מודלים פרה-קליניים המעריכים טיפול אדג'ובנטי למיקוד גרורות לסרטן השד נעדרים. כדי להתמודד עם זה, פיתחנו מודל Murine של novo ריאתי אדמוקרצינומה החלב ריאתי, שבו טיפולים שניתנו הגדרה אדג'ובנטית (כריתה כירורגית לאחר ניתוח) ניתן להעריך את היעילות להשפיע על גרורות בעבר ריאתי seeded.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
כירורגית נהלים ומתודולוגיה עבור מודל Murlin פרה קלינית של דה נובו גרורות סרטן החלב
במאמר זה
סיכום
תקציר
היבט מגביל קצב של מודלים של עכברים טרנסגניים של אדנוקרצינומה של החלב הוא שעומס הגידול הראשוני ברקמת החלב מגדיר בדרך כלל את נקודות הקצה של המחקר. לפיכך, מחקרים המתמקדים בהבהרת מנגנונים של גרורות דה נובו בשלב מאוחר נפגעים, כמו גם מחקרים הבוחנים את יעילותם של טיפולים אנטי-סרטניים המכוונים למתווכים של גרורות בסביבה האדג'ובנטית. מודלים רבים של סרטן שד בעכברים פותחו באמצעות ביטוי ממוקד של אונקופרוטאינים דומיננטיים לתאי אפיתל חלביים, והניבו מודלים המחקים באופן משתנה תת-סוגים של סרטן שד היסטופתולוגי וטרנסקריפטום הנפוצים בנשים 1. בעוד שהרבה נלמד לגבי הביולוגיה של סרטן החלב עם מודלים אלה, התועלת שלהם בזיהוי מולקולות המווסתות את הצמיחה של גרורות בשלב מאוחר נפגעת מכיוון שעכברים בדרך כלל מורדמים בנקודות זמן מוקדמות יותר עקב עומס גידול ראשוני משמעותי. יתרה מכך, מכיוון שאחוז ניכר מהנשים המאובחנות עם סרטן השד מקבלות טיפול משלים לאחר כריתה כירורגית של גידולים ראשוניים ולפני נוכחות מחלה גרורתית הניתנת לזיהוי, יש צורך דחוף במודלים פרה-קליניים של גרורות דה נובו כפלטפורמות להערכת טיפולים חדשים שמטרתם להתמקד במוקדים גרורתיים. כדי לטפל בחוסרים אלה, פיתחנו מודל עכברי של גרורות סרטן שד דה נובו, שבו גידולי שד ראשוניים נכרתים בניתוח, ומוקדים גרורתיים מתפתחים לאחר מכן במשך תקופה של 115 יום לאחר הניתוח. חביון ארוך זה מספק מודל ניתן למעקב לזיהוי מווסתים משמעותיים מבחינה תפקודית של התקדמות גרורתית בעכברים חסרי גידול ראשוני, כמו גם מודל להערכת יעילות טיפולית פרה-קלינית של חומרים שמטרתם לחסום מולקולות משמעותיות מבחינה תפקודית המסייעות להישרדות ולצמיחה של גידול גרורתי.
מבוא
לנשים בצפון אמריקה יש סיכון של 12% לכל החיים לפתח סרטן שד 2 ; רוב האנשים האלה יהיו גידולים ראשוניים הוסרו באמצעות ניתוח, ובהתאם לסוג הסרטן, לאחר מכן יקבלו טיפול ממוקד, אנדוקריני, כימותרפיה ו / או הקרנות בסביבה אדג'ובנטית 3 . דוגמאות לכך כוללות נשים המאובחנות בסרטן חיובי של קולטן הורמון המקבל טיפולים נגד אסטרוגן ונשים עם גידולים חיוביים ל- HER2 המקבלים טיפולים המבוססים על HER2 עם הקרנות / כימותרפיה, בעוד שאף טיפולים ממוקדים אינם זמינים עדיין לגידולים שליליים שליליים 3 . למרות ההתקדמות בקרינה, כימותרפיה, טיפולים מותאמים אישית והורמונים המשלימים כריתה כירו....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
בעלי חיים המשמשים בפרוטוקול הבא מכוסים על ידי אורגון הבריאות והמדע של אוניברסיטת טיפול בבעלי חיים מוסדיים ועדת שימוש (IACUC), אשר נועד להיות תואם את תקנות רווחת בעלי חיים מדיניות בריאות הציבור (PHS) מדיניות.
תחזוקה של תנאים סטריליים: מכשירים מעוקרים יש להשתמש בין העכברים, יש לנגב נקי עם גזה סטרילית, שטופים PBS ואחריו עיקור עם אתנול 70% מחטא במשך 15 דקות לפחות. כובע כירורגי, מסכת פנים, חלוק, כפפות צריך להיות משוחק עבור ניתוחים הישרדות. הכנה טרום אופרטיבית של החיה עבור ניתוחים הישרדות כלול בפרוטוקול הבא. עיין בטבלה 1 עבור רשימה של ריאגנטים וציוד.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
יותר מ 75% מהעכברים המקבלים שקיבלו 1 x 10 6 תאים מגידולי החלב העיקריים שנגזרו מעכברי MMTV-PyMT, פיתחו אדנוקרצינומות חד-פעמיות בגודל של 172 עד 450 מ"מ 3 בתוך 38-60 ימים (נתונים לא מוצגים). עכברים זכאים אקראיים נרשמות מכן לקבוצות מחקר לאחר כריתה כירורגית של גידולים ראשוניים כפי שמוצג ( איור 1 ג ). הגידול הראשוני הגידול זוהה פחות מ 2% של עכברים שעברו כריתה כירורגית של הגידול הראשוני (
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
שינויים ופתרון בעיות:
כאשר בוטה לנתח את הגידול במרחק של דופן הבטן, הגידול עשוי להישאר דבקים בדופן הבטן. זה נצפתה <5% של עכברים מוזרק גידול (נתונים לא מוצג). עבור עכברים עם גידולים הדבקים בקיר הבטן, העכבר צריך להיות מורדמים כמו כריתה קשה ללא בצמיחה מחודשת הגידול הראשוני.
מגבלות המודל / הטכניקה:
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין כל גילוי על סתירה לנתונים המוצגים כאן.
תודות
המחברים מודים לג'ו היל על סיוע בהיסטופתולוגיה, ד"ר ג'ון גלייסטין על הוראה בשיטות כירורגיות, טסה דייבל לסיוע בווידאו, כל חברי המעבדות של וונג וקוזנס על תובנות ודיונים ביקורתיים, ועל מכון OHSU Knight Cancer לתמיכה כספית. המחברים מאשרים תמיכה של T32GM071388-10 ו- T32CA106195-11 ל- CEG, NCI / NIH, המחלקה לחקר סרטן השד תוכנית המחקר, קרן סוזן ג 'קומן, הקרן לחקר סרטן השד וקרן לוסטיגרטן סרטן הלבלב התכנסות חלום צוות מענק מחקר תרגום (SU2C-AACR-DT14-14) ל LMC, מענק בריאות האישה של הענקת קרן MHW, ואת מרכז Brenden-Colson לבריאות הלבלב MHW ו LMC.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| Isofluorane | Piramal Healthcare | N/A | הזמנת מרשם |
| קולגנאז A | Roche | 11088793001 | |
| DNase I | Roche | 10104159001 | |
| DMEM | ThermoFisher | 12634010 | |
| 25 מ"ל בקבוק פיירקס | Sigma-Aldrich | CLS139525 | |
| סרום בקר עוברי | אטלנטה ביו | S11150 | |
| 0.7 ומיקרו; מסננת ניילון M | קורנינג | 352350 | |
| צינור חרוטי 50 מ"ל | VWR | 89039-658 | |
| דימתיל סולפוקסיד | סיגמא-אולדריץ' | D2650 | |
| מטריגל מופחת גורם גדילה | BD | 354230 | תכשיר קרום בסיס מסיס מופחת גורם גדילה המופק מסרקומה של עכבר אנגלברת-הולם-נחיל (EHS) |
| פולי (וינילפירולידון)– קומפלקס יוד | Sigma-Aldrich | PVP1 | |
| 29 מד 0.3 מ"ל מזרק אינסולין | BD | 324702 | |
| ערכת צריבה לכלי קטן | FST | 18000-00 | |
| קליפים פצועים | טקסס סיינטיפיק | 205016 | |
| AutoClip קליפ אפליקציה | BD | 427630 | |
| מסיר קליפ פצע AutoClip | BD | 427637 | |
| Bromodeoxyuridine | Roche | 10280879 | |
| צינורות נימים שעברו הפרין | פישר | 22362566 | |
| צינורות מיקרוטיינר עם דיפוטסיום EDTA | BD | 365974 | |
| 20 מ"ל | BD | 309661 | |
| DPBS | תרמו-פישר | 14190-250 | |
| מדיום הקפאה אוקטי | VWR | 25608930 | |
| פורמלין, חוצץ, 10% (מאגר פוספט) | פישר | SF100-4 | |
| 23 גרם מחט | פישר | 14-826-6B | |
| FVB/n עכבר | מעבדות ג'קסון | 001800 |
מקורות
- Fantozzi, A., Christofori, G. Mouse models of breast cancer metastasis. Breast Cancer Res. 8, 212(2006).
- SEER Cancer Statistics Review 1975-2008. Howlader, N. N. A., Krapcho, M. , National Cancer Institute. Bethesda, MD. based on November 2010 SEER data submission, posted to the SEER web site.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
