Summary
מודלים פרה-קליניים המעריכים טיפול אדג'ובנטי למיקוד גרורות לסרטן השד נעדרים. כדי להתמודד עם זה, פיתחנו מודל Murine של novo ריאתי אדמוקרצינומה החלב ריאתי, שבו טיפולים שניתנו הגדרה אדג'ובנטית (כריתה כירורגית לאחר ניתוח) ניתן להעריך את היעילות להשפיע על גרורות בעבר ריאתי seeded.
Introduction
לנשים בצפון אמריקה יש סיכון של 12% לכל החיים לפתח סרטן שד 2 ; רוב האנשים האלה יהיו גידולים ראשוניים הוסרו באמצעות ניתוח, ובהתאם לסוג הסרטן, לאחר מכן יקבלו טיפול ממוקד, אנדוקריני, כימותרפיה ו / או הקרנות בסביבה אדג'ובנטית 3 . דוגמאות לכך כוללות נשים המאובחנות בסרטן חיובי של קולטן הורמון המקבל טיפולים נגד אסטרוגן ונשים עם גידולים חיוביים ל- HER2 המקבלים טיפולים המבוססים על HER2 עם הקרנות / כימותרפיה, בעוד שאף טיפולים ממוקדים אינם זמינים עדיין לגידולים שליליים שליליים 3 . למרות ההתקדמות בקרינה, כימותרפיה, טיפולים מותאמים אישית והורמונים המשלימים כריתה כירורגית, המחלה חוזרת ב -30% -70% מהנשים המאובחנות עם מחלת שלב II או III 4 , מכיוון שהטיפולים אינם יעילים במידה רבה במיגור מחלות גרורות באיברים מרוחקים, כולל ריאה, עצם, bגשם ו / או כבד 5 . זה משמעותי במיוחד בהתחשב בכך שכאשר מחלת גרורות מתרחשת בהעדר גידול מחודש של הגידול, משמעות הדבר היא שתאים ממאירים מופצים היו קיימים כבר באיברים משניים בזמן הניתוח הסופי. לכן טיפולים מסוגלים לחסל או להאט את הצמיחה של גידולים גרורתיים נדרשים בדחיפות.
בעוד מודלים העכבר נובו של קרצינוגנזה החלב כבר אינפורמטיבי להפליא מנגנוני חשיפת ויסות התקדמות ניאופלסטית 1 , מודלים קיימים גם מספר מגבלות. אחד מהם הוא העובדה כי דה novo מודלים מהונדס בדרך כלל לפתח גידולים ראשוניים בבלוטות החלב מרובים, שבו הגידול הראשוני נטל מגבלות משך הלימודים. בעוד שתא הגידול העיקרי בתאי הזרע הגרורתי עשוי להתרחש מוקדם בהתקדמות ניאופלסטית במודלים אלו, התפתחות גלויה של גידולים גרמניים מתרחשת מאוחר,N את מודל העכבר ואת רקע זן, הוא לעתים קרובות חלקית החדירה 1 . זה עוד מגביל את התועלת של מודלים של נובו לגילוי של מולקולות המסדירות גרורות באיברים משניים, וכן להערכת יעילות פרה קלינית של טיפולים בסביבה adjuvant.
כדי לעקוף את המגבלות הללו, פיתחנו מודל נוטו autochthonous של גרורות קרצינומה החלב לריאות. אמהות מהונדסות מהונדס ( כלומר , MMTV-PyMT על רקע FVB / n זן למחקרים המתוארים כאן) הנושא בשלב מאוחר של גידולי החלב novo הם בגילאי ~ 100 ימים 6 , ובנקודה שבה גידולים העיקריים שלהם הם resected כירורגי ו ניתק באופן אנזימטי לתוך תא יחיד השעיות. השעיות (1 x 10 6 תאים) הם בתורו autantotopically explanted לתוך 6-7 בן מקבלי נקבה עכברים syngeneic, שבו אחד גידולי החלב העיקרית לפתח על 38-60 יום תקופה ( 3 ), עכברים מקבלים מורדמים וגידולים ראשוניים הם resected כירורגי כך לצמיחה מחודשת של הגידול באתר כירורגית ממוזער, עולה בקנה אחד עם ניתוח בנשים ( איור משלים 1 ). על רקע FVB / n זן, עכברים לפתח foci גרורתי היסטולוגית הריאות עם החדירה 45% על ידי ~ 115 ימים לאחר הניתוח ( איור 1 ב ). עם זמן חביון ממושך זה של גידול גידולי גרורתי, המודל ממוקם באופן ייחודי עבור מתן טיפול אדג'ובנטי, וכן להבהרה והערכת ביולוגיה בסיסית המשפיעים על התקדמות גרורת בעקבות הסרה כירורגית של גידולים ראשוניים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
בעלי חיים המשמשים בפרוטוקול הבא מכוסים על ידי אורגון הבריאות והמדע של אוניברסיטת טיפול בבעלי חיים מוסדיים ועדת שימוש (IACUC), אשר נועד להיות תואם את תקנות רווחת בעלי חיים מדיניות בריאות הציבור (PHS) מדיניות.
תחזוקה של תנאים סטריליים: מכשירים מעוקרים יש להשתמש בין העכברים, יש לנגב נקי עם גזה סטרילית, שטופים PBS ואחריו עיקור עם אתנול 70% מחטא במשך 15 דקות לפחות. כובע כירורגי, מסכת פנים, חלוק, כפפות צריך להיות משוחק עבור ניתוחים הישרדות. הכנה טרום אופרטיבית של החיה עבור ניתוחים הישרדות כלול בפרוטוקול הבא. עיין בטבלה 1 עבור רשימה של ריאגנטים וציוד.
1. בידוד והכנת תרחישי תא בודד מגידולי החלב הראשוניים
- להרדים נקבה התורם 100 יום מהונדס MMTV-PyMT (FVB / N) עכברים ולשמור תחת cעל ידי מתן 2% isoflurane באמצעות מסכה הרדמה. ודא כי העכבר הוא הרדים כראוי עם רפלקס הרגל לקוי הרגל.
- בסביבה סטרילית, לגזור את גידולי החלב העיקרי של 100 יום מהונדס נקבה נקבה MMTV-PyMT (FVB / N) עכברים על ידי הפרדת הגידול החלב מן העור מעל הרקמות השומן שמסביב ו / או בלוטות לימפה באמצעות מספריים סטריליים. להרדים את העכברים הרדים על ידי נקע בצוואר הרחם.
- במספריים סטריליים או באזמל מנתחים גידולים ראשוניים באופן ידני לחתיכות קטנות (~ 1.0 מ"מ 3 ). מקום חתיכות הגידול ב 3.0 מ"ג / מ"ל collagenase A ו 4.0 U / מ"ל DNase אני מומס DMEM. השתמש ~ 10 מ"ל של המדיום העיכול לעיל לכל 1.0 ס"מ קוטר הגידול.
- בצע עיכול בקבוק סטרילי 25 מ"ל עם סט מערבל סטרילי בסל"ד 125 ~ ו 37 מעלות צלזיוס למשך 40 דקות.
- עצור את העיכול על ידי הוספת בסרום עוברי בסרום (FBS) לדילול הסופי של 10% ומניחים את התערובת כולה על wוקרח שבו הוא מתוחזק.
- מסנן את ההשעיה הגידול מתעכל באמצעות מסננת ניילון 0.7 מיקרומטר לתוך צינור חרוטי 50 מ"ל וזורקים כל גידול שנותר מסננת. צנטריפוגה supernatant ב XG 300 ב 4 ° C.
- Resuspend גלולה ב 10 מ"ל DMEM לכל 1.0 ס"מ הגידול מחדש לסנן באמצעות מסננת ניילון 0.7 מיקרומטר. ספירת הריכוז התא, ואז צנטריפוגה ב XG 300 ב 4 ° C.
- Resuspend גלולה ב 10% דימתיל sulfoxide עם 90% FBS בריכוז של 2 x 10 7 תאים חיים / מ"ל. חנות השעיות תא בודד של הגידול הראשוני כולו ב -80 מעלות צלזיוס.
2. הזרקת אורתופטית של גידול החלב
- חלקית להפשיר קפוא המתלים הגידול הראשוני ב 37 ° C עד גלולה קפואה ניתן לשחרר מן הצינור cryogenic לתוך DMM 20 מ"ל לספור את התאים. צנטריפוגה ב XG 300 ב 4 מעלות צלזיוס תאים resuspend ב 1: 1 DMEM: גורם הצמיחה מופחת solobilized המרתף הממברנה הכנהXtracted מ Engelbreth-Holm- נחיל (EHS) סרקומה העכבר בריכוז של 1 x 10 7 תאים / מ"ל (ראה טבלה של חומרים ).
- מניחים את הרדיד הנמען הנשי סיניגני העכבר בצד הגחון מעלה ולשמור תחת הרגעה רציפה על ידי מתן 2% isoflurane באמצעות מסכה הרדמה.
- לעקר את הזכות הזרקה 4 בלוטת חלב באתר באמצעות אתנול 70% Aerosolized וליישם פולי (vinylpyrrolidone) - יוד עם ספוגית כותנה סטרילית.
- להזריק 100 μL (1 x 10 6 תאים חיים מן המתלים הקפואים הגידול הראשוני) שפוע בצד כלפי מעלה לתוך בלוטת החלב ימין לא ברור של 6 עד 10 בשבוע FVB / N העכבר בשבוע באמצעות מזרק 29 G 0.3 מ"ל אינסולין.
3. כריתה כירורגית של גידול חזה אורתופטי
- 38-60 ימים לאחר הזרקת תאים סרטניים, עכברים מורדמים לא מציגים כרכים גידול אורטוטופיים הנעים בין 172 ל 450 מ"מ 3 בנפח [אורך x (רוחב 2
- מניחים עכברים מורדמים הצגת גודל הגידול הנכון הגחון בצד תחת הרדמה מתמשכת על ידי מתן 2% isoflurane באמצעות מסכה הרדמה לאשר את העכבר הוא הרדים כראוי עם רפלקס הרגל לקוי הרגל. החל משחה וטרינר לעיניים למניעת יובש בזמן תחת סדיישן.
- ריסוס אתנול 70% לעקר את האזור כירורגית סביב הגידול הראשוני, ולאחר מכן להחיל פולי (vinylpyrrolidone) - יוד עם צמר גפן סטרילי.
הערה: הסרת שיער באתר הניתוח גרמה לעורקים ו / או לזיהומים בעכברים של 5%, ולכן לא נכללה בשלב זה (נתונים לא מוצגים). - כפי שמוצג בתרשים 1C , לעשות חתך ראשוני העור באמצעות מספריים קהה המדיאלי הזנב לגידול.
- לאחר מכן, לעשות כריתה מעולה של העור ( איור 1C ) המדיאלי לגידול. שים לב לצורך לצרוב כל כלי הדםהעורכים את הגידול הממוקם על העור לפני הארכת החתך.
- המשך חתך העור לרוחב (האחורי לגידול), ולאחר מכן לבצע חתך העור מעולה (לרוחב הגידול), כריתה המדיאלי (עדיף על הגידול) ( איור 1 ג ).
- לאחר העור כבר נכרת סביב סביב הגידול ( איור 1 ג ), להרים את העור המחובר לגידול באמצעות מלקחיים בעוד בוטה לנתח את הגידול הרחק את שרירי דופן דופן הבטן ולשמור על בלוטות החלב ללא פגע.
- זהה (על ידי דיסקציה קהה) ולליבון כלי גדול פועל באמצעות בלוטות החלב 4 וה 5 th.
- והבלו כמחצית בלוטות החלב 4 וה 5 th באתר צריבה לשחרר את הגידול, בעור שמעל, ומגזרי של בלוטות החלב (איור 1C).
- במקרה של דימום, לזהות דימום פעילכלי ומיד לצרוב אותם. אם יותר מ 250 μL של דם הוא איבד, להוציא את העכבר מן המחקר להרדים אותו.
- סגור אתרי כריתה עם קליפים הפצע באמצעות applier קליפ הפצע ( איור 1C ).
הערה: הסר את קליפי הפצע 10 ימים לאחר הניתוח עם מסיר קליפ הפצע. - ניהול מלוחים סטרילי חם תת עורית (4% ממשקל הגוף של החיה) ולשמור על החיה חם עם מנורת חום. בדוק את החיות כל 5-10 דקות במהלך ההתאוששות מן ההרדמה.
הערה: מינון של bupivacaine או לידוקאין העלה תמותה לאחר הניתוח (נתונים לא מוצגים). עכברים אשר הראו סימנים של כאב (בטן, לא מוכן לזוז, כישלון החתן) 1 שעות לאחר הניתוח היו מורדמים.- לאחר העכבר יש התאושש לחלוטין, להחזיר אותו לחברה של עכברים אחרים.
4. בידוד ועיבוד של דם וריאות עבור זרימת cytometry ו היסטולוגיה
<Ol>הערה: מלאי קפוא של bromodeoxyuridine מומס משמשים בתוך חודש לאחר ההכנה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
יותר מ 75% מהעכברים המקבלים שקיבלו 1 x 10 6 תאים מגידולי החלב העיקריים שנגזרו מעכברי MMTV-PyMT, פיתחו אדנוקרצינומות חד-פעמיות בגודל של 172 עד 450 מ"מ 3 בתוך 38-60 ימים (נתונים לא מוצגים). עכברים זכאים אקראיים נרשמות מכן לקבוצות מחקר לאחר כריתה כירורגית של גידולים ראשוניים כפי שמוצג ( איור 1 ג ). הגידול הראשוני הגידול זוהה פחות מ 2% של עכברים שעברו כריתה כירורגית של הגידול הראשוני ( איור משלים 1 ). 45% מהעכברים הנמענים מוערכים על ידי פרוטוקול זה פיתחו היסטולוגית גרורות לזיהוי היסטולוגית על ידי יום 115 שלאחר כריתה כריתה ( איור 1 ב ). כדי לאשר היסטולוגיה של גרורות באזורים מזוהים המכילים תאים גרורתיים על ידי H & E מכתים, סעיפים רקמה סמוכים הוערכו על ידי PyMT PCR (נתונים לאמוצג).
איור 1 : כריתה לאחר ניתוח של גידולים ראשוניים ופיתוח של גרורות ריאתי נובו דה . ( א ) סכימה ניסויית של גרעין Muren אדנוקרצינומה גרורות מודל. † מציין כי כל העכברים היו perfused לב והזריקו BrdU ביום המתת חסד. ( ב ) נציג H & E שבו איתור של foci גרורות הוערך על ידי חתך סדרתי של רקמת הריאות FFPE עם אונות מופרדות. Poci metastatic (> 5 תאים) נקבעו על ידי מכתים H & E כל 100 מיקרומטר המשקף 1,300 מיקרומטר של רקמות. הריאות מ 11 עכברים נותחו. ( ג ) סכימה של כריתה כירורגית של הגידול הראשוני החלב. מספרים וחצים אדומים מציינים את הסדר ואת הכיוון של חתכים בעורהגובל הגידול הראשוני (משמאל). הקלות TH התקין 4 ובלוטות חלב 5 th עם כלי מרכזי מוצגים מצורפים הגידול הראשוני (באמצע) ואחריו סגירת פצע עם קליפים פצע (מימין). אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 2 : בידוד, זלוף וקיבוע של הריאה. תמונה (משמאל) קריקטורה המקביל (מימין) מוצגים של בידוד ריאות, זלוף וקיבוע. (א) חתך קו אמצע מוצג עם תמונת שיבוץ מוצגת עור חזר בו חשיפת ה התקינה 4 ו 5 בלוטות חלב ה (חץ). ( ב ) קיר הבטן מוצג לסרעפת. ( ג ) לאחר ביטולהמעי הגס, אבי העורקים הבטן (ראש חץ) מזוהה וחתוכים. ( D ) הסרעפת ואת הצדדים לרוחב של כלוב צלעות נחתכים לחשוף את חלל החזה. ( ה ) הריאה היא perfused דרך החדר הימני של הלב עד הריאות להפוך לגמרי לבן ( F ). ( G ) קנה הנשימה חשוף מזוהה ואחריו הזרקת פורמלין ( H ) לתוך קנה הנשימה עד הריאות התרחבו ( אני ). אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.
תמונה משלימה 1 : גידול חוזר של הגידול הראשוני באתר הניתוח. נציג H & E (למעלה) ברוטו (תחתונה) תמונות של 4 וה 5 th נותרים התקין בלוטת חלב שלאחר הניתוח, מראה בהעדר tuמורחב מחדש עם בלוטות הלימפה ( א.ב. ) ו בלוטת החלב עם הגידול מחודש הגידול ( לסה"נ ). לחץ כאן כדי להוריד את הדמות הזו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
שינויים ופתרון בעיות:
כאשר בוטה לנתח את הגידול במרחק של דופן הבטן, הגידול עשוי להישאר דבקים בדופן הבטן. זה נצפתה <5% של עכברים מוזרק גידול (נתונים לא מוצג). עבור עכברים עם גידולים הדבקים בקיר הבטן, העכבר צריך להיות מורדמים כמו כריתה קשה ללא בצמיחה מחודשת הגידול הראשוני.
מגבלות המודל / הטכניקה:
בעוד חוקרים אחרים דיווחו על נוכחות של תאים גרמניים בודדים שכותרתם פלואורסצנטלי המופצים לכבד, לכליות, לטחול ולמוח, בנוסף לריאה, בעקבות השתלתם של ניצני קצה החלב הנובעים מעכברי MMTV-PyMT 7 , מלבד הריאות, ראינו מספר עכברים עם מוקדים גרורתיים בכבד, שעדיין לא נקבעה החדירה אליהם. אתרים אחרים של נטל גרסטי פוטנציאלי, כגון בלוטת הלימפהS, הטחול, העצם והמוח, לא הוערכו. מגבלה של טכניקה זו כללה גם לאחר הניתוח excoriations וזיהום של העור בעת גילוח האתר כירורגית. בגלל זה, סטריליות של אתר כירורגי היה מוגבל ליישום של אתנול 70% ואחריו פולי (vinylpyrrolidone) - יוד.
צעדים קריטיים במסגרת הפרוטוקול:
דיסקציה בוטה של הגידול הרחק מהקיר הבטן היא צעד קריטי (שלב 3.7) שבו הימנעות של כלי בתוך בלוטת החלב צריך להתבצע. צעדים 3.8 ו 3.9 הם גם צעדים קריטיים שבהם קיים הסיכון הגדול ביותר לדימום בלתי מבוקרת. החלקיקים הפרוקסיאליים והדיסטליים הלא מסודרים של כלי הדם צריכים להיות מזוהים לאחר צרוב כדי לדמיין בקלות את מקורות הדימום.
משמעות ביחס לשיטות הקיימות:
מודלים עכבר של סרטן האדם מחקים שלבי המחלההתקדמות, קינטיקה והיסטופתולוגיה מספקים כלים שלא יסולא בפז, בהם ניתן לזהות ולהעריך מטרות חדשות לטיפול, כמו גם יעילות פוטנציאלית של סוכנים טיפוליים חדשים המכוונים למולקולות / מסלולים אלו. בעוד הזנב הווריד ו / או הזרקת לב של תאים תאים סרטניים מבוססים משמשים לעתים קרובות מודלים ניסיוניים של גרורות, אלה אינם מצליחים לשחזר את השלבים הקריטיים בתהליך גרורתי, במקום משקפים אקטופי איברים קולוניזציה מבחני שבו היבטים של הישרדות תאים סרטניים ניתן להעריך 8 . יתר על כן, בעוד כמה מודלים מהונדס עכבר קיימים של פיתוח נוגדי סרטן החלב נובו לספק מערכות מודל המאפשר מחקר של השלבים המעורבים גרורות, נטל הגידול העיקרי משמעותי בדרך כלל מגביל את משך המחקר. לכן קבוצות הזריקו תאים נויפלסטיים תרבותיים נגזר MMTV-PyMT גידולים ראשוניים כדי לאפשר כריתה כירורגית 9 . השיטה שלנו מתרחבת מן הטכניקות האלה כמו זה דOes לא לבחור עבור שורות תאים ניאופלסטיים גדל מגידולים במבחנה ישירות מציג את הגידול הראשוני, הטרוגני העיקרי לעכברים הנמען. בנוסף, זמן ההשהיה הארוך של יצירת גרורות ריאות במודל שלנו מאפשר חלון טיפולי טוב יותר ללימודי טיפול שונים.
יישומים עתידיים:
באשר להערכת היעילות של טיפולים במודלים אלה, מכיוון שגידולים ראשוניים מתפתחים בדרך כלל בכל בלוטות החלב, לא ניתן לבצע כריתה כירורגית של כל הגידולים הראשוניים והערכה אדג'ובנטית של טיפולים שמטרתם לצמצם את הגידול של מושבות גרורות. בגלל בעיות אלה, פיתחנו מודל אוטוכתוני של הפצת גרורות, שבו הפצת גרורות של תאים סרטניים מתרחשת דה נובו , ולאחר כריתה כירורגית של הגידול הראשוני, תקופת חביון ממושכת היא הוקמה המאפשרת זיהוי של גרורות בריאה. לכן, מודל זהמשקפת את גרורות סרטן השד האנושי ומעניקה מערכת ייחודית להערכת היעילות של טיפולים אדג'ובנטיים הנשלחים על ההשפעה על הישרדות ללא מחלה ו / או הישרדות כוללת עם נקודות קצה מוגדרות לפי הנחיות IACUC.
מאז חלק גדול של נשים עם סרטן השד מטופלים על ידי כריתה כירורגית של גידולים ראשוניים 10 , ואלו ההתקדמות לאחר מכן לפתח גרורות דיסטלי, זה מרמז כי הפצה זרע אירעה לפני כריתה כירורגית. Microenvironments איברים דיסטלי לספק נישות ייחודיים לשרוד ו / או תאים גרורתיים מתרבים 11 . לכן, יש צורך במערכות מודל לחקות היבטים אלה, כך שמולקולות ומסלולים אופרטיביים באתרים משניים, אשר נבדלים ככל הנראה מן הגידולים הראשוניים, ניתן לזהות, למד, וטיפולים המכוונים אותם הערכה מדויקת ליעילות. המודל שפותח כאן מספק היבטים אלה לצורך מחקר.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
למחברים אין כל גילוי על סתירה לנתונים המוצגים כאן.
Acknowledgments
המחברים מודים לג'ו היל על סיוע בהיסטופתולוגיה, ד"ר ג'ון גלייסטין על הוראה בשיטות כירורגיות, טסה דייבל לסיוע בווידאו, כל חברי המעבדות של וונג וקוזנס על תובנות ודיונים ביקורתיים, ועל מכון OHSU Knight Cancer לתמיכה כספית. המחברים מאשרים תמיכה של T32GM071388-10 ו- T32CA106195-11 ל- CEG, NCI / NIH, המחלקה לחקר סרטן השד תוכנית המחקר, קרן סוזן ג 'קומן, הקרן לחקר סרטן השד וקרן לוסטיגרטן סרטן הלבלב התכנסות חלום צוות מענק מחקר תרגום (SU2C-AACR-DT14-14) ל LMC, מענק בריאות האישה של הענקת קרן MHW, ואת מרכז Brenden-Colson לבריאות הלבלב MHW ו LMC.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isofluorane | Piramal Healthcare | N/A | Prescription order |
| Collagenase A | Roche | 11088793001 | |
| DNase I | Roche | 10104159001 | |
| DMEM | ThermoFisher | 12634010 | |
| 25 mL Pyrex bottle | Sigma-Aldrich | CLS139525 | |
| Fetal Bovine Serum | Atlanta Bio | S11150 | |
| 0.7 µm nylon strainer | Corning | 352350 | |
| 50 mL conical tube | VWR | 89039-658 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma-Aldrich | D2650 | |
| Growth factor-reduced Matrigel | BD | 354230 | Growth factor-reduced solubilized basement membrane preparation extracted from the Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma |
| Poly(vinylpyrrolidone)–Iodine complex | Sigma-Aldrich | PVP1 | |
| 29 gauge 0.3 mL insulin syringe | BD | 324702 | |
| Small Vessel Cauterizer Kit | FST | 18000-00 | |
| Wound clips | Texas Scientific | 205016 | |
| AutoClip wound clip applier | BD | 427630 | |
| AutoClip wound clip remover | BD | 427637 | |
| Bromodeoxyuridine | Roche | 10280879 | |
| Heparinized capillary tubes | Fisher | 22362566 | |
| Microtainer tubes with dipotassium EDTA | BD | 365974 | |
| 20 mL syringe | BD | 309661 | |
| DPBS | Thermo-Fisher | 14190-250 | |
| OCT-freezing medium | VWR | 25608930 | |
| Formalin, Buffered, 10% (Phosphate Buffer) | Fisher | SF100-4 | |
| 23g needle | Fisher | 14-826-6B | |
| FVB/n mouse | Jackson Laboratories | 001800 |
References
- Fantozzi, A., Christofori, G. Mouse models of breast cancer metastasis. Breast Cancer Res. 8, 212 (2006).
- SEER Cancer Statistics Review 1975-2008. Howlader, N. N. A., Krapcho, M. , National Cancer Institute. Bethesda, MD. based on November 2010 SEER data submission, posted to the SEER web site. http://seer.cancer.gov/csr/1975_2008/ (2011).
- National Comprehensive Cancer Network. Breast Cancer (Version 3.2014). , Accessed November 25. http://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/breast.pdf (2016).
- Kataja, V., Castiglione, M., Group, E. G. W. Locally recurrent or metastatic breast cancer: ESMO clinical recommendations for diagnosis, treatment and follow-up. Ann Oncol. 19 Suppl 2, 11-13 (2008).
- Margolese, R. G., Hortobagyi, G. N., Buchholz, T. A., et al. Management of Metastatic Breast Cancer. Holland-Frei Cancer Medicine. Kufe, D. W., Pollock, R. E., Weichselbaum, R. R., et al. , 6th, BC Decker. Hamilton (ON). (2003).
- Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease. Mol Cell Biol. 12, 954-961 (1992).
- Kouros-Mehr, H., et al. GATA-3 links tumor differentiation and dissemination in a luminal breast cancer model. Cancer Cell. 13, 141-152 (2008).
- Minn, A. J., et al. Genes that mediate breast cancer metastasis to the lung. Nature. 436, 518-524 (2005).
- Qian, B. Z., et al. FLT1 signalling in metastasis-associated macrophages activates an inflammatory signature that promotes breast cancer metastasis. J Exp Med. 212 (9), 1433-1448 (2015).
- Verkooijen, H. M., et al. Patients' refusal of surgery strongly impairs cancer survival. Ann Surg. 242 (2), 276-280 (2005).
- Peinado, H., et al. Pre-metastatic niches: organ-specific homes for metastasis. Nat Rev Cancer. 17 (5), 302-317 (2017).
