Стимуляция блуждающего нерва доказала свою высокую эффективность для уменьшения периферического воспаления. В данной работе мы представляем модифицированный протокол стимуляции блуждающего нерва, который позволяет проводить дальнейшие исследования холинергических противовоспалительных механизмов при ограниченных воспалительных реакциях.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Увеличение времени восстановления и снижение LPS администрации по изучению Нерв стимуляции блуждающего механизмов в ограниченной Воспалительные Ответы
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Воспаление — это местная реакция на инфекцию и повреждение тканей, опосредованная активированными макрофагами, моноцитами и другими иммунными клетками, которые высвобождают цитокины и другие медиаторы воспаления. В течение долгого времени гуморальные и клеточные механизмы изучались на предмет их роли в регулировании иммунного ответа, но последние достижения в области иммунологии и нейробиологии также раскрыли специфические нейронные механизмы с интересным терапевтическим потенциалом. Так называемый холинергический противовоспалительный путь (НГП) был описан для контроля врожденных иммунных реакций и воспаления очень мощным образом. В начале 2000-х годов Трейси и ее коллеги разработали методику, которая стимулирует блуждающий нерв и имитирует эффект этого пути. Методология основана на электрической стимуляции блуждающего нерва при низком напряжении и частоте, чтобы избежать любых побочных эффектов гиперстимуляции, таких как нарушение регуляции вариабельности сердечного ритма. В настоящее время доступны электрические устройства для стимуляции, что упрощает настройку методики в лаборатории. Целью данного исследования было изучение потенциального участия простагландинов в ВП. К сожалению, основываясь на более ранних попытках, мы не смогли использовать оригинальный протокол, так как индуцированная воспалительная реакция была либо слишком высокой, либо не подходила для свойств ферментативного метаболизма. Различные настройки оригинального протокола операции остались в основном неизменными, но условия, касающиеся индукции воспаления и момента перед жертвоприношением, были улучшены в соответствии с нашими целями (т.е. для исследования участия CAP в более ограниченных воспалительных реакциях).
Модифицированная версия оригинального протокола, представленная здесь, включает более длительный временной диапазон между стимуляцией блуждающего нерва и анализом, что связано с более низкой индукцией воспалительных реакций. Кроме того, при снижении уровня липополисахаридов (ЛПС) для инъекций, мы также столкнулись с новыми наблюдениями относительно механистических свойств селезенки.
Введение
Врожденный иммунитет обеспечивает немедленную первую линию защиты против инфекций и заболеваний в широком диапазоне организмов. Она не только инициирует первичный иммунный ответ, чтобы устранить угрозу, но оно также играет ключевую роль в активации и обучение адаптивного иммунитета, который выполняет вторичные иммунные ответы в патоген-специфическим образом. Воспаление оркестровщик- множеством цитокинов и хемокинов, которые, в свою очередь, имеют возможность привлекать другие иммунные клетки к очагу инфекции и вызвать кардинальные признаки воспаления, такие как покраснение, отек, боль, потеря функции и лихорадка , Продолжительность и интенсивность воспаления зависят ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все эксперименты на животных были проведены в соответствии с руководящими принципами по уходу и использованию животных, утвержденных местного комитет по этике при Каролинском институте, Стокгольм. Комитет по этике местным следует директиве Европейского союза по уходу за животными.
Примечание: Основные изменения от первоначального протокола является время восстановления после операции (6 ч по сравнению с 1 ч) , а уровень LPS инъекции (2 мг / кг по сравнению с 15 мг / кг). В противном случае, различные параметры, относящиеся к самой операции не были изменены.
1. Подготовка Материал для стимуляции....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Уровень ФНО и интерлейкина-1 (IL-1) после того, как увеличение промежутка времени после хирургии и снижения дозы LPS
Как было показано ранее, используя оригинальный протокол, ВНС снизились уровни TNF & alpha; (169,3 ± 24,9 пг / мг в ложной операции против 39,7 ± 10,8 пг / мг в ВНС, р <0,001) и IL-1 (360,0 ± 40,21 пг / мг в SHAM по сравнению с 191,7 ± 27,2 пг / мг в ВНС, р <0,01) в селезенке после внутрибрюшинного введен.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
С момента своего открытия в начале 2000-х годов, механизмы ПСП были тщательно изучены. Теперь у нас есть хорошее представление о пути, и в частности, орган - мишень, селезенку, где СВ, память Т - клетки, ACH и макрофаги работают как очень эффективная команда , чтобы подавлять воспалительные медиаторы 2. Мы также недавно были опубликованы данные о значении функциональной системы простагландинов у мышей, в частности, PGE 2, который, очевидно , является обязательным компонентом для освобо.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего раскрывать.
Благодарности
Исследование было поддержано Шведским исследовательским советом, Шведской ассоциацией ревматизма, Фондами Каролинского института, Советом Стокгольмского графства, Фондом Валленберга и Фондом 80 лет GV. Авторы также хотели бы поблагодарить Ханну Окотт за корректуру рукописи.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Компьютер | Toshiba-Любой | компьютер фактически совместим | |
| с системой сбора данных MP-150 | Biopac Systems | MP150WSW | |
| Acknowledge программным обеспечением | Biopac Systems | ||
| Mice C57Bl/6 | Charles River | ||
| Anesthetic Machine | Simtec Engineering | ||
| Медицинский кислородный баллон | AGA | 107563 | |
| Медицинский баллон для воздуха | AGA | 108639 | |
| Ветфлуран (1,000 мг/г) | Вирбак | 137317 | |
| ЛПС | Sigma-Aldrich | L2630 | |
| Физиологический раствор | Merck Millipore | 1024060080 | |
| PBS 10x | Sigma-Aldrich | P5493 | Разведенный в 10 раз для использованной концентрации |
| Шприц (1 мл) | BD Plastipak | 303172 | |
| Иглы 23 G | KD-FINE | 0,6 x 30 мм (синие) | |
| Микрорассекающие щипцы (изогнутые) | Sigma-Aldrich | F4142 | |
| Ножницы для пресечения | Sigma-Aldrich | Z265969 | |
| Хирургический шов 4-0 | Ethicon | G667G | |
| Аппарат для эвтаназии | Euthanex Smartbox | EA-32000 | |
| Cavilon No Sting Barrier Film | 3M Health Care | 3346N | |
| TH1/TH2 9-Plex анализ, сверхчувствительный набор | MesoScale Discovery | K15013C-1 | |
| Стимулирующее электродное устройство | Biopac Systems | STIMSOC | |
| Aesculap Isis бритва | Agnthos | GT420 | |
| R70 | Диета для грызунов из Lantmannen, Стокгольм, Швеция |
Ссылки
- Nathan, C. Points of control in inflammation. Nature. 420 (6917), 846-852 (2002).
- Rosas Ballina, M., et al. Acetylcholine-synthesizing T cells relay neural signals in a vagus nerve circuit. Science. 334 (6052), 98-101 (2011).
- Le Maître, E., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
