Summary
Мы демонстрируют Storable, транспортабельные липидную систему образования двухслойная. Липидный бислой мембрана может быть сформирована в течение 1 часа с вероятностью успеха более 80%, когда предшественник замороженный мембрана доводят до температуры окружающей среды. Эта система позволит сократить трудоемкие процессы и опыт, связанные с ионными каналами.
Abstract
Искусственный липидный бислой, или черный липидной мембраны (БЛМ), является мощным инструментом для изучения ионных каналов и белковых взаимодействий, а также для биосенсоров приложений. Однако традиционные методы BLM формирования имеют ряд недостатков, и они часто требуют специальных знаний и трудоемкие процессы. В частности, обычные БЛМ страдают от низких показателей успешности формирования и непоследовательным времени формирования мембраны. Здесь мы демонстрируем сохраняемыми и переносимыми систему BLM пласта с регулируемой прореживания-аут времени и повышения скорости образования BLM путем замены традиционно используемых пленок (политетрафторэтилен, полиоксиметилен, полистирол) для полидиметилсилоксана (PDMS). В этом эксперименте используют пористый структурированный полимер, такой как PDMS тонкой пленки. Кроме того, в отличие от традиционно используемых растворителей с низкой вязкостью, использование сквалена допускается контролируемое разжижающие Расчетный час с помощью медленного поглощения растворителя с помощью ПДМС, увеличить срок службы мембраны. В рекламеусловие, при использовании смеси сквален и гексадекану, точка замерзания раствора липида была увеличена (~ 16 ° C), кроме того, мембранные предшественники были произведены, которые могут быть неограниченно храниться и легко транспортируемой. Эти мембранные предшественники сократили BLM время формирования <1 ч и достиг BLM скорости формирования ~ 80%. Кроме того, эксперименты ионных каналов с грамицидина А продемонстрирована возможность мембранной системы.
Introduction
Искусственный липидный бислой мембраны, или черный липидная мембрана (BLM), является важным инструментом для выяснения механизмов клеточных мембран и ионных каналов, а также для понимания процессов взаимодействия ионных каналов и ионов / молекул. 1-7 Хотя метод пэтч-кламп часто считается золотым стандартом для клеточных мембран исследований, является трудоемким и требует высокой квалификации операторов для измерения ионных каналов. 8 в то время как искусственно воссозданных липидный бислой мембраны появились в качестве альтернативных инструментов для исследований ионных каналов, 9,10 они также связаны с трудоемкими процессов и специальных знаний. Кроме того, мембраны восприимчивы к механическим возмущениям. Следовательно, липидные двухслойные технологии , введенные на сегодняшний день имеют ограниченные практические применения. 11
В целях повышения надежности и долговечности липидный бислой мембран, Костелло и др. , 12, и язь и Янагида
Развитие липидной двухслойной платформы имеет в основном вращалась вокруг увеличения прочности и долговечности БЛМ. Хотя долговечность БЛМ был суbstantially усиливается в последнее время, их применение было ограничено из-за недостатка транспортабельности и способности к хранению. Чтобы преодолеть эти проблемы, Джеон и др. Создали Storable мембранную систему и введена мембранный предшественник (МП). 16 Для построения МП, они приготовили смесь н- деканом и гексадекану содержащей 3% -ную DPhPC (1,2-diphytanoyl- зп глицеро-3-фосфатидилхолин) , чтобы контролировать температуру замерзания липидного раствора таким образом, что она будет замерзать при ~ 14 ° C ( при температуре ниже комнатной, выше типичной температуре холодильника). В этом эксперименте МП растянулось на небольшое отверстие на политетрафторэтилен (ПТФЭ) пленку, а затем замораживают в холодильнике при температуре 4 ° С. Когда МП доводят до комнатной температуры, МП размораживают и липидный бислой был автоматически сформирован, устраняя опыт, как правило, связанный с образованием мембраны. Тем не менее, вероятность успеха BLM сделал из МП составляла всего ~ 27%, а мембраны формирования кп раз был непоследовательным (30 мин до 24 ч), что ограничивает его практическое применение.
В этом исследовании, полидиметилсилоксан (ПДМС), тонкая пленка используется вместо обычного гидрофобных тонких пленок (PTFE, полиоксиметилен, полистирол) до (а) времени, изготовления контроля и (б) увеличить вероятность успеха BLM формации, как сообщалось ранее Рю и др. 17 в данном случае формирование мембраны облегчается путем экстракции растворителей из - за пористой природы PDMS, и время , необходимое для формирования мембраны успешно контролируется в данном исследовании. В этой системе, как липидный раствор всасывается в тонкой пленке PDMS, последовательное время образования Мембрана была достигнута. Кроме того, срок службы мембраны был продлен из-за медленного поглощения растворителей в PDMS тонкопленочных, в результате добавления сквален к раствору липида. Мы провели оптические и электрические измерения, чтобы убедиться, что мембраны, полученные с помощью этой методики пригодны для гна каналах исследований.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Получение раствора
- Приготовление буферного раствора:
- Сформулировать буферного раствора, растворить 1 М КСl (хлорид калия), 10 мМ Трис-HCl (Трис-гидрохлорид) и 1 мМ ЭДТА (этилендиаминтетрауксусной кислоты) в дистиллированной воде и доведения рН до 8,0.
- Фильтр раствора с использованием фильтра 0,20 мкм. Для стерилизации, автоклав раствор при температуре 121 ° С в течение 15 мин.
- Приготовление липидного раствора для предварительной покраски:
- Для того, чтобы сформулировать решение липидный для предварительной покраски, растворите 3% DPhPC (1,2-diphytanoyl- зп глицеро-3-фосфатидилхолин) липида (вес: объем) в смеси 2: 8 л -decane и гексадекана (V: V). Перемешивают в течение ночи с помощью поворотного устройства.
- Получение липидной раствора для формирования мембран:
- Для того, чтобы сформулировать решение липидов для формирования мембран, растворяется 0,1% DPhPC (1, 2-diphytanoyl- зп глицеро-3-фосфатидилхолин) липида (вес: объем) в смеси 2: 8 квualene и гексадекан (по объему). Перемешивают в течение ночи с помощью поворотного устройства.
2. Формирование тонкой пленки PDMS
- Смешайте PDMS и отвердителя в соотношении 9: 1 (вес / вес) в чашку для смешивания с образованием форполимера PDMS. Добавьте 5 г PDMS форполимера в чашку Петри, чтобы сформировать PDMS тонкую пленку (толщина 200 - 250 мкм). Распространение PDMS форполимера с использованием спиновой устройства для нанесения покрытия при 800 оборотах в минуту в течение 10 секунд, чтобы сформировать тонкую пленку.
- Поместите чашку Петри в вакуум-эксикаторе при давлении 100 мТорр в течение 2 ч, чтобы удалить пузырьки воздуха. Полимеризоваться преполимера тонкую пленку, испечь в печи в течение 5 часов при 70 ° С.
- Для того , чтобы сделать квадрат PDMS тонкопленочные, разрезать полимеризованные PDMS тонкую пленку в 2 х 2 см 2 квадратов. Используйте 500 мкм микро удар, чтобы сделать отверстие в центре PDMS тонкой пленки. Предварительно лакокрасочные апертур с 3% -ным раствором DPhPC липидов , смешанного в 2: 8 n- деканом и гексадекану.
3. Камера Изготовление и Ассmbly
- Для того, чтобы изготовить BLM камеру, дизайн два симметричных блоков камеры с использованием 3D - рисования программного обеспечения с внешними размерами 4 см х 1,5 см х 1 см и внутренним ямами размерами 1,5 см х 1,3 см х 0,8 см 17.
- Обработайте камеру, используя блок PTFE с ЧПУ и следовать инструкциям производителя.
4. Палата Ассамблеи
- Для сборки камеры, поместите тонкую пленку предварительно окрашенная-PDMS между двумя блоками ПТФЭ таким образом, что отверстие на PDMS тонкой пленки совмещен с отверстием в камере.
- Уплотнение внешние края камеры с помощью покровного стекла смазкой (облегчающее оптического наблюдения). Зафиксировать в собранном виде камеры с помощью гаек и болтов.
Примечание: Убедитесь, что камера хорошо герметизированы таким образом, что нет утечки жидкости.
5. Формирование мембранных Предтечи с Ускорянный самосборка формирования (MPES)
- С помощью пипетки, депозит 0,5мкл 0,1% DPhPC липида , смешанного в 2: 8 л -decane: гексадекана на раскрыве PDMS тонкой пленки в сборе с камерой.
- Перед использованием храните камеру в морозильной камере или в холодильнике ниже 10 ° С.
6. Мембрана Формирование и проверка
- Для формирования БЛМ с MPES, вывести камеру из холодильника и подвесить 2 мл буферного раствора в каждую сторону камеры. Установите камеру в сторону для <10 мин, пока предшественник замороженное мембрана не оттаивает.
- Поместите камеру на микроманипулятор точно контролировать высоту по отношению к источнику света и микроскопом. Осветить одну сторону камеры в качестве источника света, используя галогенную волоконно-оптический осветитель ярче апертуры PDMS тонкопленочных для оптического наблюдения BLM процесса формирования.
- С другой стороны, место цифровой микроскоп вертикально по отношению к источнику света, чтобы наблюдать образование BLM (увеличить на 200X).
- Для подтверждения BLM образования, наблюдать центр отверстия, где цвет становится ярче, чем кольцевое пространство.
7. Электрическая запись
- Для электрических измерений, подготовки Ag / Cl электродов с использованием 208 мкм толщиной серебряной проволоки и отбеливатель в гипохлоритом натрия в течение> 1 мин. Устанавливая электроды Ag / Cl в каждую сторону камеры достаточно глубоко, чтобы погрузить в буферный раствор.
- Подключите электроды к усилителю микроэлектродов. Использование ПО электрофизиологии, нанесите ± 10 мВ треугольной формы через мембрану, чтобы получить квадратные волны. Установка приложения напряжения, нажимая на стрелки, указанные на V_clamp (мВ).
- Запись электрических свойств мембраны, нажав на кнопку записи (красный значок точка). Продолжить с возможностью записи до тех пор, пока наблюдается равномерная прямоугольная волна. Закройте запись, нажав на квадратный значок черный.
8. Включение ионного канала
НЕЕ: грамицидин А (гА) включение происходит спонтанно при образовании BLM, а дА добавляют непосредственно к раствору липида.
- Для того, чтобы наблюдать за деятельностью канала gå, нанесите 100 мВ через мембрану при частоте дискретизации 5 кГц для измерения потенциала, проведение мембраны. Установка приложения напряжения, нажимая на стрелки, указанные на V_clamp (мВ).
- Запишите электрические свойства включения gå, нажав на кнопку записи (красный значок точка). Продолжить запись, пока не наблюдается тока скачков. Закройте запись, нажав на квадратный значок черный.
- После электрического сбора данных, фильтровать данные с фильтром нижних частот Бесселя на частоте 100 Гц с использованием программного обеспечения электрофизиологии.
- Соблюдайте текущие прыжками в отфильтрованной холдинг потенциальных данных (каждый скачок тока, ~ 0,15 нс, представляет собой димеризацию ионного канала gå) для проверки gå включения.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Оптимизация MPES Solution Композиция
Различные композиции липидов и растворителей были протестированы успешно воссоздавать липидный бислой мембран из MPES. Система МП со смесью н - деканом и гексадекану , содержащего 3% DPhPC 14 проявляли низкий уровень успеха формирования мембраны (~ 27%). Кроме того, как пленка ПДМС непрерывно извлеченный липидного раствора, было необходимо, чтобы оптимизировать состав растворителя для поддержания интактной мембраны липидного бислоя. Таким образом, сквален, которая имеет вязкость 12 сП при 20 ° С 18 используют вместо п - декане, которая имеет вязкость 0,92 сП при температуре 20 ° С. 19 Когда сквалена использовали, как стабильность и долговечность увеличена за счет к уменьшается скорость поглощения растворителя PDMS. Таблица 1 сравнивает истончение-аут, время жизни, и вероятность успеха мембран с различными составами растворителей.
Когда н- деканом использовалась, образование мембрана была непоследовательной и мембраны часто разрываются в течение короткого периода времени, в связи с быстрым поглощением растворителя PDMS тонких пленок. С другой стороны, при использовании сквалена, время разрыва мембраны была задержана. Кроме того, время образования мембраны стал более последовательным, показатель успешности формирования мембран, улучшению и долговечности мембран увеличилась.
Мембрана Формирование из мембранных Предтечи (МП)
МП замороженный форма липидного раствора, который становится легко использовать при оттаивании при комнатной температуре. Раствор липида , содержащий смесь н- деканом и гексадекану в небольшом отверстие в PDMS тонкая пленка застывает ниже 16 ° C, и до бесконечности сохраняемыми и переносимыми в замороженном виде. На рисунке 1 показана сборка PDMS тонкую пленку с PTFE чаmber для получения MP. Перед использованием PTFE камера была выведена из холодильника для формирования мембраны. В данном контексте, PDMS тонкую пленку, содержащую замороженного раствора липида помещали между двумя половинками камер PTFE. Когда буфер затем раствор добавляется к обеим сторонам камеры при комнатной температуре, в липидный бислой мембрана, образованная спонтанно при оттаивании мерзлого предшественника мембранного (МП).
При оттаивании, раствор липидной прореживают , как описано на фиг.2. Когда предшественник замороженный мембрана оттаивают, два монослоя вдоль границ раздела между буфером и липидного раствора приводили в контакт. 20 После формирования мембраны, gå мономеры , которые были предварительно смешаны в растворе липида показали деятельность канала.
Оптический Наблюдение мембранах
Для того, чтобы оптически подтвердить образование мембраны, мыб проходящем свете для визуализации мембраны. При образовании мембраны, мембрана оказалась ярче , чем окружение из - за процесса прореживания-аут, а центр апертуры (место расположения формирования мембраны) был ярче , чем кольцевое пространство. На рисунке 3 показано формирование мембраны наблюдается с помощью цифровой микроскопии. Мембрана успешно разреженных при оттаивании.
Электрические измерения липидного бислоя
Мы измерили электрические токи через мембрану с помощью усилителя для расчета толщины мембраны. Ag / AgCl электроды погружают в обеих палатах для электрических измерений. Когда 10 мВ треугольная волна от пика до пика наносили через мембрану, треугольник волна была преобразована в квадратную волну тока , обусловленного характеристикой липидной двухслойной мембраны (действовать в качестве конденсатора). 21 В результате мы в состоянии оценить толщину мембраныс использованием следующего уравнения:
где I (т) представляет собой электрический ток и С представляет собой емкость через мембрану. V представляет собой прикладную от пика до пика напряжения (20 мВ на 0,0625 сек). При этом, С может быть выражено, диэлектрическая проницаемость свободного пространства (8,85 х 10 12 Ф / м 2), диэлектрическая проницаемость липидов (2,1), 22 А, площадь мембраны (~ 1,29 х 10 -7 м 2), и d, толщина бислой. С помощью оптических данных на рисунке 3 и электрических данных, мы рассчитали толщину мембраны , чтобы быть ~ 4 нм. Кроме того, восстановленный мембрана удовлетворял уровень уплотнения Giga Ом (> 1 ГОм), который , как правило , необходимое для исследования ионных каналов. 23
Ионный канал Деятельность грамицидина А (ГА)
Для проверки возможности ионного канала скрининга с липидный бислой, образованной из МП, мы включили гА, один из наиболее часто используемых ионных каналов для проверки формирования мембран. Грамицидин А включает в мембрану в виде двух отдельных субъединиц , которые впоследствии димеризоваться. 7 ионных каналов формы при димеризации гА, и ионы проникают через ионный канал gå. Рисунок 4 иллюстрирует включение и димеризации гА. После gå димеризации, уровни проводимости канала gå были 28 мкСм, что согласуется с результатами предыдущих отчетов. 3
| концентрация липида | растворитель | Прореживание Расчетный час (мин) | Время жизни (мин) | Шанс успеха |
| 0,1% | 2: 8 сквален: гексадекан | 50,6 (± 30,9) | 52,4 (± 30,9) | 77,8% |
| 0,1% | 2: 8 п -decane: гексадекан | 13,2 (± 12,3) | 10,8 (± 7,8) | 75,2% |
| 1% | 2: 8 п -decane: гексадекан | 15.8 (± 8.8) | 26,2 (± 25,3) | 69,3% |
| 1% | 2: 8 п -decane: гексадекан | 13,8 (± 13,3) | 23,6 (± 30,1) | 55,6% |
| 1% | 2: 8 п -decane: гексадекан | 13,6 (± 10,3) | 8,9 (± 3,0) | 50,0% |
Таблица 1. Оптимизация состава раствора ПДВ. 0,5 мкл липидного раствора суспендировали на в PDMS тонкопленочной апертурой (диаметром 500 мкм). Здесь мы варьировали концентрацию липидов, состав растворителя, и пре-картину. 17. Адаптировано с разрешения Рю H. и др. 7
Рисунок 1. Принципиальная схема системы формирования мембрана. Наружный размер каждой половинки камеры составляла 4 см х 1,5 см х 1 см, а размер внутренней скважины составляла 1,5 см х 1,3 см х 0,8 см. Внутренний колодец был достаточно большим, чтобы вместить 2 мл буферного раствора. На каждом блоке PTFE были отверстия для имеют тонкий PDMS контакт пленки с буферным раствором. Другая сторона была запечатана с защитным стеклом для оптического наблюдения BLM. Наконец, камерные блоки были усилены с помощью болтов и гаек, чтобы избежать утечки жидкости.4258 / 54258fig1large.jpg "целевых =" _blank "> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 2. Принципиальная схема Frozen Мембранная Предтечи с Ускорянный самосборки (MPES) образование. Липидного раствора на PDMS диафрагмы тонкой пленки могут быть заморожены на неопределенный срок. Когда предшественник замороженное мембрана была введена в комнатной температуре оттаивать, формирование липидный бислой облегчается за счет извлечения гидрофобного растворителя в PDMS тонкую пленку. Как gå мономеры добавляют непосредственно в растворе липида, ионные каналы , образованные gå сразу после формирования мембраны. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
= "/ Файлы / ftp_upload / 54258 / 54258fig3.jpg" />
Рисунок 3. Микроскопическое диаграмма процесса утонения-аут. При оттаивании МПЭ и последующего поглощения гидрофобных растворителей, процесс прореживания выход облегчалось на апертуру PDMS тонкопленочных, а мембрана была образована в течение двух минут после оттаивания. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 4. Электрические измерения После включения грамицидина А. Ток прыгает на включение и димеризации гА в мембрану показано. Амплитуда ~ 28 пс наблюдается при димеризации gå мономеров (100 мВ держит потенциал; 100 Гц Бессель фильтр низких частот).rget = "_blank"> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Potassium Chloride | Sigma-Aldrich | P9333 | For buffer solution |
| Tris-hydrochloride | Sigma-Aldrich | 1185-53-1 | For buffer solution |
| Ethylenediaminetetraacetic acid | Sigma-Aldrich | 60-00-4 | For buffer solution |
| n-decane | Sigma-Aldrich | 44074-U | For lipid solution |
| Hexadecane | Sigma-Aldrich | 544-76-3 | For lipid solution |
| Squalene | Sigma-Aldrich | S3626 | For lipid solution |
| Gramicidin A | Sigma-Aldrich | 11029-61-1 | Membrane protein |
| 1,2-diphytanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine | Avanti Polar Lipids, Inc. | 850356 | For membrae formation |
| Sylgard 184a and 184b elastromer kit | Dow Corning Asia | To produce PDMS thin film | |
| 0.2 μm filter | Satorius stedim | 16534----------K | To filter buffer solution |
| Rotator | FinePCR | AG | To dissolve lipid homogeneously |
| Autoclave | Biofree | BF-60AC | To sterilize buffer solution |
| Spin coater | Shinu Mst | SP-60P | To spread PDMS prepolymer |
| Vaccum dessiccator | Welch | 2042-22 | To remove air bubble in PDMS prepolymer |
| 500 μm punch | Harris Uni-Core | 0.5 | To create an aperture on the PDMS thin film |
| CNC machine | SME trading | SME 2518 | To fabricate membrane formation chamber |
| Halogen fiber optic illuminator | Motic | MLC-150C | To illuminate the aperture of PDMS thin film for optical observation |
| Digital microscope | Digital blue | QX-5 | To optically observe lipid bilayer membrane formation |
| Electrode | A-M Systems | To electrically observe membrane formation | |
| Microelectrode amplifier (Axopatch amplifier) | Axon Instruments | Axopatch 200B Amplifier | To measure capacitance of the membrane (described as microelectrode amplifier in the manuscript) |
References
- Hanke, W., Schulue, W. Planar lipid bilayers: methods and applications. , Academic Press. (2012).
- Mirzabekov, T. A., Silberstein, A. Y., Kagan, B. L. Use of planar lipid bilayer membranes for rapid screening of membrane active compounds. Methods Enzymol. 294, 661-674 (1999).
- Bayley, H., Cremer, P. S. Stochastic sensors inspired by biology. Nature. 413 (6852), 226-230 (2001).
- Fang, Y., Lahiri, J., Picard, L. G protein-coupled receptor microarrays for drug discovery. Drug. Discov. Today. 8 (16), 755-761 (2003).
- Majd, S., et al. Applications of biological pores in nanomedicine, sensing, and nanoelectronics. Curr. Opin. Biotechnol. 21 (4), 439-476 (2010).
- Kim, Y. R., et al. Synthetic Biomimetic Membranes and Their Sensor Applications. Sensors (Basel). 12 (7), 9530-9550 (2012).
- Ryu, H., et al. Investigation of Ion Channel Activities of Gramicidin A in the Presence of Ionic Liquids Using Model Cell Membranes. Sci Rep. 5, (2015).
- Wood, C., Williams, C., Waldron, G. J.
- Mueller, P., Rudin, D. O., Tien, H. T., Wescott, W. C. Reconstitution of cell membrane structure in vitro and its transformation into an excitable system. Nature. 194, 979-980 (1962).
- Montal, M., Mueller, P. Formation of bimolecular membranes from lipid monolayers and a study of their electrical properties. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 69, 3561-3566 (1972).
- Baaken, G., Sondermann, M., Schlemmer, C., Ruhe, J., Behrends, J. C. Planar microelectrode-cavity array for high-resolution and parallel electrical recording of membrane ionic currents. Lab Chip. 8 (6), 938-944 (2008).
- Costello, R., Peterson, I., Heptinstall, J., Byrne, N., Miller, L. A robust gel-bilayer channel biosensor. Adv. Mater. Opt. Electron. 8 (2), 47-52 (1998).
- Ide, T., Yanagida, T. An artificial lipid bilayer formed on an agarose-coated glass for simultaneous electrical and optical measurement of single ion channels. Biochem. Biophys. Res. Commun. 265 (2), 595-599 (1999).
- Jeon, T. J., Malmstadt, N., Schmidt, J. J.
- Malmstadt, N., Jeon, T. J., Schmidt, J. J. Long-Lived Planar Lipid Bilayer Membranes Anchored to an In Situ Polymerized Hydrogel. Adv. Mater. 20 (1), 84-89 (2008).
- Jeon, T. J., Poulos, J. L., Schmidt, J. J. Long-term storable and shippable lipid bilayer membrane platform. Lab. Chip. 8 (10), 1742-1744 (2008).
- Ryu, H., et al. Automated Lipid Membrane Formation Using a Polydimethylsiloxane Film for Ion Channel Measurements. Anal. Chem. 86 (18), 8910-8915 (2014).
- Yaws, C. Chemical Properties Handbooks: Physical, Thermodynamic, Environmental, Transport, Safety, and Health Related Properties for Organic and Inorganic Chemicals. , MC GRAW HILL HANDBOOKS. (1999).
- Windholz, M., Budavari, S., Stroumtsos, L. Y., Fertig, M. N. The Merck index. An encyclopedia of chemicals and drugs. , Merck & Co. (1976).
- Miller, C. Ion Channel Reconstitution. , Springer Science & Business Media. (1986).
- Miller, C. Open-state substructure of single chloride channels from Torpedo electroplax. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 299 (1097), 401-411 (1982).
- Benz, R., Frohlich, O., Lauger, P., Montal, M. Electrical capacity of black lipid films and of lipid bilayers made from monolayers. Biochim. Biophys. Acta. 394 (3), 323-334 (1975).
- Priel, A., Gil, Z., Moy, V. T., Magleby, K. L., Silberberg, S. D. Ionic requirements for membrane-glass adhesion and giga seal formation in patch-clamp recording. Biophys. J. 92 (11), 3893-3900 (2007).
