Augmentation du temps de récupération et une diminution de LPS administration à étudier les mécanismes de stimulation du nerf vague dans les réponses inflammatoires limitées

Introduction

L'immunité innée fournit une première ligne de défense immédiate contre les infections et les maladies dans un large éventail d'organismes. Elle initie non seulement la réponse immunitaire primaire pour éliminer la menace, mais il joue également un rôle central dans l'activation et l'éducation de l'immunité adaptative qui réalise des réponses immunitaires secondaires d'une manière spécifique des agents pathogènes. L'inflammation est orchestrée par une pléthore de cytokines et chimiokines, qui à leur tour ont la capacité d'attirer d'autres cellules immunitaires sur le site d'infection et d'induire les signes cardinaux de l'inflammation, tels que la rougeur, l'enflure, la douleur, la perte de la fonction et de la fièvre . La durée et l'intensité de l'inflammation dépendent de plusieurs facteurs, mais la résolution de l'inflammation et la restauration de l'homéostasie est une étape essentielle pour éviter l'apparition de maladies inflammatoires chroniques. Les progrès récents dans le domaine des neurosciences et de l'immunologie ont élucidé les mécanismes neuronaux spécifiques avec un immense potentiel thérapeutique pour contrôler inflinflammation à la fois dans le système nerveux central et à la périphérie. L' un de ces mécanismes est la voie anti-inflammatoire cholinergique (CAP), également connu sous le réflexe inflammatoire, qui est entraîné par le système nerveux autonome ^{4, 5.}

On pense actuellement que les médiateurs inflammatoires activent les nerfs sensoriels et envoient des signaux sur l'état de l'inflammation au système nerveux central. Une réponse réflexe est ensuite activé par l'intermédiaire du nerf efférent pneumogastrique. Une étude approfondie des détails anatomiques de la PAC a mis en évidence un modèle parasympathique-sympathique composé de deux nerfs, le nerf vague et les nerfs splénique, respectivement ^6. Dans le CAP, le nerf cholinergique vagal efférente activé se termine dans le ganglion mésentérique-cœliaque, ce qui entraîne l'activation du nerf adrénergiques splénique par un mécanisme encore à explorer. Le nerf splénique, ainsi activé, est connu pour intérieurevée à proximité des cellules immunitaires dans la pulpe blanche, la zone marginale et la pulpe rouge de la rate, le principal organe et obligatoire de la PAC ^{7, 8.} Norépinéphrine (NE) à partir des terminaisons nerveuses spléniques se lie aux récepteurs β ₂ adrénergiques correspondantes exprimées sur les lymphocytes T spléniques. Ceci induit la libération choline acétyltransférase (ChAT) médiée par l' acétylcholine (ACh), qui à son tour active les récepteurs nicotiniques de l' acétylcholine a7 (α7nACh) sur les macrophages, ce qui limite la production et l' inflammation cytokine ^2. Par conséquent, il est maintenant clair que le système nerveux est capable de réguler l'inflammation dans les tissus périphériques et de rétablir l'homéostasie immunitaire locale.

Comme le nom de la voie indique, le système acétylcholine est d'une importance capitale pour le bon fonctionnement de cette voie de régulation neuro-immunitaire. Fait intéressant, les mécanismes impliqués dans l'activation desla PAC semble être différente dans la périphérie et dans le système nerveux central. Bien que l'importance des récepteurs nicotiniques (α7nAChR) dans la rate a été démontré plus haut ^9, les récepteurs muscariniques (mAChR) sont obligatoires pour l'activation de la voie centrale ^{10, 11.} Plus récemment, l' administration périphérique d'un facteur de nécrose tumorale sériques et de la rate agoniste muscarinique M1 à action centrale sensiblement supprimée α (TNF) au cours de l' endotoxémie létale murine, une action requise nerf vague intact et le nerf splénique de signalisation ^12. Nous avons également montré récemment que les souris dépourvues prostaglandine E ₂ (PGE ₂₎ ne sont pas en mesure de répondre à la stimulation du nerf vague et ne régulent la libération induite par le LPS de cytokines dans le sérum et la rate ^3. Par conséquent, la PAC pourrait également être réglementé par des systèmes autres que les principaux pathw Achay.

Le nerf vague a été nommé en tant que tel en raison de son parcours de déambulation dans le corps, innervant principaux organes , y compris le foie, les poumons, la rate, les reins et l' intestin ^13. Compte tenu de cette grande innervation et l'effet immunosuppresseur très puissant du nerf pneumogastrique, le potentiel thérapeutique de la PAC pourrait couvrir un large éventail de conditions inflammatoires. Le nerf vague peut être électriquement (ou mécanique) activé, avec contrôle de la tension et la fréquence, et contrairement aux traitements classiques, sans médicaments ajoutés au corps. Des essais sont en cours chez les patients rhumatismales, par exemple, pour tester la signification clinique de VNS dans le traitement de l' inflammation chronique ^14. Au total, la communication neuro-immunitaire et régulation de l'inflammation sont actuellement à l'étude, qui fournira un traitement alternative possible au traitement conventionnel. Par conséquent, l'analyse du nerf vague stimulationeffet n dans les différents organes innervé, mais aussi la caractérisation de l'action thérapeutique potentielle dans des modèles animaux d'inflammation chronique, serait certainement donner un aperçu et l'espoir de nouvelles cibles thérapeutiques potentielles.

La méthodologie originale développée par Tracey et ses collègues ⁴ ne pouvait pas être transposée à notre domaine de la recherche en raison de surstimulation de la réponse inflammatoire (par une dose létale de LPS) et une plage de temps trop court entre l' activation CAP et la lecture. Dans le présent document, nous allons présenter les modifications apportées au protocole d'origine, comparer les deux méthodes différentes sur les taux de cytokines, et mettre en évidence une nouvelle observation et à l'opposé de l'organe cible (la rate).

Protocol

Toutes les expériences animales ont été réalisées conformément aux lignes directrices pour les soins et l'utilisation des animaux approuvés par le Comité local d'éthique à l'Institut Karolinska, Stockholm. Le Comité d'éthique local suit les directives de l'Union européenne sur les soins des animaux.

REMARQUE: Les principaux changements par rapport au protocole initial est le temps de récupération après la chirurgie (6 heures par rapport à 1 h) et le niveau de LPS injectées (2 mg / kg par rapport à 15 mg / kg). Dans le cas contraire, les différents paramètres liés à la chirurgie elle-même n'a pas été modifié.

1. Préparation du matériau pour la stimulation

1. Allumer l'ordinateur et le système d'acquisition de données relié à l'électrode de stimulation (figure 1A).
2. Entrez le Acquitter programme.
3. Préparer une solution mère de LPS à une concentration de 5 mg / ml dans 1 x PBS, aliquote, et stocker à -20 ° C. Le jour de l'expérience, dégeler une aliquote et préparer un adequate échantillon de LPS (0,5 mg / ml) afin d'injecter autour de 100 ul dans l'animal, en fonction du poids.

2. Préparation de l'animal pour l'anesthésie

1. Utilisation des souris C57BL / 6. Maintenir les conditions climatiques contrôlées avec une lumière de 12 heures / cycle d' obscurité, les nourrir pour rongeurs standard, et leur donner ad libitum de l' eau.
2. Effectuer la chirurgie sur des souris qui pèsent environ 25 g le jour de l'expérience.
   REMARQUE: Lorsque des réactions inflammatoires sont induites, il est particulièrement important d'effectuer des contrôles réguliers et observations des réactions cliniques chez les animaux. L' euthanasie prématurée par inhalation de CO ₂ est nécessaire si la condition animale ne répond pas aux critères éthiques.
3. Régler la machine anesthésique.
   1. Assurez-vous que le tube est correctement connecté et n'est pas endommagé de quelque façon. Assurez-vous que la zone aérée fonctionne correctement. Branchez le filtre clé à la bouteille isoflurane et remplir le vapoRizer avec une quantité suffisante d'isoflurane.
   2. Ouvrez l'alimentation en gaz (air et de l'oxygène) et assurez-vous que les bouteilles contiennent suffisamment de gaz pour l'expérience. Un connecteur à trois voies est alors en mesure d'envoyer le flux isoflurane à la chambre d'induction ou le masque.
4. Tourner le connecteur à trois voies à la chambre d'induction. Choisir une souris de la cage et introduire l'animal dans la chambre. Ajuster le régulateur de débit de 1,0 L / min d'oxygène et de 1,0 L / min d'air. Ajuster la concentration de l'isoflurane à 4-5%.
5. Lorsque le niveau souhaité de l'anesthésie est atteinte, lorsque le niveau souhaité de l'anesthésie est atteinte, raser la zone chirurgicale et déplacer l'animal de la chambre vers le masque. Tournez le connecteur à trois voies à l'écoulement du masque. Ajuster le régulateur de débit de 0,25 L / min d'oxygène et 0,25 L / min d'air.
   1. Ajuster la concentration en isoflurane à 1.5 à 2.5%. Vérifier le niveau de l'anesthésie par le contrôle réflexe et la fréquence respiratoire avant de commencer le procedur chirurgicale.
6. Fixer les pattes de la souris sur le banc de travail en utilisant du ruban adhésif. Assurez-vous que le nez de l'animal est toujours bien positionné dans le masque.

3. La chirurgie et la stimulation du nerf vague

1. Désinfecter la zone chirurgicale avec 70% d'éthanol.
2. L'utilisation d'un scalpel, inciser soigneusement la peau au niveau du cou (incision d'environ 1 à 1,5 cm).
   Remarque: Dans le protocole, la procédure de chirurgie se termine ici pour les animaux opérés de manière fictive. En effet, il a été démontré que juste toucher le nerf avec un outil métallique stimule déjà dans une certaine mesure. Par conséquent, pour obtenir un animal témoin de la chirurgie plus précise lors de l'utilisation d'une petite quantité de LPS, arrêter la chirurgie à cette étape.
3. Avec l'aide d'un microscope (objectif 12,5X), isoler le nerf vague gauche de l'artère carotide en utilisant une pince à disséquer. Tout d'abord localiser le muscle sterno en éliminant les couches de la peau et la graisse, puis se rétracter dansafin de mettre le forceps derrière les deux le nerf et l'artère.
   Remarque: L'étape suivante est très délicate, car le nerf et l' artère sont étroitement collées les unes aux autres. Par conséquent, il est très facile de couper le vaisseau et tuer l'animal. Cependant, en plaçant la pince très soigneusement entre le nerf et l'artère, ils se séparent finalement, et il est possible d'isoler le nerf.
4. Placer l'électrode (figure 1B) dans le cadre du nerf vague. L'électrode à aiguille est assez long, même si le nerf se déplace légèrement au cours de la stimulation, il sera toujours en contact avec l'électrode.
5. Effectuer une injection intraperitoneale (ip) de LPS (2 mg / kg) à l'aide d'une seringue (pour la lecture sur les taux de cytokines, à savoir, pour mesurer l'effet de la régulation à la baisse).
6. Attendre 5 minutes avant de commencer la stimulation.
7. Stimuler le nerf vague pendant 5 minutes à 5 V et 1 Hz en appuyant sur le bouton de démarrage dans l'acquittement programme.
8. Rédéplacer l'électrode et le fil de suture de la plaie de l'animal avec un fil de suture chirurgical.
9. Vaporisez une barrière Film Non Sting (NSBF) sur la plaie afin d'améliorer la guérison et à protéger contre les infections.

4. Récupération de l'animal

1. Après la chirurgie, déplacer l'animal à sa cage pour le réveil et la récupération. Sous la lumière infra-rouge afin de maintenir la température du corps, assurez-vous de surveiller l'animal jusqu'à la pleine conscience a été retrouvé.
2. Laissez l'animal récupérer dans sa cage pendant 6 heures avant le sacrifice pour l'analyse.
   Note: L'effet de la stimulation du nerf vague est très rapide et a également été démontré que de longue durée (jusqu'à 48 heures), de sorte que le temps de récupération peut être réglée par l'expérimentateur en fonction des besoins de l'étude.

5. Sacrifice aux fins d'analyse

1. Placer l'animal dans une cage reliée à un dispositif d'administration de CO _2.
2. Réglez l'appareil sur un 5Cycle -min d'inhalation de CO _2.
3. Lorsque l'euthanasie est fait, collecter les organes d'intérêt et les congeler directement sur de la glace sèche pour une analyse ultérieure (par exemple, la mesure des taux de cytokines dans les extraits de la rate en utilisant un TH1 de la souris / TH2 dosage 9-Plex) ^3.

Representative Results

Niveau de TNFa et Interleukin-1β (IL-1β) après avoir augmenté le Accéléré après la chirurgie et la diminution de la dose de LPS

Comme montré précédemment, en utilisant le protocole d'origine, VNS a diminué les niveaux de TNFa (169,3 ± 24,9 pg / mg dans SHAM par rapport à 39,7 ± 10,8 pg / mg dans VNS, p <0,001) et l'IL-1β (360,0 ± 40,21 pg / mg de SHAM contre 191,7 ± 27,2 pg / mg dans VNS, p <0,01) dans la rate après injection intraperitoneale de LPS (15 mg / kg) (Figure 2A). Après avoir changé le temps pour l'analyse de 1 à 6 heures et en diminuant la dose de LPS 15-2 mg / kg, on n'observé un effet de VNS sur TNFa (13,67 ± 1,81 pg / mg dans SHAM par rapport à 8,82 ± 1,20 pg / mg de VNS, p <0,05), tandis que l' IL-1β n'a pas été affectée (368,62 ± 35,65 pg / mg dans SHAM contre 304,99 ± 43,54 pg / mg) (figure 2B). Sans LPS injection ( par exemple, une solution saline), a pu être détecté aucune différence après VNS (figure 2C).

Les niveaux de Oncogen (KC / GRO) réglementé croissance kératinocyte Chemoattractant / humain dans le Spleen après VNS Utilisation des différentes conditions

Avec le protocole d' origine, nous avons montré que KC / GRO a été fortement réprimée par VNS (597,4 ± 17,8 pg / mg SHAM contre 416,4 ± 29,7 pg / mg VNS, p <0,001) (figure 3A). L' utilisation d' un point de temps de 6 heures et 2 mg / kg de LPS, aucun changement n'a été observée entre les animaux et SHAM VNS (figure 3B), tandis que VNS est encore puissant sur TNFa, par exemple. Cependant, en l'absence de LPS a été injecté pour le point de temps de 6 heures, nous avons observé une forte régulation d'KC / GRO suivant VNS (59,37 ± 4,29 pg / mg SHAM contre 141,22 ± 10,56 pg / mg VNS, p <0,001 ) (figure 3C). Comme prévu, la plupart desd'autres cytokines (TNF, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12 et IFN-y) sont à des niveaux très faibles (si détectable), et aucune différence pourrait être vu entre SHAM et les animaux stimulés par VNS.

Figure 1: Photos du matériel nécessaire pour effectuer la stimulation du nerf vague. A) i) l' ordinateur, ii) le système d'acquisition de données, et iii) dispositif d'électrode de stimulation. B) gros plan de l'électrode qui est placée sous le nerf vague. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.

Figure 2: Niveaux de TNFa et IL-1β dans la rate Extracts de SHAM et VNS animaux traités. Les animaux sont soumis à SHAM ou chirurgie VNS, selon les conditions suivantes: a) récupération de 1 h après injection ip de 15 mg / kg de LPS, B) la récupération de 6 heures après l' injection intrapéritonéale de 2 mg / kg de LPS, et C) récupération de 6 heures sans injection de LPS. Les niveaux sont mesurées sur une plaque revêtue-cytokine pro-inflammatoire et exprimées en pg / mg de tissu. Les données sont exprimées en moyenne ± SEM. L'astérisque indique des différences statistiques entre VNS et souris SHAM (n = 8 dans chaque groupe). T -test Student * p <0,05; ** p <0,01; *** p <0,001. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.

Figure 3: Niveaux de KC / GRO dans SpLeen extraits de SHAM et VNS-traité des souris naïves. Les animaux sont soumis à SHAM ou chirurgie VNS, selon les conditions suivantes: a) récupération de 1 h après injection ip de 15 mg / kg de LPS, B) la récupération de 6 heures après l' injection intrapéritonéale de 2 mg / kg de LPS, et C) récupération de 6 heures sans injection de LPS. Les niveaux sont mesurées sur une plaque revêtue-cytokine pro-inflammatoire et exprimées en pg / mg de tissu. Les données sont exprimées en moyenne ± SEM. L'astérisque indique des différences statistiques entre VNS et souris SHAM (n = 8 dans chaque groupe). T de Student -test *** p <0,001.

Discussion

Depuis sa découverte au début des années 2000, les mécanismes de la PAC ont été soigneusement étudiés. Nous avons maintenant une bonne image de la voie, et en particulier, l'organe cible, la rate, où NE, les cellules T mémoire, Ach et macrophages travail en équipe très efficace pour réguler négativement les médiateurs inflammatoires ^2. Nous avons récemment publié des données sur l'importance d'un système de prostaglandine fonctionnelle chez les souris, en particulier _PGE2, ce qui est évidemment un élément obligatoire pour la libération d' ACh dans la rate après l' activation de la PAC ^3.

La technique expérimentale, connue sous le nom stimulation du nerf vague, peut facilement être réalisé dans un laboratoire, mais quelques protocoles importants doivent être respectées en ce qui concerne les animaux et la procédure de chirurgie. Nous utilisons un signal de stimulation onde sinusoïdale, qui est censé être une stimulation « charge équilibrée », afin d'éviter d'accumuler des charges électriques dans lenerf qui pourrait le détruire (par opposition à la stimulation monophasique). Tout en stimulant le nerf, il est impossible de séparer les afférences du signal efférent, qui ne peut être fait à d'autres fins avec des expériences vagotomy. La durée et la fréquence utilisée pour l'expérience sont connus pour avoir un effet sur la libération de cytokines après la provocation inflammatoire, par exemple, mais ne toucheraient pas la fréquence cardiaque ou donner des effets secondaires évidents dans les contrôles sains.

tout, l'expérimentateur doit d'abord toujours garder à l'esprit que le traitement, la chirurgie et la récupération des animaux doit se faire selon les règles d'éthique pour les soins des animaux. L'autre point est que la pratique de la chirurgie est d'une grande importance. Isoler le nerf vague est une étape difficile, qui peut être mortelle pour l'animal en cas de dommages vasculaires se produit. Avec l'expérience, la chirurgie peut être effectuée dans les 15 - 20 min, ce qui signifie que l'animal ne doit pas être anesthésié pendant une longue période de temps, ce quiaide à la reprise.

Une discussion peut également être soulevée concernant le choix d'un bon animal SHAM exploité. Dans notre protocole, nous avons utilisé les animaux qui ne ont subi une chirurgie au niveau du cou, sans placer l'électrode sous le nerf vague. La raison du choix de cette option est que juste l'électrode sous placer le nerf stimulerait mécaniquement le nerf dans une certaine mesure (comme cela a été observé précédemment) ^19, créant le risque de masquer les mécanismes potentiels qui se produisent à des niveaux très bas de l' inflammation. Si vous utilisez des doses très élevées de LPS, le meilleur contrôle opéré SHAM serait probablement de placer l'électrode sous le nerf, comme l'effet de la chirurgie SHAM ne porterait pas atteinte ou de masquer l'effet évident de stimulation électrique sur l'éclatement de cytokines.

Nous avons mis au point le protocole actuel pour répondre aux différents problèmes rencontrés au sein de notre domaine de la recherche. Comme indiqué dans notre précédent article,nous avons examiné l'implication possible du système de prostaglandine dans la PAC. En raison du métabolisme enzymatique, nous avons pensé que le temps de récupération 1 h du protocole original ne conviendrait pas à notre expérience. Par conséquent, nous avons étendu le laps de temps après la chirurgie à 6 h. Ce faisant, nous avons également de titrer sur la dose de LPS afin de répondre aux critères éthiques. Nous avons choisi un temps de récupération de 6 heures, un délai que nous avons pensé assez longtemps à cet effet. Nous titré également les LPS de 15 mg / kg (le protocole d'origine) à 0 mg / kg. A 2 mg / kg, nous avons vu le dernier effet de la VNS sur les cytokines (Figure 2), un effet qui a disparu à des doses plus faibles.

Alors que l'effet principal de la SNV dans la rate est connue et caractérisée par l'activation des cellules T mémoire et par la suite, les macrophages des cellules qui permettent la diminution des cytokines, nous a également montré ici que VNS semble induire directement la libération de médiateurs ( il est encore difficile de cellules qui, necessitating complément d'étude) afin de recruter d'autres types cellulaires de la réponse primaire à l'inflammation. En effet, si VNS fortement diminué KC / GRO après une induction inflammatoire forte (15 mg / kg de LPS, à savoir le protocole d' origine), il active une libération très rapide du KC / GRO en l'absence d'inflammation. La chimiokine KC / GRO, une protéine apparentée à IL-8 avec des propriétés chimiotactiques puissants qui est connu pour avoir un rôle important dans le développement des leucocytes (par exemple, la maturation et l' activation de conduite), le trafic (par exemple, l' attraction et le recrutement de neutrophiles) et de la fonction ¹⁵ . Par exemple, les neutrophiles sont des membres importants du système phagocytaire du système immunitaire inné. Ils agissent comme première ligne de défense contre les agents pathogènes envahisseurs, mais ils sont aussi des médiateurs importants de blessures causées par l' inflammation ^16. Fait intéressant, dans notre tentative d'améliorer le protocole, on a rencontré cette observation qui met en évidence la direcla participation de t d'autres types de cellules dans la rate dans le fonctionnement du nerf vague.

Tous les travaux d'avant-garde dans le domaine a mis l'accent sur la rate, l'organe cible de la PAC, et sur l'effet immunomodulateur de la voie en réponse à une septicémie ou une inflammation systémique périphérique. Il est important, ce travail a été fait en utilisant la stimulation aiguë du nerf pneumogastrique, tel que celui présenté dans le présent document. Cela peut être utilisé pour l'analyse moléculaire des organes spécifiques ou des effets à court terme observés dans les études fonctionnelles portant sur les modèles chroniques d'animaux d'inflammation (24 à 48 heures au maximum après la chirurgie).

Cependant, le cours errant du nerf pneumogastrique implique également que la PAC pourrait être d' une grande utilité pour le traitement des maladies inflammatoires chroniques impliquant les différents organes innervé ^13. L'un des organes les plus étudiés dans ce contexte est le tube digestif, en mettant l'accent sur les maladies inflammatoires de l'intestin (MII), qui comprend des maladies inflammatoires # 39; s la maladie et la colite ulcéreuse, mais aussi l'iléus post - opératoire induite par ^17. De plus, l'importance du règlement de la PAC dans beaucoup d' autres maladies inflammatoires impliquant le foie, les reins et les poumons est également à l'étude ^18. Néanmoins, le protocole actuel ne pouvait pas être utilisé dans ce contexte, comme l'effet à long terme de l' activation du nerf pneumogastrique nécessiterait répétitives qui peuvent stimulations bien sûr être effectué uniquement avec une électrode implantée in vivo. A cet effet, l'animal doit subir une chirurgie où des électrodes de stimulation boutons de manchette sont placés autour du nerf vague ^20. Il est également important de noter que cette dernière technique est beaucoup plus fréquemment décrite chez l'homme ou chez les animaux d'une taille plus grande. Une autre façon de stimuler le nerf vague est mécanique, comme la stimulation non-invasive et percutanée du nerf pneumogastrique a montré un effet immunosuppresseur dans un modèle murin de endotoxémieref "> 21. Cependant, les principales préoccupations de cette technique serait la reproductibilité des résultats et comment faire en sorte que le nerf vague est stimulé de la même manière dans une évaluation à long terme des modèles animaux. Des dispositifs ont été mis au point pour l' homme , telles que la stimulation trans-auriculaire VNS ou la stimulation VNS trans-cervicale, qui délivrent des impulsions électriques, qui sont bien tolérés par les sujets ^21. Ils ont été principalement utilisés pour traiter l' épilepsie et la migraine et ont montré des résultats prometteurs qui pourraient conduire à l' avenir ambulant et de la thérapie exogène.

Pour résumer, en particulier en raison de la vaste innervation du nerf pneumogastrique dans le corps, la régulation de la PAC est étudiée dans un large éventail de maladies inflammatoires dans l'espoir de trouver des propriétés moléculaires intéressantes mécanistes qui pourraient mener à l'avenir des cibles thérapeutiques potentielles. Ici, nous avons présenté une méthode aiguë pour stimuler le nerf vague. Il permet l'étude de la PAC limitée dansles réponses inflammatoires de grâce à un stimulus inflammatoire modérée associée à un intervalle de temps plus long entre la VNS et l'analyse (permettant le métabolisme enzymatique puisse avoir lieu, par exemple).

La compréhension des mécanismes moléculaires qui sous-tendent l'effet de la stimulation du nerf pneumogastrique, ainsi que son utilisation efficace dans le traitement des maladies inflammatoires, est d'une grande importance, en particulier du point de vue clinique. En effet, les avantages de la méthodologie sont larges. En raison de la nature de la signalisation nerveuse extrêmement rapide, il est rapide et efficace; un effet observable sur les taux de cytokine, par exemple, se produit en moins de 1 heure. ⁴ En outre, la stimulation mécanique, non-invasive et percutanée du nerf peut être utilisé, donner de l' espoir pour les futures thérapies ambulantes et facilement administrés. Enfin, contrairement à un traitement régulier, la stimulation du nerf pneumogastrique utilise une voie endogène. Par conséquent, contrairement à tous les traitements médicamenteux, pas de nouveaux agents sont introduitsau corps, ce qui évite des effets secondaires potentiels.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Computer	Toshiba	-	Any computer is actually compatible
MP-150 data acquisition system	Biopac Systems	MP150WSW
Acknowledge software	Biopac Systems
Mice C57Bl/6	Charles River
Anesthetic machine	Simtec Engineering
Medical oxygen bottle	AGA	107563
Medical air bottle	AGA	108639
Vetflurane (1,000 mg/g)	Virbac	137317
LPS	Sigma-Aldrich	L2630
Saline	Merck Millipore	1024060080
PBS 10x	Sigma-Aldrich	P5493	Diluted 10 times for used concentration
Syringe (1 ml)	BD Plastipak	303172
Needles 23 G	KD-FINE	900284	0.6 x 30 mm (blue)
Microdissecting forceps (curved)	Sigma-Aldrich	F4142
Dissecting scissors	Sigma-Aldrich	Z265969
Surgical suture 4-0	Ethicon	G667G
Euthanasia unit	Euthanex Smartbox	EA-32000
Cavilon No Sting Barrier Film	3M Health Care	3346N
TH1/TH2 9-Plex assay, ultrasensitive kit	MesoScale Discovery	K15013C-1
Stimulating electrode device	Biopac Systems	STIMSOC
Aesculap Isis shaver	Agnthos	GT420
R70			Rodent diet from Lantmannen, Stockholm, Sweden