Summary
هنا نقدم بروتوكول لتقييم البقاء على قيد الحياة البذور، والإنبات والسكون تحت الظروف الحقلية باستخدام دفن، وشرائط البذور وصفت ونتروبلو كلوريد (TZ) اختبار قدرتها على البقاء.
Introduction
ويتمثل الهدف العام من هذه الطريقة هو تقييم موثوق بقاء البذور مع مرور الوقت في ظل الظروف الميدانية.
بنوك البذور التربة هي محمية من تشتت والبذور بعد ungerminated قابلة للحياة توزيعها إما على سطح التربة، داخل القمامة السطح، أو داخل التربة، والتي قد تستمر عابر أو لسنوات عديدة 1،2. عندما تم تطبيق طرق دفن البذور مماثلة لتلك التي عرضت هنا لدراسة استمرت لمدة 17 باستخدام عدة أنواع اثني عشر، تم العثور على بذور قابلة للحياة في العديد من الأنواع التي تم اختبارها 3. بذور السكون هو كتلة لإنبات البذور حتى توليفة مناسبة من شروط الشتلات بقاء تنشأ 4. يمكن أن تبقى نائمة سماح بذور البقاء على قيد الحياة ظروف قاسية، مثل انخفاض درجات الحرارة في فصل الشتاء والحد من المغذيات، أو الجفاف الموسمي، حتى محفز خارجي لالسكون الإفراج يسمح للإنبات. يطلق على السكون الإفراج يمكن أن تختلف من التعرض لمدد الباردة، والمركبات التي كتبها f اليسارغضب، أو الاعتداء الجسدي على معطف البذور من خلال الاحتكاك أو الاتصال مع أحماض المعدة الحيوان 5. كما العظة إنبات يمكن أن يكون جنسا أو نوعا محددة، وغالبا ما تنجم عن الانتقاء الطبيعي الماضية، إنبات البذور غير القادرة على التأقلم هي تلك التي تحدث في وقت غير مناسب، ويمكن أن يؤدي في البذور أو الشتلات وفيات أو نمو البادرات الفقراء. في حين تم تصنيف السكون إلى عدد من أنواع على أساس آليات الإفراج السكون (على سبيل المثال، السكون الجسدي والسكون الفسيولوجي)، لا يزال 6 بذور الكمون واحدة من أقل يفهم المواضيع في بيولوجيا النبات. وهكذا، الدراسات الميدانية التي تسمح لتقييم وضع البذور أو مجموعات من البذور تحت الظروف البيئية ذات الصلة الفردية لها قوة تفسيرية أعلى من تلك التي تعتمد ببساطة على اختبارات الإنبات القياسية في المختبر.
استغلال خصائص البذور المعروفة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة على آليات السكون. السيطرة على سكون البذور ويشتركmplex، بما في ذلك السيطرة الوراثية من العوامل الفسيولوجية والمورفولوجية. في حين أن الفهم الكامل لاتساع آليات السكون لم يتم بعد توضيح، برز النموذج العام، التي تنطوي على علاقة ردود الفعل بين اثنين من الهرمونات النباتية حمض الجبريليك (GA) وحمض الأبسيسيك (ABA) 7. في هذا النموذج المعمم للبذور التي تحتوي على عنصر الفسيولوجية إلى السكون، وGA بمثابة إشارة لإطلاق السكون، في حين يخدم ABA للحفاظ على حالة سبات. التأثيرات الجينية الأمهات وكذلك بيئة النمو الأمهات يمكن أن تؤثر على السكون والصفات بذور أخرى، مثل الحجم، من خلال الأنسجة المولدة للأمهات وإشارات التنموية 8. ولدت أمهات الهياكل الخارجية (أو أغطية البذور) قد حفاظ على السكون، وأحيانا في تركيبة مع منبهات الفسيولوجية. منذ يتم التحكم أغطية البذور المستمدة أمهات جينات (مورثات) نبات الأم، فإنها قد لا تعكس هذه البذور الفعلي النووي الوراثي الماكياج. لدينا لناإد وachenes دوار الشمس من مجموعة من الهجين المحاصيل البرية يعبر من استبعاد هذه التأثيرات الجينية مقابل الجنين الأمهات على خصائص البذور 9،10. وهكذا، تصاميم الدراسة التي تشمل الأنواع المختلفة، وأنواع الصليب، أو المورثات يمكن استشفاف بعض المعلومات حول علم البيئة وعلم الوراثة من سكون البذور، الإنبات والبقاء على قيد الحياة.
مثالا هاما لكيفية إنبات البذور والبقاء على قيد الحياة الظواهر يمكن أن تؤثر على ديناميات السكان يمكن أن ينظر في المناطق المختلطة المحاصيل البرية. الاختيار خلال تدجين النباتات المزروعة يزيل معظم السكون، ويقلل من قدرة البذور على البقاء خارج موسم النمو. بعد تدفق الجينات، أو التهجين بين الأنواع المزروعة والبرية في المناطق المختلطة المحاصيل البرية يمكن إعادة العمل الأليلات المحاصيل (أو المتغيرات الجينية) إلى سكان البرية، مع الآثار المحتملة على ديناميات بنك البذور. الهجينة بين الأقارب المزروعة والبرية يحتمل أن تكون وجدت في المناطق المختلطة المحاصيل البرية قد تكون في حوزتهامجموعة متنوعة من الظواهر السكون المتوسطة، مع عدد قليل من الظواهر المتوقع أن البقاء في ظروف خارج القابلة للزراعة (على سبيل المثال، أشهر الشتاء) 11.
والهدف من هذا المخطوط هو إظهار كيف، وذلك باستخدام البذور طريقة الشريط الدفن، نستطيع أن نقيم الإنبات، والسكون، والبقاء على قيد الحياة من مجموعة واسعة من أنواع البذور على فترات زمنية مختلفة لتحقيق الاختلاف الطبيعي في ظل الظروف الميدانية. في هذا المثال، قمنا بتوظيف بذور عباد الشمس من 15 أنواع هجينة عبر المحاصيل البرية منذ نحن مهتمون في التأثيرات الجينية للأم والجنين على خصائص البذور.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. جمع البذور من الأنواع متعددة أو الصلبان التحكم من نوع واحد
ملاحظة: هذا المثال استخدام البذور من 15 نوعا عبر داخل annuus هيليانثوث الأنواع (عباد الشمس) باستخدام البرية، والهجين، وأنواع المحاصيل مثل (انتاج البذور) الأم الأم.
- في نهاية موسم النمو، وجمع رؤساء البذور الناضجة في أكياس المسمى. البذور النظيفة من القشر والبذور مكان في مظاريف وصفت مع الوالدين نوع الصليب في شكل موحد (أي س الأم الأب).
- البذور السائبة معا في مظاريف كبيرة باستخدام كميات متساوية من بذور من عدد متساو من أنواع عبر الأبوية متطابقة. على سبيل المثال، 100 البذور من 10 أنواع تقاطع مع نفس الوالدين الأم والأب. تسمية المغلفات مع تحديد (عبر نوع) المعلومات. هذه المغلفات الكبيرة الماجستير البذور لاستخدامها في تعبئة شرائط الدفن في القسم 2.
| الوالد الأمهات | |||
| الوالد الأب | وايلد: WxW | F 1: WXC | المحصول: CXC |
| وايلد: WxW | 0٪ WxW | 25٪ F 1 XW † | 50٪ CXW † |
| قبل الميلاد: WxF1 أو F1xW | 12.5٪ WxBC | 37.5٪ F 1 xBC | 62.5٪ CxBC |
| F 1: WXC | 25٪ WxF 1 † | 50٪ F 1 XF 1 | 75٪ CXF 1 † |
| F 2: F 1 XF 1 | 25٪ WxF 2 | 50٪ F 1 XF 2 | 75٪ CXF 2 |
| المحصول: CXC | 50٪ WXC † | 75٪ F 1 XC † | 100٪ CXC |
الجدول 1. الأبوية عبر رأنتجت ypes المنتجة من ناحية التلقيح. عباد الشمس أنواع هجينة عبر المحاصيل البرية مع اليد التلقيح لاستخدامها في التجربة دفن البذور. لجميع أنواع الصليب، والد الأم مدرجة الأول والد الأب سرد الثانية. أنواع عبر ملحوظ مع † هي جزء من المتبادلة أزواج نوع الصليب مع نفس الأليلات٪ المحاصيل ولكن الآباء الأمهات مختلفة. وقد تم نشر الجدول سابقا في: بيس، BA وآخرون. (2015) 15.
2. إنشاء مخصص البذور شرائط الدفن
ملاحظة: على سبيل المثال، كان لدينا ثلاثة علاجات تاريخ الإزالة و 15 مكررات، لذلك نحن مطلوب 45 شرائح المجموع. يستخدم هذا المثال 15 مقصورات في قطاع لذا، المطلوب منا ما يكفي-مزجها غرامة ألياف البوليستر أو الناموسيات لإيواء 15، 7 × 10 سم المقصورات. انظر الشكل 1.
- تبدأ بقطع الشريط 20 × 105 سم من القماش لكل قطاع البذور.
- قياس وعلامة مقصورات، ثم اضعاف النسيج في نصف. باستخدام المهزومةح درجات الحرارة مسدس الغراء، ختم قصيرة (10 سم) نهاية واحدة. مرة يبرد الغراء قليلا، ولكن ليس تماما، اضغط على الجانبين النسيج معا لإنشاء ختم.
تنبيه: ارتفاع درجة الحرارة الغراء والصمغ نصائح بندقية يمكن أن يسبب حروقا إذا ملامسة الجلد مددا. - خطوط الغراء من على حافة مطوية إلى نهاية قصيرة مفتوحة على كل علامة المقصورة. اضغط الجانبين النسيج معا على طول خطوط الغراء لضمان الأختام بدون ثقوب بين المقصورات. بذور المهاجرة بين المقصورات تساهم في الخطأ التجريبي.
ملاحظة: الآن بعد أن المقصورات تم إنشاؤها، يجب أن تبقى على حافة تكشفت مفتوحة وعلى استعداد لاستقبال البذور وتحديد المعلومات الخاصة بهم (عبر نوع الاسم). - عشوائيا تعيين أنواع البذور عبر لمقصورات لكل قطاع.
- ملء مقصورات البذور مع عدد موحد من البذور (20 لكل حجرة تستخدم في هذا المثال). للتسميات، استخدم علامات دائمة الصناعية على قطع ليتأهل السهام حديقة البلاستيك بحيث تكون قادرة علىتحمل الدفن.
ملاحظة: يمكن استخدام طرق وضع العلامات البديلة. - بعد شغل في كل مقصورة مع البذور وتسميته، وختم مقصورة على الفور مع مسدس الغراء ارتفاع في درجة الحرارة. المضي قدما حتى يتم اغلاق قطاع البذور بأكمله تماما. تسمية قطاع العام في المقصورة الأولى مع تكرار، كتلة و / أو معالجة المعلومات.
ملاحظة: للحصول على دراستنا، منذ كان لدينا إزالة الزمنية، وكتل، وتكرار شرائط داخل كتل، أدرجنا كل هذه المعلومات. - تحقق من وجود فجوات بين المقصورات والغراء بقعة حسب الحاجة قبل الانتقال إلى قطاع المقبل.
- ملء مقصورات البذور مع عدد موحد من البذور (20 لكل حجرة تستخدم في هذا المثال). للتسميات، استخدم علامات دائمة الصناعية على قطع ليتأهل السهام حديقة البلاستيك بحيث تكون قادرة علىتحمل الدفن.
الشكل 1. الدفن قطاع البذور التخطيطي. مثال على قطاع الدفن تبين تحديد نوع عبر عن المقصورات الفردية. يتم سرد الأم الأمهات الأول مع الوالد الأب المدرجة الثانية. وتشير الألوان النسب الأمهات مختلفة،مع الأصفر للالبرية، والأزرق للF 1 الهجين، والأحمر للمحصول. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
3. دفن أشرطة البذور في الميدان
- حفر المؤامرات إلى عمق محدد إلى شرائح المنزل. تعيين شرائط لكتل الفردية التي يتم ترتيب شرائط عشوائيا للسماح للتاريخ الإزالة لاستخدامها الحبكة الرئيسية والهوية مقصورة (في هذا المثال، عبر نوع) مثل حبكة فرعية في التحليل.
- تغطية قطاع غزة مع الأرض. قطع معدنية الأجهزة شبكة القماش لتكون 10 سم أكبر من المؤامرات وعلى مدى شرائط دفن. استخدام U-دبابيس لتأمين حواف وحواف غطاء من القماش مع الأرض.
ملاحظة: هذا هو غطاء لاستبعاد تختبئ الحيوانات المفترسة البذور. كخيار آخر، ميرسر وآخرون. 13 شيدت وصناديق من القماش الأجهزة التي تحيط شرائط البذور بسبب الضغط الشديد في غوفر المحلى مجال عملهم دفننشوئها.) - وضع الأعلام الملونة مساح على تمييز المكان الشريط وإزالة مواعيد لاستكمال سجلات مكتوبة واضحة.
4. حفر شرائط وتقييم البذور
- حفر شرائط البذور المخصصة لتاريخ الإزالة معين. الحفاظ على الشرائط في بيئة رطبة باردة حتى تصل إلى المختبر حيث تقييم البذور ستجرى. ويمكن تحقيق ذلك عن طريق لف الشرائط في صحيفة الرطب ووضعها في برودة النقل أو الشحن بين عشية وضحاها.
- شطف الطين والتربة من الشرائط في الماء حتى شرائط نظيفة بما فيه الكفاية أن الحطام الخارجي سوف البذور لا غامضة.
- استخدام مقص لقطع مفتوحة حجرة واحدة في وقت واحد. عدد البذور النابتة وإزالتها. عدد البذور الميتة بشكل واضح (على سبيل المثال، المتعفنة، أو بذور تحللت). وضع البذور ungerminated على المسمى، ورقة نشافة الرطب بيتري الحجم لزيادة تمييز بذور ungerminated، نائمة، والميتة.
- وضع أطباق بتري مع ungerminatedالبذور في مجموعة غرفة النمو للظروف إنبات القياسية: 25 درجة مئوية يوم / 10 ° C 12 ساعة / ليلة. تسمح بذور أسبوع واحد لتنبت. أي أن لا، عد هذه كما قابلة للحياة، ولكن ungerminated لأنها لا تنبت تحت الظروف الميدانية.
- بعد العلاج غرفة النمو، واختبار ما تبقى البذور ungerminated لجدوى استخدام نتروبلو كلوريد (TZ) 13. ولتحقيق ذلك، تشكل حلا في المئة من TZ يتناسب مع نوع الدراسة باستخدام دليل AOSA نتروبلو اختبار 14. على سبيل المثال، يتم استخدام محلول 1٪.
- قطع بذور ungerminated في النصف ووضع نصف كان الجنين والسويداء مرئية في طبق بتري تحتوي على ما يكفي من حل TZ لتغطية البذور (بذور قد تطفو، وهذا على ما يرام).
- وضع أطباق بتري TZ إلى مجموعة حاضنة عند 30 درجة مئوية وانتظر 3 ساعات. ملاحظة: سيؤدي ارتفاع درجات الحرارة يؤدي إلى رد فعل أسرع، إذا رغبت في ذلك، ولكن overstaining خطر.
<لى> إزالة أطباق بتري من الحاضنة وتقييم. البذور التي الملون الأحمر في الأجنة هم germinable، بينما البذور غير ملوثين لقوا حتفهم. الرجوع إلى دليل اختبار نتروبلو AOSA لمزيد من التفاصيل عن حالات هامشية المميزة ونوع معين.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
أنواع تقاطع مع متنوعة نسبة النسب والمحاصيل أليل الأمهات (الجدول 1) اختلفت في مواعيد إزالة في المئة نبتت، ungerminated، والبذور ميت (الشكل 2 و 3). باستخدام اختبار TZ من البذور ungerminated، وجدنا بعض البذور نائمة حقا في إزالة الثانية (أوائل الربيع) (الجدول 2)، في حين تم العثور على جميع البذور ungerminated عن طريق إزالة الثالثة (الربيع) لتكون نائمة حقا.
بشكل عام، فقد أدى انخفاض نسب أليل المحاصيل إنبات غير القادرة على التأقلم في أواخر الخريف (الشكل 2). في إزالة الربيع في وقت مبكر، وكان كل أنواع عبر إنبات عالية، ولكن تختلف في نسبة موتاهم وungerminated (الشكل 3). على وجه الخصوص، كانت أنواع تقاطع مع المحاصيل النسب وفيات الأمهات المرتفعة، بينما كانت أنواع عبر البرية الأمهات أكثر عرضة للبقاء ungerminated. بحلول الربيع،انخفضت الإنبات لبعض أنواع الصليب. بينما غير بديهية، وهذا هو الأرجح بسبب الوفيات المصنفة ضمن شرائط الدفن لالإنبات في وقت سابق من أنواع الصليب. وفقا لذلك، بلغ معدل وفيات أعلى للمزيد من أنواع عبر مثل المحاصيل (أي تلك التي مع النسب المئوية أليل أعلى المحاصيل) التي تنتجها المحاصيل الآباء الأمهات (الشكل 3)
الشكل 2. الإنبات في إزالة الأولى في أواخر الخريف. إنبات عباد الشمس أنواع عبر المحاصيل البرية في تاريخ الإزالة الأول، في أواخر الخريف. ويتم تنظيم أنواع عبر على المحور الصادي عن طريق زيادة نسبة أليل المحاصيل كما ملحوظ. يتم سرد الأم الأمهات الأول لكل نوع الصليب. إنبات أقل الوسائل المربعات (بقضبان حد ذاته) متبوعا نفس الرسالة ليست مختلفة كثيرا باستخدام تسوية توكي-كرامر للمقارنات متعددة. وقد الرقم المنشور سابقا في: باكه، وآخرون. (2015) (15). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3. النسبة نبتت، ungerminated، وفيات لإزالة الثانية (أوائل الربيع) وإزالة الثالثة (الربيع). نسبة نبتت لأوائل الربيع (A)، ربيع (B)، في المئة ungerminated لأوائل الربيع (C)، ربيع ( D)، وفي المئة الميتة لأوائل الربيع (E) والربيع (F) مواعيد الإزالة. ويتم تنظيم عباد الشمس أنواع هجينة عبر المحاصيل البرية عن طريق زيادة نسبة أليل المحاصيل، مع معظم المحاصيل مثل في الجزء العلوي من المحور الصادي والبرية مثل معظم أسفل المحور الصادي. يتم سرد نوع عبر الأم الأمهات لأول مرة. المربعات الصغرىوسائل البذور النابتة، ungerminated ومات (مع ذاته القضبان) تليها نفس الرسالة ليست مختلفة كثيرا باستخدام تسوية توكي-كرامر للمقارنات متعددة. تم الشكل تنطبق في: بيس، وآخرون (2015) 15. يرجى النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
| نوع عبر | TZ الخاملة | خطأ تقليدي |
| WxW | 0.071 | 0.0131 |
| WxBC | 0.041 | 0.0126 |
| WxF1 | 0.089 | 0.0136 |
| WxF2 | 0.054 | 0.0126 |
| F1xW | 0 | 0.0126 |
| F1xBC | 0.013 | 0.0126 |
| WXC | 0.075 | 0.0131 |
| F1xF1 | 0.007 | 0.0126 |
| F1xF2 | 0.013 | 0.0126 |
| CXW | 0 | 0.0126 |
| CxBC | 0 | 0.0126 |
| F1xC | 0 | 0.0126 |
| CxF1 | 0 | 0.0126 |
| CxF2 | 0 | 0.0126 |
| CXC | 0 | 0.0126 |
الجدول 2. بذور المحتمل أن تساهم في بنك البذور المستمرة. أقل المربعات تعني في المئة جزء نائمة من البذور ungerminated في (أوائل الربيع) إزالة الثانية. تم تحديد البذور لتكون قابلة للحياة باستخدام نتروبلو الكلوربيئة تطوير متكاملة بعد الحضانة في ظروف إنبات مواتية. وقد تم نشر الجدول سابقا في: بيس، وآخرون (2015) 15.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
نحن هنا نقدم طرق لاستخدام شرائط دفن البذور لمراقبة إنبات البذور، والسكون وفيات مخزون البذور المتنوعة في فترات زمنية المحددة مسبقا في هذا المجال. مزايا استخدام شرائط بدلا من الحزم الفردية تكمن في (1) سرعة قطاع البناء ومقصورة على الخلق من الحزم الفردية؛ و (2) سهولة وسرعة إزالة حجرات متعددة في اقتراح واحد دون خطر إهمال حزمة أو إزالة واحد عن غير قصد. كما ان اثنين من تواريخ إزالة في المثال المقدمة هنا خلال أشهر الشتاء عندما تكون التربة الصلبة والظروف الميدانية باردة، وهذا الأسلوب يقلل من العمالة واحتمال الخطأ البشري. شرائط البذور أيضا مساعدة اللوجستية التجريبية من خلال السماح للباحثين بطريقة عشوائية مواقع المجزئ في المختبر بطريقة لا يمكن تغييرها عن طريق الخطأ البشري في هذا المجال. من خلال اختيار الأوقات الإزالة شملت اتساع مرات الإنبات الطبيعية توقع كناقادرة على تقديم استنتاجات حول بنك البذور ديناميكية في مثالنا إمكانية البذور المهجنة لتستمر في بنك البذور والمساهمة في السكان في المستقبل. واحد الحد من هذه الطريقة هو أن بعض الهجرة من البذور بين المقصورات قد يكون لا مفر منه، وهذا يتوقف على حجم البذرة. لهذا السبب، (وكما جاء في البروتوكول) من المهم أن المحققين انقر نقرا مزدوجا التحقق من ارتفاع الأختام الغراء درجة الحرارة بين المقصورات للحد من الهجرة البذور.
بعض المشاكل مع التجارب دفن البذور يمكن تجنبها عن طريق التفكير بذكاء حول توقيت. قم بتحديد مواعيد الدفن وإزالة في الأوقات ذات الصلة الدورات الطبيعية للأنواع الدراسة وأهداف الدراسة. فمن الأفضل لزرع في أقرب وقت بعد إلقاء البذور الطبيعية قدر الإمكان. يجب أن يتم تحديد مواعيد إزالة على أساس الملاحظة من وقت الذروة الشتلات ظهور لتقييم السلوك الإنبات الطبيعي. إضافة مواعيد سابقة أيضا يسمح للباحثين لالتقاط الإنبات في وقت مبكر. بيكause قد عملنا السابق تشير إلى أن بعض إنبات غير القادرة على التأقلم كان يحدث المناسب لاستكمال النقص من السكون في بعض أنواع الصليب، اخترنا تاريخ الإزالة في وقت مبكر جدا بعد بضعة أسابيع فقط الدفن (إزالة 1، أواخر الخريف) 15، 16.
ميزة من الشرائط على الحزم الفردية هي أن عشرة أو أكثر من المقصورات يمكن دفن، إزالة، وتقييمها واحد، مما يسمح للتصاميم تجريبية معقدة تنطوي على كل شيء من التمر إزالة متعددة للري أو العلاجات الغذائية. ينبغي للمحققين أن تحرص على بناء كتل التي تسمح العلاجات التي هي الأكثر تشعر بالقلق مع فهم أن الأثر الرئيسي. وأكد مثالنا السلوك البذور مع مرور الوقت، ولكن يمكن أن العلاجات الأخرى تطبيق من شأنها أن تتطلب النظر في تخطيط الميدان وتكرار الترتيب داخل الكتل خلال مرحلة التصميم التجريبي. عن طريق تعيين عشوائيا قطاع موقف دفن داخل كتل، الساعة إزالة يمكن تحليلها كما أن الأثر الرئيسي.
<ص الطبقة = "jove_content"> بعد إزالة شرائط البذور، وإعداد كومة المسمى مسبقا من ورقة نشافة بيتري الحجم للقطاع بأكمله قبل أن يبدأ تقييم يقلل من الأخطاء البشرية. وبالمثل، فتح وتقييم حجرة واحدة في وقت واحد يساعد في الحفاظ على دقة. عند وضع البذور ungerminated في غرف النمو، ومما لا شك فيه أن ليلا ونهارا في درجات الحرارة تطابق الشروط إنبات البذور الأمثل لهذا النوع من الدراسة. وفي حين أن ظروف إنبات القياسية (25 ° C / 10 ° C 12 ساعة يوم / ليلة) قد يكون مناسبا لمجموعة واسعة من الأنواع، وليس هذا هو الحال بالنسبة لجميع الأنواع.نعتبر أن تطبيق العلاج TZ وتقييم أنماط تلطيخ البذور تؤثر تأثيرا قويا نتائج الدراسة. عند تقييم بذور ungerminated بعد العلاج غرفة النمو، والتشاور مع الأدب (أو كتيب AOSA نتروبلو اختبار 14) لتركيز الصحيح من TZ لنوع معين. في حين حكم على الفرد TZ الملون الصورةeeds، من المهم أن نتذكر الفرق بين بقاء البذور وقدرة البذور على الإنبات-ضعيف بذور الملون قد يشير تتنفس الأنسجة، والتي قد تكون غير قادرة على الخروج من التربة وإنتاج الشتلات. الذي ذكر، حقا البذور نائمة هي تلك التي لا تزال ungerminated في ظل ظروف إنبات مثلى، ولكن عندما اختبرت لا تزال قابلة للحياة بقوة. هذه البذور هي بذور الوحيدة المحتمل أن تساهم في بنك البذور المستمر وتنبت في السنوات المقبلة.
وهناك عدد من التطبيقات لهذه الأساليب ممكنة تتجاوز تلك المذكورة هنا. البذور شرائط الدفن يمكن تخصيص أي عدد تقريبا من الوحدات التجريبية والتصاميم التجريبية. يمكن تطبيقها للمقارنة بين أنواع مختلفة، وأحجام البذور، أو الظروف / العلاج. بناء على هذه الأساليب لديه القدرة على تعميق معرفة بيولوجيا البذور الأساسية لكثير من الأنواع في سياق ذي صلة من الناحية البيئية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Small coin envelopes | Any | ||
| Large coin envelopes | Any | ||
| fine meshed polyester mosquito netting | Any | ||
| high-temperature glue gun | Any | ||
| high-temperature glue stick refills | Any | ||
| Industrial permenant markers | Any | ||
| plastic garden labels | Any | ||
| scissors | Any | ||
| Shovel | Any | ||
| Metal mesh hardward cloth | Any | ||
| Surveyor's flags, multiple colors | Any | ||
| Wet newspaper | Any | ||
| cooler | Any | ||
| blotter paper | Any | ||
| petri dishes | Any | ||
| Temp. controlled growth chamber | Any | ||
| razor blades | Any | ||
| Petri dishes | Any | ||
| Tetrazolium chloride | Any | ||
| water | Any | ||
| heat incubator | Any |
References
- Walck, J. L., Baskin, J. M., Baskin, C. C., Hidayati, S. N. Defining transient and persistent seed banks in species with pronounced seasonal dormancy and germination patterns. Seed Sci Res. 15 (3), 189-196 (2005).
- Alexander, H. A., Schrag, A. M. Role of soil seed banks and newly dispersed seeds in population dynamics of the annual sunflower. Helianthus annuus. J Ecol. 91, 987-998 (2003).
- Burnside, O. C., Wilson, R. G., Weiseberg, S., Hubbard, K. Seed longevity of 41 weed species buried 17 years in eastern and western. Weed Sci. 44 (1), 74-86 (1996).
- Baskin, C. C., Baskin, J. M. Seeds: Ecology, biogeography, and evolution of dormancy and Germination. , Academic Press. San Diego, CA. (2001).
- Finch-Savage, W. E., Leubner-Metzger, G. Seed dormancy and the control of germination. New Phytol. 171, 501-523 (2006).
- Baskin, J. M., Baskin, C. C. A classification system for seed dormancy. Seed Sci Res. 14 (1), 1-16 (2004).
- Donohue, K., et al. Environmental and genetic influences on the germination of Arabidopsis thaliana in the field. Evolution. 54 (4), 740-757 (2005).
- Roach, D. A., Wulff, R. D. Maternal effects in plants. Ann Rev Ecol Syst. 18, 209-235 (1987).
- Pace, B. A., Alexander, H. M., Emry, J. D., Mercer, K. L. Seed fates in crop-wild hybrid sunflower: crop allele and maternal effects. Evol Appl. 8 (2), 121-132 (2015).
- Alexander, H. M., Emry, D. J., Pace, B. A., Kost, M. A., Sparks, K. A., Mercer, K. L. Roles of maternal effects and nuclear genetic composition change across the life cycle of crop-wild hybrids. Am J Bot. 101 (7), 1176-1188 (2014).
- Stewart, N. C., Matthew, J., Halfhill, D., Warwick, S. I. Transgene introgression from genetically modified crops into their wild relatives. Genetics. 4, 806-817 (2003).
- Mercer, K. L., Shaw, R. G., Wyse, D. L. Increased germination of diverse crop-wild hybrid sunflower seeds. Ecol Appl. 16, 845-854 (2006).
- Delouche, J. C., Still, T. W., Rapset, M., Lienhard, M. The tetrazolium test for seed viability. Mississippi Sta Uni Ag Exp Sta Techn Bull. 51, 1-63 (1962).
- Association of Official Seed Analysts. Tetrazolium Testing Handbook. , 653 Constitution Avenue NE, Washington, DC 20002, USA. (2010).
- Alexander, H. M., Emry, D. J., Pace, B. A., Kost, M. A., Sparks, K. A., Mercer, K. L. Roles of maternal effects and nuclear genetic composition change across the life cycle of crop-wild hybrids. Am J Bot. 10 (7), 1176-1188 (2014).
- Weiss, A. N., Primer, S. B., Pace, B. A., Mercer, K. L. Maternal effects and embryo genetics: germination and dormancy of crop-wild sunflower hybrids. Seed Sci Res. 23, 241-255 (2013).
