Introduction
Fagocytose er en viktig cellefunksjon som starter med erkjennelsen og binding av materialet til overflaten reseptorer, noe som deretter fører til internalisering og nedbryting av inntatt materiale. Mens encellede eukaryoter som formen Dictyostelium discoideum og amøber bruke fagocytose for fôring på bakterier, har høyere organismer utviklet seg med profesjonelle celler. Makrofager eller dendrittiske celler er den første linjen i forsvaret mot patogener i ulike vev og organer, og er avgjørende for å aktivere det adaptive immunsystemet gjennom antigen presentasjon og cytokin produksjon 1-4. Under visse omstendigheter fagocytose kan utføres av ikke-profesjonelle fagocyttceller, f.eks, endotelceller og epitelceller. Denne prosessen er viktig for å opprettholde homeostase under utvikling og i voksen alder for normalt vev omsetning og ombygging. Til slutt, spesialiserte fagocytter som Sertoli celler i testikkel eller retinalpigment epitelceller er ekstremt potent fagocytter 5.
Dannelsen av en phagosome hvor degradering av mikroorganismer eller cellulært avfall oppstår starter med den gruppering av fagocyterende-reseptorer på overflaten av den fagocytisk cellen. Nedstrøms signale hendelser følgende gruppering av opsoniske reseptorer som Fc reseptorer (FcR) eller utfyller reseptorer (CRS) har blitt godt karakterisert. Men det er også mange ikke-opsoniske reseptorer inkludert Toll-lignende reseptorer (TLR), lektiner, mannosereseptorer og åtseldyr reseptorer. Disse reseptorene gjenkjenne determinanter på partikkeloverflaten som mannose eller fucose rester, fosfatidylserin og lipopolysakkarider 1,6-9.
Patogen eller cellerester erkjennelse innebærer å binde seg til og gruppering av flere typer fagocytisk-reseptoren, noe som deretter fører til intense og forbigående aktin ombygging. Parallelt samlings eksocytose av intracellulær compartments bidrar til frigjøring av membranen spenning og er viktig for effektiv fagocytose av store partikler. Signalerings hendelser som førte til aktin polymerisasjon og membran deformasjon ble dissekert i eksperimentelle modeller som utløste en enkelt phagocytic reseptor. Under FcR-mediert fagocytose, det er intens aktin polymerisasjon som reguleres av små GTPases (Rac, Cdc42). Blant deres nedstrøms effektorer, den Wiskott-Aldrich syndrom protein (WASP) fører til aktivering av Actin-Related Protein 2/3 kompleks (Arp2 / 3) som nucleates actin filamenter 1,2,4,10. Lokal produksjon av phosphatidylinositol-4, 5-bisfosfat (PI (4,5) P 2) er avgjørende for første aktin polymerisasjon som driver pseudopod formasjon. Konvertering til PI (3,4,5) P 3 kreves for pseudopod forlengelse og phagosome nedleggelse 11. Flere veier bidra til forsvinningen av PI (4,5) P-2. Først avløsning av phosphatidylinositol fosfat kinaSES (PIPKIs) fra phagosome arrestasjoner PI (4,5) P 2 syntese. For det andre kan det være fosforylert og forbrukes av klasse I PI3K kinaser (PI3K) og konverteres i PI (3,4,5) P 3 12. En rolle for fosfataser og fosfolipaser har også blitt antydet i PI (4,5) P to hydrolyse og F-aktin fjerning under fagocytose i pattedyrceller og i Dictyostelium 13,14. Fosfolipase C (PLC) δ hydrolyserer PI (4,5) P-2 til diacylglycerol og inositol-1,4,5- tris-fosfat. PI (4,5) P 2 og PI (3,4,5) P 3 fosfatase OCRL (oculo-cerebro-renalt syndrom av Lowe) har også vært innblandet i phagosome formasjon. Presis lokal dannelse av F-aktin, og dens depolymerisering er strengt regulert i rom og tid, og vi har vist at rekruttering av intracellulære kamre er viktig for å levere den lokalt OCRL fosfatase, og dermed bidra til lokal aktin depolymerisering ved bunnen av fagocytisk koppen Spillerne mekanisme og molekylære som kreves for phagosome lukkemembran og spalting forblir dårlig definert på grunn av vanskelighetene med å visualisere og overvåke stedet for phagosome lukking. Inntil nylig var fagocytose observert på faste eller levende celler som internal partikler på sin rygg ansikt eller på sine sider, noe som gjør det betimelig visualisering av området av phagosome nedleggelse vanskelig. I tillegg kan festemetoder bevirke tilbaketrekking av membraner og vekte resultatene på pseudopodia forlengelse og lukking. I motsetning til analysen at vi har satt opp, og beskriver her tillater oss å visualisere pseudopod utvidelse og nedleggelse trinnet av fagocytose i levende celler 13, basert på total intern refleksjon mikroskopi (TIRFM) 16. Denne optiske teknikken bruker en flyktig bølge til å eksitere fluoroforer i et tynt område ved grenseflaten mellom et transparent sålokk (dekkglass) og en væske (cellekulturmedium). Tykkelsen av eksitasjon dybde er omkring 100 nm fra den faste overflate, slik at visualisering av molekylære hendelser nær plasmamembranen. TIRFM tillater et høyt signal-til-bakgrunnsforhold, og begrenser den ut-av-fokus fluorescens oppsamlet og den cytotoksisitet som følge av belysning av cellene. Benytte seg av TIRFM, vi utviklet "phagosome nedleggelse analyse" der Dekk aktiveres med poly-lysin og deretter belagt med IgG-opsoniserte røde blodceller (IgG-SRBCs). Makrofager uttrykker transient fluorescens-merket proteiner av interesse er da lov til å sluke de IgG-SRBCs. Mens cellene løsner målt partikler som er ikke-kovalent bundet til glassoverflaten, kan tuppen av pseudopods observeres og registreres i TIRF modus. TIRF oppkjøp er kombinert med oppkjøp i epifluorescence modus etter skiftende scenen tre mikrometer ovenfor, som lar visualization av bunnen av fagocytisk koppen. Tilsetning av farmakologiske medikamenter slik som de som inhiberer aktin eller dynamin i løpet av prosessen er det også mulig ytterligere å dissekere prosessen på molekylært nivå. Protokollen er beskrevet i detalj her er for en RAW264.7 muse-makrofag-cellelinjen og opsonisert partikler, men praktisk talt, kan det tilpasses en hvilken som helst annen celle fagocytisk og med andre mål som perler. Denne metoden vil gi bedre karakterisering av reguleringen i tid og rom av de molekylære aktørene som er involvert i pseudopod forlengelse og phagosome nedleggelse under ulike fagocyterende prosesser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Merk: plasmid brukt Lifeact-mCherry er en slags gave av Dr. Guillaume Montagnac, Institut Curie, Paris, generert etter 17.
1. Celler og Transfeksjon
Merk: RAW264.7 makrofager blir dyrket til side konfluens i komplett medium (RPMI (Roswell Park Memorial Institute) 1640 medium, 10 mM HEPES, 1 mM natriumpyruvat, 50 mM β-merkaptoetanol, 2 mM L-glutamin og 10% FCS ( føtalt kalveserum)) i en 100 mm plate. De er transfektert med plasmider som koder fluorescens-merket proteiner ved elektroporering. Rutinemessig ca. 5-6 x 10 6 celler blir transfektert med 20 ug eller 10 ug av plasmid for hver transfeksjon eller ko-transfeksjon respektivt. Legg merke til at andre former for transfeksjon basert på elektroporering eller lipofeksjon kan brukes som alternative tilnærminger.
- Skrap celler med en celle løfter og resuspender dem i 10 ml kulturmedium ved å pipettere opp og ned flere ganger.
- sentrifugerCellesuspensjonen 300 x g, 5 min ved RT i svingende vinkelrotor.
- Forvarming 10 ml komplett medium supplert med 10 ug / ml gentamycin ved 37 ° C.
- Etter sentrifugering, kast supernatanten og resuspender pelleten i 3 ml "vaskebuffer A" fra elektroporering kit.
- Sentrifuger cellesuspensjonen 300 x g, 5 min ved romtemperatur i svingende vinkelrotor.
- I mellomtiden fremstille DNA-blandingen ved værelsestemperatur: 120 ul 2x Buffer B, 20 ug av plasmid-DNA som koder for proteinet av interesse, qsp 240 pl H2O
- Etter sentrifugering forkaste hele supernatanten.
- Resuspender cellepelleten i DNA-blandingen og overfør til 4 mm electroporation kyvetter.
- Inkuber ved RT i 3 min.
- Electroporate 250 V, 900 uF.
- Umiddelbart resuspender cellene i den forvarmede (37 ° C) i komplett medium supplert med gentamicin og porsjonm på en 100 mm skål.
- Inkuber de transfekterte celler over natten ved 37 ° C, 5% CO2.
- Den neste morgen, erstatte fullstendig medium med 10 ml serumfritt medium mikroskopi (RPMI 1640 uten fenolrødt, 10 mM HEPES, 1 mM natriumpyruvat, 50 mM β-merkaptoetanol, 2 mM L-Glutamin).
2. opsonization av røde blodceller
Merk: Som en modell av partikkel mål for makrofager, er sau røde blodceller (SRBCs) brukes. Vanligvis er rundt 7 x 10 6 SRBCs per 35 mm glassbunn fatet brukt.
- Vask SRBCs med 100 ul av 1 x PBS (fosfatbufret saltvann) /0.1% BSA (bovint serumalbumin) og sentrifuge (600 xg, 4 min).
- Etter sentrifugering, kast supernatanten og resuspender SRBCs i 100 ul av 1 x PBS / 0,1% BSA og sentrifugeres (600 xg, 4 min).
- Etter sentrifugering, kast supernatanten og resuspender SRBCs i 1x PBS / 0,1% BSA med kanin IgG anti-SRBCsved sub-agglutinerende konsentrasjon. Bruk 500 ul løsning som inneholdt antistoff / 5 ul av SRBCs.
Merk: sub-agglutinerende konsentrasjon av antistoffer tilsvarer den laveste konsentrasjonen som induserte ikke agglutinering påvises som dannelsen av et nettverk. Generelt er den sub-agglutinerende konsentrasjon 8,2 pg / ml.- Bestemme konsentrasjonen av IgG anti-SRBCs som kreves for å opsonisere de SRBCs ved en hemagglutineringsprøve. Serielt fortynnet IgG anti-SRBCs (lager ved 13,1 mg / ml) mellom 1/50 - 1/25 600 i en mikroplate. Tilsett 2 x 10 6 SRBCs i hver brønn. Platen inkuberes i mørke ved romtemperatur i flere timer.
- Inkuber ved RT i 30 minutter med langsom rotasjon.
- Etter to vaskinger i 1 x PBS / 0,1% BSA, som beskrevet ovenfor, resuspender IgG-opsoniserte SRBCs (IgG-SRBCs) i forvarmet serumfritt medium mikroskopi (2 ml / skål).
3. Poly-lysin Coating av Dekk
- I mellomtiden, Behandle 35 mm glassbunn retter med 2 ml av 0.01% poly-L-lysin i 30 minutter ved romtemperatur.
- Oppvasken to ganger med 2 ml 1x PBS.
4. Ikke-kovalente Fiksering av SRBCs på Glass Bottom Retter
- Hell 2 ml SRBCs suspensjon per 35 mm glassbunn fatet.
- Sentrifuger med en svingende rotor på 500 xg i 2 min på 35 mm glassbunn retter.
- Fjern supernatanten og vask en gang med 2 ml av 1 x PBS / 10% BSA.
- Inkuber partiklene i 30 minutter med 2 ml av 1 x PBS / 10% BSA per matrett.
- Oppvasken tre ganger med 2 ml 1x PBS.
- Erstatte 1 x PBS med 2 ml forvarmet (37 ° C) serumfritt medium mikroskopi.
5. Fagocytose visualisert ved TIRFM
- Mikroskop
Merk: TIRFM ble utført ved hjelp av et mikroskop utstyrt med en olje-nedsenking objektiv (N 100X, NA1.49), et varmekammer med CO 2, og to single foton deteksjon kameraer EMCCD (Electron Multiplisere Charge Coupled Device) kombinert med en 1,5 X linse.- Dagen før TIRF mikroskop økten, slå på varmekammeret ved 37 ºC for å tillate en homogen oppvarming av mikroskop scenen.
- Kritisk Angle Fastsettelse
Merk: ImageJ Color Profiler programvare brukes til å behandle TIRF bildestrømmer.- Plasser en 35 mm glassbunn fatet inneholder opsonisert SRBC med serumfritt mikros medium under mikroskopet.
- Skrap cellene og resuspender dem i mediet før du legger dem (100-500 mL) i fatet.
- Bruk «Live Acquisition" programvare for å styre mikroskopet og utføre eksitasjon med en 491 nm og / eller en 561 nm laser for å identifisere celler som uttrykker fluorescerende merket proteiner.
- Identifisere en celle som uttrykker fluorescerende merket proteiner.
- Plasser den i midten av feltet og få 500 imaldre på en eksitasjon bølgelengde, med forskjellige vinkler fra 0º til 5º, med en økning på 0.01º (figur 2A). Vinklene blir automatisk endret av mikroskop-systemet.
- Bestemme den kritiske vinkel slik at det innfallende lys for å bli fullstendig reflektert ved det glass / medium-grensesnitt og generere den transiente bølger. Bruke ImageJ Color Profiler programvare, åpne bildesekvens ved å klikke på "File", "Open" og velg filen.
- Velge et område av interesse (ROI), med det rektangulære verktøyet, i cellen med en ensartet fluorescens (figur 2B gul 1).
- Plott "Z-aksen profil" mener fluorescens intensitet målt i avkastning med funksjon av vinklene på x-aksen ved å klikke på kategorien "Bilde", "Stacks" i rullegardinmenyen og «Plot Z-aksen profil" (figur 2B rød 2).
Merk: Den kritiske vinkelen er vinkelen som fører til maximum fluorescens før en kraftig nedgang i fluorescens. - Bruke en hvilken som helst verdi av vinkel til x-aksen overlegen i forhold til den kritiske vinkel under mikroskopi økt for å oppnå en TIRF signal som eksempel 2,00 (figur 2C).
- oppkjøp
- Med Live Acquisition programvare, sette opp parametrene av oppkjøpet med modulen "Protokoll Editor" (figur 3A).
- Lag en protokoll med en "loop" bestående av "Multi Channels" erverv til å erverve fluorescerende signal fra proteiner av interesse i TIRF regionen. Angi TIRF vinkel (for eksempel 2,00), eksponeringstiden (for eksempel 50 millisekunder) og laserintensiteten (for eksempel 50%) (figur 3B 1).
- Innføre en "Z flytte" på objektivet tre mikrometer over TIRF regionen for å få signal oppkjøp i epifluorescence med "Multi Channels" -verktøyet. Skriv en vinkel under than kritisk vinkel (som eksempel 1.00), tidspunktet for utstilling (50 millisekunder) og laserintensitet (50%) (figur 3B, 2 og 3).
- Neste legge til en "z flytte" på objektivet tre mikrometer nedenfor, for å gå tilbake i TIRF regionen (figur 3B 4). Legg et "øyeblikksbilde" av cellen i sterkt lys LED (Light-Emitting Diode) (figur 3B 5).
- Finn en celle av interesse med et moderat nivå av fluorescens-merket protein uttrykk som initierer fagocytose av SRBC ved å utvide plasma membran rundt partikkelen.
- Plasser den i midten av feltet.
- Begynn streaming kjøp av 500 - 1000 rammer. I "loop teller" -kategorien, skriv "750 frames" (figur 3B 1).
Merk: ImageJ Color Profiler programvare brukes til å behandle TIRF bildestrømmer. - Åpne sekvens bildene i bilde J programvare ved å klikke"File", "Open" og velge filen.
- Separer kanaler ved å klikke på fanen "Image", "Hyperstacks" drop down menyen og på "Stack til hyperstack" -funksjon. Fullfør dukket vinduet: Order: xyctz; Channel (c): antall kanaler (ex: "2" hvis du har to fluorokromer); Skiver (z): antall snitt i z-aksen (ex: "1" hvis det ikke er noen bevegelse i z-aksen); Rammer (t): antall bilder delt per antall kanaler; Visningsmodus: Gråtoner.
Merk: To separate bildesekvenser er generert, svarende til de to forskjellige kanaler.
- Med Live Acquisition programvare, sette opp parametrene av oppkjøpet med modulen "Protokoll Editor" (figur 3A).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den eksperimentelle system som er beskrevet i dette manuskriptet er skjematisk vist i figur 1. Transfekterte RAW264.7 makrofager som uttrykker proteiner av interesse fusjonert til en fluoriserende kode blir plassert i kontakt med IgG-opsonisert sau røde blodceller (SRBCs) som var ikke-kovalent fast på dekkglass. Makrofagene kan løsne SRBC fra dekkglass å sluke den. TIRF mikroskop tillater samtidig kjøp av signaler fra TIRF område tilsvarende tips av pseudopods og signaler i epifluorescence modus etter en Z skift tre mikrometer ovenfor.
Det er viktig for å bestemme den kritiske vinkel for total indre refleksjon fluorescens som beskrevet i figur 2. Dette sikrer en ren TIRF signal fra en 100 nm området under plasmamembranen. Figur 3 viser utviklingen av acquisitipå parametere gjennom en modul kalt "Protokoll Editor" inkludert i Live Acquisition programvaren. Denne modulen gjør det mulig for brukere å opprette og administrere arbeidsflyten før de sendes til mikroskopet, som vil utføre prosessen. På slutten av oppkjøpet, samler brukeren en TIFF strøm.
Figur 4 viser, en representant levende celle TIRFM film av en "phagosome nedleggelse assay" i RAW264.7 makrofager transfektert med plasmid (f.eks Lifeact-mCherry, en slags gave av Dr. Guillaume Montagnac, Institut Curie, Paris, generert etter 17) for å følge aktin polymerisasjon. Makrofager forbigående uttrykker plasmid fikk lov til å sluke IgG-SRBCs bundet til dekkglass. Når tuppen av pseudopods ble stilt opp imot det glass dekkglass rundt en SRBC, ble en F-aktin ring detekteres i TIRF området (toppfeltet) som gradvis redusert inntil den lukkes. Parallelt uskarpt F-aktinsignal som detekteres av epifluorescens etter å forskyve fasen 3 um ovenfor (nedre panel) tilsvarte depolymerisering ved bunnen av fagocytisk koppen. Etter 3 min av oppkjøpet ble SRBC helt internalisert, som bekreftet med overført lys (panel til høyre).
Derfor kan denne metoden anvendes for å riktig måte å skille de molekylære hendelser som finner sted ved å få endene av pseudopods og de molekylære hendelser som oppstår på undersiden av den fagocytisk koppen.
Figur 1. Skjematisk fremstilling av "Phagosome Closure analysen" Analysert av TIRFM. Den phagosome lukke Analysen utføres ved hjelp av makrofager som uttrykker transient en eller to fluorescensmerket-protein. Makrofager er avsatt på IgG-opsoniserte SRBCs ikke-kovalent festet på poly-lysin coated Dekk. Bildene tas opp i TIRF modus for å oppdage stedet for phagosome nedleggelse og i epifluorescence modus for å oppdage bunnen av fagocytisk cup. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: Bestemmelse av kritisk vinkel for TIRFM. (A) Ved hjelp av "live anskaffelse" er en celle som uttrykker fluorescent merkede proteiner plassert i midten av feltet (region i en rød). Med mulighet TIRF Stack, ble bildene kjøpt til en eksitasjon bølgelengde, med forskjellige vinkler fra 0 ° til 5 °, med en økning på 0,01 ° (region 2 i rødt). (B) Sekvensen av bilder åpnes ved hjelp ImageJ Color Profiler programvare og gjennomsnittlig fluorescens intensitet aregion av interesse (ROI) er plottet med funksjon av vinklene på x-aksen ved hjelp av "stabler" og "Plotz akse profil" (område 1 i rødt). (C) x-posisjonen av toppen av fluorescens på tomten tilsvarer kritisk vinkel: 1.98 ° (svart stiplet linje). En hvilken som helst verdi etter at denne vinkelen kan anvendes. Som et eksempel, kan 2,00 ° velges (rød linje). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3. Arbeidsflyt Process bruker Live Acquisition Modul: "Protokoll Editor". (A) I "Protocol Editor" -vinduet, er en arbeidsflyt lerret skapt. (B) Denne protokollen består av en "Loop" av handlinger som mikroskop vil gjenta mange ganger besluttetav brukeren. Som et eksempel: 750 (1). En sløyfe følger: "Multi Channels" oppkjøpet med laser eksitasjon av fluorescerende proteiner av interesse i TIRF modus. Som eksempel: Laser 491 nm intensitet 50% -TIRF vinkel 2,00 (2); "Z flytte" av målet tre mikrometer (3); "Multi Channels" oppkjøp i epifluorescence modus (4); "Z flytte" på objektivet tilbake til TIRF region (5) og en "Snapshot" i overført lys (6). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4. F-aktin er fremkommet som et punkt på stedet av Phagosome Closure. Phagosome lukking analysen ble utført ved hjelp RAW264.7 makrofager forbigående uttrykker plasmid Lifeact-mCherry (en slags gave av Dr. Guillaume Montagnac, Institut Curie, Paris, generert etter 17). Plasmidet signal ble kjøpt i TIRF området (øverst) og i epifluorescence modus (nederst). Den røde pilspiss indikerer aktin opphopning i TIRF regionen. Overført lys bilde på 3 min er presentert, noe som indikerer en internalisert SRBC. Scale bar, 10 mikrometer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Film 1: F-aktin akkumuleres i tips av pseudopods og på stedet av Phagosome Closure, mens den er fjernet fra Base av fagocyterende Cup Phagosome nedleggelse analysen ble utført ved hjelp RAW264.7 makrofager forbigående uttrykker plasmidet.. Plasmid avbildning i TIRF område (øverst) og i epifluorescens-modus (bunnen) ved hjelp av TIRFM ble utført alternativly hver 50 ms under tre minutter ved 37 ° C. Klikk her for å se denne videoen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anti-sheep red blood cells IgG | MP Biomedicals | 55806 | |
| Bovine Serum Albumin heat shock fraction, pH 7, ≥98% | Sigma | A7906 | |
| Cell lifter | Corning | 3008 | |
| Cuvettes 4 mm | Cell project | EP104 | |
| DPBS, no calcium, no magnesium | Thermo Fischer Scientific | 14190-094 | Room temperature |
| Electrobuffer kit | Cell project | EB110 | |
| 100 mm TC-Treated Cell Culture Dish | Corning | 353003 | |
| Gene X-cell pulser | Biorad | 165-2661 | |
| Gentamicin solution | Sigma | G1397 | |
| Glass Bottom Dishes 35 mm uncoated 1.5 | MatTek corporation | P35G-1.5-14-C Case | |
| iMIC | TILL Photonics | Oil-immersion objective (N 100X, NA1.49), heating chamber with CO2, a camera single photon detection EMCCD (Electron Multiplying Charge Coupled Device) and a 1.5X lens | |
| Poly-L-Lysine Solution 0.1% | Sigma | P8920-100ml | Dilution at 0.01% in water |
| RPMI 1640 medium GLUTAMAX Supplement | Life technologies | 61870-010 | |
| RPMI 1640 medium, no phenol red (10 x 500 ml) | Life technologies | 11835-105 | Warm in 37 °C water bath before use |
| Sheep red blood cells (SRBCs) | Eurobio | DSGMTN00-0Q | Conserved in Alsever buffer at 4 °C before use |
References
- Flannagan, R. S., Jaumouille, V., Grinstein, S.
- Swanson, J. A. Shaping cups into phagosomes and macropinosomes. Nat Rev Mol Cell Biol. 9, 639-649 (2008).
- Stuart, L. M., Ezekowitz, R. A. Phagocytosis and comparative innate immunity: learning on the fly. Nat Rev Immunol. 8, 131-141 (2008).
- Niedergang, F. Encyclopedia of Cell Biology. Bradshaw, R. A., Stahl, P. D. 2, Academic Press. Waltham, MA. 751-757 (2016).
- Poon, I. K., Lucas, C. D., Rossi, A. G., Ravichandran, K. S. Apoptotic cell clearance: basic biology and therapeutic potential. Nat Rev Immunol. 14, 166-180 (2014).
- Aderem, A., Underhill, D. M.
- Underhill, D. M., Goodridge, H. S.
- Underhill, D. M., Ozinsky, A.
- Canton, J., Neculai, D., Grinstein, S. Scavenger receptors in homeostasis and immunity. Nat Rev Immunol. 13, 621-634 (2013).
- Freeman, S. A., Grinstein, S. Phagocytosis: receptors, signal integration, and the cytoskeleton. Immunol Rev. 262, 193-215 (2014).
- Scott, C. C., et al. Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate hydrolysis directs actin remodeling during phagocytosis. J Cell Biol. 169, 139-149 (2005).
- Schlam, D., et al. Phosphoinositide 3-kinase enables phagocytosis of large particles by terminating actin assembly through Rac/Cdc42 GTPase-activating proteins. Nat Commun. 6, 8623 (2015).
- Marion, S., et al. The NF-kappaB Signaling Protein Bcl10 Regulates Actin Dynamics by Controlling AP1 and OCRL-Bearing Vesicles. Dev Cell. 23, 954-967 (2012).
- Loovers, H. M., et al. Regulation of phagocytosis in Dictyostelium by the inositol 5-phosphatase OCRL homolog Dd5P4. Traffic. 8, 618-628 (2007).
- Deschamps, C., Echard, A., Niedergang, F. Phagocytosis and cytokinesis: do cells use common tools to cut and to eat? Highlights on common themes and differences. Traffic. 14, 355-364 (2013).
- Johnson, D. S., Jaiswal, J. K., Simon, S. Chapter 12, Unit 12.29: Total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy illuminator for improved imaging of cell surface events. Curr Protoc Cytom. , (2012).
- Riedl, J., et al. Lifeact: a versatile marker to visualize F-actin. Nat Methods. 5, 605-607 (2008).
- Marie-Anais, F., Mazzolini, J., Herit, F., Niedergang, F. Dynamin-actin cross-talk contributes to phagosome formation and closure. Traffic. 17 (5), 487-499 (2016).
