Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Developmental Biology

Isolering av perivaskulär multi Precursor cellpopulationer från Human hjärtvävnad

doi: 10.3791/54252 Published: October 8, 2016

Summary

Human hjärtvävnad hyser multi perivaskulära prekursor cellpopulationer som kan vara lämpliga för hjärtmuskelregenerering. Den teknik som beskrivs här gör det möjligt för den samtidiga isolering och rening av två multipotenta stromala cellpopulationer som är förknippade med nativa blodkärl, dvs. CD146 + CD34 - pericyter och CD34 + CD146 - adventitiala celler, från den mänskliga hjärtmuskeln.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Hjärtat har länge ansetts vara en post-mitotisk orgel. Dock har nya studier visat att förekomsten av begränsad omsättning cardiomyocyte hos vuxna människors hjärtan 1. Native stam / progenitorceller med cardiomyocyte differentiering potential har också identifierats i hjärtmuskeln hos vuxna gnagare och människors hjärtan, däribland SCA-1 +, c-kit +, cardiosphere bildande, och nu senast, perivaskulära prekursorceller 2,3. Dessa celler representerar attraktiva kandidater för behandlingar som syftar till att förbättra hjärt reparation / regenerering genom celltransplantation eller stimulering av in-situ spridning.

Mesenkymala stamceller / stromaceller (MSC) har isolerats från nästan varje mänsklig vävnad 4,5 Kliniska prövningar av de terapeutiska tillämpningar av MSC har genomförts för flera sjukdomstillstånd såsom hjärt reparation 6, graft-versus-host-sjukdom 7 8. Positiva effekter har tillskrivits förmågan hos MSCs till: hem till inflammationsställen 9; differentiera till olika celltyper 10; utsöndrar pro-reparativa molekyler 11; och modulerar värdimmunsvar 12. Isoleringen av MSC har traditionellt förlitat sig på sin företrädesrätt vidhäftning till plastsubstrat. Emellertid är den resulterande populationen av celler vanligen markant heterogen 13. Genom att använda fluorescensaktiverad cellsortering (FACS) med en kombination av viktiga perivaskulära cellmarkörer, har vi kunnat isolera och rena en multi MSC liknande prekursorpopulation (CD146 + / CD31 - / CD34 - / CD45 - / CD56 -) från multipla humana vävnader inkluderande vuxen skelettmuskel och vitt fett 14.

Perivaskulära cellpopulationer i olika icke-hjärtvävnad har visat sig ha stam / progenitorceller egenskaper and utreds för klinisk användning i det kardiovaskulära inställningen. Pericyter, en av de mest välkända perivaskulära cellgrupper, är en heterogen population som spelar flera patofysiologiska roller bland annat i utvecklingen av nya fartyg 15, reglering av blodtryck 16, och underhåll av vaskulär integritet 17,18. Som visas i flera vävnader, specifika delmängder av pericyter inbyggt uttrycka MSC antigener och upprätthålla sin MSC-liknande fenotyper i primär kultur efter FACS rening 14. Dessutom är dessa celler upprätthålla stabilt sina långsiktiga fenotyper inom kultur och uppvisar flera härstamning differentiering potential, liknande MSC 19,20. Dessa resultat tyder på att pericyter är en av ursprunget till den svårfångade MSC 14. Den terapeutiska potentialen av pericyter har visats med en minskning av hjärtmuskel ärrbildning och förbättrad hjärtfunktion efter transplantation i ischemiskt skadadehjärtan 21. Nyligen vi framgångsrikt renade pericyter från mänskliga hjärtmuskeln och visade sina MSC liknande fenotyper och multipotens (adipogenes, kondrogenes och osteogenes) med avsaknad av skelett myogenes 3. Dessutom, hjärt pericyter uppvisade differential cardiomyogenic potential och angiogena kapacitet jämfört med motsvarigheter renade från andra organ.

En andra population av multi perivaskulära stam / progenitorceller, den adventitiala cell, har isolerats från humana vena ådror på grundval av positiva CD34 uttryck 22. Venösa adventitiala celler har visat sig ha klonogen potential, mesodermal differentieringskapacitet och proangiogenic potential in vitro. Transplantation av dessa celler in i ischemiskt skadade hjärtan möss resulterade i en reduktion av interstitiell fibros, en ökning av angiogenes och myokardial blodflöde, reducerad ventrikulär dilation och ökad hjärt ejektionsfraktion 23. Intressant nog har fett adventitiala celler visats förlora CD34 uttryck och uppreglera CD146 uttryck i kulturen som svar på angiopoietin II behandling, vilket tyder på att anta en pericyte fenotyp med stimulering 24. Inuti hjärtat emellertid den adventitiala cellpopulationen har ännu ej prospektivt renas genom FACS och / eller väl karakteriserade. Med hjälp av cellisoleringsprocedurer som beskrivs i följande avsnitt, är vi för närvarande karakteriserar hjärt adventitiala celler och undersöka deras potential för regenerativa applikationer.

Häri beskriver vi en metod att isolera och rena två subpopulationer av perivaskulära stam / progenitorceller från human fetal eller vuxen myokardiet. Denna blivande cellisolering metod gör det möjligt för forskare att få isogena perivaskulära stam / progenitorceller grupper från humana hjärt biopsier för jämförande studier och further utforska deras terapeutiska potential i olika hjärt patologiska tillstånd.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Behandling av humant Cardiac Sample

  1. Se till att alla vätskor, behållare, instrument och den särskilda verksamhetsgrenen är sterila.
  2. Placera hjärtvävnadsprovet (anskaffas av vävnadsbanken eller kirurgisk lag) i lagringsmediet som består av kyld Dulbeccos modifierade Eagles medium (DMEM) innehållande 20% fetalt bovint serum (FBS) och 1% penicillin-streptomycin (P / S) på is för transport 3.
  3. Avlägsna hjärt provet från lagringsmediet och tvätta med en tvättmedium bestående av fosfatbuffrad saltlösning (PBS) supplementerad med 2% FBS och 1% P / S. Vid hantering av provet, använd fint tippade pincett för att förstå stora kärl eller hjärtsäck och minimera krossning av hjärtmuskeln.
  4. Sänk provet i tvättmediet i en petriskål och ta hjärtsäcken, endokardiet och stora blodkärl med steriliserade iris sax och spetsig pincett som beskrivs 3.
  5. Skär den återstående myocardium i små bitar på ca 1 mm 3 med användning av en enda sida rakblad eller ett par vassa iris sax. Obs: Högsta cellutbyten kommer att erhållas om proverna behandlas omedelbart. Om en fördröjning inte kan undvikas, (> 5 ml per 1 cm 3 vävnad) vid 4 ° C i upp till 72 h är lagring av den bearbetade hjärtvävnad i den friska lagringsmedium emellertid möjligt förmodligen med en tillhörande minskning av cellutbytet.

2. Nedbrytning av vävnad och isolering av celler

  1. Färskt make up uppslutningslösning innefattande 1,5 ml vardera av kollagenas I, kollagenas II och kollagenas IV (alla på 0,5 mg / ml i DMEM) och värm till 37 ° C i ett vattenbad.
    Notera: Volym och koncentration av kollagenaser är lämpliga för prover av ca 1 cm 3.
  2. Filtrera de suspenderade vävnaden bitarna genom en 100 | im sil och tvätta två gånger med PBS. Överföra vävnaden bitar till en steril 30 ml behållare meden tätt försluten lock.
    Obs: Korta breda krukor snarare än höga smala rör ger bättre resultat. Alternativt sätta vävnadsbitar i ett sterilt 50 ml rör och placera horisontellt om en 30 ml behållare är inte tillgänglig.
  3. Lägg alla rötnings lösningar (4,5 ml totalt) och placera behållaren i en förseglad plastpåse i en 37 ° C skakande vattenbad inställd på 120 rpm. Alternativt Förslut med paraffin film och plats i ett uppvärmt orbitalskak inställd på 120 rpm.
  4. Efter 15 minuter, ta bort och invertera potten tre gånger innan du byter till en ytterligare 15 minuter. Ta bort och släcka de koUagenaser med 5 ml av DMEM kompletterat med 20% FBS och 1% P / S.
  5. Triturera uppslutnings genom att försiktigt pipettera tio till tjugo gånger med en 10 ml serologisk pipett för att bryta upp eventuella vävnadsklumpar. Filtrera suspensionen sekventiellt genom 100 | im, 70 | j, m och slutligen 40 | im cell silar för att avlägsna osmält material och erhålla en enkelcellsuspension.
    Notera:Skölj inte mellan cell silar för att undvika cell debrisgenerated av enzymet rötningsprocessen.
  6. Centrifugera cellsuspensionen vid 200 xg under 4 min, försiktigt dekantera supernatanten och återsuspendera pelleten i 1 ml röda blodkroppar lyseringsbuffert under 2 minuter vid rumstemperatur före utspädning med 4 ml tvättmedium.
  7. Upprepa centrifugeringssteget och återsuspendera pelleten i 1 ml tvättmedium. Blanda väl och ta 10 | il av cellsuspensionen för cellräkning.
  8. Blanda 10 pl av cellsuspensionen med 10 | il Trypan blånad och placera 10 pl av blandningen på en standard hemocytometer för cellräkning. Räkna antalet ljusa, runda celler närvarande i de fyra hörn rutor (varje uppdelat i sexton små kvadrater) och dividera med 4 för att få den genomsnittliga per hörn kvadrat. Multiplicera medelvärdet med 2 till kontot för fläcken utspädningsfaktor och sedan av 10 4 för att erhålla det totala antalet celler per 1 ml av provet.

  1. Tillsätt 50 pl av musserum till cellsuspensionen och inkubera vid 4 ° C under 20 min för att blockera icke-specifik antikroppsbindning.
  2. Centrifugera cellsuspensionen med musserum vid 200 xg under 4 min, avlägsna supernatanten och återsuspendera i tvättmedium vid en koncentration av 1 x 10 6 celler per 100 | il.
  3. Alikvotera 50 ul vardera av cellsuspensionen för isotyp och ofärgade kontroller i två polystyren rundbottnad flödescytometri rör placera sedan den återstående volymen i ett tredje rör för flerfärgsfärgning.
  4. Lägg CD34-PE, CD45-APC-Cy7, CD56-PE-Cy7, CD144-PerCP-Cy5.5 och CD146-AF647 antikroppar (alla 1: 100) till en enda cell suspension flerfärgade fläckar. För isotypkontroll lägger motsvarande volymer av PE, APC-Cy7-, PE-Cy7-, PerCP-Cy5.5- och AF647-konjugerade isotyp antikroppar. Försiktigt pipett för att blanda antikropparna med cellerna och inkubera alla rören vid 4 ° C under 20minuter i mörker.
  5. Förbereda kompensationskontrollpärlor genom tillsats av en droppe av positiva pärlor till 100 ul av tvättmedium i fem polystyren med rund botten flödescytometri rör. Lägg CD34-PE, CD45-APC-Cy7, CD56-PE-Cy7, CD144-PerCP-Cy5.5 och CD146-AF647 antikroppar (alla 1: 100) individuellt till var och en av de 5 rören. Inkubera alla rör vid 4 ° C under 20 minuter i mörker.
  6. Under inkubationen, förbereda celluppsamlingsrören med vardera 500 fil av Endothelial Growth Medium-2 (EGM-2) odlingsmedium och rum vid 4 ° C.
  7. Efter antikropps inkubation, tillsätt 5 ml tvättmedium för att tvätta celler och pärlor i syfte att avlägsna obunden antikropp. Centrifugera alla rören vid 200 xg under 4 minuter. Upprepa tvätt och centrifugeringssteg. Dekantera försiktigt supernatanten och pipetten försiktigt när återsuspendering celler.
  8. Återsuspendera i tvättmedium vid en koncentration av ca 1 x 10 6 celler per 250 | il. Återsuspendera pärlorna i 100 pl tvätt medium.
  9. Transportera alla cell och pärla suspensioner till cellsorterare på is i mörker. Tillsätt 1 droppe negativa pärlor till de positiva pärlan ersättning kontrollrören och använda dessa för att ställa in fluorescenskompensation.
  10. Kör ofärgade kontrollceller enligt tillverkarens anvisningar för att fastställa bakgrundsfluorescensen och som spänningarna till följande: FSC 150V; SSC 290V; V450 / 50 350 V; V710 / 50 620V; B530 / 30 400V; B710 / 50 530V; YG780 / 60 460; R670 / 30 480V; R780 / 60 460V. Kör isotyper kontroller enligt tillverkarens instruktioner för att fastställa bakgrundsfluorescensen trösklar i samband med icke-specifik bindning. Kör flerfärgade färgade provet och samla in pericyte och adventitiala cellpopulationer i uppsamlingsrören (Figur 1).
    OBS: Optimala livskraftiga cellutbyten är ungefär 3% av den totala levande cell dissociation för pericyter och 4% för adventitiala celler.

4. Cell Culture

  1. Välj lämplig storlek odlingsplattor i enlighet med resultatet av FACS sortering. Tillsätt 100 | il av steril 0,2% gelatinlösning per cm 2 av tillväxtområde och skaka manuellt för att belägga hela brunnarna. Inkubera plattorna vid 4 ° C under 10 min och avlägsna gelatinlösning helt. Hålla uppsamlade cellerna på is samtidigt förbereda odlingsplattor.
    Notera: Freshly sorterade pericyter och adventitiala celler växer bra när såddes vid en densitet av 30.000 till 40.000 celler / cm 2 på gelatinbelagda odlingsytan.
  2. Centrifugera nyuppsamlade cellerna vid 200 xg under 4 minuter och försiktigt återsuspendera cellpelleten i en lämplig mängd av EGM-2.Seed cellerna på gelatinbelagda plattor.
    Obs: Det faktiska antalet celler som skall ympas per brunn och mängden EGM-2 som skall tillsättas beror på plattan selektion. Till exempel, 0,5 ml och 1 ml EGM-2 behövs per brunn för 48- och 24-brunnars plattor respektive.
  3. Utbyte EGM-2 för perivaskulär celltillväxtmedium (DMEM kompletterat med 20% FBS och 1% P / S) för både pericyter och adventitiala cellerna en gång celler har bosatt sig och anslutit sig till plattan (efter minst 72 timmar). Ändra media varje 72 timmar därefter. Utföra initiala och alla efterföljande inkubationer i 5% CO2 och vid 37 ° C.
  4. Dissociera celler med användning av 0,05% trypsin EDTA när pericyter och adventitiala cellerna når 80 till 90% sammanflödet. Släck med 20% FBS i PBS, centrifugera vid 200 xg under 4 min, återsuspendera i perivaskulär cell odlingsmedium, och sedan passage cellerna vid en 1: 3 förhållande till obelagda polystyren odlingsplattor. Från Passage 2 och framåt, passage celler vid en 1: 5-förhållande (eller cirka 7000 celler / cm2) till belagda polystyren odlingsplattor eller flaskor.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Enstaka celler skiljer sig från skräp och dubletter på grund av framåt- och sidospridnings distributioner. Levande celler identifierades genom deras oförmåga att ta upp DAPI färgämne. Grind strategi valdes på basis av isotypkontroll märkning av detta levande, hela-hjärtcell dissociation (Figur 1). Från levande celler, CD45 + celler först gated ut, följt av CD56 + celler. CD144 + endotelceller avlägsnades sedan från den CD56 - fraktionen. Från denna sista befolkning, CD146 + / CD34 - pericyter och CD146 - var / CD34 + adventitiala celler väljs och därefter samlas in (Figur 2). Omedelbart efter cellsamling, ett litet prov av varje subpopulation (500-1000 celler) åter gå igenom sorteraren för att bekräfta att cellfördelningen var som registrerats i den första sorteringen. FACS-renade myokardial Peric ytes och adventitiala celler både uppvisar en spindel att stel cellmorfologin i kultur (Figur 3).

Figur 1
Figur 1:. FACS Gating strategi Representativa prickar tomter av isotypkontroll märkt dissocierade humana hjärtceller illustrerar placeringen av sorteringsgrindarna .. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

figur 2
Figur 2: FACS Rening av Myocardial perivaskulär celler Representativa sortering av de två subpopulationer av hjärt perivaskulära prekursorceller från en enda människa myocardial prov..es / ftp_upload / 54.252 / 54252fig2large.jpg "target =" _ blank "> Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figur 3
Figur 3:. Perivaskulära cellmorfologi i kultur De två hjärt perivaskulära prekursor cellpopulationer, pericyter (till vänster) och adventitiala celler (höger) sorterades till homogenitet genom FACS rening och ytterligare expanderas i odling (vid passage 3, Skalstrecken = 50 um ). klicka här för att se en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Ökande bevis stöder en begränsad förnyelseförmåga av den vuxna människans hjärta efter skada. Identifiering och karakterisering av inhemska prekursorceller som ansvarar för dessa regenerativa svar i skadade hjärtan är avgörande för både förståelsen av tillhörande mekanismer och signalvägar och utveckling av metoder för att utnyttja dessa celler terapeutiskt.

Tidigare protokoll har beskrivit isolering av perivaskulära prekursor cellgrupper från human skelettmuskel 25. Men direkt tillämpning av dessa tekniker till hjärtvävnader resulterar ofta i mycket dåliga cellutbyten. Därför har vi gjort omfattande förändringar i protokollet i syfte att berika två separata subpopulationer av perivaskulära prekursorceller, nämligen pericyter och adventitiala celler, från mänskliga hjärt biopsier och för att underlätta samtidig rening av båda undergrupper. Isolering av både cellpopulationer från same prov inte bara optimerar användningen av ädla hjärt vävnadsbiopsier men också tillåter direkt jämförelse av olika perivaskulära cellgrupper.

För att erhålla det maximala utbytet av celler, är färskhet vävnadsprovet av kritisk betydelse. Maximala viabla cellutbyten för pericyter och adventitiala celler är ca 3% och 4% av den totala levande cell dissociation respektive. Utbyten kan variera kraftigt från cirka 30.000 till 400.000 celler per delmängd och är starkt beroende av ett antal faktorer, inklusive mängden och kvaliteten av vävnad och varaktigheten bevaras. Perivaskulära celler är relativt känsliga; prover som inte uppvisar tecken på autolytisk förändring alltid ger låga cellantal efter FACS. På liknande sätt, perivaskulära celler är känsliga för hårda uppslutningstekniker, och över-digestion kommer också att resultera i ett reducerat livsduglig cellutbyte. Skräddarsydda justeringar av uppslutningstiden och omrörningshastighet kan vara nödvändigt genom individual laboratorier. Slutligen kommer givare ålder och provstorleken också få stora effekter på cellutbyten.

Vi har i stor utsträckning präglas hjärt pericyter som erhållits på detta sätt 3. Dessa celler visade homogenitet i kultur utan endotel förorening cell. Populationsfördubblingstid gånger på cirka 60 timmar mellan passagerna 3 och 12 noterades med konsekvent uttryck av både vanliga pericyte markörer (alkaliskt fosfatas, NG2 och α-SMA) och klassiska MSC markörer (CD44, CD73, CD90 och CD105) under denna period. Intriguingly, visade det sig att efter demetylering, en fraktion av hjärt pericyter uttryckte cardiomyogenic transkriptionsfaktorer Nkx2.5 och GATA4. När samodlas med neonatala råttkardiomyocyter, en bråkdel av demetylerad hjärt pericyter uttryckte sarcomeric proteinmarkörer alfa-actinin och kardiellt troponin-T, med en mindre grupp ytterligare uppvisar spontana cytoplasmiska kalciumflöden. Tagna tillsammans, Sugge dessa fyndst att en subpopulation av hjärt pericyter besitter cardiomyogenic potential och därför kan spela en roll i den inneboende hjärtmuskelreparationsprocessen. I jämförelse med pericyter, hjärt adventitiala celler i stort sett karaktäriserad. Vår opublicerade preliminära data tyder på att hjärt adventitiala celler uttrycker vissa pericyte markörer som PDGFR-β och NG2, om än på lägre nivåer än hjärt pericyter, samtidigt förlora CD34 i kultur. Dessa celler uttrycker också klassiska MSC markörer och visa osteogen och adipogena differentiering potential. Ytterligare studier av hjärt adventitiala celler inklusive angiogena och pro-kardiogena egenskaper pågår.

Protokollet som beskrivs här möjliggör samtidig, blivande rening av hjärt pericyter och adventitiala celler från en enda hjärt prov mänsklig vävnad. Dessa celler representerar nya hjärt prekursor cellpopulationer med potentiella cardiomyogenic egenskaper som kan visa sig vara lämplig candidates för framtida cellterapier.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
AbC Anti-mouse Bead Kit Molecular Probes A-10344
Collagenase I Gibco 17100-017 Reconstitute powder as required and filter sterilise
Collagenase II Gibco 17101-015
Collagenase IV Gibco 17104-019
anti-human CD34-PE BD Pharmingen 555822 Keep sterile
anti-human CD45-APC-Cy7 BD Pharmingen 557833 Keep sterile
anti-human CD56-PE-Cy7 BD Pharmingen 557747 Keep sterile
anti-human CD144-PerCP-Cy5.5 BD Pharmingen 561566 Keep sterile
anti-human CD146-AF647 AbD Serotec MCA2141A647 Keep sterile
EGM2-BulletKit Lonza CC-3162 For collection of cells and culture until adhered
DMEM, high glucose, GlutaMAX without sodium pyruvate ThermoFischer Scientific 10566-016
Fetal Bovine Serum ThermoFischer Scientific 10500-064 Freeze in aliquots and keep sterile
Gelatin Sigma Aldrich G1393 Dilute with sterile water
IgG1k-PE BD Pharmingen 559320 Keep sterile
IgG1k-APC-Cy7 BD Pharmingen 557873 Keep sterile
IgG1k-PE-Cy7 BD Pharmingen 557872 Keep sterile
IgG1k-PerCP-Cy5.5 BD Pharmingen 561566 Keep sterile
IgG1k-647 AbD Serotec MCA1209A647 Keep sterile
Mouse serum Sigma Aldrich M5905 Keep sterile
Paraffin Film - Parafilm M Sigma Aldrich P7793
Penicillin-Streptomycin Gibco 15979-063 Freeze in aliquots and keep sterile
Phosphate buffered saline pH 7.4 ThermoFischer Scientific 10010-023 Keep sterile
Red Blood Cell Lysing Buffer Hybri-Max Sigma Aldrich R7757 Keep sterile
Trypan Blue Solution Sigma Aldrich T8154
Trypsin-EDTA 0.5%(10x) Invitrogen 15400-054
 FACSARIA FUSION BD Pharmingen Fluorescence Activated Cell Sorter

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bergmann, O., et al. Evidence for cardiomyocyte renewal in humans. Science (New York, N.Y.). 324, (5923), 98-102 (2009).
  2. Laflamme, A., Murry, C. E. Heart regeneration. Nature. 473, (7347), 326-335 (2011).
  3. Chen, W. C. W., et al. Human myocardial pericytes: multipotent mesodermal precursors exhibiting cardiac specificity. Stem cells (Dayton, Ohio). 33, (2), 557-573 (2015).
  4. Campagnoli, C., Roberts, I. A., Kumar, S., Bennett, P. R., Bellantuono, I., Fisk, N. M. Identification of mesenchymal stem/progenitor cells in human first-trimester fetal. Blood. 98, (8), 2396-2402 (2001).
  5. Zuk, P. A., et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Molecular biology of the cell. 13, (12), 4279-4295 (2002).
  6. Chen, S., et al. Effect on left ventricular function of intracoronary transplantation of autologous bone marrow mesenchymal stem cell in patients with acute myocardial infarction. The American journal of cardiology. 94, (1), 92-95 (2004).
  7. Ringdén, O., et al. Mesenchymal stem cells for treatment of therapy-resistant graft-versus-host disease. Transplantation. 81, (10), 1390-1397 (2006).
  8. Kharaziha, P., et al. Improvement of liver function in liver cirrhosis patients after autologous mesenchymal stem cell injection: a phase I-II clinical trial. European journal of gastroenterology & hepatology. 21, (10), 1199-1205 (2009).
  9. Spaeth, E., Klopp, A., Dembinski, J., Andreeff, M., Marini, F. Inflammation and tumor microenvironments: defining the migratory itinerary of mesenchymal stem cells. Gene therapy. 15, (10), 730-738 (2008).
  10. Yan, X., et al. Injured microenvironment directly guides the differentiation of engrafted Flk-1(+) mesenchymal stem cell in lung. Experimental hematology. 35, (9), 1466-1475 (2007).
  11. Van Poll, D., et al. Mesenchymal stem cell-derived molecules directly modulate hepatocellular death and regeneration in vitro and in vivo. Hepatology (Baltimore, Md.). 47, (5), 1634-1643 (2008).
  12. Popp, F. C., et al. Mesenchymal stem cells can induce long-term acceptance of solid organ allografts in synergy with low-dose mycophenolate. Transplant immunology. 20, (1-2), 55-60 (2008).
  13. Li, Z., Zhang, C., Weiner, L. P., Zhang, Y., Zhong, J. F. Molecular characterization of heterogeneous mesenchymal stem cells with single-cell transcriptomes. Biotechnology advances. 31, (2), 312-317 (2013).
  14. Crisan, M., et al. A perivascular origin for mesenchymal stem cells in multiple human organs. Cell stem cell. 3, (3), 301-313 (2008).
  15. Ozerdem, U., Stallcup, W. B. Early contribution of pericytes to angiogenic sprouting and tube formation. Angiogenesis. 6, (3), 241-249 (2003).
  16. Rucker, H. K., Wynder, H. J., Thomas, W. E. Cellular mechanisms of CNS pericytes. Brain research bulletin. 51, (5), 363-369 (2000).
  17. Betsholtz, C. Insight into the physiological functions of PDGF through genetic studies in mice. Cytokine & Growth Factor Reviews. 15, (4), 215-228 (2004).
  18. Gerhardt, H., Betsholtz, C. Endothelial-pericyte interactions in angiogenesis. Cell and tissue research. 314, (1), 15-23 (2003).
  19. Crisan, M., Chen, C. W., Corselli, M., Andriolo, G., Lazzari, L., Péault, B. Perivascular multipotent progenitor cells in human organs. Annals of the New York Academy of Sciences. 1176, 118-123 (2009).
  20. Kang, S. G., et al. Isolation and perivascular localization of mesenchymal stem cells from mouse brain. Neurosurgery. 67, (3), 711-720 (2010).
  21. Chen, C. W., et al. Human pericytes for ischemic heart repair. Stem cells (Dayton, Ohio). 31, (2), 305-316 (2013).
  22. Campagnolo, P., et al. Human adult vena saphena contains perivascular progenitor cells endowed with clonogenic and proangiogenic potential. Circulation. 121, (15), 1735-1745 (2010).
  23. Katare, R., et al. Transplantation of human pericyte progenitor cells improves the repair of infarcted heart through activation of an angiogenic program involving micro-RNA-132. Circulation research. 109, (8), 894-906 (2011).
  24. Corselli, M., Chen, C. W., Sun, B., Yap, S., Rubin, J. P., Péault, B. The Tunica Adventitia of Human Arteries and Veins As a Source of Mesenchymal Stem Cells. Stem Cells and Development. 21, (8), 1299-1308 (2012).
  25. Crisan, M., et al. Purification and long-term culture of multipotent progenitor cells affiliated with the walls of human blood vessels: myoendothelial cells and pericytes. Methods in cell biology. 86, 295-309 (2008).
Isolering av perivaskulär multi Precursor cellpopulationer från Human hjärtvävnad
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Baily, J. E., Chen, W. C. W., Khan, N., Murray, I. R., González Galofre, Z. N., Huard, J., Péault, B. Isolation of Perivascular Multipotent Precursor Cell Populations from Human Cardiac Tissue. J. Vis. Exp. (116), e54252, doi:10.3791/54252 (2016).More

Baily, J. E., Chen, W. C. W., Khan, N., Murray, I. R., González Galofre, Z. N., Huard, J., Péault, B. Isolation of Perivascular Multipotent Precursor Cell Populations from Human Cardiac Tissue. J. Vis. Exp. (116), e54252, doi:10.3791/54252 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter