Identification des événements intracellulaires de signalisation induite dans les cellules viables par interaction avec les cellules voisines Subissant la mort cellulaire apoptotique

Snezana Vujicic; Lanfei Feng; Angelika Antoni; Joyce Rauch; Jerrold S. Levine

doi:10.3791/54980

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Article de méthode

Identification des événements intracellulaires de signalisation induite dans les cellules viables par interaction avec les cellules voisines Subissant la mort cellulaire apoptotique

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DOI :

10.3791/54980

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27 décembre 2016

Snezana Vujicic^*¹^,² , Lanfei Feng^*¹^,² , Angelika Antoni³ , Joyce Rauch⁴ , Jerrold S. Levine¹^,²^,⁵

¹Section of Nephrology, Department of Medicine, University of Illinois at Chicago, ²Section of Nephrology, Department of Medicine, Jesse Brown Veterans Affairs Medical Center, ³Department of Biology, Kutztown University of Pennsylvania, ⁴Division of Rheumatology, Department of Medicine, Research Institute of the McGill University Health Centre, ⁵Department of Microbiology & Immunology, University of Illinois at Chicago

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Ici, nous présentons un protocole pour la détermination des événements de signalisation intracellulaire induits dans les cellules viables par l’interaction physique avec des cellules mortes ou mourantes adjacentes. Le protocole se concentre sur les événements de signalisation induits par la reconnaissance des cellules mortes par le biais du récepteur, par opposition à leur absorption phagocytaire ou à la libération de médiateurs solubles.

Résumé

Les cellules meurent par apoptose, également appelé mort cellulaire comme réglementé, acquérir plusieurs nouvelles activités qui leur permettent d'influencer la fonction des cellules vivantes adjacentes. activités vitales, comme la survie, la prolifération, la croissance et la différenciation, sont parmi les nombreuses fonctions cellulaires modulées par les cellules apoptotiques. La capacité de reconnaître et de répondre à des cellules apoptotiques semble être une caractéristique universelle de toutes les cellules, indépendamment de la lignée ou de l'organe d'origine. Toutefois, la diversité et la complexité de la réponse à des cellules apoptotiques mandats qu'un grand soin soit pris en disséquant les événements de signalisation et les voies responsables de tout résultat particulier. En particulier, il faut distinguer entre les multiples mécanismes par lesquels les cellules apoptotiques peuvent influer sur les voies de signalisation intracellulaire dans les cellules répondeuses viables, comprenant: la reconnaissance médiée par le récepteur de la cellule apoptotique, la libération de médiateurs solubles par les cellules apoptotiques et / ou de l'engagement de la phagomachines cytic. Ici, nous fournissons un protocole permettant d'identifier les événements de signalisation intracellulaires qui sont induits dans les cellules répondeuses viables après leur exposition à des cellules apoptotiques. Un avantage majeur du protocole réside dans l'attention qu'il porte à la dissection du mécanisme par lequel les cellules apoptotiques modulent des événements dans les cellules répondant de signalisation. Bien que le protocole est spécifique d'une lignée conditionnellement immortalisée de rein de souris proximale de la cellule tubulaire (cellules BU.MPT), elle est facilement adaptable à des lignées cellulaires qui ne sont pas d'origine épithéliale et / ou dérivés d'organes autres que le rein. L'utilisation de cellules mortes comme un stimulus introduit plusieurs facteurs uniques qui peuvent nuire à la détection d'événements de signalisation intracellulaires. Ces problèmes, ainsi que des stratégies visant à minimiser ou les contourner, sont discutés dans le protocole. L'application de ce protocole devrait aider notre connaissance croissante de la grande influence que les cellules mortes ou mourantes exercent sur leurs voisins en direct, à la fois dans la santé et dans diseÃproprement parler.

Introduction

Apoptose, ou réglementé la mort cellulaire ^1, contribue de manière essentielle à l'entretien et le développement des tissus. Vu la plus simple, permet d'apoptose âgés, endommagées, ou les cellules excédentaires à éliminer sans nuire aux tissus environnants ^2,3. La contribution de l'apoptose à l'homéostasie tissulaire, cependant, est nettement plus dynamique et varié. Les cellules meurent par apoptose acquièrent plusieurs nouvelles activités, à la fois sécrétée et associée aux cellules, qui leur permettent d'influencer la fonction des cellules vivantes adjacentes ^4-10. Des études antérieures ont porté sur la capacit....