Introduction
Slag i nyfødtperioden er en vesentlig årsak til død og uførhet, som forekommer i så mange som 1 av 2300 levende fødte 1. Dette fører til endrede sentralnervesystemet utvikling og økt langtids sykelighet, inkludert økt forekomst av epilepsi, cerebral parese, mental retardasjon, og andre typer av motor eller kognitiv dysfunksjon. Livslang effekt av tidlig hjerneslag gjør translasjonsforskning dyremodeller avgjørende for å undersøke mekanismene for skade og reparasjon i denne populasjonen, inkludert strategier for å beskytte den skadde hjernen eller for å forbedre reparasjon.
Forskjellige ischemi modeller er blitt brukt til å studere hjerneskade hos voksne dyr, og mens den Rice-Vannucci (modifisert Levine) 2 Prosedyren er vanligvis brukt for å studere hypoksisk-iskemisk skade i den utviklende hjerne, er fokal ischemi-reperfusjon en distinkt skademekanisme forårsaker fokus skade, med en skadet kjerne og penumbra og uskadd fjerntliggende vev. De Koizumi 3 og 4 Longa modeller ble utviklet hos voksne rotter for å oppnå forbigående tilstopping av midtre cerebralarterie via den felles karotidarterie (CCA) og ytre halsarterie (ECA), henholdsvis. I begge modeller, permanent ligering og etsing av arterien grener er viktig for å minimalisere blødning og for å effektivisere den kirurgiske prosedyren, noe som også fører til uheldige virkninger på dyrets evne til å mate og for å få vekt etter skade. Videre er det forskjellige skademekanismer i den umodne hjernen og spesifikke mønstre av skade sett på som et resultat.
Flere nylig, photothrombotic hjerneslag (Rose-Bengal metoden) 5 og permanent MCA ligation 6 har blitt brukt til å studere neonatal og voksen hjerneslag. Både photothrombotic slag og MCA ligering skape permanente endringer i cerebral blodstrøm som resulterer i en mangel på reperfusion. Reperfusjon er en kritisk komponent for utvikling og progresjon av fokal skade, med økt eksitotoksisitet, dannelse av frie radikaler, og nitrogenoksidproduksjon fører til forsinket celledød som innebærer signale kaskader som er forskjellig fra den ischemiske fase 7. Hypoksi-ischemi involverer permanent ensidig carotis ligering etterfulgt av global hypoksi, som også skiller seg fra årsaken til hypoksisk-iskemisk skade på mennesker og forårsaker ikke en konsistent fokal skade mønster, slik at undersøkelse av den skadede kjerne og penumbra mer utfordrende.
Vi har tidligere beskrevet et ikke-blødende iskemi-reperfusjon slagmodell i den umodne rotter ved hjelp av transient middels cerebral arterieokklusjon (MCAO) 8, 9, 10. Dette er en mindre invasiv metode som har tilgang og tilstopper MCA via arteria carotis interna uten permanent ligatipå eller cauterization. Dette tilveiebringer en modell for skade lik den vanligste årsaken for slag i perinatalperioden 11, 12. Denne iskemi-reperfusjon modell av skaden fører til skade på den ipsilaterale striatum og parieto-temporale cortex. Denne modellen av tMCAO tillater også kontroll over graden av skade ved å variere varigheten av okklusjon. Undersøkelse av signalveier og histologiske forandringer i den skadede kjerne og penumbra og i den uskadde ipsilaterale og kontralaterale vev kan ytterligere belyse skademekanismer og reparasjon i den umodne hjernen. Denne studien vil demonstrere denne viktige skademodell for utviklingen av hjernen.
Protocol
Alle dyreforsøk ble godkjent av University of California, San Francisco komité for Forsøksdyrutvalget og ble utført i samsvar med Guide for omsorg og bruk av forsøksdyr (US Department of Health and Human Services, publikasjon nr 85-23, 1985 ). Dyrene ble nøye overvåket av veterinærer i UCSF Institutional Animal Care og bruk Committee (IACUC), akkreditert av AAALAC. En Sprague-Dawley hannrotte med en 8-dagers gamle kull (10 unger per kull) ble oppnådd. Moren og hennes unger fikk mat og vann ad libitum og ligger i en temperatur- og lys-kontrollerte dyr omsorg anlegg med daglig berikelse, per IACUC protokollen, før valpene var 10 dager gammel. Alle kirurgiske instrumenter som brukes i denne prosedyren ble autoklaveres for å sikre sterilitet. Sterilitet instrument tips opprettholdes gjennom hele operasjonen.
1. Middle Cerebral arterieokklusjon
- Vei valpen og ensure at det er den riktige vekten (19-21 g). Bedøve pup i 3% isofluran i 100% O2 og sikre at det ikke er noen respons på en fot klemme. Å opprettholde kroppsoverflaten temperatur mellom 35,5 ° C og 37 ° C ved bruk av en varmepute under operasjonstrinnet.
- Sikre dyret i en liggende stilling med tape over skulderområdene. Ved hjelp av sterile bomullspinner, vattpinne fremre cervikale område med povidon-jod-oppløsning, fulgt av en vattpinne av 70% etanol i dobbeltdestillert vann, alternerende mellom hver løsning for fire kompresser totalt.
- Lokalt infiltrere 0,25% bupivacaine i den planlagte innsnitt området. Ved hjelp av et stereoskop, gjør en midtlinje 5 til 7 mm anterior cervikalt snitt for å eksponere den felles karotidarterie (CCA). Plasser 2-4 haker for å holde hulrommet åpent og arterien utsatt.
- Lokal arteria carotis interna (ICA), occipital arterie (OA), og ytre halsarterie (ECA). Stelle arteriene å få et klart syn. Vær bileful ikke å forstyrre vagus nerve.
MERK: For humbug-opererte unger, er inicision stående åpen og arteriene er utsatt, etter som snittet syes lukket. Den totale anestesi tid er ekvivalent med den til den okklusjon kirurgi. - Skjær 1,5 cm av 6-0 silketråd flettet sutur. Unbraid sutur, trekke ut enkelttråder. Pass på at ett og ett hårstrå er ryddig og ikke frynsete.
MERK: Om nødvendig, glatte frynsete ender ved dypping av enkelttråden i sterilt vann og pleie av strengen med forcep tips. - Ved å holde suturtråden med 45-graders tang, beveger tang i en sveipende bevegelse bue for å gå under ICA, slik at forcep tips oppstår mellom ICA og OA.
MERK: Hvis disseksjon er gjort godt, vil dette trinnet være relativt enkelt. Dersom ICA og OA er rørende, være forsiktig med å sprekke arteriene når du bruker pinsett for å isolere ICA. Hvis blødningen skjer, legg press på arterien med tang inntilblødningen stopper. Absorbere blod med en steril vattpinne. - Ta tak i enden av sutur tråd som er holdt av tang og trekk det slik at enden er lett tilgjengelige. Slipp strengen fra tang og tilbake tangen ut fra under ICA reversere bevegelsen i trinn 1.5 (figur 1A).
- Knyt en midlertidig ligatur rundt ICA ved basen, nærmest der den løsner fra CCA.
Merk: Det er viktig å binde knuten slik at enden av den tråd som skal trekkes for å fjerne knuten er lang nok (større enn 1 mm, mindre enn 3 mm) lett kan gripe sammen med tang, og samtidig sikre at det er en passende mengde av suturtråden på den andre siden av knuten for tilbaketrekking. - Forsiktig trekke ICA sideveis og bruke en klemme for å feste tråden til overmål hud nær armhulen området på motsatt side av snittet. Sørg for at denne tilbaketrekkings tråden er stram nok til å stoppe blodtilførselen før du går videre til neste trinn, for åminimere risikoen for ukontrollert blødning. Observer at arterien er flat og blek.
MERK: Ikke over-retract, da det kan føre til en delvis eller full rive av ICA. Tilbaketrekkings kan innstilles like før arteriotomien ved å trekke i strengen på motsatt side av klemmen. - Bruk 45 ° tang for å gripe en annen unbraided suturtråden og sløyfe det under og rundt ICA, som i trinn 1.5. Posisjon denne tråden lateralt for tilbaketrekkingstråd (figur 1B).
MERK: Dette trinnet kan også gjøres før tilbaketrekking. Hvis du er usikker på om kvaliteten på tilbaketrekkingen, kan denne knuten være svært løst knyttet før neste trinn. - Skjær en 0,2 mm arteriotomi midtveis mellom bundet og ubundne ligaturer, feilende nærmere bundet ligatur.
MERK: Blood igjen i bundet-off arterie kan tømme gjennom arteriotomien men bør ikke overstige 5 mL. Hvis blødningen vedvarer, trekker tilbaketrekking tråden nøye for å øke tilbaketrekkingen, med omsorg for etvoid å skade arterien fra overdreven spenning. - Ved hjelp av en metrisk linjal, måle at lukkingen av suturen og kuttet suturen med en ekstra godtgjørelse på 2-3 mm for fjerning av sperreinnretningen under reperfusjon. Holde sperreinnretningen med 45-graders pinsett og bruke rette tang for å skape et bend ved den passende lengde til å nå den MCA, for å markere et stoppunktet for avansement.
MERK: En 10 mm lengde okklusjon fra silikonstykke enden til bendet blir brukt for P10 Sprague Dawley eller Long Evans-rotter i denne vektområde. - Ved hjelp av 45 ° tang, mate den silikonbelagt nylon okklusjon sutur inn i arteriotomien og videre suturen til bøyen som markerer forhåndsbestemt avstand til MCA (figur 1C). Sørg for at avansement føles glatt; umiddelbart slutte avansement hvis du føler motstand. Ved fremføring, tar sikte på suturen i en retning som er parallell med CC / ECA, mot hodet.
MERK: Hvis sutur er avansert dorsally, motdyrets ryggraden, kan det kjøres inn i pterygopalatine arterie (PTA). Hvis du kjenner motstand etter 3-5 mm av avansement, har sutur treffer PTA krysset. Å sikkerhetssperreinnretningen ut av arterien inntil silikonhodet er i nærheten av arteriotomi før justering av kjøreretning. Det er ikke nødvendig å fjerne sperreinnretningen fra arteriotomien. - Sikre sperreinnretningen ved å binde en ligatur midlertidig, ved hjelp av strengen fra trinnet 1.10 (figur 1D).
- Fjern retractor klippet. Trimme trådene i begge de midlertidige ligaturer slik at strengen av knuten som er trukket for å fjerne knuten er lett å gripe med rette tang og er lengre enn den tråd som er trukket for å stramme knuten.
MERK: Strengene må være kort nok til at de ikke floke i hulrommet etter nedleggelsen. - Fjern de haker og lukke hulrommet ved hjelp av 6-0 flettet silke for å skape tre til fire avbrutte suturer.
- Fjern valpen fraanestesi og plassere den på en varmepute i romluft. Overvåk valpen før den har gjenvunnet nok bevissthet til å opprettholde sternal recumbency og sørge for at det er fullstendig restituert før du returnerer den til demningen. Sikre at pup opprettholder en kroppsoverflate temperatur mellom 35,5 ° C og 37 ° C.
- I løpet av okklusjon, kan diffusjon-vektet magnetisk resonans avbildning (MRI DW-) under isofluran anestesi brukes til å verifisere den riktige induksjon av skade. Figur 2 viser pågående iskemisk skade påvist ved DW-MRI i løpet av tMCAO 9.
MERK: Diffusion-veid spinnekko avbildning plane utføres 10-15 min før reperfusjon. Den hele hjernen avbildes med serie 2-mm-tykke koronalsnitt ved hjelp av de følgende pulssekvensinnstillinger: TR / TE = 5.000 / 60 ms, 4 gjennomsnitt, synsfelt = 35 mm, datamatrise = 128x128, diffusjon gradient varighet = 20 ms, separasjon = 29,7 ms, amplitude = 70mT / m, og b-faktor = 1,045 s / mm2.Dyr som utviste en mangel på kortikal innbefattelsen eller atypisk iskemisk skade, for eksempel i hjernestammen, er utelukket.
2. Reperfusjon
MERK: Okklusjon er utført i 3 timer for å føre en moderat til alvorlig mengden av skade som involverer striatum og cortex.
- På omtrent 2 timer og 50 minutter etter okklusjon av MCA, bedøve pup i 3% isofluran i 100% O2. Opprettholde en kroppsoverflate temperatur mellom 35,5 ° C og 37 ° C ved bruk av en varmepute under operasjonstrinnet.
- Fjern de avbrutte suturer fra trinnet 1.16 og lokalisere krysset, som er merket med de to ligaturer og haleenden av den okkluderende sutur.
MERK: skinn-opererte dyr induseres og forbli under anestesi for en tilsvarende tidsperiode til de okkluderte dyrene. Snittet er igjen åpnet og sydd lukket. For humbug-opererte dyr, fortsett til trinn 2.11. - nøye løseden mest laterale knute tidligere bundet i trinn 1.14 ved å trekke den lengre streng.
MERK: Hvis det er motstand i untying knuten, stoppe for å sikre at riktig tråd av knuten trekkes. Hvis motstanden fortsetter, øker forstørrelse for en bedre utsikt. Vær forsiktig når du untying, som det er mulig å skade arterien under dette trinnet. - Fjern suturtråden fra hulrommet.
- På nøyaktig 3 timer etter MCA-okklusjon, langsomt tilbake at lukkingen av suturen ut av arterien. Det blir ingen motstand.
MERK: I de fleste tilfeller vil det ikke være noen blødning. Hvis en liten blødning oppstår, legg press på arterien på arteriotomistedet. - Bruk pinsett for å legge trykk på arteriotomi, som det neste trinn gjenoppretter ICA blodstrøm for reperfusjon.
- løse nøye den mediale knuten ved hjelp av samme metode som i trinn 2.3.
- Fjern suturtråden fra kroppen og anvende et hemostatisk middel for å arteriotomien for å stoppe blødning. Sørg for at blødningen har stoppet.
MERK: Return of the arterie opprinnelige form og rød farge bekrefter at ICA blodstrømmen er gjenopprettet. - Fjern de haker og lukke hulrommet med tre til fire avbrutte suturer av flettet silke 6-0.
- Fjern pup fra anestesi og plassere den på en varmepute i romluft. Overvåke den før den har gjenvunnet nok bevissthet til å opprettholde sternal recumbency og sikre full gjenoppretting før du returnerer den til demningen. Sikre at pup opprettholder en kroppsoverflate temperatur mellom 35,5 ° C og 37 ° C.
- Inspiser valpene daglig i 5 dager. Recprd sine vekter og inspisere snittet nettsteder nøye for riktig helbredelse. Fjerne sting etter 7-14 dager. Post-tMCAO skade kan avbildes med MR, om ønskelig 9.
MERK: Dyr kan miste opptil 1 g vekt på den første dagen, men vil typisk få vekten uten intervensjon og være innenfor en lignende veiet området til kontrollene ved dagene 4-5. I sjeldne tilfeller kan en pup miste overdreven vekt eller ha vanskeligheter med mating, noe som krever oral gavage strømmer i 2-3 dager. - Ved P21, kan skade på pålitelig måte vurderes med sensorimotor adferdstester, slik som rota-stav eller sylinder stell. Kognitiv testing kan utføres så tidlig som 4-6 ukers alder ved hjelp av vurderinger slik som nye objekt anerkjennelse eller den Morris vannlabyrint 13.
- Avlives rottene ved intraperitoneal injeksjon av Euthasol (50 mg / kg) for hjerne innhøsting 11, 12.
- Histologisk analyse for å vurdere skade volum eller som reaksjon på inngrep kan utføres med cresylfiolett og H & E-farging (figur 3) 10.
Representative Results
Alvorligheten av skade forårsaket av tMCAO er sterkt avhengig av både okklusjonstid og opplevelsen av kirurgen. En 90-minutters okklusjon frembringer ofte en mild til moderat skade mønster, mens 3 timer frembringer en moderat til alvorlig skade. Alvorlighetsgraden av skade kan fastslås ved en rekke metoder, inkludert MRI, histologi, eller kort- eller langtidsatferdsmessige analyser. Figur 2 viser et eksempel på DW-MRI utført 75 min til en 90-minutters okklusjon, hvilket bekrefter ischemisk skade som involverer den ipsilaterale hemisfæren. Diffusjon veid avbildning demonstrerer øket diffusjon i den ipsilaterale striatum og mesteparten av ipsilateral korteks, uten kontralaterale endringer i løpet av akutt fase. Dette samsvarer til et moderat nivå av langsiktig skade som involverer både hjernebarken og dyp grå materie.
Okklusjon av MCA resultater icelledød som begynner i striatum for mindre alvorlige skader og utvikler forverring cortical og hippocampus skade for lengre okklusjon tider og mer alvorlige skader. Ved optimalisering av den kirurgiske teknikken, som for eksempel bestemmelse av sutur innføringslengde, MRI er sterkt anbefalt, som gjør det mulig for bekreftelse av riktig plassering sutur og visualisering av ødem og skade progresjon i løpet av okklusjon 14, 15, 16. Hvis MR ikke er tilgjengelig, H & E eller kresylfiolett farging er enkle og pålitelige histologiske metoder for å bestemme skade morfologi og kan brukes ved både tidlige og sene tidspunkter etter den tMCAO. Figur 3 viser en moderat til alvorlig skade mønster på histopatologisk undersøkelse etter en 3 timers okklusjon, demonstrerer cyste dannelse og volum i den ipsilaterale striatum og hjernebark.
10.
Selv med mild skade, locomotor endringer, for eksempel sirkle og hemiparese, er kjent under okklusjon perioden. Med mer alvorlig skade, vil disse endringene vedvarer etter reperfusjon. Ytterligere adferdsundersøkelsen kan brukes for å bedømme graden av skade, herunder rota-stav eller sylinder merden testing for sensorisk funksjon og den Morris vannlabyrint forkognitiv funksjon 13.
Figur 1: Levende Kirurgiske Bilder av tMCAO prosedyre. (A) Et første suturtråden er lagt rundt ICA, som beskrevet i trinn 1.6. (B) Den første midlertidige ligatur er bundet og ICA er trukket tilbake. Den andre suturtråden er lagt rundt ICA, sideveis til den første suturtråden, som beskrevet i trinn 1.9. (C) Et silikonbelagt okklusjon sutur mates inn arteriotomistedet, som angitt i detalj i trinn 1.12. (D) Den andre midlertidige ligaturen er knyttet for å feste sperreinnretningen på plass, som beskrevet i trinn 1,14. Skala bar = 1 mm.
Figur 2: MR Under Occlusion Demonstrerer Passende Ensidig Injury. Anterior til posterior, koronale bildesnitt av den DW-MRI, utføres i løpet av en 90 minutters okklusjon, demonstrere øket diffusjon involverer den ipsilaterale hemisfæren (piler), som er i overensstemmelse med pågående iskemisk skade i den akutte fasen. Gjengitt med tillatelse fra Stroke 11. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: Ensidig skade som involverer striatum og Cortex 4 uker etter tMCAO. Bakre til fremre, kresyl-fiolett-farget koronale hjernesnitt (hver 50 mikrometer) høstet fra p38 dyr demonstrere nokså alvorlig skade (pilene viser ipsilateral cyste dannelse og redusert kortikal ogstriatal volum) etter en 3 timer tMCAO ved P10. Den runde hull på venstre side representerer en kontralaterale hemisfære identifikator. Scale bar = 5 mm. Gjengitt med tillatelse fra Neurobiology of Disease 12. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Discussion
Kritiske trinnene i protokollen
For det første er det viktig å opprettholde normothermia fra start av anestesi helt full gjenoppretting, som det er kjente effekter av både hypotermi 17 og hypertermi 18 på progresjon av hjerneskade i både umodne og modne dyr. For det andre, mens sikring dyret og tilbaketrekking av innsnitt, optimal plassering for å overvåke puste og for å sikre at luftrøret er fri for komprimering er nødvendig. For det tredje unngår å klemme eller strekking av nervus vagus, da dette kan føre til endringer i hjertehastighet med vagus-stimulering. Fjerde, fordi tilbaketrekking av ICA er nødvendig for å kontrollere blødning under arteriotomien, oppmerksomhet må betales til graden av spenning under tilbaketrekking for å unngå å skade arterien. Dersom arterien ikke rive fra retraksjon, eller om det er en dårlig arteriotomi innsnitt, dyret bør utelukkes fra analysen på grunn av risikoenfor blødning og reperfusjon dårlig.
Modifikasjoner og feilsøking
Ved hjelp av MRI som en guide, kan sutur-lengde optimaliseres for å sikre at silikonstykke ordentlig tilstopper MCA for å skape den fokal ischemi. Dersom MR ikke er tilgjengelig, kan valpene avlives før reperfusjon for disseksjon å visualisere plassering av sutur. Juster sutur lengde etter behov. Pup vekt høyt korrelerer med de krav til lengde okkluderende sutur. Okklusjonen tid kan endres for å justere graden av skadegrads.
I tillegg sutur form og lengde er kritisk. For P10 Sprague-Dawley og Long Evans hannrotter som veide 19-21 g, hvilket er 10 mm den optimale lengden av innsetting i vår erfaring. Ytterligere innføring av den okkluderende suturen kan resultere i perforering av MCA. Videre vil konsistensen i form av at lukkingen av filamentet i hvert kirurgi resulterer i en øket konsistens for skade pattern 19, 20. Av denne grunn anbefaler vi å bruke profesjonelt produsert sting for dette formålet. Det er også viktig å merke seg at skademønsteret kan variere mellom utøvere på grunn av tilsynelatende små forskjeller i teknikk.
Begrensninger av teknikken
Utfører denne teknikken i en liten, utvikle gnager krever betydelig erfaring. Hvis det utføres riktig, er kirurgen i stand til å forårsake en svært konsekvent skademønster på tvers av dyr av forskjellige størrelser og oppnå en overlevelse på mer enn 95%. Videre riktige kirurgiske verktøy er avgjørende. Kirurgiske instrumenter må være godt vedlikeholdt for å sikre at alle instrument tips tilnærmet riktig.
Betydningen av denne teknikken i forhold til eksisterende eller alternative fremgangsmåter
Mens hypoksi-ischemi, eller ris-Vannucci modell 2
Fremtidige søknader etter å mestre denne teknikken
Denne modellen er lik den vanligste årsaken for slag hos mennesker nyfødte, en forbigående okklusiv trombe som oppstår under perinatalperioden 11, 21. Årsaken er ikke helt klart, og er mest sannsynlig multifaktoriell, men det forutsettes i de fleste tilfeller to resultere fra emboli som passerer fra placenta 11. I tillegg har mange nyfødte med antatt perinatal slag ofte til stede med senere anfallsaktivitet eller subtil fokale neurologisk undersøkelse feil 22. Dette gjør bruken av en konsistent, translatorisk skade-modell for å identifisere skademekanismer progresjon og mulige terapeutiske strategier avgjørende.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflourane | Henry Schein | 50033 | anesthetic, at 3% |
| Trinocular Surgioscope | World Precision Instruments | PSMT5N | |
| Heating pad | Sunbeam | 000731-500-000 | low to medium setting |
| IR Thermometer | Extech Instruments | 72-5270 | |
| Retraction kit for small animals | Fine Science Tools | 18200-20 | |
| CermaCut Scissors | Fine Science Tools | 14958-09 | |
| Dumont #5SF Forceps | Fine Science Tools | 112522-00 | 2x |
| Dumont #5/45 Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | 2x |
| B-2 Micro Clamp | Fine Science Tools | 00398-02 | |
| Forcepts for Clamp Application | Fine Science Tools | 00072-14 | |
| Micro Vannas Scissors | Fine Science Tools | 15000-03 | 2mm cutting edge |
| Occlusion Sutures | Doccol | 602123PK10 | 701712PK5Re |
| Ruler | Fine Science Tools | ||
| Hemostatic Agent | Avitene | DVL1010590 | |
| 6-0 Perma-Hand Silk Reverse CuttingSuture | Ethicon | 769G | |
| Euthasol | Virbac | 710101 | 0.22 mL/kg |
| Cotton Tipped Applicators | Henry Schein | 100-9249 | |
| Laboratory Tape | VWR | 89097-990 |
References
- Grunt, S., et al. Incidence and outcomes of symptomatic neonatal arterial ischemic stroke. Pediatrics. 135 (5), 1220-1228 (2015).
- Rice, J. E., Vannucci 3rd, R. C., Brierley, J. B. The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat. Ann Neurol. 9 (2), 131-141 (1981).
- Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. Experimental studies of ischemic brain edema. I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area. Jpn J Stroke. 8 (8), (1986).
- Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).
- Labat-gest, V., Tomasi, S. Photothrombotic ischemia: a minimally invasive and reproducible photochemical cortical lesion model for mouse stroke studies. J Vis Exp. (76), (2013).
- Renolleau, S., Aggoun-Zouaoui, D., Ben-Ari, Y., Charriaut-Marlangue, C. A model of transient unilateral focal ischemia with reperfusion in the P7 neonatal rat: morphological changes indicative of apoptosis. Stroke. 29 (7), 1454-1460 (1998).
- Perlman, J. M. Intervention strategies for neonatal hypoxic-ischemic cerebral injury. Clin Ther. 28 (9), 1353-1365 (2006).
- Derugin, N., Ferriero, D. M., Vexler, Z. S. Neonatal reversible focal cerebral ischemia: a new model. Neurosci Res. 32 (4), 349-353 (1998).
- Gonzalez, F. F., et al. Erythropoietin increases neurogenesis and oligodendrogliosis of subventricular zone precursor cells after neonatal stroke. Stroke. 44 (3), 753-758 (2013).
- Larpthaveesarp, A., Georgevits, M., Ferriero, D. M., Gonzalez, F. F. Delayed erythropoietin therapy improves histological and behavioral outcomes after transient neonatal stroke. Neurobiol Dis. , (2016).
- Rutherford, M. A., Ramenghi, L. A., Cowan, F. M. Neonatal stroke. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 97 (5), 377-384 (2012).
- van der Aa, N. E., Benders, M. J., Groenendaal, F., de Vries, L. S. Neonatal stroke: a review of the current evidence on epidemiology, pathogenesis, diagnostics and therapeutic options. Acta Paediatr. 103 (4), 356-364 (2014).
- Gonzalez, F. F., et al. Erythropoietin sustains cognitive function and brain volume after neonatal stroke. Dev Neurosci. 31 (5), 403-411 (2009).
- Dudink, J., et al. Evolution of unilateral perinatal arterial ischemic stroke on conventional and diffusion-weighted MR imaging. AJNR Am J Neuroradiol. 30 (5), 998-1004 (2009).
- Derugin, N., et al. Magnetic resonance imaging as a surrogate measure for histological sub-chronic endpoint in a neonatal rat stroke model. Brain Res. 1066 (1-2), 46-56 (2005).
- Dzietko, M., Wendland, M., Derugin, N., Ferriero, D. M., Vexler, Z. S. Magnetic resonance imaging (MRI) as a translational tool for the study of neonatal stroke. J Child Neurol. 26 (9), 1145-1153 (2011).
- Mancuso, A., Derugin, N., Hara, K., Sharp, F. R., Weinstein, P. R. Mild hypothermia decreases the incidence of transient ADC reduction detected with diffusion MRI and expression of c-fos and hsp70 mRNA during acute focal ischemia in rats. Brain Res. 887 (1), 34-45 (2000).
- Kasdorf, E., Hyperthermia Perlman, J. M. Inflammation, and Perinatal Brain Injury. Pediatric Neurology. 49 (1), 8-14 (2013).
- Bouley, J., Fisher, M., Henninger, N. Comparison between coated vs. uncoated suture middle cerebral artery occlusion in the rat as assessed by perfusion/diffusion weighted imaging. Neurosci Lett. 412 (3), 185-190 (2007).
- Shimamura, N., Matchett, G., Tsubokawa, T., Ohkuma, H., Zhang, J. Comparison of silicon-coated nylon suture to plain nylon suture in the rat middle cerebral artery occlusion model. J Neurosci Methods. 156 (1-2), 161-165 (2006).
- Kirton, A., deVeber, G. Paediatric stroke: pressing issues and promising directions. Lancet Neurol. 14 (1), 92-102 (2015).
- Nelson, K. B. Perinatal ischemic stroke. Stroke. 38, 742-745 (2007).
