Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Cancer Research
Click here for the English version

Cancer Research

Anticancer Effekten av fotodynamisk terapi med lungcancer-Targeted Nanopartiklar

Published: December 1, 2016 doi: 10.3791/54865
Automatic Translation
1, 2, 1,3
1Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Seoul National University Bundang Hospital, 2College of Pharmacy, Kangwon National University, 3Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Seoul National University College of Medicine

Protocol

OBS: Alla djurstudieprotokoll godkändes av Institutional Animal Care och användning kommittén i Seoul National University Bundang Hospital (BA1308-134 / 072-01).

1. Syntes av hyaluronsyra-ceramid (HACE)

  1. Solubilisera 12,21 mmol av hyaluronsyra (HA) oligomer och 9,77 mmol av tetra-n-hydroxid (TBA) i 60 ml dubbeldestillerat vatten (DDW). Rör om under 30 min.
  2. Att syntetisera DS-Y30 linker, upplösa 8,59 mmol av DS-Y30 ceramid och 9,45 mmol trietylamin i 25 ml tetrahydrofuran (THF). Blanda med 8,59 mmol av 4-klormetylbensoylklorid i THF. Rör om under 6 h vid 60 ° C.
  3. Upplösa den syntetiserade 8,10 mmol av HA-TBA och 0,41 mmol av DS-Y30-linker i en blandning av THF och acetonitril (4: 1, vol / vol). Rör om under 5 h vid 40 ° C.
  4. Avlägsna orenheter genom att filtrera med ett filter medel, och eliminera det organiska lösningsmedlet genom vakuumindunstning. Rena produkten med användning av ett dialysmembran (molekylvikt cut-off: 3,5 kDa) och lyofilisera.

2. Beredning av nanopartiklar

  1. Lös upp 1 mg av HB och ett mg paklitaxel i 0,5 ml dimetylsulfoxid (DMSO) och blanda med 0,5 ml DDW genom vortex-blandning under 5 min. Då, solubilisera HACE i blandningen genom vortex-blandning under ytterligare 5 min.
  2. För att eliminera lösningsmedlet, värm vid 70 ° C under 4 h under en svag ström av kvävgas.
  3. Suspendera filmen består av HACE, HB, och paklitaxel med 1 ml DDW. Filter med en sprutfilter (0,45 fim porstorlek) för att avlägsna oinkapslade läkemedel.

3. In vitro Fototoxicitet

  1. Upptag av nanopartiklar i lungcancercellinjer
    1. Förbereda RPMI-1640-medium innehållande 10% (volym / volym) fetalt bovint serum och 1% (vikt / volym) penicillin-streptomycin.
    2. Utsäde A549-celler i 24-brunnars cellodlingsplattor vid en densitet av 1 x 10 5 celler / brunn (triplikat för varjegrupp). Inkubera i 24 h vid 37 ° C i en fuktad 5% CO2 och 95% luftatmosfär.
    3. Efter cellvidhäftning, avlägsna mediet och tvätta cellerna genom att tillsätta 1 ml fosfatbuffrad saltlösning (PBS).
    4. Upplösa nanopartiklar i PBS till en slutlig koncentration av 2 | iM / ml HB. Därefter inkubera cellerna med 1 ml PBS, tomma NP, HB-NP, eller HB-P-NP i varje brunn under 4 timmar i mörker.
    5. Avlägsna allt av lösningen och tvätta cellerna genom att tillsätta 1 ml kall PBS. Upprepa tvättsteget än en gång. Lägg till färskt odlingsmedium.
  2. Cellviabilitet assay
    1. Placera cellodlingsplattan under PDT fiber (med 1 cm avstånd från PDT fiber till brunnen). Bär laserskyddsglasögon och belysa cellerna med en PDT laser (630 nm, 400 mW / cm 2) i mörker under olika tidsperioder: 0, 5, 10, 20, 30, och 40 sek (0, 2, 4 , 8, 12, och 16 J / cm 2). Därefter inkubera cellerna under 24 h i mörker.
    2. Aspirera mediet och tvätta cellerna genom att tillsätta 1 ml kall PBS. Upprepa tvättsteget än en gång.
    3. Tillsätt 10 | il av cytotoxicitet mätningslösning till varje brunn. Inkubera i mörker i två timmar.
    4. Mät absorbansen vid 450 nm med användning av en mikroplattläsare.
  3. mikroskopisk analys
    1. Placera cellodlingsplattan under PDT fiber (med 1 cm avstånd från PDT fiber till brunnen). Bär laserskyddsglasögon och belysa cellerna med PDT laser (630 nm, 400 mW / cm 2) i mörker under 0, 20, eller 40 sekunder (0, 8, eller 16 J / cm 2). Därefter inkubera cellerna under 24 h i mörker.
    2. Aspirera mediet och tvätta cellerna genom att tillsätta 1 ml kall PBS. Upprepa tvättsteget än en gång.
    3. Tillsätt 50 pl av annexin V-FITC och 50 fil av 4 ', 6-diamidino-2-fenylindol (DAPI, 1,5 | ig / ml). Skaka försiktigt plattan och inkubera det i 15 min vid rumstemperatur i mörker.
      OBS: Använd annexin V-FITC från fluorescensmikroskop kit.
    4. Tvätta cellerna genom att tillsätta 1 ml kall PBS. Upprepa tvättsteget än en gång. Hålla cellerna i färskt PBS. Identifiera apoptotiska celler med hjälp av Ijusmikroskopi vid 100X förstoring.
  4. Fluorescensaktiverad cellsortering (FACS) -analys
    1. Placera cellodlingsplattan under PDT fiber (med 1 cm avstånd från PDT fiber till brunnen). Bär laserskyddsglasögon och belysa cellerna med PDT laser (630 nm, 400 mW / cm2) för 0, 20, eller 40 sekunder (0, 8, eller 16 J / cm 2). Därefter inkubera cellerna under 24 h i mörker.
    2. Aspirera mediet och tvätta cellerna genom att tillsätta 1 ml kall PBS. Upprepa tvättsteget än en gång.
    3. Resuspendera cellerna i 1 ml 1 x bindningsbuffert (utspädd 1 del av 10 x bindningsbuffert; 0,1 M Hepes / NaOH (pH 7,4), 1,4 M NaCl och 25 mM CaCl2 till 9 delar destillerat vatten) och överföring 100 pl av provlösningen till en 5-mlodlingsrör.
    4. Tillsätt 5 pl annexin V-FITC och 5 pl propidiumjodid (PI). Vortexa försiktigt röret och inkubera i 15 min vid rumstemperatur (RT) i mörker. Tillsätt 400 | il av en × bindningsbuffert.
      OBS: Använd annexin V-FITC och PI från fluorescensmikroskop kit.
    5. Identifiera apoptotiska celler genom att använda FACS 14. De exciteringslaserlinjer av PI och annexin V-FITC är 488 nm och 635 nm, respektive. Mät fluorescensemissionen av PI och annexin V-FITC vid 610 ± 20 nm och 660 ± 20 nm, respektive. Samla förvärvade cellerna på flödescytometern per 10.000 händelser.

4. In vivo cancer effekt i tumörbärande möss

  1. Lungcancer-inducerad musmodell
    1. Förbereda 1 x 10 6 A549-celler i 0,1 ml RPMI-1640-medium; hålla den i is.
    2. Söva möss med en ip-injektion av en xylazin och en blandning av tiletamin och zolazepam (1: 2, 1 ml /kg). Bekräfta korrekt anesthetization genom att försiktigt klämma en liten veck av mushud. Använd veterinär salva på ögonen för att förhindra torrhet under narkos.
      OBS: Om ingen rörelse observeras är tillräckligt bedövad att starta experimenten djuret.
    3. Injicera cellerna subkutant i den vänstra flanken av BALB / C manliga nakna möss (6 - 7 veckor gamla, 20-22 g).
    4. Håll observera mössen tills de börjar att flytta runt i buren.
      OBS: Lämna inte ett djur utan tillsyn tills den har återfått tillräcklig medvetenhet för att upprätthålla sternala VILA. Skicka inte tillbaka ett djur som har opererats för sällskap med andra djur förrän den har återhämtat sig helt. Håll mössen under specifika patogenfria (SPF) förhållanden.
    5. Mäta tumörstorleken med passare varje dag. Beräkna tumörvolymen (mm 3) som (längd x bredd 2) / 2. När tumörstorleken når ca 200 mm 3 i volym, starta experimentet.
    6. Anticancer effektivitetsstudie
      1. Slumpmässigt dela upp mössen i 4 grupper (n = 10 för varje grupp).
      2. Söva möss med en ip-injektion av en xylazin och en blandning av tiletamin och zolazepam (1: 2, 1 ml / kg). Bekräfta korrekt anesthetization genom att försiktigt klämma en liten veck av mushud. Använd veterinär salva på ögonen för att förhindra torrhet under narkos.
        OBS: Om ingen rörelse observeras är tillräckligt bedövad att starta experimenten djuret.
      3. Upplösa nanopartiklar i PBS till en slutkoncentration av 2 mg / ml HB. Injicera PBS, fri HB, HB-NP, eller HB-P-NP via svansvenen (2 mg / kg som HB) två gånger på dag 0 och 7.
      4. Håll observera mössen tills de börjar att flytta runt i buren.
        OBS: Lämna inte ett djur utan tillsyn tills den har återfått tillräcklig medvetenhet för att upprätthålla sternala VILA. Skicka inte tillbaka ett djur som har opererats för sällskap med andra djur tills den är heltutvanns. Håll burarna mörk och under specifika SPF förhållanden.
      5. 24 h efter varje injektion, söva mössen med en ip-injektion av en xylazin och en blandning av tiletamin och zolazepam (1: 2, 1 ml / kg). Bekräfta korrekt anesthetization genom att försiktigt klämma en liten veck av mushud. Använd veterinär salva på ögonen för att förhindra torrhet under narkos.
        OBS: Om ingen rörelse observeras är tillräckligt bedövad att starta experimenten djuret.
      6. Placera tumörstället under PDT fiber (med 1 cm avstånd från PDT fiber till tumören). Bär laserskyddsglasögon, slå av strömbrytaren, och belysa tumören med en PDT laser (630 nm, 400 mW / cm2) för 500 sek (200 J / cm 2) två gånger på dag 1 och 8.
      7. Håll observera mössen tills de börjar att flytta runt i buren. Lämna inte ett djur utan tillsyn tills den har återfått tillräcklig medvetenhet för att upprätthålla sternala VILA. Skicka inte tillbaka ett djur som har undergone operation för att bolaget av andra djur tills återhämtat sig helt.
      8. Håll burar enligt SPF förhållanden. Bibehålla burarna i mörker under 24 h efter laserbehandling.
      9. Visuellt övervaka tumörvolymen och förändringarna vid tumörstället varje dag. Mäta tumörstorleken med skjutmått, och beräkna volymen som (längd x bredd 2) / 2 (mm 3). Ta bilder av tumör platser varje dag för att kontrollera tumör ytförändringar efter PDT.
      10. På dag 16, offra fem möss per grupp av terminal anestesi använder isofluran.
      11. Med pincett och sax, klippa det yttre skalet och exponera tumörerna 15. Noggrant skörda dem. Fixera dem i 10% formalin, bädda in dem i paraffin, och ge fläckar dem med hematoxylin och eosin (H & E) för histologisk analys 16.
      12. Efter 45 dagar av övervakning, offra de återstående möss genom terminal anestesi använder isofluran.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Vi förberedde både HB-NP och HB-P-NP med de tekniker som nämns ovan. De genomsnittliga diametrarna av HB-NP och HB-P-NP var 220,9 ± 3,2 nm och 211,9 ± 1,6 nm, respektive.

Cellviabiliteten av A549-celler efter 4 h av inkubering med PBS, tomma NP, HB-NP, och HB-P-NP följt av ljusbestrålning (0-16 J / cm 2) visas i figur 1. Utan ljus, den HB-NP-behandlingsgruppen uppvisade ingen cytotoxicitet alls, medan HB-P-NP-behandlade celler uppvisade 81,28 ± 0,14% cellviabilitet. Detta kan bero på att anticancer-effekten av paklitaxel, som släpptes från nanopartiklarna. Enligt PDT, var cellviabiliteten reduceras i enlighet med den ljusexponeringen tid i både HB-NP och HB-P-NP-behandlade celler. De HB-P-NP-behandlade celler visade ökad fototoxicitet än HB-NP grupp under samma bestrålningsbetingelser. När 16 J / cm2 av bestrålning gavs, överlevde endast 7,52 ± 0,38% av cellerna i HB-P-NP behandlingsgrupp.

De konsekventa resultat visualiserades med annexin V-FITC färgning (Figur 2). PDT-inducerade apoptotiska celler färgades med annexin V-FITC, uttrycker grön fluorescens. Den starkaste grön fluorescens-signal detekterades i HB-P-NP-behandlade celler under samma bestrålningsbetingelser.

Stegen i PDT-inducerade apoptotiska celler klassificerades genom flödescytometri. Genom att dubbelfärgning med annexin V-FITC och PI, tidiga apoptotiska celler (endast annexin V-FITC positiv), sen apoptotiska celler (både annexin-V och PI positiv) och nekrotiska celler (endast PI positiva) var framstående. Under samma PDT-förhållanden, var den del av sena apoptotiska celler ökade i HB-P-NP-behandlade gruppen (Figur 3).

"Fo: keep-together.within-page =" 1 "> In vivo tumörtillväxt i lungtumörbärande möss efter dubbel intravenös injektion av PBS, fri HB, HB-NP, och HB-P-NP följt av ljusbestrålning är visas i figur 4. ytorna hos tumörsätena undersöktes också (figur 5). de HB-P-NP-behandlade möss visade de snabbaste reaktionerna, inklusive hemorragi och nekros, och den långsammaste tumörtillväxt. Vidare bekräftade histologisk analys av de flesta allvarligt skadade tumörceller var i HB-P-NP-behandlingsgruppen (Figur 6).

Figur 1
Figur 1:. In vitro Fototoxicitet av A549-Celler A549-celler behandlades med PBS, tomma NP, HB-NP, eller HB-P-NP, och ljusbestrålning gavs för 0, 5, 10, 20, 30, eller 40 sek (0, 2, 4, 8, 12, eller 16 J / cm 2). Under than samma bestrålning tid, HB-P-NP behandlingsgruppen uppvisade högre fototoxicitet än HB-NP behandlingsgrupp. Värden uttrycks som medelvärden ± standardavvikelser (SD, n = 3). *** P <0,001, jämfört med den PBS-behandlade gruppen. ## P <0,01, ### p <0,001, jämfört med HB-NP behandlingsgrupp. Anpassad från Chang et al. 10 Klicka här för att se en större version av denna siffra.

figur 2
Figur 2:. Mikroskopisk analys av apoptotiska A549-celler A549-celler behandlades med PBS, HB- NPS eller HB-P-NP, och ljusbestrålning gavs för 0, 2, eller 4 J / cm 2. Den dubbel fläck av DAPI (blå, första kolumnen) och annexin V-FITC (grön, andra kolumnen) indikerar kärnoroch apoptotiska celler. De HB-P-NP-behandlade celler visade starkare grönt fluorescenssignaler än de HB-NP-behandlade celler under samma bestrålningsbetingelser, vilket indikerar en mycket högre fototoxicitet. Skalstreck = 200 nm, förstoring = 100X. Anpassad från Chang et al. 10 Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figur 3
Figur 3:. FACS-analys av apoptotiska A549-celler A549-celler behandlades med PBS, HB- NPS eller HB-P-NP, och ljusbestrålning gavs för 0, 2, eller 4 J / cm 2. Cellerna delas in i fyra grupper. I), både annexin V-FITC- och Pl-negativa celler anses oskadade, ii) annexin V-FITC-positiva och PI-negativa cellerär tidiga apoptotiska, iii) både annexin V-FITC- och PI-positiva celler är sena apoptotiska, och iv) annexin V-FITC-negativa och PI-positiva celler är antingen sent apoptotiska eller nekrotiska. I enlighet med mikroskopisk analys, under samma bestrålningsbetingelser, de HB-P-NP-behandlade celler uppvisade högre fototoxicitet än de HB-NP-behandlade celler, och sena apoptotiska cellnivåer ökade. Anpassad från Chang et al. 10 Klicka här för att se en större version av denna siffra.

figur 4
Figur 4:. Tumörvolymen Övervakning av A549 tumörbärande möss på dag 0 och 7, de dubbla injektioner av PBS, fri HB, HB-NPS och HB-P-nationella parlamentens utfördes. PDT (200 J / cm 2) var utför litenMed en dag efter varje injektion, på dag 1 och 8. Behandlingarna visade olika nivåer av terapeutisk effekt, med HB <HB-NP <HB-P-NP. På dag 45, HB-P-NP-behandlingsgruppen visade en minskad tumörvolym avsevärt jämfört med de andra grupperna. Värden presenteras som medel ± standardavvikelser (SD, n = 4). Tumörvolymen (mm 3) definierades som (längd x bredd 2) / 2. Anpassad från Chang et al. 10 Klicka här för att se en större version av denna siffra.

figur 5
Figur 5:. Ytan Förändringar på tumörstället av A549 tumörbärande möss tumörsätena övervakades efter dubbla intravenösa injektioner (dag 0 och 7) i PBS, fri HB, HB-NP, och HB-P-NP med 200 J / cm2 ljusbestrålning en dag efter varje injektion (dag 1 och 8). Både HB-NP och de HB-P-nationella parlamentens behandlingsgrupperna började visa reaktioner dagen efter den första PDT. HB-P-NP behandlingsgruppen visade kraftig blödning och snabbaste utvecklingen av nekros. Anpassad från Chang et al. 10 Klicka här för att se en större version av denna siffra.

figur 6
Figur 6:. Histologisk analys av tumörvävnader i A549 tumörbärande möss På dag 16, var den histologiska bekräftelsen som utförs av en H & E-färgning av exciderade tumörvävnader. HB-P-NP-behandlingsgruppen visade den mest kompletta tumör celldöd. Skalstreck = 500 | im, förstoring = 40X. Anpassad från Chang et al. 10 Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Det mest kritiska steget i denna studie är att välja rätt laser villkor: våglängd, makt och bestrålningstiden. Den korrekta våglängden av ljus som lämpar sig för den specifika fotosensibiliseraren är nödvändig för PDT. Vi använde en 630 nm laser som var lämpligt för hypocrellin B. Uteffekten var en annan viktig faktor, som var satt till 400 mW / cm 2 baserat på många pilotstudier. Uteffekter överstigande 400 mW / cm 2 skadad cellerna eller hudytan av djuren på grund av bestrålningen själv, medan utgångseffekter under 400 mW / cm 2 var för svag för att visa någon terapeutisk effekt. De lämpliga bestrålningstider för in vitro- och in vivo-studier var 40 sek (16 J / cm 2) och 500 sek (200 J / cm 2), respektive. Avståndet från PDT fibern till cellerna eller till tumör vävnader hos djurmodellerna var också en kritisk faktor i denna studie. Att täcka hela cellen eller tumörytan medljus, var 1 cm befunnits vara det optimala avståndet.

Om en annan fotosensibiliserare appliceras, kan användning av den rätta ljusvåglängd maximera PDT effekt. Uteffekten och bestrålningstid bör fastställas genom försök och misstag. När hudytan börjar brinna under ljusbestrålning, bör uteffekten ställas lägre. När tumören ytan visar ingen förändring alls dagen efter PDT, kan det tyda på att det är nödvändigt att öka uteffekten.

Denna metod har vissa begränsningar. Först, om avståndet från PDT fibern till målet är en viktig faktor i denna studie, är det svårt att säkerställa enhetlighet. Avståndet kan variera något, eftersom den styrs av människor. För det andra, för djurmodell med tumörer i organ såsom lungan, är detta protokoll svår att tillämpa eftersom endoskopi är nödvändigt och andningsrörelse oundviklig.

Även kirurgisk resektion är den förstaalternativ för behandling av lungcancer, har PDT flera fördelar som en icke-invasiv och icke-kirurgisk behandling alternativ. När operationen är inte lämpligt, såsom i flera lesioner fall kan PDT vara ett giltigt alternativ. Dessutom kan preoperativ PDT minska tumörstorleken och minska graden av kirurgi 17. PDT har färre biverkningar jämfört med kirurgi, strålningsterapi, eller endobronkial brakyterapi. Dessutom är PDT irrelevant för mutationer som ger resistens mot strålningsterapi eller kemoterapi 18.

I denna studie föreslog vi både photosensitizer- och cancer läkemedels inkapslade lungcancer inriktade nanopartiklar som en ny fotosensibilisator leveranssystem för PDT. Detta koncept kan tillämpas på andra fotosensibiliserare och läkemedel mot cancer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Denna studie stöddes av bidrag nr. 14-2014-017 från SNUBH Research Fund.

Författarna står i skuld till J. Patrick Barron, professor emeritus, Tokyo Medical University och adjungerad professor, Seoul National University Bundang sjukhuset för sin pro bono redigering av detta manuskript.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
oligo hyaluronic acid Bioland Co., Ltd. _
DS-Y30 (ceramide 3B; mainly N-oleoyl-phytosphingosine) Doosan Biotech Co., Ltd. _
adipic acid dihydrazide Sigma Aldrich A0638
N-(3-dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide Sigma Aldrich 39391
4-(chloromethyl)benzoyl chloride Sigma Aldrich 270784
Tween 80 Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. T0546
syringe filter Sartorius Stedim Biotech GmbH 17762 15 mm, RC, PP, 0.45 µm
triethylamine Sigma Aldrich T0886
Mini-GeBAflex tubes Gene Bio-Application Ltd. D070-12-100
Paclitaxel Taihua Corporations _
RPMI-1640 Gibco Life Technologies, Inc. 11875
Penicillin–streptomycin Gibco Life Technologies, Inc. 15070
Fetal bovine serum Gibco Life Technologies, Inc. 16140071
Celite (Filter agent) Sigma Aldrich 6858 See step 1.4

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Shang, L., Zhou, N., Gu, Y., Liu, F., Zeng, J. Comparative study on killing effect of esophageal cancer cell line between hypocrellin B-photodynamic therapy and hematoporphyrin derivative-photodynamic therapy. Chin J Cancer Prev Treat. 12, 1139-1142 (2005).
  2. Huisman, C., et al. Paclitaxel triggers cell death primarily via caspase-independent routes in the non-small cell lung cancer cell line NCI-H460. Clin Cancer Res. 8 (2), 596-606 (2002).
  3. Dolmans, D. E., Fukumura, D., Jain, R. K. Photodynamic therapy for cancer. Nat Rev Cancer. 3 (5), 380-387 (2003).
  4. Pass, H. I. Photodynamic therapy in oncology: mechanisms and clinical use. J Natl Cancer Inst. 85 (6), 443-456 (1993).
  5. Sutedja, T. G., Postmus, P. E. Photodynamic therapy in lung cancer. A review . J. Photochem. Photobiol. 36 (2), 199-204 (1996).
  6. Peng, C. L., Shieh, M. J., Tsai, M. H., Chang, C. C., Lai, P. S. Self-assembled star-shaped chlorin-core poly(epsilon-caprolactone)-poly(ethylene glycol) diblock copolymer micelles for dual chemo-photodynamic therapies. Biomaterials. 29 (26), 3599-3608 (2008).
  7. Chen, B., Pogue, B. W., Hasan, T. Liposomal delivery of photosensitising agents. Expert Opin Drug Deliv. 2 (3), 477-487 (2005).
  8. Lee, S. J., et al. Comparative study of photosensitizer loaded and conjugated glycol chitosan nanoparticles for cancer therapy. J Control Release. 152 (1), 21-29 (2011).
  9. Chang, J. E., et al. Anticancer efficacy of photodynamic therapy with hematoporphyrin-modified, doxorubicin-loaded nanoparticles in liver cancer. J. Photochem. Photobiol. 140, 49-56 (2014).
  10. Chang, J. E., Cho, H. J., Yi, E., Kim, D. D., Jheon, S. Hypocrellin B and paclitaxel-encapsulated hyaluronic acid-ceramide nanoparticles for targeted photodynamic therapy in lung cancer. J. Photochem. Photobiol. 158, 113-121 (2016).
  11. Wang, A. Z., Langer, R., Farokhzad, O. C. Nanoparticle delivery of cancer drugs. Annu. Rev. Med. 63, 185-198 (2012).
  12. Matsumura, Y., Maeda, H. A new concept for macromolecular therapeutics in cancer chemotherapy: mechanism of tumoritropic accumulation of proteins and the antitumor agent smancs. Cancer Res. 46 (12 Pt 1), 6387-6392 (1986).
  13. Penno, M. B., et al. Expression of CD44 in human lung tumors. Cancer Res. 54 (5), 1381-1387 (1994).
  14. Wilkins, R., Kutzner, B., Truong, M., Sanchez-Dardon, J., McLean, J. Analysis of radiation-induced apoptosis in human lymphocytes: Flow cytometry using Annexin V and propidium iodide versus the neutral comet assay. Cytometry. 48 (1), 14-19 (2002).
  15. Bannas, P., et al. Validation of nanobody and antibody based in vivo tumor xenograft NIRF-imaging experiments in mice using ex vivo flow cytometry and microscopy. J Vis Exp. (98), e52462 (2015).
  16. Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. Cold Spring Harbor Protocols. (5), (2008).
  17. Lam, S. Photodynamic therapy of lung cancer. Semin Oncol. 21 (6 Suppl 15), 15-19 (1994).
  18. Simone, C. B. 2nd, et al. Photodynamic therapy for the treatment of non-small cell lung cancer. J Thorac Dis. 4 (1), 63-75 (2012).

Tags

Cancer Research Fotodynamisk terapi nanopartiklar lungcancer fototoxicitet A549 BALB / C nakenmus
Anticancer Effekten av fotodynamisk terapi med lungcancer-Targeted Nanopartiklar
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Chang, J. E., Cho, H. J., Jheon, S.… More

Chang, J. E., Cho, H. J., Jheon, S. Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles. J. Vis. Exp. (118), e54865, doi:10.3791/54865 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter