La estimulación del nervio vago ha demostrado tener una gran eficacia para disminuir la inflamación periférica. Aquí, presentamos un protocolo modificado de estimulación del nervio vago que permite exámenes adicionales de los mecanismos antiinflamatorios colinérgicos en respuestas inflamatorias limitadas.
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Artículo de método
El aumento del tiempo de recuperación y la disminución de la administración de LPS para estudiar la estimulación del nervio vago mecanismos en las respuestas inflamatorias Limited
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Resumen
Resumen
La inflamación es una respuesta local a la infección y al daño tisular mediada por macrófagos activados, monocitos y otras células inmunitarias que liberan citocinas y otros mediadores de la inflamación. Durante mucho tiempo, los mecanismos humorales y celulares se han estudiado por su papel en la regulación de la respuesta inmunitaria, pero los avances recientes en el campo de la inmunología y la neurociencia también han desentrañado mecanismos neuronales específicos con un interesante potencial terapéutico. Se ha descrito que la llamada vía antiinflamatoria colinérgica (CAP) controla las respuestas inmunitarias innatas y la inflamación de una manera muy potente. A principios de la década de 2000, Tracey y sus colaboradores desarrollaron una técnica que estimula el nervio vago e imita el efecto de la vía. La metodología se basa en la estimulación eléctrica del nervio vago a baja tensión y frecuencia, con el fin de evitar cualquier efecto secundario de la sobreestimulación, como la desregulación de la variabilidad de la frecuencia cardíaca. En la actualidad se dispone de dispositivos eléctricos para la estimulación, lo que facilita la puesta en marcha de la metodología en el laboratorio. El objetivo de esta investigación fue investigar la posible implicación de las prostaglandinas en la NAC. Desafortunadamente, basándonos en intentos anteriores, no pudimos utilizar el protocolo original, ya que la respuesta inflamatoria inducida era demasiado alta o no era adecuada para las propiedades del metabolismo enzimático. Los diferentes ajustes del protocolo quirúrgico original permanecieron prácticamente sin cambios, pero las condiciones con respecto a la inducción inflamatoria y el momento antes del sacrificio mejoraron para adaptarse a nuestros propósitos (es decir, para investigar la participación de la NAC en respuestas inflamatorias más limitadas).
La versión modificada del protocolo original, presentada aquí, incluye un rango de tiempo más largo entre la estimulación del nervio vago y el análisis, lo que se asocia con una menor inducción de respuestas inflamatorias. Además, al mismo tiempo que disminuimos el nivel de lipopolisacáridos (LPS) para inyectar, también encontramos nuevas observaciones sobre las propiedades mecanicistas en el bazo.
Introducción
La inmunidad innata proporciona una primera línea inmediata de defensa contra las infecciones y enfermedades en una amplia gama de organismos. No sólo se inicia la respuesta inmune primaria para eliminar la amenaza, sino que también desempeña un papel fundamental en la activación y educar a la inmunidad adaptativa que lleva a cabo respuestas inmunes secundarias de una manera específica del patógeno. La inflamación está orquestada por una gran cantidad de citocinas y quimiocinas, que a su vez tienen la capacidad de atraer otras células inmunitarias al sitio de la infección y para inducir los signos cardinales de la inflamación, tales como enrojecimiento, hinchazón, do....
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Protocolo
Todos los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las directrices para el cuidado y uso de animales aprobados por el Comité de Ética local en el Instituto Karolinska, Estocolmo. El Comité de Ética local sigue las directrices de la Unión Europea sobre el cuidado de los animales.
NOTA: Los principales cambios desde el protocolo original son el tiempo de recuperación después de la cirugía (6 hr frente a 1 hr) y el nivel de LPS inyectados (2 mg / kg frente a 15 mg / kg). De lo contrario, los diferentes ajustes relacionados con la cirugía en sí no se han cambiado.
1. Preparar el mater....
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Resultados
Nivel de TNF y la interleucina-1β (IL-1β) después de aumentar la Lapso de tiempo después de la cirugía y la disminución de la dosis de LPS
Como se indica anteriormente, utilizando el protocolo original, VNS disminuyó los niveles de TNFa (169,3 ± 24,9 pg / mg en SHAM frente a 39,7 ± 10,8 pg / mg en VNS, p <0,001) y la IL-1β (360,0 ± 40,21 pg / mg en SHAM frente a 191,7 ± 27,2 pg / mg en VNS, p <0,01) en el bazo después de la.......
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Discusión
Desde su descubrimiento en la década de 2000, los mecanismos de la PAC han sido estudiados a fondo. Ahora tenemos una buena imagen de la vía y, en particular, el órgano diana, el bazo, donde NE, las células T de memoria, Ach, y macrófagos trabajo como un equipo muy eficiente para regular a la baja mediadores inflamatorios 2. También hemos publicado recientemente datos sobre la importancia de un sistema de prostaglandina funcional en ratones, en particular, PGE 2, que es obviamente un c.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
El estudio fue apoyado por el Consejo Sueco de Investigación, la Asociación Sueca de Reumatismo, las Fundaciones del Instituto Karolinska, el Consejo del Condado de Estocolmo, la Fundación Wallenberg y la Fundación GV 80 Años para la investigación. Los autores también desean agradecer a Hannah Aucott por la revisión del manuscrito.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Computadora | Toshiba-Cualquier | computadora es realmente compatible | |
| Sistema de adquisición de datos MP-150 | Sistemas Biopac | MP150WSW | |
| software de reconocimiento | Biopac Systems | ||
| Ratones C57Bl/6 | Charles River Máquina | ||
| Botella | de | ||
| oxígeno médico | AGA | 107563 | |
| Botella de aire medicinal | AGA | 108639 | |
| Vetflurano (1.000 mg/g) | Virbac | 137317 | |
| LPS | Sigma-Aldrich | L2630 | |
| Solución salina | Merck Millipore | 1024060080 | |
| PBS 10x | Sigma-Aldrich | P5493 | Diluido 10 veces para la concentración utilizada |
| Jeringa (1 ml) | BD Plastipak | 303172 | |
| Agujas 23 G | KD-FINE | 0,6 x 30 mm (azul) | |
| Pinzas de microdisección (curvas) | Sigma-Aldrich | F4142 | |
| Tijeras de disección | Sigma-Aldrich | Z265969 | |
| Sutura quirúrgica 4-0 | Ethicon | G667G | |
| Unidad de eutanasia | Euthanex Smartbox | EA-32000 | |
| Cavilon Película | de barrera antipicadurasEnsayo 3M Health Care | 3346N | |
| TH1/TH2 9-Plex, kit ultrasensible | MesoScale Discovery | K15013C-1 | |
| Dispositivo de electrodos estimulantes | Biopac Systems | STIMSOC | |
| Aesculap Aisis afeitadora | Agnthos | GT420 | |
| R70 | Dieta para roedores de Lantmannen, Estocolmo, Suecia |
Referencias
- Nathan, C. Points of control in inflammation. Nature. 420 (6917), 846-852 (2002).
- Rosas Ballina, M., et al. Acetylcholine-synthesizing T cells relay neural signals in a vagus nerve circuit. Science. 334 (6052), 98-101 (2011).
- Le Maître, E., et al.
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Reimpresiones y permisos
