Summary
Hier presenteren we een protocol voor de beoordeling van het zaad overleving, kieming en kiemrust onder veldomstandigheden gebruik begraven, geëtiketteerd zaad strips en tetrazolium chloride (TZ) levensvatbaarheid testen.
Introduction
Het algemene doel van deze methode is om op betrouwbare wijze te beoordelen zaad overlevingskans na verloop van tijd onder veldomstandigheden.
Bodem zaadbanken zijn een reserve van verspreid, levensvatbare nog ongekiemde zaden verspreid, hetzij op het bodemoppervlak, in oppervlakte zwerfvuil, of binnen het bodemprofiel, die tijdelijk of voor vele jaren 1,2 kan aanhouden. Wanneer zaad begrafenis werkwijzen vergelijkbaar met die die hier werden aangebracht op een 17 jaar durende studie gebruikt tientallen soorten, werden levensvatbare zaden in veel van de geteste species 3. Kiemrust is een blok aan het ontkiemen zaad tot de juiste combinatie van de voorwaarden voor zaailingen overleven ontstaan 4. Resterende slapende kan toestaan zaden zware omstandigheden, zoals lage temperaturen in de winter, beperking van voedingsstoffen, of seizoensgebonden droogte te overleven, totdat een externe trigger voor kiemrust afgifte zorgt voor kieming. Maakt naar kiemrust afgifte kan variëren van uitgebreide blootstelling aan koude, verbindingen achtergelaten door fire, of fysieke aanval op de zaadhuid door middel van schuren of contact met de maag dier zuren 5. Zoals ontkieming signalen geslachten of species specifiek kunnen zijn en vaak resulteren uit vroegere natuurlijke selectie, onaangepaste zaadkieming wat plaatsvindt op een ongeschikt moment, en kan leiden tot sterfte of zaailingen of slechte groei van zaailingen. Hoewel slaaptoestand is ingedeeld in een aantal typen gebaseerd op de mechanismen slaaptoestand afgifte (bijvoorbeeld fysieke slaaptoestand, fysiologische rusttoestand), 6 kiemrust blijft een van de minst begrepen onderwerpen plantenbiologie. Zo veldstudies die het mogelijk maken voor de beoordeling van de status van individuele zaden of groepen zaden onder relevante ecologische omstandigheden hebben een hogere verklarende kracht dan die gewoon vertrouwen op standaard kiemproeven in het laboratorium.
Exploitatie van de bekende zaad kenmerken kan inzicht geven in de mechanismen van kiemrust. Controle van de kiemrust is complex, met inbegrip van genetische controle van de fysiologische en morfologische factoren. Terwijl een volledig begrip van de breedte slaaptoestand mechanismen is nog niet opgehelderd, is een algemeen model ontstaan, waarbij een terugkoppeling tussen de twee planthormonen Gibberellinezuur (GA) en abscisinezuur (ABA) 7. In deze algemene model voor zaden met een fysiologische component om hun slaaptoestand, Georgië dient als signaal voor de slaaptoestand release, terwijl ABA dient om de slapende toestand te houden. Maternale genetische effecten, evenals de moederlijke groei milieu kunnen beïnvloeden latentie en andere zaad kenmerken, zoals grootte, door middel van de moeder gegenereerd weefsels en ontwikkelingsstoornissen signalen 8. Moederdier gegenereerde externe structuren (of zaad afdekkingen) kunnen slaaptoestand handhaven, soms in combinatie met een fysiologische cues. Omdat maternale zaad bekledingen worden gecontroleerd door de genen van de moeder plant, kunnen zij niet overeen met het zaad van de werkelijke nucleaire genetische make-up. We hebben onsed de Helianthus annuus achenes uit een scala aan gewas-wild hybride kruisen om plagen uit deze moeders vs. embryo genetische effecten op het zaad kenmerken 9,10. Dus studie ontwerpen die diverse soorten, kruis types, of genotypes bevatten u informatie over het verzamelen ecologie en genetica van kiemrust, kieming en overleving.
Een belangrijk voorbeeld van hoe zaadkieming en overleving fenotypes kan invloed hebben op de populatiedynamiek kan worden gezien in gewas-wild hybride zones. Selectie tijdens acclimatisering van cultuurgewassen elimineert de meeste latentie en vermindert het vermogen van een zaad overleven buiten het groeiseizoen. Maar gene flow, of hybridisatie, tussen de gecultiveerde en wilde soorten in gewasspecifieke wild hybride zones kan gewas allelen (of genetische varianten) opnieuw in een wilde populatie, met mogelijke effecten op de zaadbank dynamiek. Hybriden tussen gecultiveerde en wilde verwanten potentieel gevonden in gewas-wild hybride zones kunnen bezittendiverse tussenproduct slaaptoestand fenotypes, met slechts enkele fenotypen wordt naar omstandigheden te overleven buiten kweken (bijv wintermaanden) 11.
Het doel van dit manuscript is om de werking te tonen, met de zaad begraven strookmethode, kunnen we kiemkracht, latentie en overleving van diverse zaadsoorten op verschillende tijdsperioden evalueren hun natuurlijke variatie onder veldomstandigheden onderzocht. In ons voorbeeld hebben we gebruik gemaakt zonnebloempitten van 15 gewasspecifieke wild hybride kruis types omdat we geïnteresseerd zijn in de moeder en embryo genetische effecten op zaad kenmerken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Verzamel Zaad uit Multiple Species of Controlled Kruisen van een Single Species
Opmerking: Dit voorbeeld gebruikt zaad uit 15 kruis types binnen de soort Helianthus annuus (zonnebloem) met behulp van wild, hybride, en de soorten gewassen als de moeder (zaad produceren) ouder.
- Aan het einde van het groeiseizoen, het verzamelen van rijpe zaad hoofden in gelabelde zakken. Clean zaad van kaf en plaats zaad in enveloppen gelabeld met oudertype kruis in standaard formaat (dat wil zeggen, de moeder x vaderlijke).
- Bulk zaad samen in grote enveloppen middels gelijke hoeveelheden zaad uit een gelijk aantal identieke ouderlijke types kruis. Bijvoorbeeld 100 zaden van 10 kruising of met dezelfde vaderlijke en moederlijke ouders. Label de enveloppen met het identificeren van (cross-type) informatie. Deze grote enveloppen zijn zaad masters voor gebruik bij het vullen van de begrafenis strips in afdeling 2.
| Maternal Parent | |||
| vaderlijke Parent | Wild: wXw | F 1: WXC | Crop: CXC |
| Wild: wXw | 0% wXw | 25% F 1 XW † | 50% CXW † |
| BC: WxF1 of F1xW | 12,5% WxBC | 37,5% F 1 XBC | 62,5% CxBC |
| F 1: WXC | 25% WXF 1 † | 50% F 1 xF 1 | 75% CxF 1 † |
| F 2: F 1 xF 1 | 25% WXF 2 | 50% F 1 xF 2 | 75% CxF 2 |
| Crop: CXC | 50% WXC † | 75% F 1 xC † | 100% CXC |
Tabel 1. Ouderlijke kruis types geproduceerd uit de hand bestuiving. Zonnebloem gewas-wild hybride kruis types werden geproduceerd met hand-bestuiving voor gebruik in zaad begrafenis experiment. Voor alle types kruis, de moederlijke ouder eerst en de vaderlijke ouder tweede vermeld. Cross types gemarkeerd met † maken deel uit van de wederzijdse cross type paren met hetzelfde% gewas allelen, maar verschillende moeders ouders. Tabel is eerder gepubliceerd in: Pace, BA et al. (2015) 15.
2. Aangepaste Seed Burial Strips
LET OP: Voor dit voorbeeld, hadden we drie verwijdering date behandelingen en 15 herhalingen, zodat we verplicht 45 strips totaal. Dit voorbeeld gebruikt 15 vakken per zone dus, we verplicht genoeg fijnmazig polyester textiel of klamboe naar het huis van 15, 7 x 10 cm vakken. Zie figuur 1.
- Begin met het snijden van een 20 x 105 cm strook stof voor elk zaadje strip.
- Meet en markeer compartimenten, vouw de stof in de helft. Met een high-temperatuur lijmpistool, verzegelen een korte (10 cm) einde. Zodra de lijm afkoelt een beetje, maar niet volledig, drukt u op de stof kanten op elkaar om een afdichting te creëren.
LET OP: hoge temperatuur lijm en lijmpistool tips kan brandwonden veroorzaken als contact met de huid is verlengd. - Lijm lijnen van de gevouwen rand naar het open kortste eind bij elk compartiment mark. Druk op de twee weefsel kanten op elkaar langs de lijm lijnen om zeehonden te waarborgen, zonder gaten tussen de compartimenten. Zaden migreren tussen de compartimenten een bijdrage leveren aan de experimentele fout.
LET OP: Nu dat de compartimenten zijn gemaakt, moet de opengevouwen rand open en klaar om zaad en hun identificerende informatie (cross-type naam) te ontvangen blijven. - Willekeurig zaad kruis types toe te wijzen aan compartimenten voor elke strip.
- Vul zaad compartimenten met een uniforme aantal zaden (20 voor elk compartiment worden in dit voorbeeld). Voor etiketten, gebruik van industriële permanente markeringen op cut-to-fit kunststof tuin darts, zodat zij in staat zijn omweerstaan begrafenis.
OPMERKING: Alternatieve labeling methoden worden gebruikt. - Nadat elk compartiment is gevuld met zaad en het label, sluit de ruimte onmiddellijk met de hoge-temperatuur lijmpistool. Ga verder totdat de gehele zaad strook volledig is afgesloten. Label totale strip in het eerste compartiment met repliceren, te blokkeren en / of behandeling informatie.
LET OP: Voor onze studie, want we hadden tijdelijke verhuizingen, blokken, en repliceren strips in blokken, inclusief we al deze informatie. - Controleer of er gaten tussen compartimenten en spot lijm als nodig is alvorens over te gaan naar de volgende strip.
- Vul zaad compartimenten met een uniforme aantal zaden (20 voor elk compartiment worden in dit voorbeeld). Voor etiketten, gebruik van industriële permanente markeringen op cut-to-fit kunststof tuin darts, zodat zij in staat zijn omweerstaan begrafenis.
Figuur 1. Begrafenis zaad strip schema. Voorbeeld van een begrafenis strip toont cross-type identificatie van afzonderlijke compartimenten. Moederlijke ouder wordt eerst met de vaderlijke ouder tweede vermeld. Kleuren geven verschillende moeders bloedverwantschap,met geel voor wild, blauw voor F 1 hybride, en rood voor gewas. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
3. Bury Seed Strips in het Veld
- Graaf plots naar de opgegeven diepte naar het huis van strips. Toewijzen strips afzonderlijke blokken waarin stroken willekeurig zijn ingericht om voor de verwijdering date te gebruiken als de belangrijkste plot en identiteit compartiment (in dit voorbeeld dwars type) als subplot in analyse.
- Dek af strips met aarde. Cut metalen gaas hardware doek tot 10 cm groter dan plots en plaats over begraven strips zijn. Gebruik U-pins aan de randen en de dekking doek randen te beveiligen met aarde.
LET OP: Deze bekleding is voor het uitsluiten van gravende zaad roofdieren. Als een andere optie, Mercer et al. 13 gebouwd en begraven dozen hardware doek dat het zaad strips als gevolg van hevige gopher druk in hun vakgebied loca omringdtie.) - Plaats vlaggen gekleurde landmeter om onderscheid te maken strip locatie en verwijdering data om de duidelijke schriftelijke verslagen aan te vullen.
4. Graaf Strips en evalueren Seed
- Graaf zaad strips toegewezen aan een bepaalde datum te verwijderen. Handhaving van de strips in een koele vochtige omgeving tot ze het laboratorium waar zaad evaluatie zal plaatsvinden bereiken. Dit kan worden bewerkstelligd door het wikkelen van de stroken in natte kranten en ze in een koeler voor transport of overnacht scheepvaart.
- Spoel de modder en de bodem van strips in water tot strips zijn schoon genoeg dat de externe puin zal niet obscure zaden.
- Gebruik een schaar open één compartiment te snijden op een moment. Graaf ontkiemde zaden en verwijder ze. Count duidelijk dode zaden (bv, rot, of verrotte zaden). Plaats ongekiemde zaden op het label, natte Petri-formaat vloeipapier om ongekiemde, slapende, en dode zaden verder te onderscheiden.
- Plaats Petri gerechten met ongekiemdezaden in een kweekkamer set voor standaard kieming voorwaarden: 25 ° C / 10 ° C 12 uur dag / nacht. Laat zaden een week om te ontkiemen. Elke dat doen, tellen deze als levensvatbaar, maar ongekiemde omdat zij niet ontkiemen onder veldomstandigheden.
- Na de groei kamer behandeling, testen resterende ongekiemde zaden voor de levensvatbaarheid gebruik tetrazoliumchloride (TZ) 13. Om dit te bereiken, vormen een procent oplossing van TZ geschikt is voor de studie soorten met behulp van de AOSA Tetrazolium Testing Handbook 14. Voor dit voorbeeld wordt een 1% oplossing toegepast.
- Snijd de ongekiemde zaden in tweeën en plaats een helft uit het embryo en endosperm zichtbaar in een petrischaal met weinig TZ oplossing te bedekken zaad (zaden kunnen drijven, is goed).
- Plaats TZ petrischalen in een incubator ingesteld op 30 ° C en 3 uur wachten. Opmerking: Hogere temperaturen leiden tot een snellere reactie, desgewenst, maar overstaining gevaar.
<li> Verwijder Petri gerechten uit de couveuse en te evalueren. Zaden die rood zijn gekleurd in hun embryo's kiemkrachtige, terwijl ongekleurde zaden dood zijn. Raadpleeg de AOSA Tetrazolium Testing Handboek voor meer informatie over onderscheidende marginale gevallen en bijzondere soorten.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Cross types met gevarieerde moederlijke afstamming en gewas allel percentage (tabel 1) verschilde over het verwijderen data in procent ontkiemd, ongekiemde, en dode zaad (fig. 2 en 3). Gebruik TZ testen van ongekiemde zaden, vonden we enkele werkelijk slapende zaden in de tweede verwijdering (lente) (Tabel 2), terwijl alle zaden ongekiemde de derde verwijdering (spring) bleken werkelijk blijven liggen.
In het algemeen lagere oogst allel percentages verlaagd onaangepast kieming in de late herfst (fig. 2). Aan het begin van de lente te verwijderen, alle soorten kruis had hoge kieming, maar verschilden in hun verhouding doden en ongekiemde (afb. 3). In het bijzonder, cross types met gewas moederlijke afkomst hadden hogere sterfte, terwijl de moeder wilde kruis types werden meer kans ongekiemde blijven. In het voorjaar,ontkieming daalde voor sommige kruis types. Terwijl de contra-intuïtief, dit is waarschijnlijk te wijten aan zaad sterfte binnen de begrafenis strips voor eerdere ontkiemen kruis types. Bijgevolg was de mortaliteit hoger voor meer gewasspecifieke zoals cross types (dat wil zeggen, degenen met een hogere gewas allel percentages), geproduceerd door gewas moeder ouders (Fig. 3)
Figuur 2. Kiemkracht bij de eerste verwijdering in de late herfst. Kiemkracht van zonnebloem gewas-wild kruis types op de eerste datum verwijdering, in de late herfst. Cross types worden georganiseerd op de y-as door het verhogen gewas allel percentages aangegeven. Moederlijke ouder wordt eerst voor elke cross-type. Kiemkracht kleinste kwadraten middelen (met se bars), gevolgd door dezelfde letter zijn niet significant verschillend met behulp van een Tukey-Kramer correctie voor meerdere vergelijkingen. Figuur is eerder gepubliceerd in: Pace, et al. (2015) 15. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3. Percentage Gekiemde, ongekiemde, en sterfte voor de tweede verwijdering (vroege voorjaar) en de derde verwijdering (voorjaar). Procent ontkiemd voor het vroege voorjaar (A), veer (B), procent ongekiemde voor het vroege voorjaar (C), veer ( D), en het percentage dood voor het vroege voorjaar (E) en de veer (F) te verwijderen data. Zonnebloemgewas wild-hybride kruising of organiseert verhogen gewas allel percentages, met de gewas-achtige boven op de y-as en de wild-achtige onderaan de y-as. Cross-type moeder ouder wordt als eerste vermeld. Kleinste kwadratenmiddelen voor gekiemde, ongekiemde en dode zaad (met se bars), gevolgd door dezelfde letter zijn niet significant verschillend met behulp van een Tukey-Kramer correctie voor meerdere vergelijkingen. Figuur is eerder gepubliceerd in: Pace, et al (2015) 15.. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
| cross-type | TZ Slapende | Standaardfout |
| wXw | 0,071 | 0,0131 |
| WxBC | 0,041 | 0,0126 |
| WxF1 | 0,089 | 0,0136 |
| WxF2 | 0,054 | 0,0126 |
| F1xW | 0 | 0,0126 |
| F1xBC | 0,013 | 0,0126 |
| WXC | 0.075 | 0,0131 |
| F1xF1 | 0,007 | 0,0126 |
| F1xF2 | 0,013 | 0,0126 |
| CXW | 0 | 0,0126 |
| CxBC | 0 | 0,0126 |
| F1xC | 0 | 0,0126 |
| CxF1 | 0 | 0,0126 |
| CxF2 | 0 | 0,0126 |
| CXC | 0 | 0,0126 |
Tabel 2. Zaden kunnen bijdragen tot een zaadbank. Kleinste kwadraten middelen om het percentage slapende fractie van ongekiemde zaden bij de tweede (vroege voorjaar) te verwijderen. Zaden werden bepaald levensvatbaar te zijn met behulp van tetrazolium chlooralkaliide na incubatie gunstige kiemomstandigheden. Tabel is eerder gepubliceerd in: Pace, et al (2015) 15..
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Hier presenteren we werkwijzen voor het toepassen zaad begraven strips zaadkieming, latentie en mortaliteit van diverse zaadvoorraden nageleefd vooraf gekozen tijdsperioden in het veld. De voordelen van strips in plaats van individuele pakketten liggen in (1) de snelheid van de strip en compartiment constructie over de schepping van afzonderlijke verpakkingen; en (2) het gemak en de snelheid van het verwijderen van meerdere compartimenten in een beweging zonder het gevaar van een pakket weglaten of verwijderen van een ongeluk. Als twee van de verwijdering van data in het voorbeeld hier gepresenteerde waren tijdens de wintermaanden, wanneer de bodem is hard en veldomstandigheden zijn koud, deze methode vermindert de arbeid en de kans op menselijke fouten. Zaad strips ook experimentele logistieke steun voor onderzoekers die compartimentele locaties in het laboratorium willekeurig op een manier die niet kan worden veranderd door menselijke fouten in het veld. Door selectie van verwijdering keer dat de breedte van de voorspelde natuurlijke kieming keren waren we omringdin staat om gevolgtrekkingen te maken over zaadbank dynamiek in ons voorbeeld de mogelijkheden voor hybride zaden te volharden in zaadbank en bij te dragen aan de toekomstige bevolking. Een beperking van deze werkwijze is dat sommige migratie van zaad tussen compartimenten onvermijdelijk kan zijn, afhankelijk van de grootte van het zaad. Daarom (en zoals in het protocol) is het belangrijk dat de onderzoekers Verifieer de hoge temperatuur lijm afdichtingen tussen compartimenten zaad migratie te minimaliseren.
Sommige problemen met zaad begrafenis experimenten kunnen worden vermeden door slim na te denken over timing. Selecteer begrafenis en verwijdering data op keer om de natuurlijke cycli van de studie soorten en de studie doelstellingen relevant. Het beste is om zo snel na het natuurlijk zaad werpen mogelijk te planten. Data van de verwijdering moeten worden geselecteerd op basis van waarneming van de piek zaailing opkomst tijd voor een evaluatie van de normale kieming gedrag; de toevoeging van eerdere data maakt het ook mogelijk onderzoekers aan het begin van de kieming vast te leggen. BecAGebruik ons eerdere werk had aangegeven dat sommige maladaptive kieming was ontstaan door het ontbreken van kiemrust in sommige kruis soorten te voltooien, hebben we gekozen voor een zeer vroege datum verwijdering slechts een paar weken na de begrafenis (verwijdering 1, late herfst) 15, 16.
Het voordeel van de stroken op de individuele pakketten is dat een dozijn of meer compartimenten kunnen worden begraven, verwijderd, en beoordeeld als één, waardoor complexe experimentele ontwerpen waarbij alles van meerdere verwijderen data om de irrigatie of nutriënt behandelingen. Onderzoekers moeten zorgen om blokken die de behandelingen die zij het meest bezorgd met begrip voor de belangrijkste effect toe te construeren. Ons voorbeeld benadrukte zaad gedrag na verloop van tijd, maar ook andere behandelingen kunnen worden toegepast dat zou houden van het veld lay-out nodig en repliceren arrangement in blokken tijdens de experimentele ontwerpfase. Door willekeurig toewijzen van strip begrafenis positie binnen blokken, kan verwijdering tijd worden geanalyseerd als het belangrijkste effect.
<p class = "jove_content"> Na het verwijderen van het zaad strips, het voorbereiden van een pre-gelabeld stack van Petri-formaat vloeipapier voor de hele strip voordat assessment begint vermindert menselijke fouten. Evenzo openen en evalueren van een enkel compartiment tegelijk helpt handhaven nauwkeurigheid. Bij het plaatsen van ongekiemde zaadjes in de groeikamers, er zeker van zijn dat de dag en 's nachts temperaturen overeenkomen met optimale zaadkieming voorwaarden voor de studie soorten. Terwijl de standaard kiemomstandigheden (25 ° C / 10 ° C 12 uur dag / nacht) geschikt voor allerlei soorten kunnen zijn, dit is niet het geval voor alle soorten.Bedenk dat de TZ behandeling toepassing en evaluatie van zaad kleurpatronen grote invloed studie uitkomst. Bij de beoordeling van de ongekiemde zaden na de groeikamer behandeling, raadpleeg dan de literatuur (of het AOSA Tetrazolium Testing Handboek 14) voor de juiste concentratie van TZ voor een bepaalde soort. Terwijl het beoordelen van individuele TZ-lood seeds, is het belangrijk om het verschil tussen zaad levensvatbaarheid en het vermogen van een zaad ontkiemt-zwak gekleurd zaden kunnen wijzen ademende weefsel, dat niet uit de grond te komen en produceren een zaailing kan herinneren. Dat gezegd, echt slapende zaden zijn die onder optimale omstandigheden ontkiemen ongekiemde blijven, maar bij testen zijn nog steeds sterk levensvatbaar. Deze zaden zijn de enige zaden die kunnen bijdragen tot een zaadbank en ontkiemen in de komende jaren.
Een aantal aanvragen voor deze methoden zijn mogelijk voorbij die hier geschetst. Zaad begrafenis strips kan worden aangepast voor vrijwel elk aantal experimentele eenheden en experimentele ontwerpen. Ze kunnen worden toegepast op verschillende soorten, zaadafmetingen of aandoeningen / behandelingen vergelijken. Voortbouwend op deze methoden heeft het potentieel om de kennis van het basiszaad biologie van vele soorten te verdiepen in een ecologisch relevante context.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Small coin envelopes | Any | ||
| Large coin envelopes | Any | ||
| fine meshed polyester mosquito netting | Any | ||
| high-temperature glue gun | Any | ||
| high-temperature glue stick refills | Any | ||
| Industrial permenant markers | Any | ||
| plastic garden labels | Any | ||
| scissors | Any | ||
| Shovel | Any | ||
| Metal mesh hardward cloth | Any | ||
| Surveyor's flags, multiple colors | Any | ||
| Wet newspaper | Any | ||
| cooler | Any | ||
| blotter paper | Any | ||
| petri dishes | Any | ||
| Temp. controlled growth chamber | Any | ||
| razor blades | Any | ||
| Petri dishes | Any | ||
| Tetrazolium chloride | Any | ||
| water | Any | ||
| heat incubator | Any |
References
- Walck, J. L., Baskin, J. M., Baskin, C. C., Hidayati, S. N. Defining transient and persistent seed banks in species with pronounced seasonal dormancy and germination patterns. Seed Sci Res. 15 (3), 189-196 (2005).
- Alexander, H. A., Schrag, A. M. Role of soil seed banks and newly dispersed seeds in population dynamics of the annual sunflower. Helianthus annuus. J Ecol. 91, 987-998 (2003).
- Burnside, O. C., Wilson, R. G., Weiseberg, S., Hubbard, K. Seed longevity of 41 weed species buried 17 years in eastern and western. Weed Sci. 44 (1), 74-86 (1996).
- Baskin, C. C., Baskin, J. M. Seeds: Ecology, biogeography, and evolution of dormancy and Germination. , Academic Press. San Diego, CA. (2001).
- Finch-Savage, W. E., Leubner-Metzger, G. Seed dormancy and the control of germination. New Phytol. 171, 501-523 (2006).
- Baskin, J. M., Baskin, C. C. A classification system for seed dormancy. Seed Sci Res. 14 (1), 1-16 (2004).
- Donohue, K., et al. Environmental and genetic influences on the germination of Arabidopsis thaliana in the field. Evolution. 54 (4), 740-757 (2005).
- Roach, D. A., Wulff, R. D.
- Pace, B. A., Alexander, H. M., Emry, J. D., Mercer, K. L. Seed fates in crop-wild hybrid sunflower: crop allele and maternal effects. Evol Appl. 8 (2), 121-132 (2015).
- Alexander, H. M., Emry, D. J., Pace, B. A., Kost, M. A., Sparks, K. A., Mercer, K. L. Roles of maternal effects and nuclear genetic composition change across the life cycle of crop-wild hybrids. Am J Bot. 101 (7), 1176-1188 (2014).
- Stewart, N. C., Matthew, J., Halfhill, D., Warwick, S. I. Transgene introgression from genetically modified crops into their wild relatives. Genetics. 4, 806-817 (2003).
- Mercer, K. L., Shaw, R. G., Wyse, D. L. Increased germination of diverse crop-wild hybrid sunflower seeds. Ecol Appl. 16, 845-854 (2006).
- Delouche, J. C., Still, T. W., Rapset, M., Lienhard, M. The tetrazolium test for seed viability. Mississippi Sta Uni Ag Exp Sta Techn Bull. 51, 1-63 (1962).
- Association of Official Seed Analysts. Tetrazolium Testing Handbook. , 653 Constitution Avenue NE, Washington, DC 20002, USA. (2010).
- Alexander, H. M., Emry, D. J., Pace, B. A., Kost, M. A., Sparks, K. A., Mercer, K. L. Roles of maternal effects and nuclear genetic composition change across the life cycle of crop-wild hybrids. Am J Bot. 10 (7), 1176-1188 (2014).
- Weiss, A. N., Primer, S. B., Pace, B. A., Mercer, K. L. Maternal effects and embryo genetics: germination and dormancy of crop-wild sunflower hybrids. Seed Sci Res. 23, 241-255 (2013).
