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Developmental Biology

인간의 심장 조직에서 혈관 주위 능성 전구체 세포 집단의 분리

doi: 10.3791/54252 Published: October 8, 2016

Summary

인간의 심장 조직 심근 재생에 적합 할 수있는 다 능성 혈관 주위 전구체 세포 집단을 항구. 주연 세포와 CD34 + CD146 - - 외막 세포, 인간 심근에서 여기에 설명 된 기술은 원시 혈관, CD34 + CD146와 연관된 두 능성 간질 세포 집단의 동시 분리 및 정제를 허용한다.

Introduction

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마음은 긴 후 유사 분열 기관으로 간주되고있다. 그러나 최근의 연구는 성인 인간의 마음 (1) 제한 심근 매출의 존재를 증명하고있다. 심근 분화 가능성을 가진 기본 줄기 / 전구 세포는 혈관 주위 전구 세포 2, 3, 가장 최근에 성인 설치류와 무서-1 +를 포함하여 인간의 마음, C-키트 +, cardiosphere 형성의 심근 내에서 확인할하고있다. 이러한 세포는 세포 이식 또는 원위치 증식 자극으로 심장 수선 / 재생을 향상시키는 목적으로 치료를위한 매력적인 후보를 나타낸다.

중간 엽 줄기 / 간질 세포 (MSC)가 심혈관 수리 6으로 MSC의 치료 응용 4,5- 임상 시험은 여러 병리학 적 조건에서 수행 된 거의 모든 인간의 조직으로부터 분리 된, 이식편 대 숙주 질병 7 8. 유익한 효과에 중간 엽 줄기 세포의 능력에 기인 한 : 염증 9의 사이트에 홈; 상이한 세포 유형으로 분화 10; 프로 수복 분자 (11)을 분비; 호스트 면역 반응 (12)을 변조한다. 중간 엽 줄기 세포의 분리는 전통적으로 플라스틱 기판에 자신의 우선 준수에 의존하고있다. 그러나, 세포의 생성은 일반적 인구 13 현저 균질하다. 에서 주요 혈관 주위 세포 마커의 조합 (FACS)을 정렬 형광 활성화 된 세포를 사용하여, 우리는 다 능성 MSC와 같은 전구체 인구 (- / CD34 - / CD45 - - / CD56 CD146 + / CD31)를 분리하고 정제 할 수 있었다 성인 골격 근육과 흰색 지방 (14) 등 다양한 인체 조직.

다양한 비 심장 조직에서 혈관 주위 세포 집단은 줄기 / 전구 세포의 특성있는 것으로 나타났다차 심장 혈관 설정에서 임상 적 사용을 위해 연구되고있다. 주위 세포, 가장 잘 알려진 혈관 주위 세포의 서브 세트 중 하나가 새로운 용기 (15)의 개발을 포함하여 여러 병태 생리 학적 역할을 이종 집단이며, 혈압 (16), 및 혈관 완전성 (17, 18)의 유지의 조절. 여러 조직에 도시 된 바와 같이, 혈관 주위 세포의 특정 서브 세트는 기본적 MSC 항원을 발현하고 FACS 정제 후 14 주 배양에서의 MSC와 같은 표현형을 유지. 또한, 이들 세포는 안정하게 배양 내에서의 장기 표현형을 유지하고, MSC들 (19, 20)과 유사한 다중 - 계통 분화 잠재력을 나타낸다. 이러한 결과는 혈관 주위 세포가 어려운 MSC (14)의 기원 중 하나입니다 것이 좋습니다. 혈관 주위 세포의 치료 가능성은 심근 흉터의 감소와 함께 시연 및 ischemically 부상으로 이식 다음 심장 기능을 향상되었습니다마음 21. 최근에, 우리는 성공적으로 인간의 심근에서 혈관 주위 세포를 정제 및 골격 근육 생성 3의 부재로 자신의 MSC와 같은 표현형과 다 능성 (지방 조직, 연골 및 골 형성)을 보여 주었다. 또한, 심근 혈관 주위 세포는 다른 기관으로부터 정제 대조와 비교하여 차등 cardiomyogenic 전위 및 혈관 신생 능력을 나타냈다.

혈관 주위 능성 줄기 / 선조 세포의 세포 외막의 제 인구 양성 CD34 식 (22)에 기초하여 인간 복재 정맥으로부터 분리되었다. 정맥 외막 세포 클론 원성 포텐셜 중배엽 분화 능력 및 체외 proangiogenic 가능성이있는 것으로 밝혀졌다. 마우스의 ischemically 부상 마음에서 이러한 세포 이식 간질 성 섬유증의 감소, 혈관과 심근 혈류의 증가, 감소, 심실 DIL 초래ATION, 증가 된 심장 배출 분율 23. 흥미롭게도, 지방 외막 세포를 자극 (24)와 주연 세포 표현형의 채택을 제안, CD34의 발현을 잃고 안지 오포 이에 틴 II 치료에 대한 반응에 문화에서 CD146 발현을 상향 조절하는 것으로 나타났다. 심장 내에서, 그러나, 외막 세포 집단은 아직 전향 FACS 및 / 또는 잘 특징으로 정제되지 않았다. 다음 절에 설명 된 세포 격리 절차를 활용하여, 우리는 현재 심근 외막 세포의 특성 및 재생 응용 프로그램에 대한 자신의 가능성을 조사하고있다.

여기서 우리는 분리하고 인간의 태아 또는 성인 심근의 혈관 주위 줄기 / 전구 세포의 두 개체군을 정화하는 방법을 설명합니다. 이 미래의 세포 분리 방법을 비교 연구하고 furthe에 대한 인간의 마음 생검에서 동종 혈관 주위 줄기 / 전구 세포 하위 집합을 얻기 위해 연구를 가능하게 할 것이다R 다양한 심장의 병리 적 상태에서의 치료 가능성을 탐구한다.

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Protocol

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인간의 심장 샘플 1. 처리

  1. 모든 유체, 용기, 악기 및 전용 운영 지역은 멸균 있는지 확인합니다.
  2. 20 % 소 태아 혈청 (FBS) 및 얼음에 1 % 페니실린 - 스트렙토 마이신 (P / S)을 함유하는 냉각 된 둘 베코 변성 이글 배지 (DMEM)으로 이루어지는 기억 매체 (조직 은행 또는 수술 팀 조달) 심장 조직 샘플을 놓고 교통 3.
  3. 기억 매체로부터 심장 샘플을 제거하고, 2 % FBS와 1 % P / S가 보충 인산 완충 용액 (PBS)으로 이루어지는 세척 배지로 세척 하였다. 샘플을 취급 할 경우, 대형 선박 또는 심낭을 파악하고 심근의 분쇄 최소화하기 위해 좋은 팁 집게를 사용합니다.
  4. 페트리 접시에 세척 매체에 샘플을 잠수함과 3 설명한 바와 같이 살균 홍채 가위와 뾰족한 집게로 심낭, 내막과 큰 혈관을 제거합니다.
  5. 나머지 myoca 컷하나의 측면 면도날이나 날카로운 홍채 가위를 사용하여 약 1mm 3의 작은 조각으로 rdium. 참고 : 샘플을 즉시 처리하는 경우 최고 세포 수율을 얻을 수 있습니다. 지연이 불가피한 경우, 새로운 기록 매체에 처리 된 심장 조직의 스토리지 (> 1cm 3 조직 당 5 ㎖)를 72 시간 동안 4 ℃에서 그러나 아마도 셀 수율 관련된 감소로 가능하다.

세포의 조직과 분리 2. 소화

  1. 갓 1.5 ml를 포함하는 소화 솔루션을 구성하는 콜라겐의 각 I하는 수조에서 37 ° C 따뜻한 (0.5 밀리그램 / DMEM에서 ml의 모든) 콜라게나 제 II, 및 콜라게나 제 IV.
    참고 : 볼륨 및 콜라게나의 농도가 약 1cm 3의 샘플에 적합하다.
  2. 100 μm의 스트레이너를 통해 정지 조직 조각을 필터와 PBS로 두 번 씻는다. 멸균 30 ML의 컨테이너에 조직 조각을 전송단단히 밀봉 뚜껑.
    참고 : 짧은 넓은 냄비보다는 키가 좁은 튜브가 더 나은 결과를 제공합니다. 대안 적으로, 멸균 50 ㎖ 튜브에 조직 조각을 넣고, 30 ml의 용기를 사용할 수없는 경우에는 가로로 배치했다.
  3. 모든 소화 용액 (4.5 ml의 총)를 추가하고 120 rpm으로 설정 37 ° C 흔들어 물을 욕조에 밀봉 된 비닐 봉투 안에 용기를 놓습니다. 또한, 120 rpm으로 설정 가열 궤도 통에 파라핀 필름과 장소 용기를 밀봉.
  4. 15 분 후 제거하고, 추가로 15 분 동안 교체하기 전에 세 번 포트를 반전. 분리하고 20 % FBS와 1 % P / S가 보충 된 DMEM 5 ㎖로 급냉 콜라게나.
  5. 부드럽게 어떤 조직 덩어리를 파괴하는 10 ㎖의 혈청 학적 피펫으로 10-20 회 피펫 팅하여 다이제스트를 씹다. 소화되지 않은 물질을 제거하여 단일 세포 현탁액을 얻었다 100 μm의 70 ~ 40 μm의 마지막 μm의 셀 스트레이너 현탁액 순차적 필터.
    노트:효소 분해 과정에서 debrisgenerated 셀을 피하기 위해 셀 스트레이너 사이에 세척하지 마십시오.
  6. 원심 4 분 동안 200 XG에 세포 현탁액을 조심스럽게 상층 액을 디 캔트 세척 배지 4 ㎖로 희석하기 전에 실온에서 2 분 동안 버퍼 용균 적혈구 1 ㎖의 펠릿을 다시 일시.
  7. 원심 분리 단계를 반복하여 세척 배지 1 ㎖의 펠릿을 다시 일시. 잘 혼합 셀 카운트하는 세포 현탁액 10 μL를 취할.
  8. 트리 판 블루 염색의 10 μL와 세포 현탁액의 10 μl를 혼합 세포 계수에 대한 표준 혈구의 혼합물의 10 μl를 배치합니다. 코너 광장 당 평균을 얻기 위해 4로 네 모서리의 사각형에 존재하는 밝은 둥근 세포의 수 (각각 여섯 작은 사각형으로 분할)과 격차를 계산합니다. 스테인 희석 인자를 고려하여 2 평균 곱 후 104 샘플 1 ㎖ 당 세포의 수를 수득함으로써.

  1. 세포 현탁액에 마우스 혈청 50 μl를 추가하고 20 분 결합 비 특이 항체를 차단하기 위해 4 ° C에서 품어.
  2. 원심 4 분 동안 200 XG에 마우스 혈청과 세포 현탁액, 상등액을 제거하고 100 ㎕의 당 1 × 106 세포의 농도로 세척 배지에 재현 탁.
  3. 나누어 두 폴리스티렌 둥근 바닥에 50 ㎕의 이소 타입 및 염색 컨트롤의 세포 현탁액을 각 튜브에 다음 다색 염색하는 제 튜브에 남아있는 볼륨을 배치 유세포.
  4. 멀티 컬러 염색에 대한 단일 세포 현탁액에 : (100 모두 1) CD34-PE, CD45-APC-Cy7, CD56-PE-Cy7, CD144-를 PerCP-Cy5.5 및 CD146-AF647 항체를 추가합니다. 이소 타입 제어를 위해, PE-, APC-Cy7-, PE-Cy7-,를 PerCP-Cy5.5- 및 AF647 - 복합 이소 항체의 동등한 볼륨을 추가합니다. 조심스럽게 피펫은 세포와 항체를 혼합하고 20 4 ° C에서 모든 관을 배양하기어둠 속에서 분.
  5. 바닥 유동 세포 계측법 튜브 라운드 다섯 폴리스티렌에 세척 배지 100 ㎕에 긍정적 인 구슬 한 방울을 추가하여 보상 제어 구슬을 준비합니다. 개별적으로 5 튜브의 각 : (100 모두 1) CD34-PE, CD45-APC-Cy7, CD56-PE-Cy7, CD144-를 PerCP-Cy5.5 및 CD146-AF647 항체를 추가합니다. 어둠 속에서 20 분 동안 4 ° C에서 모든 튜브를 품어.
  6. 배양시 세포 수집 관 내피 성장 중간 2 ~ 4 ° C에서 (EGM-2) 배지 및 장소 500 μl의 각을 준비합니다.
  7. 항체 부화 후, 언 바운드 항체를 제거하기 위해 세포와 구슬을 씻어 세척 매체의 5 mL를 추가합니다. 원심 분리기 4 분 200 XG에 모든 튜브. 세척 및 원심 분리 단계를 반복합니다. 세포를 다시 일시 중단 할 때 조심스럽게 조심스럽게 상층 액과 피펫을 가만히 따르다.
  8. 250 μL 당 약 1 × 106 세포의 농도로 세척 배지에 재현 탁. 세척 m 100 ㎕의 구슬을 다시 중단edium.
  9. 어둠 속에서 얼음에 셀 소터 모든 세포와 비드 현탁액을 전송. 긍정적 인 비드 보상 제어 튜브에 부정적인 구슬 1 방울을 추가하고 형광 보상을 설정하려면 다음을 사용합니다.
  10. 백그라운드 형광을 확립하고, 다음에 전압을 설정하기 위해 제조자의 지시에 따라 염색 대조군 세포 실행 FSC 150V 단계; SSC 290V; V450 / 50 350V; V710 / 50 620V; B530 / 30 400V; B710 / 50 530V; YG780 / 60 (460); R670 / 30 480V; R780 / 60 460V. 제조자의 지시에 따라 실행 아이소 타입 컨트롤 비특이적 결합과 관련된 배경 형광 임계 값을 설정한다. (그림 1) 멀티 색상을 염색 샘플을 실행하고 수집 튜브에 주연 세포 및 외막 세포 인구를 수집합니다.
    참고 : 최적의 생균 수익률은 혈관 주위 세포의 총 살아있는 세포 분리의 약 3 %와 외막 세포를 4 %이다.

4. 세포 배양

  1. FACS 정렬의 결과에 따라 적당한 크기 배양 플레이트를 선택합니다. 전체 우물을 성장 영역의 cm 2 당 멸균 0.2 % 젤라틴 용액 100 μl를 추가하고 코트에 수동으로 선동. 10 분 동안 4 ° C에서 접시를 품어 완전히 젤라틴 용액을 제거합니다. 배양 플레이트를 준비하는 동안 얼음에 수집 된 세포를 유지합니다.
    참고 : 젤라틴 코팅 문화 표면에 30,000 40,000 세포 / cm 2의 밀도로 접종 할 때 갓 분류 혈관 주위 세포 및 외막 세포가 잘 성장한다.
  2. 4 분 동안 200 XG에 새로 수집 된 세포를 가볍게 원심 EGM-2.Seed 적당량 젤라틴 - 코팅 된 플레이트에 대한 세포의 세포 펠렛을 다시 일시.
    주 : 셀의 실제 개수는 잘 EGM-2 첨가되는 양에 따라 시드되는 판의 선택에 의존한다. 예를 들어, 0.5 mL 및 1 ml의 EGM-2는 각각 48, 24 웰 플레이트 웰 당 필요하다.
  3. 환 EGM-2 혈관 주위 세포 성장 매체 (셀 ()은 적어도 72 시간 후 플레이트에 정착하여 부착 한 후 DMEM 모두 외막 세포 및 외막 세포를 20 % FBS, 1 % P / 초)로 보충. 그때부터 미디어마다 72 시간을 변경합니다. C 5 % CO 2, 37 ℃에서 초기 및 이후의 모든 배양을 수행하십시오.
  4. 혈관 주위 세포 및 외막 세포가 80~90%의 합류에 도달하면 0.05 % 트립신 EDTA를 사용하여 세포를 떼어 놓다. 코팅 폴리스티렌 배양 플레이트 상에 3 비율 : 1 다음에 통로 혈관 주위 세포를 세포 배양 배지에 재현 탁하고, PBS 20 % FBS, 4 분 동안 200 XG 원심 분리기로 켄 칭하고. 전방 통로 (2)에서, 1 유로에 세포 : 5의 비율 (또는 대략 7,000 세포 / cm 2) 코팅 폴리스티렌 배양 접시 또는 플라스크이다.

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Representative Results

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단일 세포를 전방 및 측면 산란 분포에 기초하여 파편과 이중선 구별 하였다. 라이브 세포는 DAPI 염색을 차지하기 위해 자신의 실패에 의해 확인되었다. 게이팅 전략이 라이브 전체 심근 세포의 분리 (도 1)의 이소 제어 라벨에 기초하여 선택되었다. 살아있는 세포에서 CD45 + 세포는 먼저 밖으로 게이트 된 CD56 + 세포 하였다. CD144 + 내피 세포 다음 CD56에서 제거 - 분획. 마지막 인구에서 CD146 + / CD34 - 혈관 주위 세포와 CD146 - / CD34 + 외막 세포는 수집 된 이후에 (그림 2)을 선택했다. 즉시 세포 수집 한 후, 각 모집단의 작은 샘플 (500 ~ 1,000 세포) 초기 정렬에 기록 된대로였습니다 세포의 분포를 확인하기 위해 분류기를 통해 다시 실행되었습니다. FACS 정제 심근의 peric , 킬로바이트 및 외막 세포 모두 문화의 세포 형태 (그림 3) 성상하는 스핀들을 나타낸다.

그림 1
그림 1 :. 표시 이소 컨트롤의 FACS 게이팅 전략 대표 도트 플롯은 인간의 마음 세포가 정렬 게이트의 위치를 설명 해리 .. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 2
도 2 : 심근 혈관 주위 세포의 FACS 정제 한 인간 샘플로부터 심근, 심장 혈관 주위 세포 전구체의 두 개체군의 대표적인 선별..에스 / ftp_upload / 54252 / 54252fig2large.jpg "대상 ="_ 빈 ">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 3
그림 3 :. 문화 혈관 주위 세포 형태학 두 개의 심장 혈관 주위 전구체 세포 집단 (오른쪽) 혈관 주위 세포 (왼쪽 패널) 및 외막 세포는 = 50 μm의 FACS 정화에 의해 동질성에 분류 추가 통로 (3), 스케일 바에서 문화 (에 확장했다 ). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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Discussion

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증가 증거는 부상 후 성인 인간의 마음의 제한된 재생 능력을 지원합니다. 부상 마음에 이러한 재생 반응에 대한 책임 네이티브 전구 세포의 식별 및 특성화 관련 메커니즘 및 신호 전달 경로의 이해와 치료 이러한 세포를 활용하는 방법의 개발 모두에 중요하다.

이전 프로토콜 인간 골격근 (25)로부터 혈관 주위 전구 세포 서브 세트의 분리를 설명 하였다. 그러나, 심장 조직에 이러한 기술의 직접적인 응용 프로그램은 종종 매우 가난한 세포 수율을 초래한다. 따라서, 우리는 인간 심근 생검에서 혈관 주위 세포 전구체, 즉, 외막 세포 및 외막 세포의 두 개의 분리 된 부분 집단을 풍부하게하는 두 서브 세트들의 동시 정제를 용이하게하기 위해 프로토콜에 큰 조정을 만들었다. 의 S에서 모두 세포 집단의 분리AME 샘플뿐만 아니라 소중한 심장 조직 생검의 사용을 최적화뿐만 아니라 별개의 혈관 주위 세포 하위 집합의 직접 비교를 할 수 있습니다.

셀의 최대 수율을 얻기 위해, 조직 샘플의 신선도는 매우 중요하다. 혈관 주위 세포 및 외막 세포에 대한 최대 가능한 세포 수율은 약 3 % 각각 총 살아있는 세포 분리의 4 %이다. 수율 서브 세트 당 약 30,000 내지 400,000 세포 크게 다를 량과 출발 조직의 품질 및 보존 기간 등 다양한 요인에 크게 의존 할 수있다. 혈관 주위 세포는 상대적으로 섬세; 자가 분해 변화의 증거를 보여주는 샘플은 변함없이 FACS 후 낮은 세포 수를 산출. 마찬가지로, 혈관 주위 세포는 가혹한 소화 기술에 민감하고, 과도하게 소화도 감소 생존 세포 수율가 발생합니다. 소화 시간 및 교반 속도의 사용자 정의 조정 individua에 의해 필요할 수있다리터 실험실. 마지막으로, 기증자의 연령과 표본 크기는 세포 수율에 큰 영향을 미칠 것입니다.

우리는 광범위하게 이러한 방식 3에서 얻은 심장 혈관 주위 세포를 특징으로하고있다. 이 세포는없는 내피 세포의 오염과 문화의 동질성을 보여 주었다. 유로 (3)과 (12) 사이에 약 60 시간의 시간을 두 배로 인구는 모두 공통 주연 세포 마커의 일관된 표정으로 관찰되었다 (알칼리 포스 파타 아제, NG2 및 α-SMA)이 기간 동안 고전 MSC 마커 (CD44, CD73, CD90 및 CD105). 흥미롭게도, 그것은 탈 메틸화 후, 심장 혈관 주위 세포의 일부가 cardiomyogenic 전사를 표현하는 것이 Nkx2.5과 GATA4 요인 발견되었다. 신생아 쥐 심근와-배양 공동 때, 탈 메틸화 심장 혈관 주위 세포의 일부는 작은 그룹이 더 자연 세포질 칼슘 플럭스 전시와 sarcomeric 단백질 마커 알파 티닌 및 심장 트로포 닌-T를 표명했다. 함께 찍은, 이러한 결과는 sugge심장 혈관 주위 세포의 서브 모집단 따라서 cardiomyogenic 전위 보유 성 및 극한 심근 복구 과정에서 중요한 역할을 할 수있다. 주연 세포와 비교하여, 심장 외막 세포는 주로지지 않은 남아있다. 우리의 게시되지 않은 예비 데이터는 심장 외막 세포 배양에서 CD34을 잃는 동안, 심장 혈관 주위 세포보다 낮은 수준이기는하지만, 이러한 PDGFR-β 및 NG2 같은 일부 주연 세포 마커를 표현하는 것이 좋습니다. 이 세포는 고전 MSC 마커를 표현하고 골 형성 및 지방 세포 분화 잠재력을 보여줍니다. 혈관 신생 및 프로 심인성 속성을 포함하여 심장 외막 세포의 추가 연구가 진행 중이다.

여기에 설명 된 프로토콜은 하나의 인간의 심장 조직 샘플에서 심장 혈관 주위 세포와 외막 세포의 동시, 미래의 정화를 할 수 있습니다. 이 세포는 적절한 candidat 것을 입증 할 수있는 잠재적 cardiomyogenic 특성을 가진 새로운 심장 전구 세포 인구를 나타냅니다향후 세포 치료에 대한 말이지.

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
AbC Anti-mouse Bead Kit Molecular Probes A-10344
Collagenase I Gibco 17100-017 Reconstitute powder as required and filter sterilise
Collagenase II Gibco 17101-015
Collagenase IV Gibco 17104-019
anti-human CD34-PE BD Pharmingen 555822 Keep sterile
anti-human CD45-APC-Cy7 BD Pharmingen 557833 Keep sterile
anti-human CD56-PE-Cy7 BD Pharmingen 557747 Keep sterile
anti-human CD144-PerCP-Cy5.5 BD Pharmingen 561566 Keep sterile
anti-human CD146-AF647 AbD Serotec MCA2141A647 Keep sterile
EGM2-BulletKit Lonza CC-3162 For collection of cells and culture until adhered
DMEM, high glucose, GlutaMAX without sodium pyruvate ThermoFischer Scientific 10566-016
Fetal Bovine Serum ThermoFischer Scientific 10500-064 Freeze in aliquots and keep sterile
Gelatin Sigma Aldrich G1393 Dilute with sterile water
IgG1k-PE BD Pharmingen 559320 Keep sterile
IgG1k-APC-Cy7 BD Pharmingen 557873 Keep sterile
IgG1k-PE-Cy7 BD Pharmingen 557872 Keep sterile
IgG1k-PerCP-Cy5.5 BD Pharmingen 561566 Keep sterile
IgG1k-647 AbD Serotec MCA1209A647 Keep sterile
Mouse serum Sigma Aldrich M5905 Keep sterile
Paraffin Film - Parafilm M Sigma Aldrich P7793
Penicillin-Streptomycin Gibco 15979-063 Freeze in aliquots and keep sterile
Phosphate buffered saline pH 7.4 ThermoFischer Scientific 10010-023 Keep sterile
Red Blood Cell Lysing Buffer Hybri-Max Sigma Aldrich R7757 Keep sterile
Trypan Blue Solution Sigma Aldrich T8154
Trypsin-EDTA 0.5%(10x) Invitrogen 15400-054
 FACSARIA FUSION BD Pharmingen Fluorescence Activated Cell Sorter

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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인간의 심장 조직에서 혈관 주위 능성 전구체 세포 집단의 분리
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Baily, J. E., Chen, W. C. W., Khan, N., Murray, I. R., González Galofre, Z. N., Huard, J., Péault, B. Isolation of Perivascular Multipotent Precursor Cell Populations from Human Cardiac Tissue. J. Vis. Exp. (116), e54252, doi:10.3791/54252 (2016).More

Baily, J. E., Chen, W. C. W., Khan, N., Murray, I. R., González Galofre, Z. N., Huard, J., Péault, B. Isolation of Perivascular Multipotent Precursor Cell Populations from Human Cardiac Tissue. J. Vis. Exp. (116), e54252, doi:10.3791/54252 (2016).

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