Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

جراحة التحويلة، الحق القلب قسطرة، والأوعية الدموية القياس الشكلي في الفأر نموذج لالناجم عن تدفق-الرئوي الشرياني ارتفاع ضغط الدم

Published: February 11, 2017 doi: 10.3791/55065
Automatic Translation
1, 2, 2, 1, 1, 1, 1
1Center for Congenital Heart Diseases, Department of Pediatric Cardiology, Beatrix Children's Hospital, University Medical Center Groningen, University of Groningen, 2Research and Development Facility, University Medical Center Groningen, University of Groningen

Introduction

والهدف من هذه الطريقة هو خلق نموذج يمكن استنساخه لالشديد، الناجم عن التدفق الشرياني الرئوي وارتفاع ضغط الدم في الفئران وقياس في الدورة الدموية حيث المبدأ ونقطة نهاية النسيجية المرضية.

الرئوي ارتفاع ضغط الدم الشرياني (الهيئة العامة للإسكان) هو متلازمة سريرية أن تشمل الزيادة التدريجية في المقاومة الوعائية الرئوية مما يؤدي إلى فشل البطين الأيمن والموت. ضمن الطيف مرض superordinate من أمراض ارتفاع ضغط الدم الرئوي (PH)، الهيئة العامة للإسكان هو الشكل الأكثر حدة واحدة أن يبقى دون علاج 1. يتميز اعتلال الشرايين الأساسية في الهيئة العامة للإسكان من الشكل التقليدي لإعادة الأوعية الدموية التي تسبب انسداد لمعة السفينة. وتعتبر Muscularization من السفن غير muscularized العادية وتضخم طبقة سفينة سطي كظواهر المرض في وقت مبكر من الهيئة العامة للإسكان، وينظر أيضا في أشكال أخرى من PH 2، ويعتقد أن يكون عكسها 3. كما الهيئة العامة للإسكان لdvances، وتبدأ طبقة باطنة لإعادة، تشكل في نهاية المطاف الآفات neointimal مميزة 2. Neointimal من نوع الأوعية الدموية الرئوية إعادة عرض حصري لالهيئة العامة للإسكان ويعتبر حاليا أن يكون لا رجعة فيه (4).

كما الهيئة العامة للإسكان هو مرض نادر، والتقدم في الفهم لها pathobiological وتطوير علاجات جديدة اعتمدت بشكل كبير على نماذج حيوانية. و(MCT) نموذج monocrotalin في الفئران هو نموذج ضربة واحدة بسيطة التي كانت، ولا تزال، وتستخدم في كثير من الأحيان. MCT هو السم الذي يسبب إصابة الشرايين الرئوية والتهاب الإقليمي 5. 60 ملغ / كغ MCT يؤدي إلى زيادة في ضغط متوسط الشريان الرئوي (mPAP)، الرئوي المقاومة الوعائية (PVR)، وتضخم البطين الأيمن (RVH) بعد 3-4 أسابيع 6. يتميز histomorphology من تضخم وسطي معزولة بدون آفات neointimal 5. وMCTوبالتالي يمثل نموذج الفئران شكل معتدل من PH، وليس الهيئة العامة للإسكان، على الرغم من أنه يرد عادة باسم هذا الأخير.

في الأطفال الذين يعانون من الهيئة العامة للإسكان المرتبطة تحويلة الخلقية اليسار إلى اليمين (الهيئة العامة للإسكان-CHD)، وزيادة يعتبر تدفق الدم الرئوي كما الزناد أساسي لتطوير الآفات neointimal 7، 8، 9. في الفئران، وزيادة تدفق الدم الرئوي يمكن أن يتسبب من خلال إنشاء تحويلة بين الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف، وهي تقنية صفت لأول مرة في عام 1990 10. بدائل لخلق زيادة تدفق الرئوي هي من الرئة من جانب واحد أو تحت الترقوة إلى مفاغرة الشريان الرئوي 11. تتكون عيوب المفاهيمية من هذه النماذج من النمو التعويضي المحتملين من الرئة المتبقية وتفعيل مسار التكيف الناجمة عن استئصال الرئة، أو الإصابة علاجي المنشأ من الأوعية الدموية الرئوية المقررلمفاغرة الشريان الرئوي، سواء يفند تأثيرات زيادة تدفق الدم الرئوي.

عندما يتم إنشاء تحويلة الأورطيه- الأجوف وزيادة تدفق الدم الرئوي هو فعل بمثابة الضربة الثانية في الفئران المعالجة MCT، تحدث الآفات neointimal مميزة، وشكل حاد من الهيئة العامة للإسكان وما يرتبط بها من فشل البطين الأيمن (حمى الوادي المتصدع) تطوير 3 أسابيع بعد زيادة تدفق 12. وتقدم الدورة الدموية من الهيئة العامة للإسكان في هذا النموذج يمكن تقييم في الحي بواسطة تخطيط صدى القلب وقسطرة القلب الأيمن. وhistomorphology الأوعية الدموية، وسمك جدار الوعاء الدموي، ودرجة الانسداد الشرياني، والمعلمات للفشل البطين الأيمن تشكل الدعائم التي تقوم عليها توصيف المجراة سابقا من الهيئة العامة للإسكان.

يصف هذا الأسلوب بروتوكولات وإجراءات تفصيلية لعملية جراحية الأورطيه- الأجوف تحويلة (AC-تحويلة)، والحق قسطرة القلب، وتقييم النوعي والكمي للhistomorphology الأوعية الدموية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

وقد تمت الموافقة على الإجراءات التي تجرى على الحيوانات من قبل اللجنة المركزية الهولندية للتجارب على الحيوانات واللجنة رعاية الحيوان في جامعة المركز الطبي جرونينجن (NL). استخدمت كل من ويستار ولويس الفئران مع الأوزان ما بين 180 و 300 غرام.

1. السكن والتأقلم

  1. بعد وصوله إلى المرفق الحيوان المركزي والجرذان منزل في مجموعات من 5 في قفص. خلال فترة تأقلم لمدة 7 أيام، تعويد الفئران لمعالجة البشر، ولكن لا يتم تنفيذ أي إجراءات تجريبية.

2. إعداد وحقن معقمة Monocrotalin

  1. ل1 مل من 60 ملغ / مل monocrotalin (MCT) حل، تزن 60 ملغ من monocrotalin في أنبوب 2 مل. إضافة 700 ميكرولتر من كلوريد الصوديوم 0.9٪. إضافة 200 ميكرولتر من 1 M حمض الهيدروكلوريك. تدفئة الحل في أنبوب تحت ماء الحنفية الساخن ودوامة عليه. استخدام 6 N هيدروكسيد الصوديوم لجلب الرقم الهيدروجيني نحو 7.0. استخدام تقنية معقمة لإعداد MCT للحقن في القوارض. حقن 1 مل من معقم 60 ملغ / مل حل MCT للكيلوغرام الواحد تحت الجلد في الرقبة (0.3 مل من 60 ملغ / مل MCT ل300 غرام الفئران). ملاحظة: نحن نفضل عدم استخدام كميات أصغر بسبب فرصة أكبر أن جرعة حقن لن يكون مناسبا.

جراحة التحويلة 3. الأورطي-الأجوف

  1. تخدير.
    1. ملء غرفة الاستقراء مع 5٪ الأيزوفلورين / 100٪ O 2 (تدفق: 1 لتر / دقيقة) ووضع الفئران في الغرفة. تحقق من عمق كاف من التخدير عن طريق إجراء قرصة أخمص القدمين الخلفيتين. وزن الفئران.
    2. حلاقة وتنظيف البطن على مساحة أن ما يقرب من 8 سم و 3 سم. وضع فأر على ظهرها على حصيرة الحرارة (37 درجة مئوية) من قبل حصيرة معقمة تغطيتها.
    3. ضع خطم في التهوية قناع / غطاء محرك السيارة مع 2-3٪ الأيزوفلورين / 100٪ O 2 (تدفق: 1 لتر / دقيقة). تحقق من عمق التخدير عن طريق إجراء قرصة أخمص القدمين الخلفيتين. تطبيق مرهم العين لمنع جفاف بينما تحت التخدير.
  2. تحويلة سورجيري.
    1. فرك الجلد مع كلوريد hexidine للتطهير. حقن 0.01 ملغم / كغم البوبرينورفين تحت الجلد لتسكين الألم بعد العمليات الجراحية.
    2. استخدام أدوات معقمة لإجراء عملية جراحية. إجراء شق بشفرة مشرط رقم 10 في البطن في خط الوسط، اعتبارا من 1 سم تحت الحجاب الحاجز وتمتد إلى أسفل إلى ما فوق الأعضاء التناسلية.
    3. وترفع من الأمعاء مع مسحة القطن، وتغطي الأمعاء في والشاش الرطب معقم (0.9٪ كلوريد الصوديوم)، ووضعها على الجانب الأيسر من الحيوان.
    4. استخدام قطعة قطن لفصل الأغشية التي تربط الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي إلى الأنسجة المحيطة بها.
      ملاحظة: لا تشريح الأغشية بين الشريان الأبهر والوريد الأجوف.
    5. باستخدام ملقط المنشقة، وإزالة الدهون الأبهر ماحول الأوعية فقط فوق التشعب، فقط على الجانب الأيمن من الشريان الأورطي وفقط على موقع حيث سيتم إدخال الإبرة.
    6. استخدام قطعة قطن لفصل الشريان الأبهر والوريد الأجوف من 2 مم سوبrior إلى الموقع حيث سيتم إدخال الإبرة من أجل خلق مساحة للالمشبك Biemer.
    7. في هذا المجال، أولا وضع رباط فضفاضة (5-0 خياطة) حول الشريان الأورطي. خلق التوتر على ربطة طريق وضع المشبك كوشر على ذلك، ومن ثم وضع كوشر متفوقة على شق (الشكل 1A). وضع Biemer المشبك فقط متفوقة على ضمد (شملت رقم البريد 1A).
    8. باستخدام قطعة من القطن، ضغط الوريد الأجوف كما بشكل أقصى وقت ممكن لعرقلة تدفق (الشكل 1A). ينحني إبرة (18 G في هذا البروتوكول) في زاوية 45 درجة، حيث يشير فتحة نحو الخارج (الشكل 1A).
    9. في زاوية من 90 درجة، أدخل الإبرة في الشريان الأورطي، فقط فوق التشعب، مع فتحة لافتا الإبرة إلى اليسار (الشكل 1A). التلاعب في رأس الإبرة إلى اليسار وأدخله في الوريد الأجوف.
      ملاحظة: الآن يجب أن يكون طرف الإبرة فيزيبلي في الوريد الأجوف (الشكل 1B).
    10. استخدام قطعة من القطن الثانية لدفع الدم المتبقية في الشريان الأورطي من موقع الإدراج لمنع تجلط الدم. تجفيف المنطقة المحيطة ناور مع شاش معقم من أجل الغراء التمسك بشكل كاف.
    11. سحب الإبرة بأكملها من الشريان الأورطي وتطبيقه على الفور قطرة من الغراء الأنسجة على الموقع ثقب في الشريان الأورطي. تأكد من عدم الغراء مسحة القطن إلى الأنسجة. Unclamp الشريان الأورطي.
    12. التحقق من تحويلة يدويا عن طريق سحب على والافراج عن رباط على الداني الأبهر إلى تحويلة. تخفيف يجب تلوين القاصي الوريد الأجوف لتحويلة في أحمر وخلق الاضطراب في موقع تحويلة.
      ملاحظة: سوف تشديد يتحول الدم في الوريد الأجوف إلى الأحمر الداكن.
    13. وضع الأمعاء مرة أخرى في الحيوان. إغلاق طبقة العضلات والجلد مع resorbable 4-0 الغرز. تهوية الحيوان مع 100٪ O 2 للتعافي من التخدير.
      ملاحظة: لا تترك العاني غير المراقب سوء حتى استعاد وعيه كافية للحفاظ على الاستلقاء القصية.
  3. جراحة صورية.
    1. تنفيذ كافة الإجراءات المذكورة أعلاه باستثناء إدخال الإبرة في الشريان الأورطي.
  4. الرعاية بعد الجراحة.
    1. وضع الفئران في قفص واحد وفي حاضنة عند 37 درجة مئوية حتى صباح اليوم التالي.
    2. حوالي 6 ساعات بعد الجراحة، وضخ 0.01 ملغم / كغم البوبرينورفين تحت الجلد لتسكين الألم بعد العمليات الجراحية. كرر في صباح اليوم التالي إذا تبين الفئران علامات الانزعاج.
      ملاحظة: أول 3 أيام بعد الجراحة، والفئران تميل إلى أكل وشرب أقل (وهذا مهم بشكل خاص عند طعام أو مياه الشرب تختلط مع الأدوية). وتشير معظم الفئران السلوك العادي بعد 3 أيام من الجراحة. إذا لم يكن كذلك، ترصد عن كثب. يعتبر فقدان الوزن تزيد عن 15٪ في 1 أسبوع غير طبيعي، ويجب أن يتم التخلص من هذا القبيل الفئران عن طريق استخراج وتعميم حجم الدم في حين تحت التخدير.

"jove_title"> 4. تطوير الهيئة العامة للإسكان

ملاحظة: في هذا البروتوكول، والموت الرحيم للحيوان قبل استخراج تعميم حجم الدم في حين تحت التخدير.

  1. تضحية 1 يوم بعد الجراحة (MF8) لالاستجابات الخلوية والوظيفية في وقت مبكر لزيادة تدفق الدم الرئوي (على سبيل المثال، من الجين بنسبة التنظيم أو عوامل النسخ في وقت مبكر).
  2. تضحية 1 أسبوع بعد الجراحة (MF14) للمرحلة مبكرة، النمط الظاهري الهيئة العامة للإسكان الأوعية الدموية (تضخم وسطي بدون آفات neointimal).
  3. تضحية 2 أسابيع بعد الجراحة (MF21) لمراحل متقدمة من الهيئة العامة للإسكان الأوعية الدموية النمط الظاهري (ملحوظ تضخم وسطي وتشكيل neointimal) مع ارتفاع معتدل في RVP وmPAP.
  4. تضحية 3 أسابيع بعد الجراحة (MF28) لنهاية مرحلة الهيئة العامة للإسكان الأوعية الدموية النمط الظاهري (ملحوظ انسداد neointimal) والارتفاع القوي في RVP وmPAP. علامات سريرية للفشل البطين الأيمن شائعة في هذه المرحلة.
  5. التضحية بعد يوم 28 (MF-حمى الوادي المتصدع) عن فشل البطين الأيمن المصاحب الهيئة العامة للإسكان (حمى الوادي المتصدع)، الذي يعرف طبيا باسم ضيق التنفس والخمول الشديد، وفقدان الوزن (<10٪ في 1 أسبوع). إنهاء الفئران عند واحد من هذه العلامات موجودا. في كثير من الأحيان، الفئران تتطور هذه الأعراض بين أيام 28 و 35، وإذا تركت بدون حراسة، ويموت من تلقاء أنفسهم خلال هذه الفترة الزمنية.

5. حق القلب قسطرة

  1. تخدير.
    1. ملء غرفة الاستقراء مع 5٪ الأيزوفلورين / 100٪ O 2 (تدفق: 1 لتر / دقيقة) ووضع الفئران في المربع. تحقق من عمق كاف من التخدير عن طريق إجراء قرصة أخمص القدمين الخلفيتين. وزن الفئران.
    2. حلاقة وتنظيف الرقبة في الجانب الأيمن بطني من الفئران، وبالنسبة لبروتوكول تخطيط صدى القلب، والصدر والجزء العلوي من البطن.
    3. وضع فأر على ظهرها على حصيرة الحرارة (37 درجة مئوية) ووضع خطم في التهوية قناع / غطاء محرك السيارة مع 2-3٪ الأيزوفلورين / 100٪ O 2 (تدفق: 1 لتر / دقيقة). يجب أن تواجه الخطم نحو الباحثة.
  2. بروتوكول ضربات القلب.
    1. إجراء تخطيط صدى القلب وفقا لبروتوكول صفها بريتين وآخرون. في إن الرب 13.
  3. بروتوكول القسطرة.
    ملاحظة: يستخدم هذا البروتوكول قنية جامدة مع طرف متشكلة عازمة 20 درجة لتوجيه 15 سم السيليكون القسطرة مع مم الكرة 2 من غيض. يتم استخدام إبرة 20 G مع فتحتها تميل قليلا إلى الداخل لإدراج قنية في الوريد الوداجي الأيمن (انظر قائمة المواد). الفئران في أي مرحلة من الهيئة العامة للإسكان التقدم والسيطرة يمكن أن تستخدم في هذا البروتوكول.
    1. تطهير الرقبة مع كلوريد hexidine. جعل شق 1.5 سم بشفرة مشرط رقم 10 في الجانب الأيمن بطنيمن الرقبة، من الحق في عظمة الترقوة حتى العظم الفك السفلي.
    2. نشر النسيج باستخدام المقص. باستخدام الملقط، وسحب بلطف الأنسجة بعيدا حتى يظهر حبل الوريد. تشريح الأغشية حول حبل الوريد الوريد باستخدام الملقط منشقة.
    3. وضع التوتر على حبل الوريد عن طريق وضع رباط فضفاضة (5-0 خياطة) حول السفينة. زيادة التوتر والشريط ربطة على قناع التهوية (الشكل 2A).
    4. المصب من موقع الإدراج، ووضع رباط فضفاضة حول السفينة لتشديد بعد قنية هي في الموقع من أجل منع تسرب وفقدان الضغط.
    5. باستخدام مقابض ملقط، ينحني قليلا غيض من إبرة 20 G مع فتحة إلى الداخل لإجراء قنية مع القسطرة.
    6. إدخال رأس الإبرة 20-G في الوريد، وسرعان ما وضع قنية تحتوي على القسطرة داخل السفينة. سحب إبرة، ثم قم بإغلاق ضمدالتي أعدت في الخطوة 5.3.4.
    7. إجراء قنية تحتوي قسطرة في الوريد الوداجي. غيض من قنية هو في منحنى 20 درجة (راجع الخطوة 5.3.5). مناورة قنية تحت عظمة الترقوة وتقدم قليلا لدخول الأيمن الأذين (الشكل 2C).
    8. للدخول إلى البطين الأيمن، تشير غيض من قنية إلى اليسار، نحو القلب (الشكل 2D). على الشاشة السرير، يجب أن يظهر منحنى الضغط RV، مطابقة الشكل 2D.
    9. عندما منحنى الضغط RV هو ثابت، كتابة البطين الأيمن الانقباضي والانبساطي ضغط 1 (sRVP1 / dRVP1).
    10. التلاعب غيض من قنية إلى اليسار وإلى الأعلى. دفع القسطرة داخل قنية (الشكل 2E).
    11. دفع القسطرة في الشريان الرئوي الرئيسي (PA). يجب أن يشعر أي مقاومة عند تمرير الصمام الرئوي.
      ملاحظة: عندما تدخل القسطرة في الشريان الرئوي الرئيسي، دوضغط iastolic يرتفع. على الشاشة السرير، يجب أن يظهر منحنى ضغط السلطة الفلسطينية، مطابقة الشكل 2E.
    12. عندما منحنى الضغط السلطة الفلسطينية هو ثابت، كتابة الانقباضي، ضغط الدم الانبساطي، ويعني السلطة الفلسطينية ضغط 1 (sPAP1، dPAP1، mPAP1).
    13. مزيد من التقدم القسطرة داخل قنية حتى يحصل مثبتة على الكرة في طرف القسطرة في الشريان الرئوي. مراقبة منحنى الضغط على رصد انخفاض السرير وتتناسب مع منحنى الضغط إسفين في الشكل 2F.
    14. عندما منحنى الضغط إسفين هو ثابت، كتابة الانقباضي، ضغط الدم الانبساطي، ويعني الضغط إسفين.
    15. سحب القسطرة ببطء، وبعد ذلك قياس وكتابة القيم sPAP2، ​​dPAP2، ​​mPAP2، ​​sRVP2، وdRVP2، كما هو معروض على الشاشة السرير.
    16. عندما تكون في RV، وسحب قليلا إلى الوراء قنية والقسطرة لقياس يعني الضغط الأذيني الأيمن (RAP). منحنى يجب أن يتطابق مع منحنى RAP في الشكل 2A.
      لاالشركة المصرية للاتصالات: في هذا البروتوكول، والموت الرحيم الفئران بعد بروتوكول القسطرة عن طريق استخراج حجم الدورة الدموية في حين تحت التخدير.

6. تقييم الصرف وقياس الأشكال

ملاحظة: في هذا البروتوكول، والموت الرحيم للحيوان قبل استخراج تعميم حجم الدم في حين تحت التخدير. الفئران في أي مرحلة من الهيئة العامة للإسكان التقدم والسيطرة يمكن أن تستخدم في هذا البروتوكول.

  1. بعد التضحية، واخراج الرئتين عن طريق قطع القصبة الهوائية حوالي 5 مم فوق التشعب الشعب الهوائية والسفن التي تربط الرئتين إلى القلب. وضع الرئتين في المياه المالحة الباردة. تشريح الرئة اليسرى. قطع القصبة الرئيسية اليسار في التشعب.
  2. ملء حقنة 50 مل مع 4٪ لامتصاص العرق، ونعلق أنبوب مع قنية إلى الحقنة، وشنق الحقنة حوالي متر فوق طاولة العمل. تناسب قنية في القصبة الرئيسية اليسرى لملء سلبي الرئة مع امتصاص العرق.التعامل مع امتصاص العرق بحذر.
  3. احتضان الرئة اليسرى في امتصاص العرق لمدة 48 ساعة.
  4. يذوى الرئة اليسرى التي يحتضنها ذلك على التوالي في 70٪ من الإيثانول (1 ح)، و 80٪ من الإيثانول (1 ح)، و 90٪ من الإيثانول (ح 1)، و 100٪ من الإيثانول (3 ساعات)، زايلول (2 ح)، والبارافين ( 2 ساعة).
  5. تضمين الرئة اليسرى في البارافين، مع نقير الرئة التي تواجه كاسيت.
  6. وصمة عار على 4 ميكرومتر أقسام الرئة جزءا لا يتجزأ من البارافين باستخدام تلطيخ فيرهوف أو المرنة، فان Gieson، وفقا لتعليمات الشركة الصانعة 29. تأكد من أن صفيحة مرنة وتختلف أيضا (كما في الشكل 3). مسح أقسام الملون في 40X التكبير.
  7. تقسيم الرئة إلى 4 أجزاء. في كل رباعي، والعثور على 10 سفن التي يبلغ قطرها الخارجي <50 ميكرون (داخل عنيبية) و 10 السفن التي يبلغ قطرها الخارجي> 50 ميكرون (قبل عنيبية). التقاط صورة (2 × 40 صور في الرئة). تكبير عشوائيا حتى 20x التكبير وصورة كل سفينةفي هذا المجال من أجل الحد من التحيز في الاختيار.
  8. استبعاد السفن التي لديها أطول / أقصر نسبة قطر> 2، شكل دائري غير مكتمل، أو انهيار أكثر من ربع من جدار الوعاء الدموي.
    ويرد مثال من سفينة مستبعدة في الشكل 3B جعل كل صورة على نفس التكبير (40X)، وتشمل شريط النطاق: ملاحظة.
  9. فتح يماغيج والصورة الأولى. رسم خط مستقيم على شريط الحجم في الصورة لوضع جدول عبر "تحليل" و"تعيين نطاق واسع." ل"المسافة المعروفة"، استخدم القيمة على شريط نطاق والصورة. استخدام ميكرومتر (ميكرون) كوحدة للطول. تعيين المقياس إلى العالمية.
  10. باستخدام "التحديدات مرفوعة" رسم خط على الحدود الداخلية للمنطقة اللمعية (الشكل 3)، واستخدام "قياس" (CRTL م) لقياس هذا المجال. ثم، رسم خط حول ELAST الخارجيجيم الصفيحة (الشكل 3) لقياس منطقة السفينة الإجمالية.
  11. حساب اللمعية وقطرها الخارجي ( معادلة ) باستخدام معادلة .
  12. حساب سمك الجدار باستخدام معادلة .
  13. حساب نسبة الجدار / التجويف باستخدام معادلة .
  14. حساب درجة الانسداد باستخدام معادلة .
  15. تسجيل السفينة على muscularization (لا، muscularization الجزئية أو الكلية) (الشكل 3B).
    يتم تعريف سفن مع الصفيحة المرنة مزدوجة لأكثر من نصف محيط الدائرة كما muscularized تماما: ملاحظة. يتم تعريف السفن مع الصفيحة المرنة مزدوجة أقل من نصف محيط الدائرة كما muscularized جزئيا.
  16. تسجيل السفينة على وجود neointima (نعم أو لا) (الشكل 3C).
    يتم تعريف سفن بدون رقيقة داخلية محددة بوضوح جنبا إلى جنب مع (وغالبا ما غريب الأطوار) اللمعية انسداد كما الآفات neointimal: ملاحظة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

يتم عرض نتائج ممثلة في الشكل (4). تظهر النتائج المقدمة خصائص MCT + FLOW في الفئران لويس في المجموعات التالية: التحكم (ن = 3)، MF8 (ن = 5)، MF14 (ن = 5)، MF28 (ن = 5)، وMF-حمى الوادي المتصدع ( ن = 10). وأجريت التحليلات الإحصائية باستخدام في اتجاه واحد أنوفا مع تصحيح بونفيروني.

60 ملغ / كغ MCT وزيادة الرئوي الرصاص تدفق الدم إلى ارتفاع متوسط ​​في الانقباضي ضغط البطين الأيمن (sRVP) (23 ± 6-56 ± 11 مم زئبقي)، الانقباضي ضغط الشريان الرئوي (SPAP) (20 ± 4-54،0 ± 10 مم زئبقي )، ويعني ضغط الشريان الرئوي (mPAP) (16 ± 3 و 36 ± 4 مم زئبق) في 28 يوما (MF28). أنها لا تزال مرتفعة على حد سواء وصولا إلى مرحلة عندما يتطور فشل البطين الأيمن (MF-حمى الوادي المتصدع) (الشكل 4). في المراحل المبكرة الهيئة العامة للإسكان (MF8 وMF14)، ويلاحظ وجود ارتفاع في sRVP، SPAP، وmPAP. PAP الانبساطي والصحيحزيادة الضغط المحاكمة في أواخر مراحل، ولكن ليس بشكل كبير. الضغوط إسفين لا تتغير بشكل ملحوظ خلال تطور المرض.

الحق في البطين البطيني إلى اليسار والحاجز زيادة نسبة الوزن إلى حد كبير من MF14 إلى MF-حمى الوادي المتصدع، مشيرا إلى تضخم البطين الأيمن. وتزداد نسبة الوزن الرطب الجاف الكبد بشكل كبير في مرحلة MF-حمى الوادي المتصدع، مشيرا إلى ذمة الكبد وفشل البطين الأيمن الاحتقاني.

Muscularization السفن داخل عنيبية <50 ميكرون الزيادات تدريجيا خلال الهيئة العامة للإسكان التقدم. سفن من هذا الحجم عادة لا يكون طبقة وسطي العضلات في الفئران السيطرة. في MF14، ما يقرب من نصف هذه السفن (43 ± 17٪) لديه وسائل الاعلام العضلات الإجمالي (كما في الشكل 3B). في MF28 وMF-حمى الوادي المتصدع، وmuscularized تقريبا كل شرين (98.7 ± 2.5٪، و 100 ± 0٪). آفات Neointimal تحدث لأول مرةفي MF21، بينما في MF28 وMF-حمى الوادي المتصدع، حوالي 65٪ من جميع الشرايين لديها طبقة neointimal (كما في الشكل 3C). وتصلب الجدار إلى التجويف نسبة وانسداد عشرات كلا الزيادة بشكل كبير من MF14 إلى MF28 (على التوالي، 10.4 ± 3،9 حتي 71،5 ± 30 (يخدع: 7.1 ± 0.2) و20،0 ± 2،8 حتي 54،7 ± 10.6 (يخدع: 12.2 ± 0.3) ). خصائص الدورة الدموية وhistomorphological من الهيئة العامة للإسكان تقدم في MCT + FLOW في الفئران ويستار متشابهة 14.

شكل 1
الشكل 1. التمثيل التخطيطي لجراحة التحويلة Aorto-الأجوف. أ) يتم المتأزم الأبهر وفرضت متفوقة على الموقع الإدراج. يتم ضغط الوريد الأجوف السفلي إلى الموقع الإدراج. الإبرة، عازمة على 45 درجة ومع فتحة للخارج، يتم إدخالها في الشريان الأورطي في زاوية 90 درجة. ب) الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2
الشكل 2. حق إجراء قسطرة القلب والمنحنيات الضغط التمثيلية. أ) يتم المتأزم الوريد الوداجي الحق مع ربطة ومسجلة على قناع التهوية. يتم وضع قسطرة في الوريد الوداجي. ب) ورصد السرير عرض على حق موجة ضغط البطين. C) القسطرة داخل قنية وضعها في الأذين الأيمن بعد إدخالها في الوريد الوداجي الصحيح. أدناه: أ الصحيحة موجة الضغط الأذيني نموذجية. D) القسطرة داخل قنية وضعها في البطين الأيمن. أدناه: أ ventricul الحق نموذجيةع موجة الضغط في نهاية مرحلة الهيئة العامة للإسكان. وتقدمت E) القسطرة في قنية لدخول الشريان الرئوي الرئيسي. أدناه: أ الرئوية موجة الضغط الشرياني نموذجية. وتقدمت F) القسطرة في الشرايين الرئوية حتى يتم عرض موجة الضغط إسفين على الشاشة. أدناه: أ الرئوية موجة الضغط إسفين نموذجية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (3)
الشكل 3. الأوعية الدموية الصرف والقياس الشكلي في الجرذان تحكم والهيئة العامة للإسكان. أ) A، سفينة عادية غير muscularized مع درجة انسداد 3.7٪. ب) شرين muscularized تماما مع النتيجة انسداد 24.3٪. C). آفة neointimal مع درجة انسداد 54.1٪. د) E) وقياس المساحة الكلية للسفينة واللمعية (في وعاء مع التمثيل التخطيطي من آفة neointimal)، بما في ذلك الحسابات. تمثل القضبان 50 ميكرون. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (4)
الشكل 4. ممثل النتائج من الرئوي ديناميكا الدم والأوعية الدموية علم الصرف / قياس الأشكال. وأجريت التحليلات الإحصائية باستخدام في اتجاه واحد أنوفا مع التصحيحات بونفيروني. يتم تمثيل قيم كمتوسط ​​± SEM. يخدع: السيطرة؛ MF (monocrotalin + تدفق)؛ حمى الوادي المتصدع: فشل البطين الأيمن. الصورة: الانقباضي. د: الانبساطي. م: متوسط. RVP: ضغط البطين الأيمن. PAP: pulmonarالضغط الشرياني ذ. RAP: الضغط الأذيني الأيمن. RV: البطين الأيمن. LV: البطين الأيسر. الحبس الاحتياطي: الحاجز بين البطينين. BW: وزن الجسم. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

ويصف هذه الطريقة العملية الجراحية لتحويلة الأورطيه- الأجوف في الفئران قبل المعاملة مع MCT إلى إنشاء الهيئة العامة للإسكان التي يسببها تدفق والتقنيات لتقييم الدورة الدموية مبدأ ونقطة نهاية النسيجية المرضية التي تميز الهيئة العامة للإسكان وهذا النموذج.

خطوات حاسمة في إطار بروتوكول واستكشاف الأخطاء وإصلاحها

الجراحة وبعد الجراحة. خلال جراحة تحويلة الأورطيه- الأجوف، فإن الخطوة الأكثر أهمية هو تشريح الشريان الأبهر والوريد الأجوف. الأغشية التي إحاطة يجب أن تشريح الشريان الأبهر والوريد الأجوف بما فيه الكفاية لخلق 1) رؤية جيدة للمنطقة الأورطي، حيث سيتم إدخال الإبرة، والموقف من الإبرة في الوريد الأجوف بعد الإدراج و2) مساحة كافية ل المشبك الشريان الأبهر فوق موقع الإدراج. نفس الأغشية، ومع ذلك، تستخدم أيضا لإجراء الدم الأبهري من خلال الموقع ثقب بين السفينتين (الشكل 1). تشريح أغشية الكثير سوفتسبب تحويلة إلى تسرب. الأنسجة الغراء قد يحل التسرب، ولكن قد ثم يتسرب أيضا إلى ناور، المساس حجمها. عندما الغراء قيدت تدفق من خلال تحويلة أو أي من السفن، والغراء يمكن إزالتها بلطف، ولكن تمزق الوريد الأجوف أو الأغشية التي تجري قد تحدث تحويلة. حجم أو كفاية تحويلة يمكن تقدير من خلال مقارنة اختلاف اللون ودرجة الاضطراب من الدم في الوريد الأجوف خلال ضغط وإزالة الضغط من الشريان الأبهر القريب مع مسحة القطن.

وقد تبين إبرة 18 G لإنشاء تحويلة الكافية التي تنتج في شكل يتفق وقابلة للتكرار للتقدم الهيئة العامة للإسكان في لويس (هذه المقالة) ويستار (انظر المرجع 14) الجرذان ومن البطين الأيمن حجم الزائد 15. خلقت إبرة 18 G تحويلة الأكثر متوازنة، مع زيادة كبيرة في تدفق الرئوي من جهة وانخفاض نسبة المضاعفات بعد العملية من ناحية أخرى. المشكلة بعد الجراحة الأكثر شيوعا هو فقدان الوزن. يحدث فقدان الوزن تصل إلى 10٪ في 1 أسبوع في كل الفئران بعد الجراحة، وذلك بسبب ويفترض أن انخفاض استهلاك بعد الأيام القليلة الأولى لعملية جراحية. يصرح باستخدامها الفئران عندما تتجاوز فقدان الوزن 15٪ في 1 أسبوع، وهذا يعتبر مؤشرا على أن تكون على ما يرام. طعام السائل يمكن أن تحسن التغذية في الأسبوع الأول بعد الجراحة. مضاعفات ما بعد الجراحة النادرة هند شلل ساقه والأمعاء نقص التروية، والذي يؤدي أيضا إلى القتل الرحيم. في المجموع، كان أقل من 5٪ من الفئران ليتم التخلص بعد العمل الجراحي.

قسطرة. خطوات حاسمة خلال بروتوكول قسطرة تبدأ مع تنظيم التخدير. يجب أن يكون عمق التخدير أدنى حد ممكن (1،5-2٪ الأيزوفلورين في هذا البروتوكول)، كما تظهر زيادة في عمق التخدير لتقليل البطين الأيمن والشريان الرئوي الضغوط، خصوصا في الفئران مع فشل البطين الأيمن. قياسات لديهم ميل إلى becomه لا يمكن الاعتماد عليها عند تجاوز البروتوكول 20 دقيقة في المدة.

الخطوة الهامة التالية هي التلاعب القسطرة في RV وفي الشريان الرئوي الرئيسي. هذا يمكن أن يكون تحديا. يمكن بيغ القسطرة تساعد على منحنى القسطرة في مجرى تدفق عندما عالق طرف في الترابيق رف ل. التلاعب في حد ذاته يمكن أن يسبب خلل RV، مما يدل على منحنيات ضغط غير النظامية على شاشة السرير. يجب تشغيل إدخال قسطرة في البطين الأيمن والشريان الرئوي بسلاسة. عندما يحصل الطرف عالقا في الصمام الرئوي، ويرى المقاومة. الضغط من خلال هذه المقاومة قد يتسبب في الصمام الرئوي إلى تمزق، مما يحد من الاعتماد على القياسات اللاحقة.

في هذا البروتوكول، وضحى الفئران بعد إجراء القسطرة. من الناحية النظرية، إلا أن حبل الوريد والجروح يمكن أن تكون مغلقة بعد سحب القسطرة خارج، والحيوانات يمكن أن يعيش مع فقطوالباقي ترك حبل الوريد.

قياس الأشكال. في تقييم الأوعية الدموية سمك الجدار وانسداد العشرات، والخطوة الأكثر أهمية هو التعرف على صفيحة مرنة. من الخبرة، واحتمالات النجاح لهذه الغاية هو أعظم مع جيدا متباينة فيرهوف أو المرنة، فان Gieson تلطيخ. في حين أن التجويف عادة ما يمكن تمييزها بسهولة من البطانية (لقياس مساحة الأوعية الدموية الداخلية)، تمييز من وسائل الإعلام من البرانية قد تتطلب نظرة فاحصة (لقياس مساحة الأوعية الدموية الخارجية). بعض باطنة بروتوكولات التدبير وسماكة وسطي على حدة، وتحديد البطانية كطبقة بين التجويف ورقيقة داخلية، ووسائل الإعلام والطبقة بين رقيقة داخلية وخارجية. هذا عادة ما يكون من الممكن في مرحلة مبكرة MCT + FLOW الهيئة العامة للإسكان. ومع ذلك، والشرايين في مرحلة متقدمة من المرض، لا سيما الآفات neointimal، قد تعرض عدة صفيحة مرنة وكثيرا ما تفقد سلامة صفيحة مرنة (

مزايا والقيود من إضافة تدفق بمثابة الزناد

استخدام زيادة تدفق الدم الرئوي لإنشاء الهيئة العامة للإسكان في الفئران لديها العديد من المزايا، أبرزها أنها معروفة (patho-) الزناد الفسيولوجية لهذا المرض، والتي تفضل الترجمة البشري الهيئة العامة للإسكان-CHD (آيزنمنغر علم وظائف الأعضاء)، ولكن أيضا لأشكال أخرى من الهيئة العامة للإسكان 9. نموذج يسمح لتنظيم تدفق من خلال تغيير حجم الإبرة عند إنشاء AC-تحويلة.

في هو جين تاورجل الهيئة العامة للإسكان-CHD، وإغلاق تحويلة يؤدي إلى عكس الهيئة العامة للإسكان في مرحلة مبكرة من المرض، ولكن لتطور الهيئة العامة للإسكان في مراحل المرض المتقدمة. أن إغلاق التحويلة في الجسم الحي يسمح احد لدراسة تأثير إزالة الزناد في نقاط زمنية مختلفة من تطور المرض، وبالتالي للتحقيق في آليات (عدم) عكس الهيئة العامة للإسكان. لسوء الحظ، في الوقت الحاضر، وإغلاق التحويلة ليس ممكنا في النموذج الحالي. آثار التطبيع الدورة الدموية (على سبيل المثال، وإزالة التدفق الزائد وتطبيع ضغط الشريان الرئوي) في الفئران مع الهيئة العامة للإسكان المرتبطة تدفق يمكن التحقيق من قبل زرع الرئة اليسرى المتضررين في الفئران المتلقي مع تداول العادي. ولقد ثبت سابقا أن تطبيع الدورة الدموية، في الفئران عن طريق زرع الرئة والبشري الهيئة العامة للإسكان، أمراض الشرايين التاجية عن طريق إغلاق تحويلة القلب، ويؤدي إلى تراجع تضخم وسطي في مرحلة مبكرة الهيئة العامة للإسكان 21. آثار الدورة الدموية العاديةسعودة في مراحل متقدمة من التجارب تدفق الهيئة العامة للإسكان غير معروفة حاليا.

أهمية مع الاحترام لنماذج بديلة

نموذج MCT-ضربة واحدة. إن الحقن تحت الجلد من 60 ملغ / كغ MCT هو وسيلة بسيطة وفعالة لخلق نموذج لارتفاع ضغط الدم الرئوي في الفئران. MCT يدفع الرئوي الشرياني إصابة الخلية البطانية، تليها تضخم طبقة العضلات في الشرايين الرئوية 5. على الرغم من أن الآليات الدقيقة لا تزال غير واضحة، وقد تم تحديد العديد من مسارات وعوامل النمو التي تشارك في تضخم وسطي التالية MCT. تدخل الصيدلانية على هذه الممرات في كثير من الأحيان قد قلل بنجاح تضخم وسطي وmPAP في MCT-الفئران. ومع ذلك، منذ يعرف تضخم وسطي لديهم ميل طبيعي للعكس في البشر 3 وكما تم وصفها لعكس تلقائيا في MCT-الفئران 16، وتأثير هذه العلاجاتوينبغي تقييم نقدي.

وMCT + FLOW نموذج ضرب المزدوج. إضافة لزيادة الدم الرئوي تدفق 7 أيام بعد الحقن MCT يغير نقدي (الأوعية الدموية) النمط الظاهري بطريقة تعتمد على الوقت المميز. في MF14 (7 أيام بعد تحريض من زيادة تدفق)، تبدأ السفن عادة غير muscularized لتطوير طبقة وسطي العضلات. في MF21، ويزيد من سماكة وسطي وأول الآفات neointimal تحدث. في MF28، وقد وضعت طبقة neointimal في معظم السفن. بين MF28 MF35 و، معظم الفئران تطوير قصور القلب الأيمن وتموت من sequellae لها. وقد أظهرت الدراسات السابقة في MCT + الفئران تدفق أن إضافة تدفق إلى MCT يؤدي إلى تفعيل مجموعات محددة من الجينات. في بعض التجمعات، وتدفق تعارض الآثار الناجمة عن MCT. في حالات أخرى، تدفق تعزيز هذه الآثار، ومجموعة واحدة تضمن الجينات التي كانت خصيصا للتنظيم بعد تدفق 17. واحدة من تلك الجينات تدفق معين هوالنمو في وقت مبكر استجابة-1 جين 14 (التمثيل الجغرافي العادل-1). أدى تثبيط وقت مبكر من التمثيل الجغرافي العادل-1 في تخفيف من الهيئة العامة للإسكان وتشكيل neointimal في MCT + الفئران تدفق 18. التمثيل الجغرافي العادل-1 ارتبط أيضا مع إعادة neointimal في الهيئة العامة للإسكان البشري (الهيئة العامة للإسكان، أمراض القلب و الهيئة العامة للإسكان مجهول السبب) 19. هذه الملاحظات إضافة إلى أدلة على أن زيادة أو اضطراب تدفق الدم الرئوي هو الزناد ضروري لتشكيل neointimal.

نموذج ضرب واحد تدفق الوحيد. في الفئران مع تحويلة الأورطيه- الأجوف دون MCT الحقن وارتفاع ضغط الدم الرئوي (mPAP> 25 مم زئبق) تتطور بين 10 و 20 أسبوعا بعد تحويلة تحريض 20. في 20 أسبوعا، ويهيمن على الأنسجة الوعائية الرئوية التي تضخم وسطي الشرايين قبل عنيبية والجدد muscularization من الشرايين داخل عنيبية. وعلى الرغم من وصفوا بعض الآفات neointimal في هذا النموذج 20، وتطوير هذه الآفات تحتاج ر س يتم تأكيد وكميا.

نموذج Sugen-نقص الأكسجة. نموذج آخر شائع للالهيئة العامة للإسكان مع الآفات neointimal هو Sugen5416-نقص الأكسجة (SuHx) الفئران. كتل Sugen5416 عامل النمو البطاني (VEGF) مستقبلات الأوعية الدموية. هذا يدفع تلف الخلايا البطانية وتتالي يشير إلى أن، إلى جانب نقص الأكسجة، تثير الخلايا البطانية وانتشار 22. بعد حقن Sugen5416، يتم وضع الفئران في غرفة ميتة لمدة 4 أسابيع، والتي على تطور الهيئة العامة للإسكان. ثم يتم إعادة مكشوفة الفئران على normoxia لمدة 4 أسابيع. وقد أظهرت المركبات الدوائية التي تستهدف البطانية الخلايا المقاومة أو شلالات الإشارات من TGF-B و BMP القدرة على عكس الآفات neointimal في هذا النموذج 23 و 24 و 25. والبديل الجديد من طراز SuHx هو النموذج Sugen-pneumectomy، والذي ينتج أيضا في الهيئة العامة للإسكان حادة مع الآفات neointimal > 26. ومع ذلك، وهذا النموذج لا تتسم بشكل كامل حتى الان. وهناك طريقة وراثية جديدة للحث على PH في الفئران ينطوي على طفرة في الجين BMP-مستقبلات-2، والذي ينتج في muscularization كبير (PH)، ولكن لا تشكيل neointimal (الهيئة العامة للإسكان) 27.

وقد تم الإبلاغ عن نتائج مماثلة فيما يتعلق بعدد من الآفات neointimal ودرجة الانسداد اللمعية في مرحلة نهاية SuHx دون علاج وMCT + الفئران تدفق 28. الاختلافات الرئيسية بين كلا النموذجين هي 1) أن mPAP في MCT + تدفق يزيد تدريجيا، في حين، وقد تبين أن mPAP في SuHx أن ينخفض تدريجيا بعد إعادة التعرض لnormoxia 28؛ 2) أن MCT نموذج + تدفق يعرف مرحلة المرض المبكرة، التي تتميز تضخم وسطي والخلايا البطانية. 3) أن الوقت الذي يستغرقه كل من النماذج للوصول إلى مرحلة النهاية حيث يبدأ فشل البطين الأيمن لتطوير (4 أسابيع في MCT + التدفق، 8 أسابيع في SuHx)EF "> 28 غير مختلف؛ و 4) أن Sugen5416 تتدخل في مسار الجزيئي (VEGF) التي تؤدي دورا في التسبب في الهيئة العامة للإسكان لا يزال غير واضح وهذا قد يعيق ترجمة إلى الهيئة العامة للإسكان البشري.

التطبيقات المستقبلية أو الاتجاهات

مراحل المرض متميزة من MCT + نموذج تدفق تسمح لأحد 1) لاختبار آليات تطور المرض (الأنسجة البشرية بشكل عام هو متاح فقط من بعد الوفاة أو إجراءات يزدرع) و 2) لاختبار التدخلات في استراتيجيات مختلفة. يمكن البدء في استراتيجية وقائية في بناء تحويلة (MF7). ويمكن البدء في التدخل المبكر في MF14. وقد يكون ذلك مناسبا بوصفها استراتيجية معالجة مسبقة لقذف إغلاق في الأطفال الذين يعانون من تحويلة القلب الخلقية والهيئة العامة للإسكان المرتبطة بها والتي قد تقدم في منطقة رمادية بين مرض عكسها ولا رجعة فيه. ويمكن البدء في استراتيجيات انعكاس في MF21 MF28 أو. في وقت لاحق مراحل على حد سواء تظهر الآفات neointimal، مظهرا من مظاهر نهاية مرحلة الهيئة العامة للإسكان. </ P>

في الختام، إضافة لزيادة تدفق الرئوي إلى MCT في الفئران يخلق نموذجا من الهيئة العامة للإسكان التدريجي والشديد الذي يحاكي تطور المرض الإنسان. الحق قسطرة القلب والتقييم النوعي والكمي للأمراض الأنسجة الوعائية تشكل حجر الزاوية في توصيف المرض في هذا المجال ونماذج أخرى لالهيئة العامة للإسكان.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Shunt Surgery
Sterile surgical gloves
Duratears Eye ointment Alcon 10380
Chloride-Hexidine
Cotton swabs
Histoacryllic tissue glue B. Braun Medical 1050052
Silkam 5-0 sutures black non-resorbable B. Braun Medical F1134027
Safil 4-0 sutures violet resorbable B. Braun Medical
18 G needle Luer NN1838R BD tip bent in 45 degrees orifice to the outside
Gauzes 10 x 10 cm Paul Hartmann 407825
Temgesic Buprenorphine RB Pharmaceuticals 5429 subcutaneous injection
Sodium Chloride 0.9%
Ventilation mask Rat
Scalple blade
Biemer clamp 18 mm, 5 mm opening  AgnTho 64-562
Heat mat
Kocher Clamp
Shaving machine
Microscope Leica
Right Heart Catheterization
Sterile surgical gloves
Eye ointment Duratears
Chloride-Hexidine
Cotton swabs
Gauzes 10 x 10 cm Paul Hartmann 407825
Silkam 5-0 sutures black non-resorbable B. Braun Medical F1134027
Needle 20 G Luer Tip slightly bent to the inside
Cannula 20 G Luer to introduce catheter, tip pre-formed in 20 degrees
Silastic Catheter 15 cm long 0.5 mm ball 2 mm from tip
Pressure transducer Ailtech
Bedside monitor Cardiocap/5 Datex-Ohmeda
Shaving machine
10 mL Syringe
Sodium Chloride 0.9% for flushing
Vascular Morphology
50 mL Syringe
4% Formaldehyde
18 G cannula with tube
Verhoef staining kit Sigma-Aldrich HT254 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht254?lang=en&region=US
Digital slide scanner Hamamatsu C9600
ImageJ
Elastic (Connective Tissue Stain)  Abcam ab150667 http://www.abcam.com/elastic-connective-tissue-stain-ab150667.html
http://www.abcam.com/ps/products/150/ab150667/documents/ab150667-Elastic%20Stain%20Kit%20(website).pdf

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Hoeper, M. M., Bogaard, H. J., Condliffe, R., et al. Definitions and diagnosis of pulmonary hypertension. J Am Coll Cardiol. 62, D42-D50 (2013).
  2. Stacher, E., Graham, B. B., Hunt, J. M., et al. Modern age pathology of pulmonary arterial hypertension. Am J Respir Crit Care Med. 186 (3), 261-272 (2012).
  3. Levy, M., Maurey, C., Celermajer, D. S., et al. Impaired apoptosis of pulmonary endothelial cells is associated with intimal proliferation and irreversibility of pulmonary hypertension in congenital heart disease. J Am Coll Cardiol. 49 (7), 803-810 (2007).
  4. Sakao, S., Tatsumi, K., Voelkel, N. F. Reversible or irreversible remodeling in pulmonary arterial hypertension. Am J Respir Cell Mol Biol. 43 (6), 629-634 (2010).
  5. Gomez-Arroyo, J. G., Farkas, L., Alhussaini, A. A., et al. The monocrotaline model of pulmonary hypertension in perspective. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 302 (4), L363-L369 (2012).
  6. Jones, J. E. Serial noninvasive assessment of progressive pulmonary hypertension in a rat model. Am J Physiol - Heart Circ Physiol. 283 (1), 364-371 (2002).
  7. Hoffman, J. I., Rudolph, A. M., Heymann, M. A. Pulmonary vascular disease with congenital heart lesions: Pathologic features and causes. Circulation. 64 (5), 873-877 (1981).
  8. van Albada, M. E., Berger, R. M. Pulmonary arterial hypertension in congenital cardiac disease--the need for refinement of the evian-venice classification. Cardiol Young. 18 (1), 10-17 (2008).
  9. Dickinson, M. G., Bartelds, B., Borgdorff, M. A., Berger, R. M. The role of disturbed blood flow in the development of pulmonary arterial hypertension: Lessons from preclinical animal models. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 305 (1), L1-L14 (2013).
  10. Garcia, R., Diebold, S. Simple, rapid, and effective method of producing aortocaval shunts in the rat. Cardiovasc Res. 24 (5), 430-432 (1990).
  11. Okada, K., Tanaka, Y., Bernstein, M., Zhang, W., Patterson, G. A., Botney, M. D. Pulmonary hemodynamics modify the rat pulmonary artery response to injury. A neointimal model of pulmonary hypertension. Am J Pathol. 151 (4), 1019-1025 (1997).
  12. van Albada, M. E., Schoemaker, R. G., Kemna, M. S., Cromme-Dijkhuis, A. H., van Veghel, R., Berger, R. M. The role of increased pulmonary blood flow in pulmonary arterial hypertension. Eur Respir J. 26 (3), 487-493 (2005).
  13. Brittain, E. Echocardiographic assessment of the right heart in mice. JVis Exp. (e81), (2013).
  14. Dickinson, M. G., Bartelds, B., Molema, G., et al. Egr-1 expression during neointimal development in flow-associated pulmonary hypertension. Am J Pathol. 179 (5), 2199-2209 (2011).
  15. Borgdorff, M. A., Bartelds, B., Dickinson, M. G., Steendijk, P., de Vroomen, M., Berger, R. M. Distinct loading conditions reveal various patterns of right ventricular adaptation. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 305 (3), H354-H364 (2013).
  16. Ruiter, G., de Man, F. S., Schalij, I., et al. Reversibility of the monocrotaline pulmonary hypertension rat model. Eur Respir J. 42 (2), 553-556 (2013).
  17. van Albada, M. E., Bartelds, B., Wijnberg, H., et al. Gene expression profile in flow-associated pulmonary arterial hypertension with neointimal lesions. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 298 (4), L483-L491 (2010).
  18. Dickinson, M. G., Kowalski, P. S., Bartelds, B., et al. A critical role for egr-1 during vascular remodelling in pulmonary arterial hypertension. Cardiovasc Res. 103 (4), 573-584 (2014).
  19. van der Feen, D. E., Dickinson, M. G., Bartelds, M. G., et al. Egr-1 identifies neointimal remodeling and relates to progression in human pulmonary arterial hypertension. Jheart lung transplant. 35 (4), 481-490 (2016).
  20. Rungatscher, A. Chronic overcirculation-induced pulmonary arterial hypertension in aorto-caval shunt. Microvasc Res. 94, 73-79 (2014).
  21. O'Blenes, S. B., Fischer, S., McIntyre, B., Keshavjee, S., Rabinovitch, M. Hemodynamic unloading leads to regression of pulmonary vascular disease in rats. J Thorac Cardiovasc Surg. 121 (2), 279-289 (2001).
  22. Sakao, S., Taraseviciene-Stewart, L., Lee, J. D., Wood, K., Cool, C. D., Voelkel, N. F. Initial apoptosis is followed by increased proliferation of apoptosis-resistant endothelial cells. FASEB J. 19 (9), 1178-1180 (2005).
  23. Spiekerkoetter, E. FK506 activates BMPR2, rescues endothelial dysfunction, and reverses pulmonary hypertension. J Clin Invest. 123 (8), 3600-3613 (2013).
  24. Nickel, N. P., Spiekerkoetter, E., Gu, M., et al. Elafin reverses pulmonary hypertension via caveolin-1-dependent bone morphogenetic protein signaling. Am J Respir Crit Care Med. 191 (11), 1273-1286 (2015).
  25. Meloche, J., Potus, F., Vaillancourt, M., et al. Bromodomain-containing protein 4: The epigenetic origin of pulmonary arterial hypertension. Circ Res. 117 (6), 525-535 (2015).
  26. Happé, C. M. Pneumonectomy combined with SU5416 induces severe pulmonary hypertension in rats. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 310 (11), L1088-L1097 (2016).
  27. Ranchoux, B., Antigny, F., Rucker-Martin, C., et al. Endothelial-to-mesenchymal transition in pulmonary hypertension. Circulation. 131 (11), 1006-1018 (2015).
  28. de Raaf, M. A. SuHx rat model: Partly reversible pulmonary hypertension and progressive intima obstruction. Eur Respy J. 44 (1), 160-168 (2014).
  29. Elastic (Connective Tissue Stain) Instructions for Use. , Available from: http://www.abcam.com/ps/products/150/ab150667/documents/ab150667-Elastic%20Stain%20Kit%20(website).pdf (1506).

Tags

الطب، العدد 120، الرئوي ارتفاع ضغط الدم الشرياني، نموذج الفئران، وزيادة تدفق الرئوي، الأورطيه- الأجوف تحويلة / الناسور، والحق قسطرة القلب والأوعية الدموية التشكل
جراحة التحويلة، الحق القلب قسطرة، والأوعية الدموية القياس الشكلي في الفأر نموذج لالناجم عن تدفق-الرئوي الشرياني ارتفاع ضغط الدم
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

van der Feen, D. E., Weij, M.,… More

van der Feen, D. E., Weij, M., Smit-van Oosten, A., Jorna, L. M., Hagdorn, Q. A. J., Bartelds, B., Berger, R. M. F. Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension. J. Vis. Exp. (120), e55065, doi:10.3791/55065 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter