivitet, kontroll läkemedelsdosering, förbättra farmakokinetik och biodistribution drog, och därför rDRA UT läkemedel systemisk toxicitet 13. Endast ett fåtal nanoformulations emellertid har undersökts hittills för Dac leverans, som visar skydd av läkemedlet från fotodegeneration, ökade läkemedlets löslighet, och förbättrad terapeutisk effekt 10,14,15. Men dessa formuleringar lidit av låg inkapslingseffektivitet medan vissa även använda syntetiska polymernanopartiklar som inte är kostnadseffektiva.
Nanostrukturerade lipidbärare (NLC), gjorda av en blandning av fasta och flytande lipider, har utvecklats för drug delivery 16,17. De läkemedel som skall inkapslas är ofta lösliga i både de vätskeformiga lipider och fasta lipider faserna 18, vilket resulterar i en hög belastnings och kontrollerad frisättning 19. Denna studie syftar till att utveckla en ny Dac formulering baserad på NLC-inkapsling använder glycerylpalmitostearat och isopropylmyristat som lipider. Framställningen involverade olja-i-vatten-emulsion, indunstning, stelning, och homogenization. Förberedelserna har präglats för NLC storlek, form, ultra och dispersitet, drog inkapslingseffektivitet och läkemedelsbelastning 20.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Framställning av olja-i-vatten-emulsion
- Väg glycerylpalmitostearat (120 mg), isopropylmyristat (60 mg), d-α-tokoferyl-polyetylenglykol succinat (30 mg) och sojabönlecitin (30 mg), och lägga till dem till 12,5 ml av organiska lösningsmedel (6,25 ml aceton och 6,25 ml etanol). Snabbt lösa upp blandningen vid temperaturen 70 ° C (5 ° C över smältpunkten för den fasta lipid) i vattenbad.
- Lägga antingen 125, 250 eller 375 mg Poloxamer188 i 12,5 ml DDH 2 O för att uppnå 1-3% (respektive) av Poloxamer 188-lösning, som är föremål för upphettning vid samma temperatur som ovan.
- Lägga den vattenhaltiga fasen lösningen från steg 1,2 till oljefasen lösningen från steg 1,1 droppvis för att bilda emulsioner under magnetisk omrörning vid 400 rpm. Röra om emulsionen vid 400 varv per minut under ytterligare 4 h för att medge avdunstning av de organiska lösningsmedlen.
2. Stel och homogenisering
- lämnar than emulsion i ett kallt rum (4 ° C) i 2 timmar för att stelna / kristallisera.
- För att erhålla NLC, utsätta emulsionen för hög skjuvning dispersion (HSD) med en homogenisator vid 10.000-15.000 rpm under 10-40 minuter.
3. Optimering av NLC Preparation
- Ta prover från steg 2,2 med en koncentration av ytaktivt medel av en, två och tre% undergår HSD med hastigheter på 10000, 15000 och 20000 rpm, respektive, och tidsintervaller av 10, 20, 30 och 40 minuter, respektive,
- Undersök proverna för partikelstorlek (PS), poly spridningsindex (PDI), morfologi och ultra 20.
Obs: De parametrar som producerar partiklar med den minsta storleken (155 nm) och PDI (0,2) värde bestäms som optimal.
4. Framställning av Dac belastad NLC (NLC-DAC)
- Förbereda oljefas lösning såsom beskrivs i steg 1,1 med tillsats av Dac (70 mg) före upplösning av blandningen vid 70 ° C i vattenbad.
- Prepare en vattenfas lösning såsom beskrivs i steg 1,2 med 1% ytaktivt medel, och tillsätt denna lösning till att beredd i steg 4,1 droppvis till bildning av en emulsion under magnetisk omrörning vid 400 rpm. Röra om emulsionen under ytterligare 4 timmar för att avdunsta de organiska lösningsmedlen.
- Lämna emulsionen i ett kallt rum (4 ° C) under 2 timmar för att stelna / kristallisera såsom beskrivs i steg 2, och slutligen, utsätta emulsionen till hög skjuvning dispersion (HSD) med användning av de optimala parametrar som bestämts i steg 3.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Förberedelserna för NLC och NLC-Dac hjälp glycerylpalmitostearat och isopropylmyristat med olika parametrar karaktäriserades för PS, PDI, morfologi och ultra 20. PS och PDI av NLCS var ytaktivt koncentration, HSD hastighet och varaktighet beroende. Enligt bedömning med PS och PDI av NLCS erhölls de bästa resultaten uppnås med en% av ytaktivt medel och en ren dispersion hastighet på 15.000 varv per minut under 30 min (figur 1 A, B och C), som därför wwew vald som de optimala parametrarna för NLC beredning i denna studie.
Figur 1. Optimering av parametrar som används i NLC beredning. Den optimala koncentrationen ytaktivt ämne och hastigheten och tiden för HSD bestämdes enligt deras effekt på PS och PDI. (
De optimala parametrar användes för NLC-Dac preparatet. Den minsta storleken som uppnåddes var 150 ± 10 nm för NLC (Figur 2A) och 190 ± 10 nm för NLC-Dac (figur 2B), båda med PDI av 0,2 ± 0,001, vilket indikerar en god likformighet.
Figur 2. DLS mätning av NLC (A) Den optimala storleksfördelningen av vanligt NLC.; (B) den optimala storleksfördelningen av NLC-Dac.
(Figur 3).
Figur 3. TEM avbildning av NLC och NLC-Dac. Både NLC och NLC-Dac visade en sfärisk form. (A) Grundläggande NLC strukturen innefattar ett skikt tensid (fast svart pil), flytande lipidmatrix (vitt fast pil), och fasta lipid kristaller (streckade vita pilar); (B) NLC-Dac uppvisade också den grundläggande strukturen som visas i NLC men ytaktivt skikt, flytande matris lipid och fast lipid kristaller verkade utvidgas; en extra byggnad kunde ses i de fasta lipid kristaller (indikerade med streckade svarta pilar), indikerar läkemedelsladdning. Bar skala: 50 nm, Förstoring: 55,000X. Denna figur har modifierats 20.
"1"> Uppladdning och inkapsling av Dac i NLC indikeras av storleken och strukturförändringar som framgår av fig 2 och 3, där NLC-Dac visar en större storlek och förändrade interna strukturer jämfört med NLC. Den grundläggande strukturen för NLC innefattar ett skikt ytaktivt medel, ett flytande matris lipid och fasta lipidkristaller (figur 3a). NLC-Dac uppvisade även den grundläggande strukturen som en NLC men med expanderat ytaktivt skikt, vätskematrisen lipid och fasta lipidkristaller, tillsammans med en extra understruktur inuti de fasta lipidkristaller (figur 3B), som är indikativa för läkemedelsladdning och inkapsling. De fasta lipidkristaller sett i NLC föll tätare än den i NLC-Dac, vilket indikerar att den fasta lipiden är mindre kristalliserade i NLC-Dac.
Läkemedlet inkapslingseffektiviteten (EF) och läkemedelsbelastning (DL) procent härleddes från följande ekvationer:
"Fo: keep-together.within-page =" 1 "> EE% = W 1 - W2 / W 1 x 100 = 98,5%DL% = W 1 - W 2 / W 3 x 100 = 14%
där W en mängd Dac sätts i NLC, W2 mängd un-inneslutet Dac, W3 mängd av lipider sattes 20.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Lipidbaserade nanostrukturerade partiklar har använts för att ge en mycket lipofil bärare för tillförsel av hydrofoba läkemedel. En NLC är den andra generationen av fast lipid nanostrukturerade bärare, vilka är fasta vid rums och kroppstemperatur. Införlivandet av en fast lipid i en vätska lipid i en NLC resulterar i en mindre perfekt kristallisation, vilket ökar läkemedelsladdningseffektivitet och även minska utdrivning av inkapslade läkemedel under lagring.
För NLC syntesen, involverar den mest använda metoden olja-i-vatten-emulsion, homogenisering och stelning / kristallisation 21,22. Homogeniseringen tillåter NLCS att dispergera grundligt i en vattenhaltig fas, medan den stel vid låg temperatur tillåter den inre oljefasen för att kristallisera. Olika homogenisering metoder har rapporterats, inklusive magnetisk omröring, ultrasonikering, och HSD som används före och / eller under stel 23,24
I denna studie var den allmänt använda metoden initialt följt för NLC beredning. Som ett resultat var otillfredsställande, var metoden modifieras så att HSD tillämpades efter stelning. Denna modifiering visat sig vara mycket effektiv i partikelgenerering, PS och PDI kontroll, samtidigt som gör NLC syntes enklare jämfört med tidigare rapporter om NLC preparat med samma lipider 23,25. Det var värt att notera att längden på avdunstning (protokoll 1,3) och stel (protokoll 2,1) är mycket kritisk som för lång eller för kort tid skulle ha negativa effekter på genereringen av NLC.
Denna studie visar att NLC partiklar och deras sammanläggning bildades under stelning. HSD kan störa aggregering, som var möjligen beroende på hydrofob växelverkan mellan NLCS, och även stabilisera partiklarna genom att noggrant remixa dem med ytaktivt ämne. Syntesförfarandet optimerades såsom thatt NLC och NLC-Dac producerades med en storlek 155 ± 10 nm och 190 ± 10 nm, respektive, och en PDI av 0,2 ± 0,01. Den höga graden av enhetlighet med partikelstorlekar och de små PDI-värden indikerar att en tillräcklig dispersion energi uppnåddes och väl fördelade i lösningen för störningar av partikelaggregat. Det har föreslagits att partiklar av 100-200 nm är inte benägna att upptag av icke-riktade celler, inklusive mononukleära fagocytiska systemet och därmed få en lång blodcirkulationstiden in vivo 26,27, medan en PDI av mer än 0,5 är en indikation av partikelaggregation 28; ju lägre PDI-värde, desto högre är storleken homogenitet mellan partiklarna 29. Ytterligare ökning av HSD hastighet och tid över den optimala punkten kan leda till ytterligare PS minskning, och därmed en ökad samverkan mellan små partiklar samt åter aggregering. Skillnaden i storlek och struktur mellan NLC och NLC-Dac föreslår att Dac lastning och inkapsling var framgångsrik. Läkemedlet binder till det yttre lagret av den NLC och inkapsling inuti lipidmatriser ge en potential för förlängd läkemedelsfrisättning, som skulle kunna innebära läkemedelsfrisättning för det första av det yttre skiktet, följt av frisättning från vätskematrisen lipid och sedan från de fasta lipidkristaller av NLC 30.
För närvarande fyra nanoformulations har försökt för leverans av Dac som monoterapi. Den senaste formuleringen rapporterades var avsedd för duell inkapsling av Dac och vitamin A 32. Emellertid dessa formuleringar lidit av ett lågt inkapslingseffektivitet och / eller relativt komplexa syntesförfaranden. Detta är den första rapporten för inkapsling av Dac med en NLC, bevisar fördelaktigt jämfört med andra inkapslingar som tidigare rapporterats. NLC-Dac är lätt att göra och presenterar högre läkemedels inkapsling och läkemedelsbelastning effektiviteten med 20. NLC-Dac visade nästan 50% avläkemedel släppas inom de första två timmar medan de återstående släpps långsamt upp till 30 timmar 20. Förtida frigivning kan bero på bindningen av läkemedlet med ytaktivt skikt på ytan av den NLC, vilket indikerar att denna formulering inte kan vara perfekt för att ersätta formuleringen närvarande i klinisk användning. Men läkemedlet i NLC-Dac verkade mer stabil jämfört med nanoemulsion tidigare 10 rapporterats. Dessutom har lipid baserade fordon föreslagits för behandling av kutant melanom och epidermoidkarcinom genom topisk läkemedelsavgivning 32,10, vilket indikerar att NLC-Dac utvecklats i denna studie också skulle kunna vara fördelaktigt för topisk applicering där tidig läkemedelsfrisättning inte skulle potentiellt leda till allvarliga systemiska toxicitet.
På grund av de kollektiva begränsningar med de tillgängliga drug delivery bärare utvecklats hittills, det behövs ytterligare forskning för att utveckla mer avancerade nanomaterial för Dac leverans riktadcancerbehandling.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har ingenting att lämna ut.
Acknowledgments
Författarna erkänner Saudiarabien finansierade stipendium (I821) för att göra forskningen möjlig. Författarna är tacksamma till Dr Xianwei Liu för expertstöd i TEM-analys vid Cranfield University.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dacarbazine (DAC) | Sigma Aldrich (Gillingham Dorset, UK) | D2390-100MG | drug used for uploading |
| glyceryl palmitostearate | Gattefossé (Saint_Priest_cédex, France) | 85251-77-0 | solid lipid |
| d-α- Tocopherol polyethylene glycol succinate (TPGS) | Sigma Aldrich (Gillingham Dorset, UK) | 57668 | lipid phase surfactant |
| Poloxamer 188 | Sigma Aldrich (Gillingham Dorset, UK) | 15759-1KG | liqiud phase surfactant |
| Acetone | Sigma Aldrich (Gillingham Dorset, UK) | 650501-1L | organic solvent |
| Ethanol | Sigma Aldrich (Gillingham Dorset, UK) | 459836-1L | organic solvent |
| Soybean lecithin (SL) | Cuisine Innovation (Dijon, France) | SLL1402 | lipid phase surfactant |
| Double-distilled water was collected in our laboratory from | Millipore-Q Gradient A10 ultra-pure water system (Millipore, France) | SAS - 67120 | aqueous phase |
| T 25 digital ULTRA-TURRAX | IKA | 3725000 | as high shear disperser |
| Hotplate Magnetic Stirrer | Scientific Support, Inc | 1454 | emulsion homogenization |
References
- Loo, T. L., Housholder, G. E., Gerulath, A. H., Saunders, P. H., Farquhar, D. Mechanism of action and pharmacology studies with DTIC (NSC 45388). Cancer Treat Rep. 60 (2), 149-152 (1976).
- Behringer, K., et al. Omission of dacarbazine or bleomycin, or both, from the ABVD regimen in treatment of early-stage favourable Hodgkin's lymphoma (GHSG HD13): An open-label, randomised, non-inferiority trial. The Lancet. 385 (9976), 1418-1427 (2014).
- Carvajal, R. D., et al. A phase 2 randomised study of ramucirumab (IMC-1121B) with or without dacarbazine in patients with metastatic melanoma. Eur J Cancer. 50 (12), 2099-2107 (2014).
- Jiang, G., Li, R., Sun, C., Liu, Y., Zheng, J. Dacarbazine combined targeted therapy versus dacarbazine alone in patients with malignant melanoma: A meta-analysis. PLoS ONE. 9 (12), (2014).
- Lazar, V., et al. Sorafenib plus dacarbazine in solid tumors: A phase i study with dynamic contrast-enhanced ultrasonography and genomic analysis of sequential tumor biopsy samples. Invest New Drugs. 32 (2), 312-322 (2014).
- Niemeijer, N. D., Alblas, G., Van Hulsteijn, L. T., Dekkers, O. M., Corssmit, E. P. M. Chemotherapy with cyclophosphamide, vincristine and dacarbazine for malignant paraganglioma and pheochromocytoma: Systematic review and meta-analysis. Clin Endocrinol (Oxf). 81 (5), 642-651 (2014).
- Bedikian, A. Y., Garbe, C., Conry, R., Lebbe, C., Grob, J. J. Dacarbazine with or without oblimersen (a Bcl-2 antisense oligonucleotide) in chemotherapy-naive patients with advanced melanoma and low-normal serum lactate dehydrogenase: 'The AGENDA trial'. Melanoma Res. 24 (3), 237-243 (2014).
- Daponte, A., et al. Phase III randomized study of fotemustine and dacarbazine versus dacarbazine with or without interferon-a in advanced malignant melanoma. J Trans Med. 11 (1), (2013).
- Jiao, J., Rhodes, D. G., Burgess, D. J. Multiple Emulsion Stability: Pressure Balance and Interfacial Film Strength. J Colloid Interface Sci. 250 (2), 444-450 (2002).
- Kakumanu, S., Tagne, J. B., Wilson, T. A., Nicolosi, R. J. A nanoemulsion formulation of dacarbazine reduces tumor size in a xenograft mouse epidermoid carcinoma model compared to dacarbazine suspension. Nanomedicine. 7 (3), 277-283 (2011).
- Xie, T., Nguyen, T., Hupe, M., Wei, M. L. Multidrug resistance decreases with mutations of melanosomal regulatory genes. Cancer Res. 69 (3), 992-999 (2009).
- Estanqueiro, M., Amaral, M. H., Conceição, J., Lobo, J. M. S. Nanotechnological carriers for cancer chemotherapy: the state of the art. Colloids Surf., B. 126, 631-648 (2015).
- Koziara, J. M., Whisman, T. R., Tseng, M. T., Mumper, R. J. In-vivo efficacy of novel paclitaxel nanoparticles in paclitaxel-resistant human colorectal tumors. J Controlled Release. 112 (3), 312-319 (2006).
- Ding, B., et al. Biodegradable methoxy poly (ethylene glycol)-poly (lactide) nanoparticles for controlled delivery of dacarbazine: Preparation, characterization and anticancer activity evaluation. Afr J Pharm Pharacol. 5 (11), 1369-1377 (2011).
- Ding, B., et al. Anti-DR5 monoclonal antibody-mediated DTIC-loaded nanoparticles combining chemotherapy and immunotherapy for malignant melanoma: target formulation development and in vitro anticancer activity. Int J Nanomedicine. 6, 1991-2005 (2011).
- Jenning, V., Thünemann, A. F., Gohla, S. H. Characterisation of a novel solid lipid nanoparticle carrier system based on binary mixtures of liquid and solid lipids. Int J Pharm. 199 (2), 167-177 (2000).
- Müller, R. H., Radtke, M., Wissing, S. A. Nanostructured lipid matrices for improved microencapsulation of drugs. Int J Pharm. 242 (1-2), 121-128 (2002).
- Pouton, C. W. Lipid formulations for oral administration of drugs: Non-emulsifying, self-emulsifying and 'self-microemulsifying' drug delivery systems. Eur. J. Pharm. Sci. 11 (Suppl. 2), S93-S98 (2000).
- Jores, K., Mehnert, W., Drechsler, M., Bunjes, H., Johann, C., Mäder, K. Investigations on the structure of solid lipid nanoparticles (SLN) and oil-loaded solid lipid nanoparticles by photon correlation spectroscopy, field-flow fractionation and transmission electron microscopy. J Controlled Release. 95 (2), 217-227 (2004).
- Almousallam, M., Zhu, H. Encapsulation of cancer therapeutic agent dacarbazine using nanostructured lipid carrier. Int nano lett. , (2015).
- Ng, W. K., et al. Thymoquinone-loaded nanostructured lipid carrier exhibited cytotoxicity towards breast cancer cell lines (MDA-MB-231 and MCF-7) and cervical cancer cell lines (HeLa and SiHa). BioMed Research International. , (2015).
- Sun, M., et al. Quercetin-nanostructured lipid carriers: Characteristics and anti-breast cancer activities in vitro. Colloids Surf., B. 113, 15-24 (2014).
- Savla, R., Garbuzenko, O. B., Chen, S., Rodriguez-Rodriguez, L., Minko, T. Tumor-Targeted Responsive Nanoparticle-Based Systems for Magnetic Resonance Imaging and Therapy. Pharm Res. 31 (12), 3487-3502 (2014).
- Chen, Y., et al. Formulation, characterization, and evaluation of in vitro skin permeation and in vivo pharmacodynamics of surface-charged tripterine-loaded nanostructured lipid carriers. Int J Nanomedicine. 7, 3023 (2012).
- Sanna, V., Caria, G., Mariani, A. Effect of lipid nanoparticles containing fatty alcohols having different chain length on the ex vivo skin permeability of Econazole nitrate. Powder Technol. 201 (1), 32-36 (2010).
- Brigger, I., Dubernet, C., Couvreur, P. Nanoparticles in cancer therapy and diagnosis. Adv Drug Deliv Rev. 54 (5), 631-651 (2002).
- Visaria, R. K., et al. Enhancement of tumor thermal therapy using gold nanoparticle-assisted tumor necrosis factor-a delivery. Mol Cancer Ther. 5 (4), 1014-1020 (2006).
- Tripathi, A., Gupta, R., Saraf, S. A. PLGA nanoparticles of anti tubercular drug: Drug loading and release studies of a water in-soluble drug. Int J PharmTech Res. 2 (3), 2116-2123 (2010).
- Joshi, M., Patravale, V. Nanostructured lipid carrier (NLC) based gel of celecoxib. Int J Pharm. 346 (1-2), 124-132 (2008).
- Lim, W. M., Rajinikanth, P. S., Mallikarjun, C., Kang, Y. B. Formulation and delivery of itraconazole to the brain using a nanolipid carrier system. Int J Nanomedicine. 9 (1), 2117-2126 (2014).
- Bei, D., Zhang, T., Murowchick, J. B., Youan, B. C. Formulation of dacarbazine-loaded cubosomes. Part III. physicochemical characterization. AAPS PharmSciTech. 11 (3), 1243-1249 (2010).
- Lei, M., et al. Dual drug encapsulation in a novel nano-vesicular carrier for the treatment of cutaneous melanoma: Characterization and in vitro/in vivo evaluation. RSC Advances. 5 (26), (2015).
