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Cancer Research

폐암 표적 나노 입자와 광 역학 치료의 항암 효능

Published: December 1, 2016 doi: 10.3791/54865
Automatic Translation
1, 2, 1,3
1Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Seoul National University Bundang Hospital, 2College of Pharmacy, Kangwon National University, 3Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Seoul National University College of Medicine

Protocol

참고 : 모든 동물 연구 프로토콜 분당 서울 대학교 병원의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (BA1308-134 / 072-01)에 의해 승인되었다.

히알루 론산 - 세라마이드 1. 합성 (HACE)

  1. 이중 증류수 (DDW)를 60 ml의 테트라 n 개의 -butylammonium 수산화물 (TBA)의 12.21 히알루 론산 (HA) 올리고머 밀리몰 및 9.77 밀리몰 가용화. 30 분 동안 교반한다.
  2. 의 DS-Y30 링커를 합성 테트라 히드로 푸란 25 ㎖ (THF)에 트리 에틸 아민 8.59 DS-Y30의 세라마이드 밀리몰 및 9.45 밀리몰 용해합니다. THF에 4 chloromethylbenzoyl 클로라이드 8.59 밀리몰와 함께 섞는다. 60 ° C에서 6 시간 동안 교반한다.
  3. THF의 혼합물 및 아세토 니트릴 DS-Y30 링커의 합성 HA-TBA의 8.10 밀리몰와 0.41 밀리몰 용해 (4 : 1, v / v)로. 40 ° C에서 5 시간 동안 교반한다.
  4. 필터 제로 여과하여 불순물을 제거하고, 진공 증착법에 의해 유기 용매를 제거한다. (투석막을 이용하여 생성물을 정제하여분자량 컷 - 오프 : 3.5 kDa의)과 동결 건조.

나노 입자의 제조 2

  1. HB 1 mg을 디메틸 설폭 사이드 (DMSO)에 0.5 ml의 파클리탁셀 1 mg을 용해시키고 볼텍스 혼합하여 5 분 동안 DDW 0.5 ㎖의 혼합. 이어서, 추가의 5 분 동안 소용돌이 혼합하여 그 혼합물을 용해 HACE.
  2. 질소의 부드러운 흐름하에 4 시간 동안 70 ° C에서 용매, 열을 제거한다.
  3. DDW 1 mL로 HACE, HB 이루어지는 막 및 파클리탁셀을 재현 탁. 봉입 약물 제거 주사기 필터 (0.45 ㎛의 공극 크기)에 필터.

3. 체외 광독성

  1. 폐암 세포주에서의 나노 입자의 흡수
    1. RPMI-1640 배지를 함유 10 % (v / v)의 소 태아 혈청, 1 % (w / v)를 페니실린 - 스트렙토 마이신을 준비한다.
    2. 각 / 웰의 1 × 105 세포의 밀도로 24- 웰 세포 배양 플레이트에 시드 A549 세포 (삼중그룹). 가습 된 5 % CO 2 및 95 % 공기 분위기하에 37 ℃에서 24 시간 동안 인큐베이션.
    3. 세포 부착 후, 배지를 제거하고 인산 완충 식염수 (PBS) 1 ㎖를 첨가하여 세포를 세척 하였다.
    4. 2 μM / ㎖의 HB의 최종 농도로 PBS에 나노 입자를 녹인다. 그리고, 어두운 곳에서 4 시간 동안 각 웰에 PBS 빈 NP에, HB-NP에 또는 HB-P-NP에 1 ml의 세포를 배양한다.
    5. 용액을 모두 제거하고 차가운 PBS 1 ㎖를 첨가하여 세포를 세척 하였다. 한 번 더 세척 단계를 반복합니다. 신선한 문화 매체를 추가합니다.
  2. 세포 생존 분석
    1. PDT 섬유에서 세포 배양 접시를 놓습니다 (우물에 PDT 섬유에서 거리 1cm 포함). 레이저 안전 안경을 착용 다양한 시간에 대한 암의 PDT 레이저 (630 내지 400 mW의 / cm 2)로 세포를 밝히는 0, 5, 10, 20, 30 및 40 초 (0, 2, 4 8, 12 및 16 J / cm 2). 그리고, 어두운 곳에서 24 시간 동안 세포를 배양한다.
    2. 배지를 흡인하고 차가운 PBS 1 ㎖를 첨가하여 세포를 세척 하였다. 한 번 더 세척 단계를 반복합니다.
    3. 각 웰에 세포 독성 측정 용액 10 μl를 추가합니다. 2 시간 동안 어두운 데에서 인큐베이션.
    4. 마이크로 플레이트 리더를 사용하여 450 nm에서 흡광도를 측정한다.
  3. 현미경 분석
    1. PDT 섬유에서 세포 배양 접시를 놓습니다 (우물에 PDT 섬유에서 거리 1cm 포함). 레이저 안전 안경을 착용하고 0, 20, 또는 40 초 (0, 8, 16 J / cm 2)의 어둠 속에서 PDT 레이저 (630 nm의, 400 mW의 / cm 2)와 세포를 조명. 그리고, 어두운 곳에서 24 시간 동안 세포를 배양한다.
    2. 배지를 흡인하고 차가운 PBS 1 ㎖를 첨가하여 세포를 세척 하였다. 한 번 더 세척 단계를 반복합니다.
    3. 아 넥신 V-FITC의 50 μL, 4 ', 6-diamidino-2-페닐 인돌 (DAPI, / ㎖ 1.5 μg의) 50 μl를 추가합니다. 가볍게 흔들어 플레이트 어둠 속에서 실온에서 15 분 정도 배양한다.
      참고 : 넥신 V-FI를 사용하여형광 현미경 키트에서 TC.
    4. 차가운 PBS 1 ㎖를 첨가하여 세포를 세척 하였다. 한 번 더 세척 단계를 반복합니다. 신선한 PBS에 세포를 보관하십시오. 100X 배율 광학 현미경을 사용하여 세포 사멸 세포를 식별합니다.
  4. 형광 활성화 된 셀 정렬 (FACS) 분석
    1. PDT 섬유에서 세포 배양 접시를 놓습니다 (우물에 PDT 섬유에서 거리 1cm 포함). 레이저 안전 안경을 착용하고 0, 20, 또는 40 초 (0, 8, 16 J / cm 2)에 대한 PDT 레이저 (630 nm의, 400 mW의 / cm 2)와 세포를 조명. 그리고, 어두운 곳에서 24 시간 동안 세포를 배양한다.
    2. 배지를 흡인하고 차가운 PBS 1 ㎖를 첨가하여 세포를 세척 하였다. 한 번 더 세척 단계를 반복합니다.
    3. 및 전송 100 μL, 1 × 결합 완충액 1 ㎖로 세포를 재현 탁 (0.1 M 헤 페스 / 수산화 나트륨 (PH 7.4), 1.4 M의 NaCl, 25 mM의 CaCl2를 9 중량 부, 증류수 10 배 결합 완충액 1 부 희석) 5 ml의에 검액문화 튜브.
    4. 아 넥신 V-FITC의 5 μL 및 요오드화 프로피 듐 (PI)의 5 μl를 추가합니다. 조심스럽게 튜브를 와동과 어두운 데서 실온 (RT)에서 15 분 동안 배양한다. 1 × 바인딩 버퍼 400 μl를 추가합니다.
      참고 : 형광 현미경 키트에서 넥신 V-FITC와 PI를 사용합니다.
    5. FACS (14)를 사용하여 사멸 세포를 식별합니다. PI 및 아 넥신 V-FITC의 여기 레이저 라인은 각각 488 nm 내지 635 nm 인이다. 각각 610 ± 20 nm의 660 ± 20 nm에서 PI와 아 넥신 V-FITC의 형광 방출을 측정합니다. 10000 이벤트에 따라 유동 세포 계수기에 획득 한 세포를 수집합니다.

종양 함유 마우스 (4)에 생체 내 항암 효과

  1. 폐암 유도 마우스 모델
    1. 0.1 ㎖의 RPMI-1640 배지에 1 × 106 세포 A549를 준비; 얼음에 보관합니다.
    2. 자일 라진의 IP 주입 및 tiletamine 및 zolazepam ((1)의 혼합물로 생쥐를 마취 : 2, 1 ㎖ /킬로그램). 부드럽게 마우스 피부의 작은 배를 곤란하게하여 적절한 마취를 확인합니다. 마취 동안 건조를 방지하기 위해 눈에 수의사 연고를 사용합니다.
      주 : 사용 이동이 관찰되지 않은 경우, 동물 실험을 시작하기에 충분히 마취.
    3. (- 7 주, 20~22g 6) 피하 BALB / C 남성 누드 마우스의 왼쪽 측면에 세포를 주입한다.
    4. 그들은 새장 주위를 이동하기 시작 때까지 쥐를 관찰하십시오.
      참고 :이 흉골 드러 누움을 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 무인 동물을 두지 마십시오. 완전히 회복 될 때까지 다른 동물의 회사에 수술을 한 동물을 반환하지 않습니다. 특정 병원균이없는 (SPF) 상태에서 마우스를 유지합니다.
    5. 매일 캘리퍼스와 종양의 크기를 측정한다. 종양의 크기는 부피 약 200 mm 3에 도달 할 때, 실험을 시작 (폭 × 길이 2) / 2로 종양 체적 (mm 3)을 계산한다.
    6. 항암 효능 연구
      1. 무작위로 4 개의 그룹 (각 그룹 N = 10)로 쥐를 나눕니다.
      2. (2, 1 ㎖ / kg 1) 자일 라진의 IP 주입 및 tiletamine zolazepam과의 혼합물로 생쥐를 마취. 부드럽게 마우스 피부의 작은 배를 곤란하게하여 적절한 마취를 확인합니다. 마취 동안 건조를 방지하기 위해 눈에 수의사 연고를 사용합니다.
        주 : 사용 이동이 관찰되지 않은 경우, 동물 실험을 시작하기에 충분히 마취.
      3. 2 ㎎ / ㎖의 HB의 최종 농도로 PBS에 나노 입자를 녹인다. 두 번 일 0에서 7에 꼬리 정맥 (2 ㎎ / ㎏ HB)를 통해 PBS, 무료 HB, HB-NP에, 또는 HB-P-NPS를 주입한다.
      4. 그들은 새장 주위를 이동하기 시작 때까지 쥐를 관찰하십시오.
        참고 :이 흉골 드러 누움을 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 무인 동물을 두지 마십시오. 완전히 때까지 다른 동물의 회사에 수술을 한 동물을 반환하지 않습니다회복되었다. 어두운 특정 SPF 조건 하에서 새장을 유지합니다.
      5. (2, 1 ㎖ / kg 1) 24 시간 각각 주입 한 후, 자일 라진의 IP 주입 및 tiletamine zolazepam과의 혼합물로 생쥐를 마취. 부드럽게 마우스 피부의 작은 배를 곤란하게하여 적절한 마취를 확인합니다. 마취 동안 건조를 방지하기 위해 눈에 수의사 연고를 사용합니다.
        주 : 사용 이동이 관찰되지 않은 경우, 동물 실험을 시작하기에 충분히 마취.
      6. (종양의 PDT 섬유에서 거리 1cm 포함) PDT 섬유에서 종양 부위를 놓습니다. 레이저 안전 안경을 착용 스위치를 끄고, 두 번 일 1 8 500 초 (200 J / cm 2)에 대한 PDT 레이저 (630 nm의, 400 mW의 / cm 2)으로 종양을 조명.
      7. 그들은 새장 주위를 이동하기 시작 때까지 쥐를 관찰하십시오. 이 흉골 드러 누움을 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 무인 동물을 두지 마십시오. undergon이있는 동물을 반환하지 않습니다다른 동물의 회사에 전자 수술은 완전히 회복 될 때까지.
      8. SPF 조건에서 케이지를 유지합니다. 레이저 치료 후 24 시간 동안 어둠 속에서 새장을 유지한다.
      9. 시각 종양 부피 및 종양 부위에서 매일의 변화를 감시한다. 캘리퍼스와 종양의 크기를 측정하고 (폭 2 × 길이) / 2 (mm 3)로 볼륨을 계산합니다. PDT 후 종양 표면의 변화를 확인하기 위해 매일 종양 사이트의 사진을 촬영합니다.
      10. 날 16 일, 이소 플루 란을 사용하여 단말기 마취에 의해 그룹에 5 쥐를 희생.
      11. 집게와 가위, 외부 피부를 잘라 종양 (15)를 노출합니다. 조심스럽게 그들을 수확. 10 % 포르말린을 고정 파라핀을 포함하고, 조직 학적 분석을 16 헤 마톡 실린 및 에오신 (H & E)로 얼룩.
      12. 모니터링 45 일 후, 이소 플루 란을 사용하여 단말기 마취하여 나머지 쥐를 희생.

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Representative Results

우리는 상기 언급 된 기법 및 NP는 HB-HB-P-NP에 모두를 준비했다. HB-NP에와 HB-P-NP에의 평균 직경은 각각 220.9 ± 3.2 nm의 211.9 ± 1.6 nm이었다.

광 조사에 의해 다음 PBS 빈 NP에, HB-NP에 및 HB-P-NP에 함께 배양 4 시간 (0 J 16 / cm 2) 후의 A549 세포의 세포 생존율은 램프 없음.도 1에 도시되고 상기 HB-NP-P 처리 된 세포는 81.28 ± 0.14 %의 세포 생존율을 보였다 HB-NP 처리구는 전혀 세포 독성을 나타내지 않았다. 이 나노 입자로부터 방출 된 파클리탁셀의 항암 효과에 기인 할 수있다. PDT에서 세포 생존율은 HB-NP- 및 HB-P-NP가 처리 된 세포 모두의 노광 시간에 따라 감소 하였다. HB-NP-P 처리 된 세포는 동일한 조사 조건 HB-NP에 기 광독성보다 증가 하였다. 경우 16 J / cm 2 조사 주어진 하였다 세포의 7.52 ± 0.38 %는 HB-P-NP 치료군에서 살아남은.

일관된 결과는 아 넥신 V-FITC 염색 (그림 2)로 시각화 하였다. PDT에 의한 세포 사멸 세포는 녹색 형광을 발현하는, 아 넥신 V-FITC로 염색 하였다. 강한 녹색 형광 신호가 같은 조사 조건에서 HB-P-NP가 처리 된 세포에서 검출되었다.

PDT에 의한 세포 사멸 세포의 단계는 유동 세포 계측법에 의해 분류되었다. 아 넥신 V-FITC와 PI, 초기 사멸 세포 (만 넥신 V-FITC 긍정적)으로 이중 염색, 후반 사멸 세포 (넥신-V와 PI 긍정적 인 모두) 및 괴사 세포 (만 PI 긍정적)으로 구분 하였다. PDT 동일한 조건에서 늦은 사멸 세포의 부분은 HB-P-NP 투여군 (도 3)로 증가 하였다.

"fo를하기 : 유지-together.within 페이지를 ="1 "> 빛을 조사하여 다음 PBS, 무료 HB, HB-NP에, 그리고 HB-P-NP에 이중 정맥 주사 후 폐 종양 베어링 생쥐의 생체 내 종양 성장은 도 4에 도시. 종양 부위의 표면은 또한 조사 하였다 (도 5). HB-P-NP-처리 된 마우스는 출혈 및 괴사와 느린 종양 성장을 포함하여 빠른 반응을 나타내었다. 또한, 조직 학적 분석이 확인했다 가장 심각하게 손상된 암세포는 HB-P-NP 치료군에서 (도 6)이었다.

그림 1
그림 1. 시험관 광독성 A549 세포의 A549 세포를 PBS 빈 NP에, HB-NP에 또는 HB-P-NP에, 광 조사로 처리가 0, 5, 10, 20, 30 또는 40 초 동안 받았다 (0, 2, 4, 8, 12, 16 J / cm 2). t에서동일한 조사 시간 자신의 HB-P-NP 치료군은 HB-NP 치료군보다 광독성을 보였다. ± 표준 편차 값 수단으로서 표현 (SD를, N = 3). *** PBS를 처리 한 군과 비교하여 p <0.001. ## p <0.01 상기 HB-NP 투여군에 비해 ###을 p <0.001. 장 등. (10)에서 적응하는 것은 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 2
그림 2. 자멸 A549 세포의 현미경 분석 A549 세포를 PBS, HB-NP에 또는 HB-P-NP에 처리하고, 광 조사가 0 주어, 2 또는 4 J / cm 2. DAPI (파란색, 첫 번째 열)과 아 넥신 V-FITC (녹색, 두 번째 열)의 더블 얼룩은 핵을 나타냅니다및 사멸 세포, 각각. HB-NP-P 처리 된 세포는 훨씬 높은 광독성을 나타내는, 동일한 방사 조건으로 HB-NP-처리 한 세포보다 강한 녹색 형광 신호를 보였다. 스케일 바 = 200 μm의 배율 = 100X. 장 등. (10)에서 적응하는 것은 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 3
도 3. 자멸 A549 세포의 FACS 분석 A549 세포를 PBS, HB-NP에 또는 HB-P-NP에 처리하고, 광 조사가 0 주어, 2 또는 4 J / cm 2. 세포는 네 그룹. 내가) 모두 넥신 V-FITC- 및 PI-음성 세포로 분류 된 손상되지 않은, ⅱ) 넥신 V-FITC 양성과 PI-음성 세포로 간주됩니다있는 초기 세포 사멸, ⅲ) 넥신 V-FITC-과 PI 양성 세포가 모두 늦은 세포 사멸하고, ⅳ) 아 넥신 V-FITC 음성 및 PI 양성 세포가 어느 늦은 세포 사멸이나 괴사 있습니다. 현미경 분석에 따르면, 같은 조사 조건에서 HB-NP-P 처리 된 세포는 HB-NP-처리 한 세포보다 광독성을 보였고, 후반 사멸 세포 수준이 증가 하였다. 장 등. (10)에서 적응하는 것은 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 4
그림 4 :. A549 종양 베어링 마우스의 종양 볼륨 모니터링 일 0, 7, PBS의 이중 주사, 무료 HB, HB-NP에, 그리고 HB-P-NP에에서 시행 하였다. PDT (200 J / cm 2) perfor이었다의대 일일 각각 주입 한 후, 일 (1)과 (8)의 처리는 <HB-NP에 <HB-P-NP에 HB으로, 치료 효과의 다른 수준을 보였다. 45 일에, HB-P-NP에 치료 군은 상당히 다른 그룹에 비하여 종양 부피 감소를 나타내었다. ± 표준 편차 의미로 값이 제시되어있다 (SD를, N = 4). 종양 볼륨 (mm 3) (폭 2 × 길이) 장 등. (10)에서 적응 / 2로 정의 된 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 5
그림 5 :. A549 종양 베어링 마우스의 종양 사이트에 표면 수선은 종양 사이트는 두 번 정맥 주사 한 후 관찰 하였다 (일 0에서 7) PBS, 무료 HB, HB-NP에, 그리고 HB-의200 J 각 주입 후 / cm 2 광 조사 1 하루 P-NP에 (일 1, 8). HB-NP에와 HB-P-NP에 치료 그룹 모두 반응을 처음 PDT 다음날을 표시하기 시작했다. HB-P-NP에 투여군 심한 출혈 및 괴사의 빠른 발전을 보였다. 장 등. (10)에서 적응하는 것은 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 6
그림 6 :. A549 종양 베어링 마우스에서 종양 조직의 조직 학적 분석은 하루에 16 일, 조직 학적 확인 절제 종양 조직의 H & E 염색에 의해 수행되었다. HB-P-NP에 투여군은 가장 완전한 종양 세포 사멸을 보였다. 스케일 바 = 500 μm의 배율 = 40X. 장 등의 알에서 적응. (10) 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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Discussion

이 연구에서 가장 중요한 단계는 적절한 레이저 조건을 선택한다 : 파장, 전력 및 조사 시간. 구체적인 감광제에 적합한 조명의 적절한 파장은 PDT 필요하다. 우리는 출력 전력이 많은 파일럿 연구에 기초하여 400 mW의 / cm 2로 설정 한 다른 중요한 요인이었다 hypocrellin의 B. 적합한 선수 630 nm의 레이저를 사용 하였다. 400 mW의 / cm 2 이하의 출력 파워는 임의의 치료 효과를 표시하기에 너무 약한 동안 의한 조사 자체 (2)는 세포 또는 동물의 피부 표면을 손상 400 mW의 / cm를 초과하는 출력 전력. 생체 외 및 생체 내 연구에 적절한 조사 시간은 각각 40 초 (16 J / cm 2) 및 500 초 (200 J / cm 2)이었다. PDT 섬유로부터 세포 또는 동물 모델의 종양 조직으로의 거리가이 연구에서 중요한 요소이다. 로 전체 세포 또는 종양의 표면을 덮도록광은 1cm 최적 거리였다.

다른 감광제가 도포되는 경우, 빛의 적절한 파장의 사용은 PDT의 효율을 극대화 할 수있다. 출력 전력 및 조사 시간은 시행 착오를 통해 해결해야한다. 피부 표면은 광 조사 중에 연소 시작하면, 출력 전력은 낮게 설정한다. 종양의 표면은 PDT 후에 모든 날에 변화가 보이지 않고 때 출력 전력을 증가시킬 필요성을 나타낼 수있다.

이 방법은 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 타겟 PDT로 광섬유로부터의 거리가 중요한 요인이 연구되어 있지만 첫째, 그 균일 성을 확보하기 어렵다. 그것은 인간에 의해 제어되기 때문에 거리가 약간 다를 수 있습니다. 둘째, 이러한 폐 등의 장기의 종양을 갖는 동물 모델을 위해,이 프로토콜은 내시경 필요한 호흡 운동 불가피 때문에 적용하기 곤란하다.

수술 적 절제는 처음이지만폐암의 치료 옵션은 PDT 비 침습적 비수술 대체 요법 등 여러 가지 이점이있다. 동작은 여러 병변의 경우와 마찬가지로, 적합하지 않은 경우, PDT 유효한 옵션이 될 수있다. 또한, 수술 PDT 종양 크기를 감소시키고 수술 (17)의 정도를 줄일 수있다. 수술, 방사선 치료, 또는 기관지 강내에 비해 PDT 적은 부작용을 갖는다. 또한, PDT는 방사선 요법 또는 화학 요법 (18)에 저항을 제공 돌연변이 무관하다.

본 연구에서는 PDT위한 새로운 감광제 전달체로서 photosensitizer- 항암 약물 봉입 폐암 타겟 나노 입자를 모두 제안했다. 이러한 개념은 다른 감광제 및 항암 약물에 적용될 수있다.

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Acknowledgments

본 연구는 보조금없이 의해 지원되었다. SNUBH 연구 기금 14-2014-017.

저자는이 원고의 자신의 프로 보노 편집 J. 패트릭 배런, 명예 교수, 도쿄 의과 대학 겸임 교수, 분당 서울 대학교 병원 신세를하고 있습니다.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
oligo hyaluronic acid Bioland Co., Ltd. _
DS-Y30 (ceramide 3B; mainly N-oleoyl-phytosphingosine) Doosan Biotech Co., Ltd. _
adipic acid dihydrazide Sigma Aldrich A0638
N-(3-dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide Sigma Aldrich 39391
4-(chloromethyl)benzoyl chloride Sigma Aldrich 270784
Tween 80 Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. T0546
syringe filter Sartorius Stedim Biotech GmbH 17762 15 mm, RC, PP, 0.45 µm
triethylamine Sigma Aldrich T0886
Mini-GeBAflex tubes Gene Bio-Application Ltd. D070-12-100
Paclitaxel Taihua Corporations _
RPMI-1640 Gibco Life Technologies, Inc. 11875
Penicillin–streptomycin Gibco Life Technologies, Inc. 15070
Fetal bovine serum Gibco Life Technologies, Inc. 16140071
Celite (Filter agent) Sigma Aldrich 6858 See step 1.4

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References

  1. Shang, L., Zhou, N., Gu, Y., Liu, F., Zeng, J. Comparative study on killing effect of esophageal cancer cell line between hypocrellin B-photodynamic therapy and hematoporphyrin derivative-photodynamic therapy. Chin J Cancer Prev Treat. 12, 1139-1142 (2005).
  2. Huisman, C., et al. Paclitaxel triggers cell death primarily via caspase-independent routes in the non-small cell lung cancer cell line NCI-H460. Clin Cancer Res. 8 (2), 596-606 (2002).
  3. Dolmans, D. E., Fukumura, D., Jain, R. K. Photodynamic therapy for cancer. Nat Rev Cancer. 3 (5), 380-387 (2003).
  4. Pass, H. I. Photodynamic therapy in oncology: mechanisms and clinical use. J Natl Cancer Inst. 85 (6), 443-456 (1993).
  5. Sutedja, T. G., Postmus, P. E. Photodynamic therapy in lung cancer. A review . J. Photochem. Photobiol. 36 (2), 199-204 (1996).
  6. Peng, C. L., Shieh, M. J., Tsai, M. H., Chang, C. C., Lai, P. S. Self-assembled star-shaped chlorin-core poly(epsilon-caprolactone)-poly(ethylene glycol) diblock copolymer micelles for dual chemo-photodynamic therapies. Biomaterials. 29 (26), 3599-3608 (2008).
  7. Chen, B., Pogue, B. W., Hasan, T. Liposomal delivery of photosensitising agents. Expert Opin Drug Deliv. 2 (3), 477-487 (2005).
  8. Lee, S. J., et al. Comparative study of photosensitizer loaded and conjugated glycol chitosan nanoparticles for cancer therapy. J Control Release. 152 (1), 21-29 (2011).
  9. Chang, J. E., et al. Anticancer efficacy of photodynamic therapy with hematoporphyrin-modified, doxorubicin-loaded nanoparticles in liver cancer. J. Photochem. Photobiol. 140, 49-56 (2014).
  10. Chang, J. E., Cho, H. J., Yi, E., Kim, D. D., Jheon, S. Hypocrellin B and paclitaxel-encapsulated hyaluronic acid-ceramide nanoparticles for targeted photodynamic therapy in lung cancer. J. Photochem. Photobiol. 158, 113-121 (2016).
  11. Wang, A. Z., Langer, R., Farokhzad, O. C. Nanoparticle delivery of cancer drugs. Annu. Rev. Med. 63, 185-198 (2012).
  12. Matsumura, Y., Maeda, H. A new concept for macromolecular therapeutics in cancer chemotherapy: mechanism of tumoritropic accumulation of proteins and the antitumor agent smancs. Cancer Res. 46 (12 Pt 1), 6387-6392 (1986).
  13. Penno, M. B., et al. Expression of CD44 in human lung tumors. Cancer Res. 54 (5), 1381-1387 (1994).
  14. Wilkins, R., Kutzner, B., Truong, M., Sanchez-Dardon, J., McLean, J. Analysis of radiation-induced apoptosis in human lymphocytes: Flow cytometry using Annexin V and propidium iodide versus the neutral comet assay. Cytometry. 48 (1), 14-19 (2002).
  15. Bannas, P., et al. Validation of nanobody and antibody based in vivo tumor xenograft NIRF-imaging experiments in mice using ex vivo flow cytometry and microscopy. J Vis Exp. (98), e52462 (2015).
  16. Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. Cold Spring Harbor Protocols. (5), (2008).
  17. Lam, S. Photodynamic therapy of lung cancer. Semin Oncol. 21 (6 Suppl 15), 15-19 (1994).
  18. Simone, C. B. 2nd, et al. Photodynamic therapy for the treatment of non-small cell lung cancer. J Thorac Dis. 4 (1), 63-75 (2012).

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암 연구 문제 (118) 광 역학 치료 나노 입자 폐암 광독성 A549 BALB / C 누드 마우스
폐암 표적 나노 입자와 광 역학 치료의 항암 효능
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Chang, J. E., Cho, H. J., Jheon, S.… More

Chang, J. E., Cho, H. J., Jheon, S. Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles. J. Vis. Exp. (118), e54865, doi:10.3791/54865 (2016).

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