Summary
Meme kanseri metastazını hedef alan adjuvan tedaviyi değerlendiren klinik öncesi modeller eksiktir. Buna değinmek için, de novo pulmoner meme adenokarsinom metastazına ait bir fare modeli geliştirdik, burada adjuvan ortamında (primer tümörlerin cerrahi sonrası rezeksiyonu) uygulanan terapiler önceden tohumlanmış pulmoner metastazları etkilemek için etkinlik açısından değerlendirilebilir.
Introduction
Kuzey Amerika'daki kadınların yaşam boyu% 12 oranında meme kanseri riski 2 vardır ; Bu kişilerin çoğunluğunun ameliyat yoluyla primer tümörler çıkarılacağı ve kanser alt tipine bağlı olarak adjuvan ortamında hedefe bağlı, endokrin, kemo ve / veya radyoterapi alacağı 3 . Örnekler, anti-östrojen terapileri alan hormon reseptörü pozitif kanserler tanısı konan kadınlar ve radyasyon / kemoterapi ile HER2 hedefli terapiler alan HER2 pozitif tümörleri olan kadınlar olmakla birlikte, üçlü negatif tümörler için henüz hedeflenmiş tedaviler mevcut değildir 3 . Radyasyon, kemoterapi, kişiselleştirilmiş ve hormonal esaslı cerrahi rezeksiyon eklemelerindeki ilerlemelere rağmen, evre II veya III hastalık 4 olarak teşhis edilen kadınların% 30-70'inde hastalık tekrar eder; çünkü terapiler uzak organlarda metastatik hastalığın ortadan kaldırılmasında büyük ölçüde etkisizdir; Akciğer, kemik, bYağmur ve / veya karaciğer 5 . Metastatik hastalık primer tümör yeniden büyümesinin olmaması durumunda ortaya çıktığı zaman bu, özellikle önemli bir konudur; bu da, kesin ameliyat sırasında, dissemine malign hücrelerin muhtemelen ikincil organlarda zaten mevcut olduğunu ima eder. Bu nedenle, metastatik tümörlerin yok olmasını veya yavaş büyümesini sağlayabilen terapilere acilen ihtiyaç vardır.
Meme karsinogenezisin de novo fare modelleri, neoplastik ilerlemesinin 1 düzenleyen mekanizmaların açığa dikkat çekecek derecede bilgilendirici olmuş olmakla mevcut modeller ayrıca çeşitli sınırlamalara sahiptir. Bunlardan biri, de novo transgenik modellerin tipik olarak birden fazla meme bezi içerisinde primer tümörler geliştirdiği gerçeğidir; burada primer tümör yükü çalışma sürelerini sınırlar. Primer tümör hücresi kaçışı ve metastatik tohumlama, muhtemelen bu modellerde neoplastik progresyonun erken döneminde ortaya çıkarken, metastatik tümörlerin açık gelişimi geç ortaya çıkar veFare modeli ve gerinim arka planı, çoğunlukla kısmen penetrantır 1 . Bu ayrıca, ikincil organlarda metastazı düzenleyen moleküllerin keşfi için de novo modellerin kullanımını sınırlar ve adjuvan ortamında önleyici etkinliğin değerlendirilmesi için sınırlandırılır.
Bu kısıtlamaları ortadan kaldırmak için, akciğerlere yönelik meme kanseri metastazının de novo otonom modeli geliştirdik. Son evre de novo meme tümörleri taşıyan ebeveyn transgenik dişiler (diğer bir deyişle , burada açıklanan çalışmalar için FVB / n suşu zemininde MMTV-PyMT) yaklaşık 100 gün 6 yaşlandırılır ve bu noktada primer tümörler cerrahi olarak rezeke edilir ve enzimatik olarak Tek hücreli süspansiyonlar. Süspansiyonlar (1 x 10 6 hücre) sırayla ortotopik olarak 6-7 haftalık alıcı eş merkezli dişi farelere eksplane edilir ve burada tekli primer meme tümörleri 38 ila 60 günlük süre boyunca gelişir ( 3 mm), alıcı farelere anestezi yapılır ve primer tümörler cerrahi cerrahi alanda tümörün yeniden büyüdüğü kadınlarda cerrahi (Ek Şekil 1) ile uyumlu, en aza inecek şekildedir çıkartılmaktadır. Fareler, FVB / n suşu zemininde, ameliyat sonrası ~ 115 gün boyunca% 45 penetransli akciğerlerde histolojik olarak saptanabilir metastatik odak gelişir ( Şekil 1B ). Metastatik tümör büyümesinin uzatılmış gecikmesi ile model, adjuvan tedavi sunumu için ve primer tümörlerin cerrahi olarak çıkarılmasını takiben metastatik ilerlemeyi etkileyen biyolojiyi aydınlatmak ve değerlendirmek için benzersiz bir şekilde konumlandırılmıştır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Aşağıdaki protokolde kullanılan hayvanlar, Hayvan Refahı Yasası düzenlemelerine ve Halk Sağlığı Hizmeti (PHS) Politikasına uyumlu olacak şekilde tasarlanan Oregon Sağlık ve Bilim Üniversitesi'nin Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından kapsanmaktadır.
Steril koşulların bakımı: Sterilize edilmiş aletler kullanılmalı ve fareler arasında steril gazlı bezle silinmeli, PBS içinde durulanır ve ardından en az 15 dakika dezenfekte edici% 70 etanolle sterilize edilmelidir. Hayatta kalma ameliyatları için cerrahi bir başlık, yüz maskesi, elbise ve eldiven giyilmelidir. Hayatta kalma ameliyatları için hayvanın ameliyat öncesi hazırlığı aşağıdaki protokole dahil edilmiştir. Reaktiflerin ve ekipmanların bir listesi için Tablo 1'e bakın.
1. Primer Memeli Tümörlerden Tek Hücreli Süspansiyonların İzolasyonu ve Hazırlanması
- Denekli dişi 100 günlük transgenik MMTV-PyMT (FVB / n) farelerde anestezi uygulayın ve c altında tutunAnestezi maskesi vasıtasıyla% 2 izofluran uygulayarak onutuous sedasyon. Farenin, ayak bileği sıkışmayan bir refleksle düzgün şekilde anestezi edildiğinden emin olun.
- Steril bir ortamda meme tümörünü steril makas kullanarak üstteki deri ve çevre doku dokusundan ve / veya lenf düğümlerinden ayırarak 100 günlük transgenik dişi MMTV-PyMT (FVB / n) farelerdeki primer meme tümörlerini rezekte edin. Anestezi uygulanmış fareleri servikal dislokasyonla euthanize edin.
- Steril makas veya bir neşterle, primer tümörleri elle küçük parçalara (~ 1.0 mm 3 ) koyun. Tümör parçalarını 3.0 mg / mL kollajenaz A'ya ve 4.0 U / mL DNase I'e DMEM içerisinde çözündürün. 1.0 cm çaplı tümör için ~ 10 mL yukarıdaki sindirim ortamını kullanın.
- Steril 25 mL'lik bir şişede ~ 125 rpm'de ve 37 ° C'de 40 dakika süreyle steril bir karıştırma çubuğu ile sindirim yapın.
- % 10'luk nihai bir seyreltiye fetüs sığır serumu (FBS) ekleyerek sindirimi durdurun ve tüm karışımı wEt buz burada muhafaza edilir.
- Sindirilmiş tümör süspansiyonunu 0,7 μm'lik bir naylon süzgeçten 50 mL'lik bir konik tüpe süzün ve süzgeçte kalan tümörleri atın. Süpernatantı 300 xg'de 4 ° C'de santrifüjleyin.
- 1.0 cm tümör başına pelet 10 mL DMEM'de süspansiyon haline getirin ve 0.7 μm'lik bir naylon süzgeç ile yeniden filtre edin. Hücre konsantrasyonunu sayın, daha sonra 4 ° C'de 300 xg'de santrifüjleyin.
- 2 x 10 7 canlı hücre / mL'lik bir konsantrasyonda% 90 FBS ile% 10 dimetil sülfoksit içinde süspanse edin pelet. Tüm primer tümörün tek hücre süspansiyonlarını -80 ° C'de saklayın.
2. Anne tümörünün ortotopik enjeksiyonu
- Donmuş primer tümör süspansiyonlarını 37 ° C'de kısmen çözdürüp dondurulmuş pelet kriyojenik tüpten 20 mL DMEM'ye salınana ve hücreleri sayana kadar eritin. 4 ° C'de 300 xg'de santrifüjleyin ve hücreleri 1: 1 DMEM'de tekrar süspansiyon haline getirin: büyüme faktörü azaltılmış çözündürülmüş bazal membran hazırlığı eEngelbreth-Holm-Swarm (EHS) fare sarkomundan 1 x 10 7 hücre / mL konsantrasyonda çıkarıldı (Bkz . Malzeme Tablosu ).
- Anestezi uygulanmış alıcı dişi syngeneic fare ventral tarafı yerleştirin ve bir anestezi maskesi ile% 2 izofluran uygulayarak sürekli sedasyon altında korumak.
- Sağdaki 4. meme bezi enjeksiyon alanını aerosol haline getirilmiş% 70 etanol kullanarak sterilize edin ve steril bir pamuklu çubuk ile Poli (vinilpirolidon) -İyodan geçirin.
- 29 G 0.3 mL insülin şırıngası kullanılarak, 6 ila 10 haftalık dişi FVB / N fare temizlenmemiş sağ 4 meme bezine 100 uL (dondurulmuş primer tümör süspansiyonlardan, 1 x 10 6 canlı hücreler) konik yan enjekte edilir.
3. Ortotopik meme tümörünün cerrahi rezeksiyonu
- Tümör hücresi enjekte edildikten sonra 38-60 gün sonra, farelere hacim olarak 3 mm'lik 450-172 arasında [x uzunluğunda uzanan ortotopik tümör hacimleri arzetmeyen ötenazi (genişliği 2
- Bir anestezi maskesi ile% 2 izofluran uygulamak suretiyle sürekli sedasyon altında uygun tümör boyutu ventral tarafı gösteren anestezi uygulanmış fareler yerleştirin ve fare uygunsuz ayak tutam refleksiyle düzgün şekilde anestezi doğrulayın. Sedasyon sırasında kuruluğu önlemek için gözlere veteriner merhemi uygulayın.
- Primer tümörü çevreleyen cerrahi alanı sterilize etmek için% 70 etanol püskürtün, daha sonra bir steril pamuklu çubuk ile Poli (vinilpirolidon) -İyoden uygulayın.
NOT: Cerrahi bölgedeki epilasyon% 5 farelerde deri ekskoriasyonları ve / veya enfeksiyonlarla sonuçlanmıştır ve bu nedenle bu adımdan çıkarılmıştır (veriler gösterilmemiştir). - Şekil 1C'de gösterildiği gibi, tümörün medial-kaudal künt makas kullanılarak ilk cilt insizyonu yapın.
- Sonra, tümörün medialinde cildin üstün bir eksizyonu yapın ( Şekil 1C ). Herhangi bir vaskülatürü cauterize etme ihtiyacına dikkat edin.Insizyonu uzatmadan önce deride bulunan tümörü düzenleyebilir.
- Deri kesisini lateral olarak (tümörün posterioru) devam edin, daha sonra üstün bir deri eksizyonu (tümöre lateral) ve medial eksizyonu (tümöre üstün) ( Şekil 1C ) yapın.
- Cilt tümör çevresinde çevresel olarak eksize edildikten sonra ( Şekil 1C ), tümörü karın duvar kas sisteminden uzakta keserek ve meme bezlerini sağlam tutarak, forseps kullanarak tümörün üstündeki cildi kaldırın.
- (Künt diseksiyon ile) belirlenmesi ve 4 ve 5. meme bezlerinin içinden geçen büyük gemiler dağlamak.
- Tüketim yaklaşık tümör serbest dağlama sitesinde 4 ve 5. meme bezlerinin yarısı üzerinde bulunan deri ve meme bezleri (Şekil 1C) bölümleri.
- Kanama durumunda, aktif kanamayı tanımlayınGemileri derhal saklayın ve hemen onlara koterleyin. 250 μL'den fazla kan kaybederse, fareyi çalışmadan çıkarın ve euthanize edin.
- Yara klipleri ile yara klipi uygulayıcısı kullanarak eksizyon yerlerini kapatın ( Şekil 1C ).
NOT: Ameliyattan 10 gün sonra yara klipslerini bir yara klipsi çıkarıcı ile çıkartın. - Deri altı (hayvanin vücut ağırlığının% 4'ü) sıcak steril salin uygulayın ve hayvanı bir ısı lambası ile sıcak tutun. Anesteziden kurtulma işlemi sırasında 5-10 dakikada bir hayvanları kontrol edin.
NOT: Bupivakain veya lidokain uygulaması post-operatif mortaliteyi artırmıştır (veriler gösterilmemiştir). Ameliyattan 1 saat sonra ağrı belirtileri gösteren (ağrıyan, taşımak istemeyen, damat yapamayan) fareler ötenazi görmüştür.- Fareler tamamen kurtarıldıktan sonra, diğer farelerin şirketlerine geri gönderin.
Akım Sitometri ve Histoloji için Kan Akciğerinin İzolasyonu ve İşlenmesi
<ol>NOT: Dondurulmuş çözünmüş bromodeoksiuridin stokları, hazırlandıktan sonraki 1 ay içerisinde kullanılır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Daha MMTV PyMT farelerden türetilen primer meme tümörlerinden, 1 x 10 6 hücre alan alıcı farelerin% 75, daha 172 ila 450 mm3 38-60 içinde gün arasında değişen tek bir meme adenokarsinomu geliştirmek (veriler gösterilmemiştir). Daha sonra randomize edilmeye uygun olan fareler, gösterildiği gibi primer tümörlerin cerrahi rezeksiyonunu takiben çalışma gruplarına alınır ( Şekil 1C ). Primer tümör yeniden büyümesi, primer tümörün cerrahi rezeksiyonuna tabi tutulmuş farelerin% 2'sinden azında tespit edildi ( Ek Şekil 1 ). Bu protokol tarafından değerlendirilen alıcı farelerin% 45'i, tümör rezeksiyonundan 115 gün sonra histolojik olarak saptanabilir metastatik odak geliştirdi ( Şekil 1B ). H & E boyaması ile metastatik hücreler içeren metastazların histolojisini doğrulamak için komşu doku kesitleri PyMT PCR ile değerlendirildi (veri notuolarak gösterilmiştir).
Şekil 1 : Primer tümörlerin post-cerrahi rezeksiyonu ve de novo pulmoner metastaz gelişim . ( A ) Sıçan meme adenokarsinom metastaz modelinin deneysel şeması. †, östazinin yapıldığı gün tüm farelerin kardiyak perfüze edildiğini ve BrdU enjekte edildiğini gösterir. ( B ) Metastatik odakların belirlenmesinde FFPE akciğer dokusunun kesilip ayrılan loblar ile değerlendirildiği H & E temsilcisi. Metastatik odaklar (> 5 hücre) 1,300 μm doku yansıtan her 100 um'de H & E boyaması ile belirlendi. 11 fareden alınan akciğerler analiz edildi. ( C ) Primer meme tümörünün cerrahi rezeksiyon şeması. Kırmızı sayılar ve oklar cilt insizyonlarının sırasını ve yönünü belirtirPrimer tümör ile sınırla (solda). Büyük damarlar ile sağ 4 ve 5. meme bezleri, yara klipleri (sağ) ile yaranın kapatılması ve ardından Primer tümör (orta) takılı olarak gösterilmiştir. Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.
Şekil 2 : Akciğerin izolasyonu, perfüzyonu ve fiksasyonu. Resim (solda) ve ilgili karikatür (sağda) akciğer izolasyonu, perfüzyon ve fiksasyonla gösterilmiştir. (A) bir orta hat kesimi ek görüntü doğru 4. ve 5. meme bezleri (ok) maruz bırakılması geri çekilmiş cilt görüntülenmesi ile gösterilmiştir. ( B ) Diyaframa açılan karın duvarı gösterilir. ( C ) Geri çekildikten sonra oF bağırsağı, abdominal aorta (ok başı) tanımlanır ve kesilerek açılır. ( D ) Göğüs boşluğunu ortaya çıkarmak için kaburga kafesinin diyaframı ve yan tarafları kesilir. ( E ) Akciğer tamamen beyaza dönene kadar akciğer kalbin sağ ventrikülünden perfüze edilir ( F ). ( G ) Maruz kalan trakea belirlenir ve ardından akciğerler büyüdükçe trakea içine formalin ( H ) enjekte edilir ( I ). Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.
Tamamlayıcı Şekil 1 : Cerrahi bölgede primer tümör yeniden büyümesi. Örnek H & E (üst) ve geriye kalan sağ 4 ve 5. meme bezi ameliyat sonrası brüt (alt) görüntüleri, tu gösteren olmamasıInguinal lenf nodu ( AB ) ve meme bezi primer tümör büyümesi ( CE ) ile miyokard büyümesi. Bu rakamı indirmek için lütfen tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Değişiklikler ve sorun giderme:
Tümör karın duvarından uzak künt diseksiyon yaparken, tümör karın duvarına yapışmış kalabilir. Bu, tümör enjekte edilen farelerin <% 5'inde gözlenmiştir (veriler gösterilmemiştir). Karın duvarına yapışık tümörleri olan fareler için, fare, birincil tümör yeniden büyümesi olmaksızın rezeksiyon zor olduğu için ötenazi yapılmalıdır.
Model / teknik sınırlamaları:
Diğer araştırmacılar, MMTV-PyMT farelerinden 7 elde edilen meme terminal uç tomurcuklarının akciğer dışında yeniden implante edilmesini takiben akciğerin yanı sıra karaciğer, böbrek, dalak ve beyine yayılmış floresanla işaretlenmiş tekli metastatik hücrelerin varlığı rapor ettikleri halde, birkaç gözlemledik Karaciğerde metastatik odakları olan ve henüz penetrasyonu saptanmamış fareler. Lenf nodu gibi potansiyel metastatik yükün diğer siteleriDalak, kemik ve beyin değerleri değerlendirilmedi. Bu tekniğin bir kısıtlılığı cerrahi alan traş ederken post-operatif ekskoriasyonlar ve cildin enfeksiyonunu da içermektedir. Bu nedenle, cerrahi alanın sterilitesi,% 70 etanolün ardından Poli (vinilpirolidon) - İyot uygulaması ile sınırlıydı.
Protokol dahilinde kritik adımlar:
Tümörün karın duvarından uzakta künt disseksiyonu, meme bezi içindeki damarlardan kaçınılması gereken kritik bir adımdır (basamak 3.7). 3.8 ve 3.9 basamaklar da kontrol edilemeyen kanamalar için en büyük risk bulunduğu kritik adımlardır. Geminin kesilmemiş proksimal ve distal kısımları, kanayan kaynakları kolaylıkla görselleştirmek için koterizasyon sonrası belirlenmelidir.
Mevcut metotlara göre önemi:
İnsan kanseri modelini taklit eden fare modelleriProgresyon, kinetik ve histopatoloji, terapi için yeni hedefleri tanımlamak ve değerlendirmek için çok değerli araçlar sağlarken, aynı zamanda bu molekülleri / yolakları hedef alan yeni terapötik ajanların potansiyel etkililiğini de sağlar. Yerleşik kanserli hücre dizilerinin kuyruk-ven ve / veya kardiyak enjeksiyonu metastazın deneysel modelleri olarak sıklıkla kullanılırken, bunlar metastatik süreçteki kritik adımları tekrarlamayı başaramaz ve bunun yerine ektopik organ kolonizasyon tahlillerini yansıtmazlar, burada tümör hücresi yaşamının yönleri değerlendirilebilir 8 . Dahası, mevcut novo meme kanseri oluşumunda mevcut bazı transgenik fare modelleri, metastazda yer alan basamakların incelenmesini sağlayan model sistemleri sunarken, önemli birincil tümör yükü tipik olarak çalışma süresini sınırlar. Böylece, gruplar cerrahi rezeksiyona izin vermek için MMTV-PyMT primer tümörlerden türetilmiş kültürlü neoplastik hücreleri enjekte etti 9 . Yöntemimiz bu tekniklerden genişler;In vitro tümörlerden yetişen neoplastik hücre çizgileri için seçilmez ve doğrudan alıcı farelere komple, heterojen primer tümör getirir. Ek olarak, modelimizdeki akciğer metastaz formasyonunun uzun gecikmesi, çeşitli tedavi çalışmaları için daha iyi bir tedavi penceresi sağlar.
Gelecekteki uygulamalar:
Bu modellerde terapötiklerin etkililiğini değerlendirmek açısından primer tümörler tipik olarak bütün meme bezlerinde gelişir, tüm primer tümörlerin cerrahi rezeksiyonu ve metastatik kolonilerin büyümesini en aza indirmeyi amaçlayan tedavilerin adjuvan değerlendirilmesi mümkün değildir. Bu sorunlardan dolayı, tümör hücrelerinin metastatik yayılımının de novo olarak gerçekleştiği ve primer tümörün cerrahi rezeksiyonu sonrasında, akciğerdeki metastazın tanımlanmasına izin veren uzun bir latans peryodu oluşturulduğu metastatik yayılımın otonom modeli geliştirdik. Böylece, bu modelInsan göğüs kanseri metastazını yansıtır ve IACUC kılavuzlarına göre belirlenmiş son noktalarla hastalıksız sağkalımı ve / veya genel sağkalımı düzenleyen etki için adjuvan verilen tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için benzersiz bir sistem sağlar.
Meme kanseri olan kadınların büyük bir kısmının birinci tümörlerde 10 ve akabinde uzak metastaz geliştirmek ilerlemeye olanların cerrahi rezeksiyon ile tedavi edildiği için, bu yayma ve tohumlama öncelikle cerrahi rezeksiyon veya meydana geldiğini ima eder. Distal organ mikro ortamları, hayatta kalan ve / veya prolifere metastatik hücreler için benzersiz nişler sağlar 11 . Bu nedenle, model sistemlerinin, bu fasetleri taklit etmesi ve böylece primer tümörlerden farklı muhtemel moleküllerin ve yolların ikincil bölgelerde çalışabilmesi, bunların belirlenmesi, çalışılması ve bunları hedefleyen terapilerin etkinlik açısından doğru bir şekilde değerlendirilmesi gereklidir. Burada geliştirilen model, çalışma için bu yönleri sağlar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar burada sunulan verilerle çelişen herhangi bir açıklama yapmamıştır.
Acknowledgments
Yazarlar, histopatoloji yardımı için Jo Hill'e, ameliyat tekniği eğitimi için Dr. John Gleysteen'e, videografi yardımı için Tessa Diebel'e, eleştirel görüş ve tartışmalar için Wong ve Coussens laboratuvarlarının tüm üyelerine ve mali destek için OHSU Knight Cancer Institute'a teşekkür ederler. Yazarlar, T32GM071388-10 ve T32CA106195-11'den CEG'e, NCI / NIH'ye, Savunma Bakanlığı Göğüs Kanseri Araştırma Programı'na, Susan G Komen Vakfı'na, Meme Kanseri Araştırma Vakfı'na ve Bir Kansere Karşı Stand Up - Lustgarten Vakfına verdikleri desteği onaylarlar MHW'ye Vakfı Ödüllendiren Kadın Sağlığı Çemberi olan LMC'ye ve MHW'ye ve LMC'ye Brenden-Colson Pankreas Sağlığı Merkezi'ne Pankreas Kanseri Yakınsama Düşü Ekipleri Translasyonel Araştırma Granti (SU2C-AACR-DT14-14) verdi.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isofluorane | Piramal Healthcare | N/A | Prescription order |
| Collagenase A | Roche | 11088793001 | |
| DNase I | Roche | 10104159001 | |
| DMEM | ThermoFisher | 12634010 | |
| 25 mL Pyrex bottle | Sigma-Aldrich | CLS139525 | |
| Fetal Bovine Serum | Atlanta Bio | S11150 | |
| 0.7 µm nylon strainer | Corning | 352350 | |
| 50 mL conical tube | VWR | 89039-658 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma-Aldrich | D2650 | |
| Growth factor-reduced Matrigel | BD | 354230 | Growth factor-reduced solubilized basement membrane preparation extracted from the Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma |
| Poly(vinylpyrrolidone)–Iodine complex | Sigma-Aldrich | PVP1 | |
| 29 gauge 0.3 mL insulin syringe | BD | 324702 | |
| Small Vessel Cauterizer Kit | FST | 18000-00 | |
| Wound clips | Texas Scientific | 205016 | |
| AutoClip wound clip applier | BD | 427630 | |
| AutoClip wound clip remover | BD | 427637 | |
| Bromodeoxyuridine | Roche | 10280879 | |
| Heparinized capillary tubes | Fisher | 22362566 | |
| Microtainer tubes with dipotassium EDTA | BD | 365974 | |
| 20 mL syringe | BD | 309661 | |
| DPBS | Thermo-Fisher | 14190-250 | |
| OCT-freezing medium | VWR | 25608930 | |
| Formalin, Buffered, 10% (Phosphate Buffer) | Fisher | SF100-4 | |
| 23g needle | Fisher | 14-826-6B | |
| FVB/n mouse | Jackson Laboratories | 001800 |
References
- Fantozzi, A., Christofori, G. Mouse models of breast cancer metastasis. Breast Cancer Res. 8, 212 (2006).
- SEER Cancer Statistics Review 1975-2008. Howlader, N. N. A., Krapcho, M. , National Cancer Institute. Bethesda, MD. based on November 2010 SEER data submission, posted to the SEER web site. http://seer.cancer.gov/csr/1975_2008/ (2011).
- National Comprehensive Cancer Network. Breast Cancer (Version 3.2014). , Accessed November 25. http://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/breast.pdf (2016).
- Kataja, V., Castiglione, M., Group, E. G. W. Locally recurrent or metastatic breast cancer: ESMO clinical recommendations for diagnosis, treatment and follow-up. Ann Oncol. 19 Suppl 2, 11-13 (2008).
- Margolese, R. G., Hortobagyi, G. N., Buchholz, T. A., et al. Management of Metastatic Breast Cancer. Holland-Frei Cancer Medicine. Kufe, D. W., Pollock, R. E., Weichselbaum, R. R., et al. , 6th, BC Decker. Hamilton (ON). (2003).
- Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease. Mol Cell Biol. 12, 954-961 (1992).
- Kouros-Mehr, H., et al. GATA-3 links tumor differentiation and dissemination in a luminal breast cancer model. Cancer Cell. 13, 141-152 (2008).
- Minn, A. J., et al. Genes that mediate breast cancer metastasis to the lung. Nature. 436, 518-524 (2005).
- Qian, B. Z., et al. FLT1 signalling in metastasis-associated macrophages activates an inflammatory signature that promotes breast cancer metastasis. J Exp Med. 212 (9), 1433-1448 (2015).
- Verkooijen, H. M., et al. Patients' refusal of surgery strongly impairs cancer survival. Ann Surg. 242 (2), 276-280 (2005).
- Peinado, H., et al. Pre-metastatic niches: organ-specific homes for metastasis. Nat Rev Cancer. 17 (5), 302-317 (2017).
