Abstract
नेत्र लेंस एक पारदर्शी अंग है कि refracts और रेटिना पर एक स्पष्ट छवि के रूप में प्रकाश केंद्रित है। मनुष्यों में, सिलिअरी मांसपेशियों अनुबंध लेंस ख़राब करने के लिए, एक प्रक्रिया आवास के रूप में जाना जाता आसपास की वस्तुओं पर ध्यान केंद्रित करने के लिए लेंस 'ऑप्टिकल शक्ति में वृद्धि करने के लिए अग्रणी। , को समायोजित करने के लिए लेंस की क्षमता में कमी, और विस्तार के द्वारा, चश्मा पढ़ने के लिए जरूरत लेंस कठोरता में उम्र से संबंधित परिवर्तन presbyopia से जोड़ा गया है। हालांकि माउस लेंस को समायोजित या presbyopia विकसित नहीं है, माउस मॉडल समझ लेंस विकृतियों के लिए एक अमूल्य आनुवंशिक उपकरण प्रदान कर सकते हैं, और त्वरित उम्र बढ़ने चूहों में मनाया लेंस में उम्र से संबंधित परिवर्तन के अध्ययन के लिए सक्षम बनाता है। इस प्रोटोकॉल, माउस लेंस कठोरता का निर्धारण क्रमिक रूप से लागू लेंस पर compressive भार बढ़ाने के लिए कांच coverslips प्रयोग करने के लिए एक सरल, सटीक, और लागत प्रभावी तरीका दर्शाता है। प्रतिनिधि डेटा है कि माउस लेंस उम्र के साथ कड़ी बन जाते हैं, जैसे इस बात की पुष्टिमानव लेंस। इस विधि अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है और संभावित बड़े जानवरों से परीक्षण लेंस यंत्रवत् करने के लिए बढ़ाया जा सकता है।
Protocol
सभी पशु प्रक्रियाओं सिफारिशों के साथ गाइड में स्क्रिप्स रिसर्च इंस्टीट्यूट में संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा स्वास्थ्य और एक अनुमोदित प्रोटोकॉल के तहत राष्ट्रीय संस्थान द्वारा की देखभाल और प्रयोगशाला पशु के उपयोग के लिए अनुसार प्रदर्शन किया गया।
1. लेंस विच्छेदन
- स्वास्थ्य "देखभाल और प्रयोगशाला पशु के उपयोग के लिए गाइड" के राष्ट्रीय संस्थानों और अनुमोदित संस्था पशु का उपयोग प्रोटोकॉल में सिफारिशों के अनुसार चूहों euthanize।
- घुमावदार संदंश का उपयोग चूहों से आंख पता लगाना। संदंश के साथ आंख के आसपास ऊतक दबाना सॉकेट से बाहर आंख लाने के लिए, और फिर संदंश के साथ सॉकेट से आंख बांधना। विच्छेदन डिश में ताजा 1x फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) के लिए आंखों के स्थानांतरण।
- ऑप्टिक तंत्रिका के रूप में संभव के रूप में आंख की पुतली के पास से काटा। धीरे और सावधानी से छेद के माध्यम से wher नेत्रगोलक में ठीक सीधे चिमटी डालनेई ऑप्टिक तंत्रिका पीछे बाहर निकालता है।
- ध्यान से कॉर्निया के किनारे करने के पीछे से नेत्रगोलक में कैंची के साथ एक चीरा बनाते हैं। कृंतक लेंस पर कब्जा आंख की ~ 30%। इन चीरों सावधानी से करें, और आंख में भी गहरी चिमटी या कैंची न डालें लेंस को नुकसान पहुँचाए से बचने के लिए।
- नेत्रगोलक के आसपास कम से कम आधे रास्ते में कॉर्निया और श्वेतपटल के बीच जंक्शन के साथ काटा।
- धीरे कॉर्निया पर धक्का कदम 1.4 और 1.5 में किए गए उद्घाटन के माध्यम से आँख से लेंस हटा दें।
- ठीक टिप सीधे संदंश का प्रयोग सावधानी से किसी भी बड़े मलबे कि अभी भी लेंस से जुड़ा हुआ है हटा दें। दिखने में कठोरता माप के लिए आगे बढ़ने से पहले किसी भी नुकसान के लिए लेंस का निरीक्षण किया।
2. कठोरता माप
- एक विश्लेषणात्मक संतुलन का उपयोग एक ही बॉक्स से कम से कम 10 coverslips वजन। coverslips का औसत वजन का पता लगाएं। स्थिरता के लिए, सभी प्रयोगों के लिए coverslips के ही बॉक्स का उपयोग करें। पूर्व गीलाcoverslips और सही कोण कम से कम 2 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर 1x पीबीएस में दर्पण प्रयोगों शुरू करने से पहले।
- 1x पीबीएस के 75 मिलीलीटर - माप चैम्बर भरें 65 के साथ (चित्रा 1 देखें)। माप चैम्बर एक घर में मशीन की दुकान से Plexiglas से बाहर कर दिया गया था, और चैम्बर में divots एक ड्रिल प्रेस के लिए एक उपयुक्त ड्रिल बिट के साथ वांछित गहराई के लिए सेट द्वारा किए गए थे। लेंस यांत्रिक परीक्षण की अवधि के लिए कमरे के तापमान पर 1x पीबीएस में पारदर्शी बने हुए हैं।
चित्रा 1:। कठोरता मापन चैंबर विभिन्न गहराई और आकार के divots की एक किस्म के साथ कस्टम बनाया कठोरता माप चैम्बर के आयामों दिखा एक तस्वीर। दौर divots कि 200 माइक्रोन या 300 माइक्रोन गहरी (पीले तीर) हैं माउस लेंस पर मापन के लिए उपयोग किया जाता है। Divots व्यास में 2 मिमी और ~ 13 हैं-। चैम्बर के किनारे से 14 मिमी कृपया यहाँ यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए क्लिक करें।
- divot कि लेंस धारण करने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा से लगातार दूरी पर चैम्बर में सही कोण दर्पण रखें। यकीन दर्पण प्रयोग के दौरान कदम नहीं करता है सुनिश्चित करें।
- माप चैम्बर के लिए स्थानांतरण विच्छेदित लेंस ध्यान अधिकार संदंश या घुमावदार संदंश के साथ।
- सीधे भूमि के ऊपर से उतार दिया लेंस के एक शीर्ष दृश्य तस्वीर ले लो। माइक्रोस्कोप (नीचे) और बाएँ और दाएँ पक्ष पर एक फाइबर ऑप्टिक प्रकाश स्रोत विदारक से रोशनी के साथ 30X बढ़ाई पर माउस लेंस तस्वीरें ले लो। अधिकतम प्रकाश की तीव्रता का 80% करने के लिए फाइबर ऑप्टिक बिजली की आपूर्ति निर्धारित करें। जरूरत के रूप में बिजली की आपूर्ति परिवेश प्रकाश व्यवस्था, उपयोगकर्ता वरीयता और तस्वीर की गुणवत्ता के आधार पर उत्पादन को समायोजित।
- जो री के माध्यम से देखा जा सकता है उतार लेंस के एक ओर देखने के चित्र, ले लोGHT कोण दर्पण। अगर कैमरा calibrated नहीं है, ध्यान केंद्रित करने में दर्पण धार की एक तस्वीर ले लो। दर्पण बढ़त 5 मिमी लंबा है, और इस माप बाद में पिक्सल / मिमी निर्धारण और छवियों में एक पैमाने पर पट्टी के रूप में काम करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
- divot में जगह लेंस, और इस बात की पुष्टि है कि लेंस divot में सुरक्षित रूप से और सीधे बैठा है। लोड करने से पहले लेंस की एक तस्वीर ले लो। लेंस अपनी पूर्वकाल या पीछे पोल पर divot में आराम कर रही किया जाना चाहिए।
- लेंस पर धीरे 1 coverslip रखें। रेंगना की अनुमति के लिए 2 मिनट रुको, और लोड लेंस का एक और पक्ष-देखें तस्वीर ले लो।
- 2.8 कदम के रूप में coverslips जोड़ने और जब तक 10 coverslips की कुल लागू कर रहे हैं 2.8 कदम के रूप में प्रत्येक coverslip के बाद इसके अलावा ओर देखने के चित्र लेने के लिए आगे बढ़ें।
- सभी coverslips निकालें। 2 मिनट रुको, और सभी coverslips हटाने के बाद लेंस (अंदर और divot के बाहर) के एक ओर देखने तस्वीर ले लो।
3. लेंस न्यूक्लियस मापन
- determ करने के लिएलेंस नाभिक आकार ine, 1x पीबीएस के साथ भरा एक साफ पेट्री डिश के लिए लेंस चलते हैं।
- धीरे ठीक संदंश का उपयोग सीधे लेंस decapsulate।
- स्लाव बंद दस्ताने उंगलियों के बीच लेंस रोलिंग द्वारा cortical फाइबर कोशिकाओं। शेष लेंस नाभिक एक कठिन संगमरमर की तरह महसूस होगा। उम्र के 1 महीने से शुरू वयस्क लेंस पर नाभिक को अलग-थलग करने के लिए इस प्रक्रिया का उपयोग करें। चूंकि पृथक नाभिक एक कठोर शरीर है, लेंस नाभिक के आगे यांत्रिक परीक्षण इस वर्णित विधि का उपयोग नहीं किया जा सकता।
- धीरे पेट्री डिश में 1x पीबीएस में लेंस नाभिक कुल्ला।
- लेंस नाभिक माप चैम्बर (divot में नहीं) में वापस जगह है, और सही कोण दर्पण के माध्यम से लेंस नाभिक की एक छवि ले।
चित्रा 2:। एक माउस लेंस Coverslips से संकुचित (ए) योजनाबद्ध और (बी) के पूर्व की तस्वीरperimental माप चैम्बर 1x पीबीएस के साथ भरा में 200 माइक्रोन गहरी divot में एक 2 महीने पुराने माउस लेंस दिखा सेटअप। एक सही कोण दर्पण और एक डिजिटल कैमरा एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप पर मुहिम शुरू की coverslips द्वारा संपीड़न के दौरान लेंस की छवियों को इकट्ठा करने के लिए इस्तेमाल किया गया। (सी) एक 2 महीने की उम्र में जंगली प्रकार क्रमिक coverslips की बढ़ती संख्या से संकुचित लेंस के बाण के विचारों की तस्वीरें अक्षीय और इक्वेटोरियल व्यास मापने और coverslip आधारित संपीड़न परीक्षण के दौरान अक्षीय और इक्वेटोरियल उपभेदों की गणना के लिए कच्चे डेटा प्रदान की है। लेंस का एक प्रतिबिंब कभी कभी coverslips (सबसे स्पष्ट रूप से 1 coverslip छवि में दिखाई) में देखा जा सकता है। जब माप कर रही है, प्रतिबिंब उपेक्षा और लेंस के शीर्ष करने के लिए उपाय। (डी) 2 महीने की उम्र में जंगली प्रकार के लेंस के बाद संपीड़न और अलग लेंस नाभिक के बाण के विचारों की तस्वीरें। पोस्ट-संपीड़न लेंस और पृथक नाभिक divot के बाहर बैठे हैं। स्केल सलाखों, 1 मिमी। यह आंकड़ा Gokh से संशोधित किया गया हैमें, एट अल। PLoS एक, 2012 19। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
4. छवि विश्लेषण
- लेंस की इक्वेटोरियल और अक्षीय व्यास उपाय लोड करने से पहले और ImageJ या इसी तरह के सॉफ्टवेयर का उपयोग कर प्रत्येक लोडिंग कदम के बाद। प्रत्येक लेंस नाभिक का व्यास उपाय। लेंस नाभिक लगभग गोलाकार इसलिए किसी भी अभिविन्यास में एक माप 19,21 पर्याप्त होगा है।
- इस्तेमाल किया divot की गहराई जोड़कर व्यास अक्षीय लेंस सही। माप कक्ष में, divot छिप 200 माइक्रोन (2 महीने पुराने माउस लेंस) या 300 माइक्रोन (4 महीने की उम्र में और 8 महीने की उम्र में माउस लेंस) लेंस का अक्षीय मोटाई की।
- समीकरण का उपयोग, ε = (डी - डी 0) लेंस व्यास माप से अक्षीय और इक्वेटोरियल उपभेदों की गणना / डी 0, जहां ε तनाव है, डी अक्षीय या ई हैएक दिया लोड पर quatorial व्यास, और डी 0 शून्य लोड पर इसी अक्षीय या इक्वेटोरियल व्यास है।
- अक्षीय और लगाया लोड (एमजी में) के रूप में कार्य इक्वेटोरियल उपभेदों प्लॉट।
- अक्षीय, इक्वेटोरियल और परमाणु व्यास प्लॉट। गणना और इक्वेटोरियल व्यास द्वारा अक्षीय व्यास विभाजित करके लेंस पहलू अनुपात साजिश है।
- गणना और समीकरण का उपयोग लेंस मात्रा साजिश, मात्रा = 4/3 × × π आर ई 2 × आर ए, जहां आर ई इक्वेटोरियल त्रिज्या और आर एक अक्षीय त्रिज्या के चित्र 2.6 चरण में ले लिया से मापा जाता है। इस समीकरण मानता लेंस एक चपटा अंडाकार आकृति (दीर्घवृत्ताभ) 1,22 है।
- गणना और × आर एन 3, जहां आर एन लेंस नाभिक की त्रिज्या के रूप में चित्र 3.5 चरण में ले जाया से मापा जाता है समीकरण, मात्रा = 4/3 × π का उपयोग कर परमाणु मात्रा साजिश है। इस समीकरण लेंस नाभिक मैं मानताSA क्षेत्र 19,21।
- गणना और लेंस मात्रा को परमाणु मात्रा के अनुपात के रूप में परमाणु अंश साजिश है।
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Representative Results
कठोरता और 2, 4 और 8 महीने की उम्र में माउस लेंस के आयामों को मापा गया। चूहे एक शुद्ध C57BL6 तनाव TSRI पशु प्रजनन सुविधा से प्राप्त की पृष्ठभूमि पर सभी प्रकार के जंगली जानवरों के थे, और प्रत्येक लेंस 1 से 10 coverslips के साथ भरी हुई थी। अक्षीय और इक्वेटोरियल उपभेदों प्रत्येक coverslip के अलावा के बाद अक्षीय और लेंस की इक्वेटोरियल व्यास मापने, और फिर इसी उतार व्यास के व्यास में प्रत्येक परिवर्तन सामान्य से लागू लोड के एक समारोह के रूप में गणना की गई। प्रत्येक वर्ष की उम्र से आठ लेंस का परीक्षण किया गया है, और परिणाम औसत ± मानक त्रुटि के रूप में व्यक्त कर रहे हैं। पहले 19 दिखाया गया है, अक्षीय तनाव लागू लोड (चित्रा 3 ए) के एक लघुगणक समारोह है। यह दर्शाता है कि माउस लेंस उम्र के साथ stiffens अधिकतम लागू लोड (चित्रा 3) के तहत अक्षीय और इक्वेटोरियल उपभेदों में एक सांख्यिकीय महत्वपूर्ण उम्र पर निर्भर कमी नहीं थी। सेंटके रूप में छोटे मानक त्रुटियों द्वारा प्रदर्शन बारिश माप, एक ही उम्र के लेंस भर में अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य थे।
इस प्रयोग के दौरान एकत्र की छवि डेटा भी कई अन्य लेंस लक्षण (चित्रा 4) निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया गया। उम्मीद है, अक्षीय और इक्वेटोरियल व्यास और लेंस मात्रा उम्र (चित्रा -4 ए, 4 बी और 4D) के साथ वृद्धि हुई है। पहलू अनुपात को इंगित करता है लेंस अक्षीय व्यास की तुलना में थोड़ा बड़ा इक्वेटोरियल व्यास है, और इस पैरामीटर उम्र (चित्रा 4C) के साथ बदल नहीं किया था। व्यास, मात्रा और लेंस नाभिक के अंश उम्र (चित्रा 4E, 4F और 4 जी) के साथ वृद्धि हुई है। इन परिणामों का सुझाव है कि लेंस नाभिक लेंस उम्र के रूप में रिश्तेदार के आकार में वृद्धि करने के लिए remodels।
यह डेटा बताते हैं कि माउस लेंस कठोरता में उम्र के साथ, परिवर्तन करने के लिए एक समान में वृद्धिमानव लेंस 9,15 ging। इन आंकड़ों से भी पिछले की गई टिप्पणियों के लिए एक समान विधि 18 उपयोग करने के साथ और Brillouin ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी 23 कि माउस लेंस उम्र के साथ कठोरता में वृद्धि से सहमत हैं। दो अन्य अध्ययनों में वर्णित विधि का इस्तेमाल किया है कि tropomodulin -1 दिखाने के लिए, एक actin बताया अंत कैपिंग प्रोटीन, CP49, एक मनके मध्यवर्ती रेशा प्रोटीन, और aquaporin 0 बनाए रखने के लिए लेंस कठोरता 19,20 जरूरत है। इस विधि के साथ, लेंस विकृतियों और चूहों की त्वरित उम्र बढ़ने के लिए माउस मॉडल की अधिकता के आनुवंशिक परिवर्तन और / या उम्र बढ़ने के कारण लेंस कठोरता परिवर्तनों को समझने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। इस विधि को भी अन्य प्रजातियों से लेंस के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। इन प्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया चैम्बर के आयामों माउस लेंस के लिए अनुकूलित कर रहे हैं, लेकिन आसानी से बड़ी प्रजाति से लेंस के लिए बढ़ाया जा सकता है। भविष्य में, यह निर्धारित करने के लिए लेंस आकार प्रजातियों भर लेंस कठोरता के साथ तराजू कि क्या दिलचस्प होगा।
चित्रा 3:। 2-, 4 और 8 महीने की उम्र (2 एम, 4M और 8M) जंगली प्रकार माउस लेंस के लिए अक्षीय और इक्वेटोरियल तनाव लोड घटता (ए) अक्षीय दबाने तनाव लागू लोड के एक समारोह के रूप में साजिश रची ( मिलीग्राम)। (बी) इक्वेटोरियल कंप्यूटर अनुप्रयोगressive तनाव लागू लोड (एमजी) के एक समारोह के रूप में साजिश रची। चार और 8 महीने की उम्र में लेंस बराबर अधिकतम भार में 2 महीने पुराने लेंस की तुलना में कम दबाव का प्रदर्शन किया, उम्र के साथ लेंस कठोरता में वृद्धि का संकेत है। **, पी <0.01। ध्यान दें कि वाई अक्ष (ए) और (बी) के बीच अलग है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 4:। 2-, 4 और 8 महीने की उम्र (2 एम, 4M और 8M) जंगली प्रकार माउस लेंस के लक्षण (ए) अक्षीय व्यास और (बी) इक्वेटोरियल व्यास उत्तरोत्तर उम्र के साथ वृद्धि हुई है। लेंस पहलू अनुपात (सी) से पता चलता है कि माउस लेंस लेंस भूमध्य रेखा पर थोड़ा व्यापक हैं। लेन्स की मात्रा (डी), परमाणु व्यास (ई), परमाणु मात्रा (एफ) और परमाणु अंश (G) उत्तरोत्तर उम्र के साथ वृद्धि हुई है। **, पी <0.01। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
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Discussion
जब इस पद्धति का उपयोग लेंस कठोरता को मापने के लिए कई महत्वपूर्ण विचार कर रहे हैं। चैम्बर (θ) के नीचे करने के लिए सम्मान के साथ - (8.5 ° 8) सबसे पहले, coverslips एक थोड़ा तिरछा कोण पर लेंस को लागू कर रहे हैं। इस अक्षीय रूप से equatorially नहीं बल्कि लोड का एक बहुत छोटा घटक लागू होगी। हालांकि, इस इक्वेटोरियल लोड क्योंकि पाप θ ≈ 0.1 19 नगण्य माना जाता है। इस विधि बड़ा लेंस के लिए अनुकूलित है, तो कक्ष के नीचे करने के लिए coverslips के कोण का निर्धारण करने के लिए इक्वेटोरियल लोड तनाव गणना में सकारात्मक असर होना चाहिए कि क्या मापा जा करने की आवश्यकता होगी। दूसरा, यह लेंस प्रत्येक coverslip के अलावा के बाद संतुलित करने के लिए अनुमति देने के लिए महत्वपूर्ण है। 2 मिनट की प्रतीक्षा अवधि समय पर निर्भर विरूपण की अनुमति देता है (यानी।, रेंगना) के लिए होते हैं, कि इस तरह के चित्रों केवल लिया जाता है जब लेंस एक संतुलन आकार 19 पर है। तीसरा, इस प्रोटोकॉल मीटर पर दबाने तनाव को मापने के लिए अनुकूलित हैभार की एक व्यापक गतिशील रेंज भर में लेंस OUSE। पायलट अध्ययन में 1,293 मिलीग्राम (यानी, दस 18 x 18 मिमी coverslips) के एक आवेदन लोड एक अधिकतम तनाव करने के लिए माउस लेंस संकुचित, जिसके आगे बढ़ गई भार प्रशंसनीय आगे विकृति का कारण नहीं है। यह कठोर लेंस नाभिक कि संपीड़न 19 के तहत appreciably ख़राब नहीं करता है की उपस्थिति के कारण है। चौथा, इस प्रोटोकॉल अपरिवर्तनीय ऊतकों को नुकसान से बचा जाता है। पहले प्रकाशित प्रयोगों में, माउस लेंस के यांत्रिक गुणों में कोई बदलाव नहीं दोहराने लोड हो रहा है पर मनाया गया, सुझाव है कि इस विधि लेंस 19 नुकसान नहीं करता है। 2.10 और तनाव लोड घटता, लेंस व्यास और पहली और दूसरी के बीच लेंस संस्करणों की तुलना - जब यंत्रवत् एक अलग प्रजाति या उत्परिवर्ती लेंस के लेंस का परीक्षण, पायलट परीक्षण कदम 2.8 दोहरा द्वारा अधिकतम तनाव के लिए आवश्यक अधिकतम भार निर्धारित करने के लिए किया जाना चाहिए लोड हो रहा है। अंत में, इस विधि कठोरता ओ के एक अनुभवजन्य माप प्रदान करता है पूरे लेंस एफ और विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं का योगदान (उपकला कोशिकाओं, cortical फाइबर, परमाणु फाइबर) और पूरे लेंस यांत्रिक गुणों के लेंस कैप्सूल को अलग नहीं कर सकते।
अक्षीय और इक्वेटोरियल उपभेदों लगाया लोड के कार्यों के रूप में यहां प्लॉट किए जाते हैं। पिछले अध्ययनों माउस लेंस कठोरता 19,21, लचीलापन 21 या लागू लोड पर व्यास 18 में बदलें मात्रा निर्धारित है। तनाव एक आयामरहित मात्रा है कि विभिन्न आकार के लेंस के बीच प्रत्यक्ष तुलना की अनुमति देता है। ध्यान दें कि इक्वेटोरियल एक्सटेंशन (सकारात्मक तनाव) लेंस मात्रा (यानी, पॉसों प्रभाव) के संरक्षण के कारण लागू अक्षीय संपीड़न (नकारात्मक तनाव) के साथ समवर्ती होता है। हालांकि, मनाया इक्वेटोरियल उपभेदों अक्षीय उपभेदों से पूर्ण परिमाण में बहुत छोटे थे, यह दर्शाता इक्वेटोरियल तनाव में छोटे परिवर्तन का पता लगाने के लिए कम संकल्प किया है कि इस विधि अक्षीय तनाव की तुलना में।
NT "> सारांश में, माउस लेंस कठोरता को मापने के लिए एक आसानी से इकट्ठे डिवाइस के साथ इस सरल विधि बेहतर कैसे प्रोटीन, विकृतियों में परिवर्तन और / या उम्र बढ़ने के लेंस कठोरता को प्रभावित समझने के लिए लेंस अनुसंधान के क्षेत्र में आम तौर पर और व्यापक रूप से लागू किया जा सकता है। माउस लेंस नहीं है समायोजित, इस पद्धति अभी भी प्रोटीन और उम्र से संबंधित संशोधनों है कि वृद्धि की लेंस कठोरता के योगदान को स्पष्ट कर सकते हैं, और संभवतः presbyopia के लिए उपन्यास उपचार विकसित करने के लिए नए ज्ञान योगदान करते हैं।Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
लेखकों के पास खुलासे के लिए कुछ भी नहीं है।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Fine tip straight forceps | Fine Scientific Tools | 11252-40 | |
| Microdissection scissors, straight edge | Fine Scientific Tools | 15000-00 | |
| Curved forceps | Fine Scientific Tools | 11272-40 | |
| Seizing forceps | Hammacher | HSC 702-93 | Optional |
| Dissection dish | Fisher Scientific | 12565154 | |
| 60 mm Petri dish | Fisher Scientific | 0875713A | |
| 1x phosphate buffered saline (PBS) | Life Technologies | 14190 | |
| 18 x 18 mm glass coverslips | Fisher Scientific | 12-542A | |
| Measurement chamber with divots to hold lenses | Custom-made (see Figure 1) | ||
| Right-angle mirror | Edmund Optics | 45-591 | |
| Light source | Schott/Fostec | 8375 | |
| Illuminated dissecting microscope | Olympus | SZX-ILLD100 | With SZ-PT phototube |
| Digital camera | Nikon | Coolpix 990 |
References
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